牛布鲁氏菌病抗体检测试剂盒
四种牛布鲁氏菌病抗体检测方法的比较
2019年第12期（总第217期）四种牛布鲁氏菌病抗体检测方法的比较马宏伟",路广计1*,张若曦"，刘天驹"，李翀",轩秋燕"，刘志勇2,范京惠3,程丽华4,边青岩4（1.河北省动物疫病预防控制中心，河北石家庄050035；2.唐山市动物疫病预防控制中心，河北唐山063004；3•河北农业大学动物医学院，河北保定071001；4.饶阳县农业农村局，河北衡水053900）中图分类号：S855.1&2文献标识码:B文章编号：1003-8655（2019）12-0009-04摘要:布鲁氏菌病是一种全球分布、危害严重的人畜共患病,我国主要采用疫苗免疫、感染畜淘汰等措施进行防控,常用血清学检测方法虽有较高的敏感性和特异性，但易受疫苗免疫干扰％本研究对健康牛和感染牛在口服免疫S2疫苗的背景下,采用不同方法、不同样品进行了抗体检测％结果表明:健康牛布病抗体在免疫60天后开始迅速下降，RBT因敏感性和抗体滴度较低在检测期内结果全为阴性，iELISA敏感性高，牛奶iELSIA与血清iELSIA经Kappa法分析发现K值在0.286〜1.000之间（60天内0.545〜".000之间），NH-AGID特异性100%，敏感性随抗原刺激强度而变化较大，但NH-AGID可在疫苗免疫早期鉴别人工免疫与自然感染％综合来看，牛奶样品可替代血清样品进行布病免疫抗体评价,NH-AGID与高敏感方法（如:iELISA'配合使用，可为奶牛布病净化过程中尽早筛选淘汰感染牛提供一个有利途径％关键词：布鲁氏菌病;天然半抗原;琼脂凝胶免疫扩散;鉴别诊断布鲁氏菌病，简称“布病”，是由布鲁氏菌引起的一种以发热、流产、睾丸炎、关节肿胀等临床症状为特征的人畜共患传染病，可侵害牛、羊、鹿、猪、狗、骆驼、水獭、海豹、海豚、鲸等多种动物，也称波浪热、马耳他热、地中海热，人间布病俗称懒汉病、蔫吧病、千日病等，我国规定其为乙类传染病["-3]o布病流行广泛且一年四季均可发病，通过消化道、呼吸道和皮肤黏膜在动物、动物和人之间传播，对畜牧养殖和人类健康造成巨大危害,疫苗免疫和检测筛查对于有效防控甚至净化布病意义重大。
牛布鲁氏菌抗体ELISA试剂盒与国标血清学SAT试验在布病检测中的比较试验
快 速 等优 点 。为找 甘 适合 家畜 布 病快 捷 方便 的检测 方 ｊ 法 ， 们 开展 ｒ对 Ｒ Ｐ 我 Ｂ Ｔ实验 阳性 结 果 血清进 行 Ｅ Ａ １Ｓ Ｉ
试 验 Ｓ Ｔ试 验 对 比 实 验 ， 以验 证 Ｅ ＩＡ 试 验 在 家 畜 Ａ ＬＳ 痫检 测 中 的实 际应 用价 值 ，为 其实 际应 用 提供 一些 科 学依据 。
采集 ３ ０份ｍ清， 中羊血清 ２ ０份 、 ５ 其 ５ 牛血清 １０份。 ０ １ ． 布病 虎红平 板凝 集试验 （ Ｂ Ｔ ５ Ｒ Ｐ） 按 照 中华 人 民共 和 同国 家标 准 ＜ 物 布 鲁 氏 菌 病 动 诊断技 术＞２ ０ ） （０ ２操作 。 １ ． 动物布病 试 管凝 集试验 （ Ａ ６ Ｓ Ｔ） 按 照 中 华 人 民共 和 同 困 家标 准 ＜ 物 布 动 诊断技 术＞２ ０ ） （０ ２操作 。 １ 牛 布鲁 氏菌抗 体 Ｅ ＩＡ 试剂 盒 ． ７ ＬＳ 按照天 杰仁 和生物科技 （ 北京 ） 限公 司说 明 ５ 行。 有 ｝ 进 痫
１ ． 仪 器设 备 ３
法侄敏 感 、 异 、 作等 方 面均令 人满意…、在 ¨常榆测 特 操 巾 一 Ａ采用 Ｒ Ｐ Ｂ Ｔ试 验来 检 测 Ｊ清 进 行 家 裔的 田州筛 Ｉ Ｉ Ｌ
选 ， 大艟 的研 究 资料 证 明 ， 方法 与 常规 血清 试 验行 经 本
３ ℃恒 温 箱 、 管 、 密 移 液 器 、 标 仪 、 离 子 水 。 ７ 试 精 酶 去 １ ． 待 检 血 清 ４
２ １ 年 １ 第 ４期 （ ０ １ ２月 总第 １ ３期 ） ５
