组织病理学制片技术共65页
组织病理技术(完整版)
一.标本的采集和处理 在组织病理学研究中，制做高质量的组 织切片是关键性的一步，切片质量的好 坏直接影响着病理诊断结果的准确性和 可靠性，而一张好的切片与标本的采集 和处理过程有着密切的关系。
二、标本的固定
将组织浸入某些化学试剂中，使组织、细胞尽 量保持其生活状态时的形态结构和位置，称为 固定。
三、取材 在具体实验过程中，我们不可能将所有 的病理组织都做成切片进行观察，所以， 为达到正确观察或诊断的目的，必须采 集适量的病例组织，这不仅要求标本材 料要尽可能新鲜，而且要有一定的数量 和质量，根据需要确定取材的部位和块 数。
切取组织时，应用锋利的刀、剪，刀刃 宜薄，足够长。一般标本切取的组织块 厚以0.2~0.3cm为宜，对于冰冻切片，取 材组织块略厚度可达0.3~0.4cm，也可根 据情况略作调整。若过厚则固定不好， 组织结构不佳，过薄则切片张数有限， 有漏掉病变部位的可能性。一般来讲， 常规组织病理染色，组织块大小以 1.5cm×1.5cm×0.2～0.3cm为宜
笨和二甲苯都可使组织透明，常用二甲 苯。
透明步骤：低
高梯度透明。
3、浸蜡
经过透明的组织块，进一步移入熔化的 石蜡内浸渍，其目的是以石蜡置换组织 块中的二甲苯，使较软的组织块变成有 一定硬度的组织蜡 中等硬度石蜡
熔化的硬蜡。
4、包埋
组织包埋的方法有多种，如石蜡包埋法、火棉 胶包埋法等；常用的为石蜡包埋法。
理论上，凡需要进行病理检验的各种组织都应 该进行固定。组织离开机体或机体死亡后，若 不固定，细胞在自身酶的作用下会溶解破坏， 结构消失，无法进行形态学检查。
正确的病理诊断是建立在对病理标本正确的 肉眼形态观察和显微镜形态观察之上的，切片 的质量直接影响形态学观察的准确性，而一张 好的切片与组织的固定和取材质量密切相关。
病理学中的组织切片技术
病理学中的组织切片技术病理学是医学领域中非常重要的一个学科，研究人体各个器官和组织的疾病变化及其发生、发展机制。
而组织切片技术是病理学中的基础操作，是为了观察和诊断疾病而必要的步骤之一。
本文将详细介绍组织切片技术的相关知识和方法。
一、组织切片技术的概述组织切片技术是指将人体组织切割成薄片并染色，以便于病理学家观察。
这项技术已经存在了很长时间，并且随着技术的发展和改进，已经成为了诊断和治疗疾病的重要手段之一。
组织切片技术可以被广泛应用于疾病的研究、诊断和治疗中。
二、组织切片技术的步骤组织切片技术的主要步骤包括取样、固定、脱水、包埋、切片和染色。
下面将对这些步骤进行详细的介绍：1. 取样组织切片的第一步是取样，即从人体组织中取出一小块，以便于后续的操作。
取样的方法根据不同的情况会有所不同，比如在手术中取样，就需要根据病变的部位和特点来选择取样点，而在活检中取样，就需要根据患者的症状和体征来确定取样点。
2. 固定取样后，需要用一种方法把组织中的细胞和结构固定住，以便于后续处理。
目前常用的固定剂是福尔马林，它可以迅速把组织中的蛋白质交联，使其不易变性，从而保持组织形态的完整。
3. 脱水在固定后，需要将组织逐渐从水中转移到酒精、乙醇等脱水剂中，以便于把组织中的水去除，使其硬化。
这是组织切片的关键步骤之一，如果脱水不彻底，切出的组织切片会变形或破损。
4. 包埋将脱水的组织置于熔蜡中，使其被包覆在蜡中。
这么做可以保持组织的形态，并使其更易于切割。
5. 切片蜡包埋后，组织需要被切成薄片。
切片可以使用手工或自动切片机完成，手工切片需要技巧和经验，而自动切片机可以更好地保证切片的厚度和质量。
6. 染色切片完成后，需要对组织进行染色，以便于病理学家对其进行观察。
目前常用的染色剂有血液学染色剂、组织学染色剂以及免疫组化染色剂等。
三、组织切片技术的应用组织切片技术在病理学中有广泛的应用，其中包括：1. 诊断和治疗疾病组织切片技术是病理学家进行诊断和治疗疾病的重要手段之一。
病理制片技术规范
病理制片技术规范病理制片技术的规范病理技术是病理学诊断不可分割的一部分，制片质量的好坏很大程度上影响病理医生做出正确的病理诊断。
