微波辅助萃取-气相色谱- 质谱联用 分析石蒜中的加兰

1.2.2 加兰他敏的传统提取方法概述
传统生产工艺：将石蒜通过乙醇热提， 传统生产工艺：将石蒜通过乙醇热提，洗 萃取，重结晶， 涤，萃取，重结晶，得到氢溴酸加兰他敏 原料药。 原料药。 缺点：能耗高、原辅料损耗大、 缺点：能耗高、原辅料损耗大、生产周期 而且加兰他敏提取不完全。 长，而且加兰他敏提取不完全。
2.2 试剂和样品
氢溴酸加兰他敏标准品购自Sigma公司 。 公司。 氢溴酸加兰他敏标准品购自 公司 甲醇、 乙醇、 石油醚（ 沸程： ～ 甲醇 、 乙醇 、 石油醚 （ 沸程 ： 90～ 120 乙醚、丙酮、乙酸乙酯、盐酸、 ℃ ） 、乙醚 、丙酮 、乙酸乙酯 、 盐酸 、 浓氨水、碳酸钠（分析纯试剂， 浓氨水、 碳酸钠 （ 分析纯试剂 ， 广州化 学试剂厂） 学试剂厂）。 石蒜：鳞茎棕黑色片状物，有特殊香味。 石蒜 ：鳞茎棕黑色片状物 ，有特殊香味。
各因素不同水平对应的峰面积之和及平均值（ 表3 各因素不同水平对应的峰面积之和及平均值（% ）
颗粒度 ／mesh K1 K2 K3 k1 k2 k3 60313023 86473924 66236929 20104341 28824641 22078976 溶剂体积 ／mL 53443021 75742975 83837880 17814340 25247658 27945960 辐射温度 ／℃ 65362867 69377083 78283926 21787622 23125694 26094642 辐射时间 ／min 69623871 71774523 71625482 23207957 23924841 23875161
3.4 和传统方法的对比
表6 微波萃取法与乙醇加热回流萃取法测定 加兰他敏的结果比较
加兰他敏的含量 RSD/% 萃取时间 (n=6) / mg·L-1 /min 微波萃取法 乙醇加热回 流萃取法 96.6 99.4 4.4 9.9 5 120
4. 结论
本实验建立了MAE－GC－MS分析石蒜中加兰 本实验建立了MAE－GC－MS分析石蒜中加兰 MAE 他敏的方法， 他敏的方法，并且利用正交设计实验优化了 微波萃取测定石蒜样品中加兰他敏的条件, 微波萃取测定石蒜样品中加兰他敏的条件,方 法平均回收率99.3 %，检出限3.42 mg·L 法平均回收率99.3 %，检出限3.42 mg L-1， %，线性范围10 mg·L RSD = 4.4 %，线性范围10 ~ 100 mg L-1。将 本方法与乙醇加热回流提取法相比， 本方法与乙醇加热回流提取法相比，结果表 明本方法省时、精密度好、操作简便， 明本方法省时、精密度好、操作简便，适合 于石蒜中加兰他敏的快速测定。 于石蒜中加兰他敏的快速测定。
峰面积之和； 峰面积平均值。 注：Ki—峰面积之和；ki—峰面积平均值。 峰面积之和 峰面积平均值
9.00E+07 8.00E+07 7.00E+07 6.00E+07
水平1 水平2 水平3
回 5.00E+07 收 率 4.00E+07
3.00E+07 2.00E+07 1.00E+07 0.00E+00 颗粒度 溶剂体积 辐射温度 辐射时间
石蒜样品的甲醇溶液色谱图（标记为1的是加兰他敏的峰） 的是加兰他敏的峰 图二 石蒜样品的甲醇溶液色谱图（标记为 的是加兰他敏的峰）
3 结果与讨论
微波萃取溶剂的选择 微波条件的优化 微波辅助萃取方法的线性范围、检出限、 微波辅助萃取方法的线性范围、检出限、 回收率和精密度 和传统方法的对比
3.1 微波萃取溶剂的选择
1.3.3 微波辅助萃取系统
高压密闭微波萃取系统 ： 磁控管 波导管 微波腔 波形搅拌器 循环装置 转台
1.3.4 MAE在植物提取中的应用 在植物提取中的应用
最早的报道来自1986年，匈牙利学者Ganzler 年 匈牙利学者 最早的报道来自 K用微波提取了羽扇豆、玉米等作物中的油脂、 用微波提取了羽扇豆、 用微波提取了羽扇豆 玉米等作物中的油脂、 棉籽酚等有效成分 。 国内外已有很多将MAE应用于中药中有效成 国内外已有很多将 应用于中药中有效成 分提取的文献报道。 分提取的文献报道。 本实验室的研究人员在这方面也做了大量的 工作。 工作。
影响因素
图三
颗粒度、溶剂体积、控制温度、 颗粒度、溶剂体积、控制温度、辐射时间于萃取效率的影响
表4 优化的微波萃取条件
颗粒度 ／mesh 40~60 溶剂体积 辐射温度 辐射时间 ／℃ ／mL ／min 20 85 5
3.3 微波辅助萃取方法的线性范围、 微波辅助萃取方法的线性范围、 检出限、 检出限、回收率和精密度
2 实验部分
仪器及操作条件 试剂和样品 样品处理过程 定性和定量
2.1 仪器及操作条件
仪器