草 食家 畜 （ 季刊 ）
牛布鲁 氏菌抗体 Ｅ ＩＡ试剂盒 与国标血 清学 ＬＳ Ｓ Ｔ试验在布病检测中的比较试验 Ａ
布鲁氏菌病补体结合酶联免疫吸附试验抗体检测试剂盒敏感性和特异性评价
［ 摘 要］ 为评价布鲁 氏菌病补体结合酶联免疫吸附试验抗体检测试剂盒（ Ｃ Ｆ — Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ试剂盒） 的
敏感 性 、 特 异 性及 与其他 试 剂 盒 的符 合 率 ， 用 Ｃ Ｆ — Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ试 剂 盒对 布 病 感 染 地 区牛 、 羊血 清各 ２ ０ ０ 份， 布病 净 化 地 区牛 、 羊群 血 清各 １ ０ ０份进 行 抗 体 检 测 ， 同 时 与其 他 商 品化 检 测 试 剂 进 行 了 比较 。 结 果表 明 ， 感 染地 区牛 、 羊血 清抗 体 的 Ｍｃ Ｎ ｅ ｍ ａ ｒ 检 验 结果表 明 Ｃ Ｆ － Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ试 剂 盒 与 间接 酶联 免 疫 吸
Ｅｎｚ ｙ ｍｅ Ｌｉ ｎ ｋｅ ｄ Ｉ ｍ ｍ ｕｎ ｏ ｓ ｏ ｒ ｂｅ ｎ ｔ Ａｓ ｓ ａ ｙ Ｋｉ ｔ ｆ ｏ ｒ Ｄｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｎ ｇ Ｂｒ ｕｃ ｅ ｌ ｌ ｏ ｓ ｉ ｓ Ａｎ ｔ ｉ ｂｏ ｄ ｉ ｅ ｓ
ＷＡ Ｎ Ｇ Ｎ ａ ｎ ， Ｙ Ａ Ｏ Ｘ ｕ ｅ — ｊ ｕ ｎ ， ＭＡ Ｌ ｉ － ｆ ｅ ｎ ｇ ， ＷＡ Ｎ Ｇ Ｘ ｉ ｕ － ｌ ｉ ， Ｃ Ｈ Ｅ Ｎ Ｇ Ｊ ｕ ｎ － ｓ ｈ ｅ ｎ ｇ ，
ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｍｅ ｎｓ ｗｅ ｒ ｅ ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ｂ ｕｃ ｒ ｅ ｌ ｌ ｏ ｓ ｉ ｓ —ａ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ａ ｒ ｅ ａ ｓ ｓ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｉ ｎ ｇ ＣＦ—ＥＬＩ Ｓ Ａ ｋｉ ｔ ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｂ ｒ ｕｃ ｅ ｌ ｌ ｏ ｓ ｉ ｓ ａ ｎ ｔ ｉ ｂ ｏ ｄｉ ｅ ｓ． ｗｈ ｅ ｒ ｅ ｃ ａ ｓ ｅ ｓ ｈ ａ ｄ ａ ｌ ｒ ｅ ａ ｄ ｙ ｂｅ ｅ ｎ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ｅ ｄ．Ａｎ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｏ ｆ ２ ００ ｂｏ ｖ ｉ ｎ ｅ ａ ｎｄ ｓ ｈ ｅ ｅ ｐ ｓ ｅ ｕ ｍ ｓ ｒ ｐｅ ｃ ｉ ｍｅ ｎ ｓ ｏｒ ｆ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｎ ｇ ａ ｎ ｔ ｉ ｂ ｏ ｄ ｉ ｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ｎ ｏ ｂ ｕｃ ｒ ｅ ｌ ｌ ｏ ｓ ｉ ｓ －ａ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ａ ｒ ｅ ａ ｓ，ｗｈｅ ｒ ｅ １ ３ ０ ｃ ａ ｓ ｅ ｓ ｈａ ｄ ｂ ｅ ｅ ｎ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｉｅ ｆ ｄ．Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｓ ｈｏ ｗｅ ｄ