因此，保证和提高制片质量是每个病理技术员的责任。
为了保证制片质量，减少差错，防范责任事故，避免医疗纠纷，有必要加强对病理技术进行科学规范管理和制片的控制，为提高临床病理诊断水平，促进临床病理学事业的发展做出我们应有的贡献。
一、高素质技术人员的规范管理1．要有敬业精神，强烈的工作责任心、2．努力学习，刻苦钻研，掌握过硬的基本功，引进和学习新技术，工作精益求精。
3．领导重视，为技术人员提供进修学习和提高的机会。
4．技术员和医生，技术员与技术员互相团结，密切配合，发挥团队精神的作用、二、仪器设备分规范管理1．配备先进，高质量的仪器设备是保证和提高制片质量的重要条件、2．正确使用，定期维修保养，保证仪器设备在最佳的状态下工作、三、标本和资料档案的规范管理1．标本和送检单的接收检查标本和送检单的名字是否相符，有否标本，有没有病史。
标本补充固定液，送检单编号登记。
2．资料档案的规范管理诊断报告发出后，附有诊断报告记录的送检单、玻片和组织蜡块存档并专人保管。
建立严格的资料借出制度，确保档案资料不被丢失。
四、技术操作规范1. 及时固定组织：应采用10%~20%甲醛液（10%甲醛液即用浓甲醛液1份加蒸馏水9份稀释）固定组织，因甲醛易氧化成甲酸，因此多会偏酸性，最理想的是配成中性甲醛液。
巨大组织要切开固定，小块组织的固定时间约4小时左右，然后取材时修切成大小约22 x 22mm，厚不超过2mm的组织块进行脱水。
取材时必须注意核对编号是否与送检单上的病理号一致，并记录好对大体标本的描述，取材组织的形状和数量。
l 常规固定液的配制（1） 10%甲醛液浓甲醛 10ml蒸馏水 90ml(2 ) 缓冲中性甲醛液浓甲醛 10mlPBS缓冲液（Ph7.2） 90ml(3 ) 10%中性甲醛液浓甲醛 10ml蒸馏水 90ml碳酸钙加至饱和冷冻切片固定液(1) 乙醚酒精液无水乙醚 1份95%酒精 1份(2) 酒精—冰醋酸液95%酒精 100ml冰醋酸 3~5滴细胞学涂片固定液的配制(1) 酒精—冰醋酸液95%酒精 97ml冰醋酸 3ml(2) 乙醚--酒精液95%酒精 50ml乙醚 50ml冰醋酸 1ml(3) Carney`s液无水酒精 60ml氯仿 30ml冰醋酸 10ml2. 脱水彻底：脱水液常用乙醇，用乙醇脱水要由低浓度逐级上行至高浓度（一般70%~100%的浓度），逐步置换组织内的水份。
《组织病理技术》课件
采用适当的固定液和保存方法，优化 染色流程，使用防脱片胶，提高制片 质量。
新技术的应用与展望
新技术
数字化病理技术、人工智能辅助诊断、 组织芯片技术。
VS
展望
数字化病理技术将使病理诊断更加便捷和 准确；人工智能辅助诊断能够提高诊断效 率和准确性；组织芯片技术可用于药物筛 选和疾病模型研究。
组织病理技术的伦理与法规问题
组织病理技术的发展历程
19世纪初
随着显微镜的发明和应用 ，人们开始对组织结构和 细胞形态进行研究。
20世纪初
石蜡切片技术的出现，使 得组织病理技术更加标准 化和规范化。
20世纪末至今
随着科技的不断进步和应 用，组织病理技术不断发 展和完善，应用领域也更 加广泛。
02
组织病理技术的基本原理
组织样本的获取与处理
。
恶性程度评估
组织病理技术可以评估肿瘤的恶性 程度，判断肿瘤的侵袭性和转移风 险，为制定治疗方案提供依据。
预后判断
通过组织病理技术对肿瘤的病理特 征进行分析，可以预测患者的预后 情况，帮助医生制定后续治疗方案 。
移植组织鉴定
组织匹配
在器官移植中，组织病理技术用 于检测供体和受体之间的组织匹 配程度，确保移植组织的兼容性
根据处理方法的不同，组织病理 技术可以分为石蜡切片技术和冷 冻切片技术等。
组织病理技术的应用领域
01
02
03
临床病理诊断
通过组织病理技术对病变 组织进行观察和分析，为 临床医生提供准确的病理 诊断。
药物筛选
利用组织病理技术观察药 物对病变组织的影响，为 新药研发提供实验依据。
毒理学研究
通过组织病理技术观察化 学物质对组织结构和细胞 形态的影响，评估其毒性 和安全性。
病理组织制片技术流程