MarsⅩ型微波炉（CEM，USA）； Ⅹ型微波炉（ ， ） R201旋转蒸发仪（上海申科机械研究所）； 旋转蒸发仪（ 旋转蒸发仪 上海申科机械研究所） HP-6890GC-5973MSD 配 G1701B.02.05 工 作 站 （Hewlett-Packard，USA）; ， ） DB-5MS熔融毛细管柱（J&W，CA）。 熔融毛细管柱（ 熔融毛细管柱 ， ）
操作条件
色谱条件：升温程序初温 保持3 色谱条件：升温程序初温150 ℃，保持 min，以6 ℃ / min的速度升至 的速度升至300 ℃， ， 的速度升至 保持5 保持 min。进样口温度 。进样口温度250 ℃，不分流 进样。载气为高纯氦气，流速1.0 mL / 进样 。 载气为高纯氦气 ， 流速 min。 。 质谱条件：接口温度280 ℃，EI，电子 质谱条件：接口温度 ， 能量70 eV，离子源温度230 ℃，四极杆 能量 ，离子源温度 温度150 ℃，质量扫描范围 ～ 550 质量扫描范围50 温度 amu。 。
1.3.1 微波辅助萃取原理
微波加热有两种机理： 微波加热有两种机理：离子传导和偶极 子转动。 子转动。 物质吸收微波的程度主要取决于其介电 常数，被萃取物质进入介电常数小， 常数，被萃取物质进入介电常数小，微 波吸收能力相对较差的萃取剂中 。
1.3.2 微波辅助萃取特点
升温速度快 加热均匀 选择性好 萃取效率高 伴有生物效应
1.2.3 加兰他敏的分析检测方法综述
薄层色谱（ 薄层色谱（TLC） ） 高效液相色谱（ 高效液相色谱（HPLC） ） 气相色谱法（ ） 气相色谱法（GC） 免疫分析法（ ） 免疫分析法（IA） 高效毛细管电泳（ 高效毛细管电泳（HPCE） ） 联用方法
1.3 微波辅助萃取技术
微波辅助萃取原理 微波辅助萃取特点 微波辅助萃取系统 MAE在植物提取中的应用 在植物提取中的应用
2.3 样品处理过程
前处理： 粉碎，过筛，储存在干燥器中。 前处理： 粉碎，过筛，储存在干燥器中。 微波辅助萃取： 微波辅助萃取： 定量称取样品放入微波 罐中，加入一定体积的萃取溶剂， 罐中 ，加入一定体积的萃取溶剂 ，在一 定的控制温度下萃取一定的时间。 定的控制温度下萃取一定的时间 。取出 萃取液，过滤，滤液旋干后甲醇溶解， 萃取液， 过滤， 滤液旋干后甲醇溶解 ， 定容至5 定容至 mL。 。
微波辅助萃取—气相色谱 质谱联用 微波辅助萃取 气相色谱—质谱联用 气相色谱 分析石蒜中的加兰他敏
指导老师： 指导老师： 李攻科教授 报告人： 汪军霞 报告人：
1. 前言
前苏联科学家首次分离出了加兰他敏。 性和选择性的 乙酰胆碱酯酶抑制剂（ ），可以 乙酰胆碱酯酶抑制剂（AChE），可以 ）， 作为治疗AD的药物 的药物。 作为治疗 的药物。
药理作用研究概况 加兰他敏的传统提取方法 加兰他敏的分析检测方法
1.2.1 药理作用研究概况
重症肌无力 脊髓前角灰质炎（小儿麻痹症） 脊髓前角灰质炎（小儿麻痹症）后遗症 术后肠肌麻痹 尿潴留 解箭毒 阿尔茨海默病
1.2.1.1 药理作用特点
具有可逆性和选择性的乙酰胆碱酯酶抑 制剂（ 制剂（AChE） ） 作用时间长 无毒性或致癌作用 耐受性好
图一 加兰他敏甲醇标准溶液色谱图
Abundance TIC: 0115Y3MP.D 4000000 3800000 3600000 3400000 3200000 3000000 2800000 2600000 2400000 2200000 2000000 1800000 1600000 1400000 1200000 1000000 800000 600000 400000 200000 0 4.00 6.00 8.0010.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00 32.00 Time--> 2 1
线性范围、检出限、 表5 线性范围、检出限、回收率和精密度 线性方程 Y=3.3048E5X－ Y=3.3048E5X－1.2784E7 10 ~ 100 mg·L-1 3.42 mg·L-1 99.3 % 7.9 %(n=6)
线性相关系数R 0.9996 线性相关系数 线性范围 检出限 回收率 RSD
乙醇加热回流萃取： 准确称取1 乙醇加热回流萃取 ： 准确称取 1 g 石蒜 样品，放入圆底烧瓶中，加入一定体积 样品， 放入圆底烧瓶中， 的萃取溶剂， 水浴加热回流2 的萃取溶剂 ， 水浴加热回流 2 h 后 ， 冷 却过滤，再旋转蒸发至近干， 却过滤， 再旋转蒸发至近干， 用甲醇定 容至5 mL， μL用GC-MS测定 测定。 容至5 mL，取1 μL用GC-MS测定。
正确选择萃取溶剂是实现高效率萃取的关键 步骤。 步骤。 MAE中，所选的溶剂应满足以下条件： 中 所选的溶剂应满足以下条件： 1 具有吸收微波及将微波转化为热能的 能力； 能力； 2 能够选择性的从样品基体中将待测物分离萃 取出来； 取出来； 3 方便于后续处理过程 方便于后续处理过程。