动物布鲁氏菌病ELISA竞争酶联免疫吸附
酶联免疫吸附（ELISA）是一种常用的实验方法，用于检测动物体内是否存在特定抗体或抗原物质。
本文将介绍动物布鲁氏菌病ELISA竞争酶联免疫吸附的原理、步骤和应用。
1. 简介动物布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种传染病，主要感染牛、羊、猪等多种动物。
该病对动物的健康和生产能力造成严重影响，也对人类健康构成威胁。
ELISA是一种高效、敏感、特异性好的检测方法，广泛应用于布鲁氏菌病的诊断和研究。
2. 原理动物布鲁氏菌病ELISA竞争酶联免疫吸附的原理基于抗原与特异性抗体之间的竞争反应。
简而言之，ELISA试剂盒中包含布鲁氏菌特异性抗原，该抗原与待检样品中的布鲁氏菌抗体发生竞争结合。
具体步骤如下：•第一步：将待检样品与ELISA试剂盒中的抗原结合物共孵育，使样品中的抗体与抗原结合。
•第二步：将试剂盒中的竞争抗体加入孵育体系，竞争抗体与试剂盒中的抗原结合。
•第三步：将孵育体系中未结合的抗体和竞争抗体洗掉。
•第四步：加入酶标记的二抗与抗原或竞争抗体二抗结合形成复合物。
•第五步：加入底物使酶作用，产生可定量检测的颜色反应。
•第六步：使用酶标仪测量底物反应的光密度，光密度与待检样品中布鲁氏菌抗体的浓度成正比。
3. 步骤动物布鲁氏菌病ELISA竞争酶联免疫吸附通常分为以下步骤：3.1 样品处理收集待检样品，如血清或乳汁，根据样品特性进行适当处理，如稀释、离心等。
3.2 试剂准备准备ELISA试剂盒，包括抗原结合物、竞争抗体和酶标记的二抗等。
3.3 抗原结合将待检样品与抗原结合物共孵育，使布鲁氏菌抗体与抗原结合。
3.4 竞争结合加入竞争抗体使其与试剂盒中的抗原竞争结合，形成抗原-抗体-竞争抗体的复合物。
3.5 洗涤使用缓冲液进行多次洗涤，去除未结合的抗体和竞争抗体。
3.6 酶标记的二抗结合加入酶标记的二抗与抗原或竞争抗体复合物结合，形成二级抗体复合物。
3.7 底物反应加入底物使酶作用，产生可定量检测的颜色反应。
3.8 光密度测量使用酶标仪测量底物反应的光密度，光密度与待检样品中布鲁氏菌抗体的浓度成正比。
动物结核、布病检测试剂盒
30 中国农村科技 CHINA RURAL SCIENCE & TECHNOLOGY 布鲁氏菌病（布病）和牛结核病（简称“两病”）是《国家中长期动物疫病防治规划(2012—2020年)》明确指出需要优先防治的病种。
准确诊断是“两病”防控的关键环节。
要实现这一目标，首先需要解决布病阳性血清标准化的问题。
丁家波和团队通过科研攻关，建立了布病阳性血清选择的方法，成功研制将各种布病诊断方法的判定标准统一在同一国际单位的布病阳性血清标准品，弥补了国际上布病阳性血清标准品“不标准”的技术缺陷。
在此基础上，开发了系列布病诊断试剂盒，实现了不同诊断方法之间的高度吻合性，提高了布病诊断的准确性，并逐步成为我国动物“两病”诊断的主要方法，为“两病”防控提供关键的技术保障。
国家重点研发计划“畜禽重大疫病防控与高效安全养殖综合技术研发”专项——牛羊重要疫病诊断与检测新技术研究项目（2016YFD0500900）。
中国兽药监察所、华中农业大学等。
在本项目立项以前，我国“两病”检测主要依赖传统方法或进口ELISA试剂。
布病传统诊断方法敏感性和特异性低，且不适合高通量检测；牛结核病诊断的传统方法为牛结核菌素皮内变态反应试验，检测过程费时耗力，结果判断主观性强；进口试剂盒不仅价格昂贵，而且不同品牌试剂盒检测结果存在较大差异，试剂盒质量评价成为新的问题。