病理组织制片技术流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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标准病理组织制片和染色技术讲课文档
3. 尸体解剖组织（脏器）取材：略。
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三．固定（ fixalion）
固定：新鲜组织浸泡在适宜的化学试 剂内借助于化学试剂的作用，使组织或细 胞内蛋白质凝聚，沉淀，成为溶性并保持 组织细胞原有的形态结构：称为固定。所 使用的化学试剂配成的溶液，称为固定液。
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浓甲醛 75ml 冰醋酸 5ml (对组织收缩小，固定均匀、保存细微结构、软化皮肤、 肌健、结缔组织较好 )
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3、固定的原理
甲醛为例，甲醛与组织蛋白反应是多样而复杂的。
O
H
P CONH+HCH+P-CONH P -CON---C----P--CON 肽键 甲醛 H 亚甲基桥
蛋白质分子之进行交换，形成亚甲基桥，把蛋白质分子串 联起来，使蛋白变性，破坏了蛋白质的立体结构，达到固 定目的。
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四、洗涤
组织在固定后，一定要把渗透到 里面的固定液(沉淀物或结晶)洗去， 然后再进行下一步程序，洗涤必须彻 底，否则留在组织中的固定液有可能 妨碍染色。
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洗涤的原则：
1、固定液为乙醇或酒精混合液一般不要 冲洗。
2、固定液为水配制者，用水流水冲洗 3、凡含有铬酸、重铬酸钾的固定液-洗涤 4、含有苦味酸用乙醇配制的固定液-洗涤
2. 方法：
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3. (1) 最大平面向下压平 (2) 管状 束壁 皮肤 竖埋
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七、浸蜡（Infilftrition）
组织经过媒剂的透明作用后，移 入熔化的石蜡内浸渍称为浸蜡。
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１、 石蜡：
切片蜡___软蜡50℃以下，酶，保存抗原活性 (纯度高密度好) 硬蜡50℃以上-62∽64℃ 工业石蜡___质地较差，价格便宜
病理组织切片技术
可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现
象，有时甚至完全变形。为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
二、固定
定义
将组织浸入某些化学试剂。使组织细胞内所含 物质尽量保持在生活状态时形态结构和位置的过 程。
• 苏木素是一种碱性染料,可使组织中的嗜碱 性物质染成蓝色，如细胞核中的染色质等； 伊红是一种酸性染料，可使组织中的嗜酸 性物质染成色，如多数细胞的胞质、核 仁等在H.E染色的切片中均呈红色。
H.E染色程序如下
• 脱蜡 • 脱苯 • • 染色 • • 透明 •
复水 脱水 封固
切片脱水透明要彻底
浸蜡的
注意事项
首先，应保证所用石蜡的质量，尽量不含杂质，否则易造成 切片刀刀口受损或切片破碎、划痕增多。
其次，浸蜡用的石蜡熔点应控制在55~58℃。蜡温过低，浸 蜡不良；蜡温过高回烫伤组织，是组织收缩、变硬、切片 时易脱片、卷片。
再次，要控制好浸蜡时间。时间过短，蜡没有完全渗入组 织、组织过软；时间过长，造成组织硬脆。两者均可造成 切片困难。另外，应尽量去除沾在组织上的二甲苯，在浸 蜡。
脱水的方法