为了解决上述问题，丁家波研究员带领团队深入分析，大胆推测，并通过大量试验发现，最终得出的结论是：要把统一诊断标准作为布病准确诊断的突破口。
只有将不同诊断试剂的临界值控制在一个相对固定的范围内，才能确保诊断结果的彼此吻合，而该临界值的标准应与经典的补体结合试验判定标准保持一致。
项目组攻克布病阳性血清制备关键技术，创建国家布病参考血清库，为评价各类布病诊断试剂提供了不可或缺的参考物质。
项目首创布病鉴别诊断技术、创制7种新技术、改进3种常规技术，成功开发“两病”诊断试剂盒，其中布病抗体检测试纸条首次实现了对多种动物现场快速检测，获国家1类新兽药证书。
检测奶牛布鲁氏菌病试验方法的比较
中 图分 类 号 ： ８ １ ３ ￥ ５． ４ 文 献 标识 码 ： Ｂ 文章 编 号 ： ５ ９６ ０ （ ０ ８ ０ — ０ ３０ ０ ２—０ ５ ２ ０ ）２０ ６—１
３ 试 验 结 果
３ １ ２ ０ 年 ５ 对 奶 牛 场 进 行 普 查 ， ９ ０ 。参 考 外 省 如福 建 漳平 、 安 及 邵 ６０ ２ １ ６ ） 永
武 疫 区 内 居 民 饮 生 水 与 肺 吸 虫 感 染 情 况 也 是 类 似 的 ， 吃蟹史 而皮 试 阳性 率 达 ２． ７ （４／ ５３ 。 无 １ ６ ％ ３ ３ １ ８ ） 湖 北 宜 昌疫 区 居 民 ， 吃 蟹 史 但 有 饮 生 水 习 惯 皮 试 无
１ ６ ６２ ０ ８ ４ — ０ ２进 行 。 Ｅ １ Ａ 试 验 判 定 标 准 ： 过 抗 原 一 ＬＳ 通
抗 体 反 应 ， 色后 在 ４ ０ｎ 测 量 吸 光值 ， 吸 收 值 与 显 ５ ｍ 光
样品 中 的 特 异 性 抗 体 的含 量成 正 比， ／ Ｓ Ｐ值 ＜ ０ ８ ． 判为抗 体 阴性 ；． ≤ｓ Ｐ值 判为抗体 阳性 。 ０８ ／
脊 椎 动物 的蠕虫 ， 其感 染 阶段有 两 个 以上 的 尚有曼
氏裂 头绦虫 ， 感 染 阶 段 既有 裂 头 蚴 ， 有 原 尾 蚴 。 其 又
短膜壳 绦虫 的六 钩蚴 卵与 甲虫 体 内的似囊尾 蚴都可
感 染终宿 主 。在线 虫 中 ， 犬蛔 虫 其 幼虫 期 卵 是感 如 染 期 ， 小动 物 （ 鼠类 ） 了感 染性 卵 ， 但 如 吃 其体 内蛔 蚴 若 被犬 吃下 亦可感 染 ， 这些 情况 应引起 寄生虫 学 ， 流
中兽药治疗牛霉菌毒素中毒
中国动物保健2024.01摘要：牛霉菌毒素中毒，是牛采食了发霉变质的饲（草）料而引起的疾病。
以流涎，口温稍高，口色红绛，舌苔黄腻，口津黏滑，口腔及舌体黏膜溃烂，眼结膜潮红或黄染，流泪，体温正常或稍高，食欲、反刍减少或停止，大便干燥并附有黏液或血丝，小便短少色黄为主证，是危害养牛业最严重的疾病之一。
笔者根据中兽医望闻问切诊法收集的临床症状，综合辨证分析认为：牛霉菌毒素中毒属湿热内毒壅结证。
宜以清热解毒、保肝护肾、滋养胃肠为治则。
探索运用自拟“加味黄连解毒散”合“加味茵陈蒿散”治疗，共收治牛霉菌毒素中毒病例69例，治愈65例，治愈率94.2%，有效68例，有效率98.6%。
关键词：加味黄连解毒散；加味茵陈蒿散；治疗；牛霉菌毒素中毒中兽药治疗牛霉菌毒素中毒尹华江1,2，何泽波3，李林波4，李常银1，张守聪1，王培勇1（1.兴文县动物疫病预防控制中心四川宜宾644400；2.四川荣州动物药业有限公司四川自贡643102；3.兴文县石海镇农业技术综合服务中心四川宜宾644419；4.兴文县五星镇农业技术综合服务中心四川宜宾644404）收稿日期：2023-06-05基金项目：2020年四川省“天府万人计划”天府农业大师项目。
作者简介：尹华江（1963—），男，研究员，研究方向为中兽医临床与中兽药创制。
Email ：***********************。
牛霉菌毒素中毒在临床中较为常见，常因采食了发霉变质的草料（青贮料）、酒糟、玉米、麦麸、豆粕、过期变质预混料等引起，已成为危害养牛业最严重的疾病之一。
近10年来，笔者探索运用中兽医辨证论治方法，采用自拟“加味黄连解毒散”合“加味茵陈蒿散”治疗，共收治牛霉菌毒素中毒病例69例，治愈65例，治愈率94.2%，有效68例，有效率98.6%。
现予报道，供同仁参考。
1辨证论治1.1临床辨证牛霉菌毒素中毒，急性病例表现为食欲、反刍减少或停止，眼结膜潮红，鼻镜干燥或汗不成珠，口温稍高，口色红绛，舌苔黄腻，口津黏滑，口气恶臭，体温正常或偏高1℃左右，初期拉痢、后大便干结附有黏液或带血丝，小便短少色黄，脉象洪数。
牛羊布鲁氏菌cELISA与RBT、SAT检测方法比较
化创建场”（以下简称“两场”）评估认证工作，
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技术支撑
并于 2015 年和 2021 年先后对“两场”评估标准进 行了修订。
2014 年以来，为做好布鲁氏菌净化工作，山 东省日照市开展了检测方法优化筛选等净化关键技 术研究。根据国标 GB/T 18646—2018 中规定，虎 红平板凝集试验（RBT）、试管凝集试验（SAT）、 竞争酶联免疫吸附试验（cELISA）等方法为我国 动物布鲁氏菌病血清学诊断技术。在现阶段大规模 检疫检测中，血清学方法仍是最常用的诊断技 术 [7]。RBT 因操作简单，敏感性高，在实际应用 中常作为初筛手段；SAT 则适用于牛种、羊种和猪 种布鲁氏菌病血清学确诊。目前，市场上 cELISA 商品试剂盒种类繁多，为筛选敏感性高、可靠性好 的试剂盒，本试验拟将 2 种布鲁氏菌 cELISA 试剂 盒与 RBT、SAT 方法进行检测比较分析，以期为 快速、准确诊断牛羊布鲁氏菌病提供参考。 1 材料与方法 1.1 试剂
RBT、SAT， 参 照 动 物 布 鲁 氏 菌 病 诊 断 技 术 （GB/T 18646—2018）步骤开展试验；cELISA 试
剂盒检测，严格按照相应说明书进行操作。 1.5 cELISA、RBT 以及 SAT 方法比较分析
为 更 好 地 评 价 3 种 检 测 方 法 的 可 靠 性， 将 cELISA 检 测 结 果 分 别 与 RBT、SAT 进 行 比 较， 4 种分析指标为假阴性率、假阳性率、符合率和 Kappa 值。 假 阴 性 率 是 指 cELISA 检 测 为 阴 性 用 RBT/SAT 检测为阳性与 RBT/SAT 检测所有阳性之 和的百分比；假阳性是指 cELISA 检测为阳性用 RBT/SAT 检测为阴性与 RBT/SAT 检测所有阴性之 和的百分比；符合率是指 cELISA 检测的阳性与阴 性样本与两种检测方法（RBT、SAT）结果相一致 的总和与所有检测样本的百分比。
几种牛羊布鲁氏菌病抗体检测方法的比较
２ ． １ 不 同检测方法牛羊布鲁氏菌病抗体检测结果 用虎红平板凝集试 验 、试管凝集试验 、间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 、 竞争 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ和胶体金检测试纸条对 １ ０ ７ 份 牛 血清 和 ４ ５份 羊 血清 样 品进 行检测 ，检 测结 果详
见表 １ 。
表 １不同检测方法布 鲁氏茵病 抗体检测 结果 比较
合率分别为 ９ ８ ． １ ３ ％、 ９ ９ ． ０ ７ ％、 １ ０ ０ ％和 ９ ７ ． ２ ０ ％。
表 ３试验凝集试验和其他四种方法检测羊 血清样本的符合率 比较
针对羊血清 ， 虎 红平 板凝 集 试 验 、 间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ
法 、竞争 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法和胶体金法与试管凝集试验的 符 合率 分 别为 ９ ７ ． ７ ８ ％、 ９ ７ ． ７ ８ ％、 １ ０ ０ ％和 １ ０ ０ ％。 ３讨 论 与分析 根据《 布鲁 氏菌病防治技术规范》 和《 动物布鲁
１ ． ２试 验方 法和 结果 判定
虎红平板凝集试验和试管凝集试验按照动物布 鲁 氏菌病诊 断技术标准 （ Ｇ Ｂ 厂 ｒ １ ８ ６ ４ ６ — ２ ０ ０ ２ ） 中虎红 平板凝集试验和试验凝集试验方法进行操作与判定田 。 间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 、 竞争 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ和胶体金检测试纸条检测 方 法均按 照试剂 盒说 明进 行操作 和结果 判定 。
通讯作者 ： 宁华杰 ， ３ １ ７ ６ ６ ０ ６ ０ ８ ＠ｑ ｑ ． ｃ ｏ ｍ。
Ｈ ｕ ｎ ａ ｎ Ａ ｎ ｉ ｍ ａ ｌ ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｖ ｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ， Ｎ ｏ ． ３ ， ２ ０ １ ７ ． （ Ｔ ０ ￡ ａ ｌ Ｎ ｏ ． １ ９ ９ ） ３ ５
5种布鲁氏菌病竞争ELISA抗体检测试剂盒的比较
5种布鲁氏菌病ELISA抗体检测的比菊虞一聪，桂平雄，倪柏锋，王雅婷，董建斐，周蕾，娟，谢，赵，徐(浙江省动物疫病预防控制中心，浙江杭州311199)摘要:为提高布鲁氏菌病检测诊断能力，采用5种布鲁氏菌病抗体竞争酶联免疫吸附试验(cELISA)试剂盒对背景清楚的166份牛、羊、猪血清样本进行检测，同试集试验(SAT)作为照方法，5试剂盒的敏感性、特异性、Youden指数及AUC值等参数。
结果显示,5种试剂盒的敏感性为88.00%-100.00%;特异性为86.21%-99.14%；Youden 指数为86.21%~95.69%;AUC值为0.931~0.978；McNemac检验结果显示,5种试剂盒中厂家A、C和E检验结果与SAT 结果差异不显著(P>0.05),厂家B和D检验SAT结果差异显著(P<0.05);Kappa一致性检验分析表明,5种试剂盒与SAT结果均有高度的一致性(0.790~0.930);成本-效果分析表明,5种试剂盒优先选择依次为A、C、B、E、D%本试验结为诊断用试剂，从而提高诊断准确性。
关键词:布鲁氏菌病；竞争ELISA；试剂盒；比较中图分类号：R378.5文献标志码:A文章编号：0529—6005(2020)12—0036—04Comparison of5cELISA Kite for Detecting AnhCodiet of BrucellosisYUYc-cong,GUIPcng-xcong,NIBac-eeng,WANGYa-ecng,DONGJcan-eec,ZHOULec,CHAIJuan,XIERong-huc,ZHAOLcng-yan,XUHuc(Zhejiang Provincial Center for Animal Disease Control,Hangzhou311199,China)Abstract:To improve the ability of detection and diaanosis of brucellosis,five cELISA kits were used to detect166serum samples for brucellosis antibodies from cattle,sheep and pigs with