自低到高溶度依次进行，使组织中 所含水分逐渐减少直至被脱水剂代 替。
脱 水 机
透明
定义
用某些化学试剂将组 织中的脱水剂置换 出来，以利于浸蜡 和包埋，因组织块 浸入这此试剂后常 呈半透明状
透明
目的
Ö透明是制片过程中很重要的环节。大 多数脱水剂不能和包埋剂（如石蜡） 混溶，而透明剂即可与脱水剂混溶， 又能和包埋剂（如石蜡）混溶，能起 到桥梁作用。
组织切片技术
骨磨片
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疏松结缔组织铺片
第10页，共71页。
上皮组织铺铺片片
第11页，共71页。
2、切片法
切片法是必须依靠切片机将组织切成薄片来进行观察的 方法。为了能清晰地观察到组织结构及细胞形态，必须先 经过一系列步骤将组织内渗入某些支持物质，使组织变硬 以利于切成薄片，根据所用支持剂的种类不同，主要分为 石蜡切片法，火棉胶切法，冰冻切片法等类型，切成薄片后 还需要脱蜡，染色，脱水，透明等步骤，将其制成永久标 本。
组织切片技术
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大多数的生物材料，在自然状态下是不适合显微观察的， 也无法看到其内部结构。因为材料较厚，光线不易透过，另外 由于细胞内各个结构的折射率相差很小，即使光线可透过，也 难以辩明。
组织学技术是教学和科研中常用的方法。组织在经过固定， 脱水，透明，包埋等手续后，用切片机切成较薄的切片，再经不 同的染色就可以显示不同细胞组织的形态及其中某些化学成份含 量的变化，组织切片也便于保存。
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2.1.2 动物组织标本的取材
动物的处死方式一般为活杀，组织标本来源较新鲜，10min内即可 完成固定和冷冻保存，脑组织和神经组织应采用灌注固定后，再进行后 固定。
制片所需的材料要求越新鲜越好，尤其是细胞学方面的研究对 材料的新鲜程度要求更严。因此，要从活的动物体上采取材料，在一 般情况下，要对动物施行麻醉，然后再割取材料加以固定。所用的麻 醉药品，必须以不影响细胞结构为原则。
甲醛渗透力强，固定均匀。但脱水后有较大收缩，在某些方法 中要求中性甲醛，可在原装瓶内放入碳酸镁，pH为7.6，能长期保 持中性。甲醛固定后，通常需在流水中冲洗24-48小时,否则影响染 色效果。
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病理制片技术手册
病理制片技术手册第一章病理标本的接收病理标本的接收是在取材、固定组织前首先要做的第一步工作，它是临床与病理科交接的一个重要环节，它为开展病理学检查、病理档案的保存奠定了基础。
标本接收程序如下。
1．首先核对病理申请单与标本上的红色号码是否一致。
2．核查病理申请单上写明的送检标本及数目是否与实际送检标本一致。
3．观察送检标本的大小及固定液比例是否合适。
(1)穿刺活检及纤支镜所取的小标本，4％中性甲醛(10％中性福尔马林)固定组织的量应在6～10倍。
(2)对于较大的手术切除标本，应及时切开固定；核对后将病理申请单和标本编上病理标本号。
4．将病人姓名、性别、年龄、病历号、科别、临床诊断、部位、标本来源、标本例数等逐项录入电脑存储。
5．作为病理资料不仅要做好计算机录入工作，还须进行文字登记，以便病理档案长期保存。
第二章组织固定一、固定的目的和意义活体组织一旦停止血液循环和物质代谢就会因物质代谢障碍产生一系列的生物化学和组织化学改变，并导致形态学上可见的细胞器变化和细胞组织的形态改变直至腐败自溶。
固定的目的就是要通过使用化学和物理的方法，尽可能地保存组织细胞离体时具有的生理和病理形态结构及生物化学和免疫化学成分。
良好的固定是制作优秀病理切片的基础，也是特殊染色、组织化学、免疫组织化学和组织原位分子杂交等技术方法赖以成功的基础。
因此，在病理技术工作中必须高度重视固定的质量。
二、组织固定的注意事项1．及时取材：由于甲醛对组织的平均穿透速度只有0.8 mm/h，因此手术切除的送检标本应及时切开进行取材，以便保证重要的镜检部位能及时地得到固定。
2．及时固定：完成取材的组织块应立即投入固定液以便尽可能地保存组织细胞的形态结构和抗原性。
3．液量充分：一般情况下要求固定液的量应为组织体积的6～10倍。
4．适度固定：现代固定的要求是，在良好保存组织细胞形态结构的同时尽可能较好地保存组织细胞的抗原性。
长时间的固定会导致某些组织抗原性的逐渐丧失，因此，适时固定可以在保存细胞结构和抗原性之间取得必要的平衡。
1.组织病理学制片技术
5、组织/细胞培养(Tissue and Cell culture)： 将某种组织或单细胞在适宜的培养基中体外培养， 来研究各种病因作用下组织、细胞的病理变化及治 疗效果。
3. 异戊烷-液氮法：此法的优点可防止冰晶 破坏组织细胞的形态结构，对含水较多的组织 适宜用此法进行速冻。先用甲基纤维素包埋组 织块。将盛有异戊烷的小烧杯放入装有液氮的 大保温杯或冰壶内，搅拌异戊烷待杯底出现一 层白色糊状物时，放入包埋好的组织块，数秒 钟即可取出，按上述方法保存。
（三）注意事项
2、脱落细胞学检查(Exfoliative cytological exam)：对患者痰液、胸腹水、尿液以及阴道刮 片、食管拉网、纤维胃/支气管镜所取得的材料 进行涂片，以检查脱落细胞，是早期发现和诊 断肿瘤的好方法。
3、尸体解剖(Autopsy)：通过尸检可查出病因和病 变，及时发现和确诊某些传染病、新发现的疾病， 积累经验，提高诊疗水平。
（二）保存方法
组织速冻的方法很多，常用方法为液氮和干冰~ 丙酮法。
1. 液氮法：将组织块平放于瓶盖或标本盒等适 当容器内，缓慢放入盛有液氮的容器内。当组 织块冻结后，取出用铝箔包好，做好标记后入 液氮罐或-70℃低温冰箱保存。可保存数月至数 年。如短期内使用，可保存于-30℃冰箱。
2. 干冰-丙酮法：将组织块放入盛有OCT包埋 剂的标本盒内，使组织块完全浸没。将丙酮倒 入盛有10g干冰的保温杯调成糊状。将装有组 织块的标本盒放入保温杯，待包埋剂成白色冻 块时，取出如上法保存。此法组织速冻快，组 织结构保存好。
第三节 冰冻切片法 (Frozen sectioning)
病理组织切片制作技术
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------病理组织切片制作技术病理组织切片制作技术病理组织切片常用的制作方法有三种。
即石蜡切片法，冰冻切片法和火棉胶切片法。
以石蜡切片法为代表，切片的基本制作过程是：组织取材固定冲洗脱水透明浸蜡组织包埋组织切片展片附贴切片脱蜡染色脱水染片透明封固。
以上基本过程是互相联系的，任何一环节出现问题，都将使整个切片制作归于失败。
因此应细致、耐心、认真负责，并事先做好计划安排。
一、取材采取病料，要刀剪锐利，剪切时不可挤压，扯拉病料，以防人为损伤。
切取的工具要清洁。
采取病料越新鲜越好，一般不超过死后 24 小时。
应选择病变部与可疑病变部切取，切取时要由表及里，有浅入深并包括周围正常组织一部分。
特殊病料应根据器官的结构特点切取。
管状，囊状和皮肤组织应注意垂直切取（横切）。
带有薄膜的组织，要防止切时薄膜分离和脱落。
切取组织块大小，以 1.51.50.3 厘米为宜，最厚不宜超过0.5 厘米。
组织块病变一面应平整光滑，另一面可不平整，以便包埋时1/ 7辨认。
切取后，放入事先准备好的装有固定液的磨口玻璃广口瓶中，并做好标记。
二、固定固定的目的是迅速将组织细胞杀死，使细胞中的蛋白质，糖，脂肪等凝固，从而保持与活组织相似的结构状态。
材料取下后，应迅速固定。
固定液数量应为病理组织块的 5 到 20 倍。
由于一般把组织块浸入固定液后数小时，固定液渗入组织液的深度只达 2 到 3 厘米。
因此，可以放置冰箱内固定，使组织内酶失去作用，细菌也能停止滋生。
最常用的固定液是 10%的福尔马林溶液：使用时，用 40%的甲醛饱和水溶液 10 毫升，加水 90 毫升配成。
三、冲洗固定后的组织块，应将固定液洗去。
病理组织切片技术课件
取材
取材是病理组织切片制作的第一步，也是至关重要的一步。 取材时，应选择具有代表性的组织，并注意避免组织自溶和 腐败。同时，要确保取材器械的清洁和消毒，以避免污染和 交叉感染。
取材时，应根据不同的病理类型和病变情况，选择适当的取 材方法和取材量。对于小块病变组织，应尽量取全；对于大 块病变组织，应根据病变特点和部位，选择具有代表性的部 分取材。
固定
固定是病理组织切片制作中不可缺少的一步，其目的是使组织保持其生前的状态 ，防止组织自溶和腐败。常用的固定方法有：甲醛固定法、乙醇固定法和混合固 定法等。
固定液的浓度和固定时间对固定效果有很大影响。一般来说，固定液的浓度越高 、固定时间越长，固定效果越好。但固定时间过长会导致组织变硬，影响切片质 量。因此，应根据具体情况选择适当的固定液和固定时间。
切片质量
切片的质量直接影响到显 微镜观察的结果，因此制 备过程中需要保证切片的 平整、均匀和无气泡。
切片技术分类
01
02
03
04
石蜡切片
将样品包埋在石蜡中，然后进 行切片和染色，是最常用的切
片技术之一。
冰冻切片
将样品快速冷冻后进行切片， 主要用于快速病理诊断。
苏木素-伊红染色
对切片进行染色，以便在显微 镜下观察细胞的形态和结构。
脱水
脱水是病理组织切片制作中非常重要的一步，其目的是去 除组织中的水分，为后续的浸蜡和包埋做准备。常用的脱 水方法有：自然干燥法和人工脱水法等。
脱水液的选择和使用对脱水效果有很大影响。一般来说， 脱水液的浓度越高、脱水时间越长，脱水效果越好。但脱 水时间过长会导致组织变脆，影响切片质量。因此，应根 据具体情况选择适当的脱水液和脱水时间。
H&E染色
病理制片和染色技术PPT课件
2、AAF液 配制 : 纯酒精85ml+醋酸 5ml+甲醛10ml
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5）尽可能避免使组织膨胀或收缩。 6）能使细胞内的成分（蛋白质）凝固或 沉淀下来。 7）增加细胞内含物的折光程度，易于鉴 别。增加媒染作用和染色能力。 8）使组织变硬，适于制片，但又不使材 料太坚硬而松脆。 9）使组织充分固定，便于保存。
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第二节
介绍几种常见固定液
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第一章 病理技术的应用范围
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➢帮 助 临 床 查 明 死 因 （ 原 因 不 明 的 死 亡 ） ➢手 术 后 病 变 标 本 ， 以 明 确 诊 断 （ 临 床 活检） ➢提供教学、科研的资料
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第一节 组织制片的概述
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组织制片技术的应用，从1665 年由HOOk发现细胞开始，已有300 多年的历史。最早应用冰冻切片；随 后又进一步利用石蜡的硬度，以石蜡 包埋组织，制成石腊切片；后来又利 用明胶、火棉胶、碳蜡和塑料等物质 的韧性，以其包埋组织而制作切片。
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6、丙酮
丙酮又名醋酮或本酮，极易挥发、 易燃的无色液体，能与水、醇、氯仿、 醚及多种溶液混合。
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特性：
1）它可以作固定剂，又可作脱水剂，穿 透速度快，可使蛋白质沉淀凝固，2毫米 以下的组织固定半小时至1小时即可。 2）可引起组织较强的收缩使之变硬，对 核固定不佳。 3）对某些酶的固定很好，如碱性磷酸酶、 酸性磷酸酶等。 4）丙酮一般多与氯化汞、甲醛混合液使 用，先用低浓度丙酮再经高浓度丙酮固定 以减少组织收缩和过度硬化。