a cleac background.Meanwhile,tbe sensitivity,specificity,Youden's J vaeue&and AUCvaeue&oeeheecvekceweoedeeeomcned bySATa&aoeeeoencemeehod.Theoe&uee&howed ehaeehe&en&cecvceyoeehe five kiw was88.00%〜100.00%；the specificity was86.21%-99.14%；the Youden&s J vvlue was86.21%-95.69%；the AUCvaeuewa&0.931〜0.978.McNema o ee&e oe&u ee&howed no&cgnceccane&eaececcaedc e oencewa&ob&eoved beeween eheoe&ueeoe manufacturers A,C,and E with SAT results(P>0.05),while significant dWerence was observed between the SAT results of manu-factuer B and D(P<0.05).Kappa consistency test analysis showed that the five kiw were highly consistent with SAT results (0.790〜0.930).The cos e-e i ec ecvene s ana eys cs showed ehaeehepocooceyoieheicvekceswasA,C,B,Eand D.Theseoesueeswc e provide a reference for the selection of diaanostic kits,thereby improving the diaanostic accuracy.Key words:Brucellosis；cELISA；kit；comparisonCorresponding author:XU Hui,E-mail:****************布鲁氏菌病!Bruce/osW，简称布病)是由布鲁氏牛、羊、猪、鹿、乳动物和人类感染的一种人兽共患传染病[1]%家畜感染后畜生流产、早产、，公畜炎和附睾炎，殖能力和生产能降，畜收稿日期：2020—06—04基金项目：浙江省农业重大技术协同推广计划(2019XTTGXM02-4)；浙江省"三农六方”科技协作项目(CTZBE180706LWZENY1):一(1989-),男，兽医师，硕士，主要从事动物疫病监测工作,E-mail:jordanyuyicong@163-com:,E-mac:****************产品的质量和安全[2]%上170多个国家和地区先生人兽布病疫情2050年代布病曾在我国广泛流行，疫情严重地区人畜感染率达50%%20世纪80—90年代，由于防 度加大，疫情降低水平％自2000年，人兽共患布病疫情年上，对畜牧业构成了严重威胁⑷％动物布鲁氏菌病诊断技术(GB/T18646)在更新至2018年版后，增加竞争酶联免疫吸附试验(cELISA)作为血清学确诊试验％因试集试验(SAT)操作繁琐、耗时,cELISA较SAT具有更高的特异性，便、判％为此，作SAT作为参照方法，选择5个厂家cELISA试剂盒进行比对试验，根据检测结果分析评价各试剂盒的检测性能,为本实验室选择诊断用试剂盒提供参考。
动物布鲁氏菌病荧光pcr检测说明书
动物布鲁氏菌病荧光pcr检测说明书一、引言动物布鲁氏菌病是一种由布鲁氏菌引起的传染病，对动物和人类都有很大的危害。
为了更好地控制和预防这种疾病的传播，科学家们研发出了一种新的检测方法——动物布鲁氏菌病荧光PCR检测。
本文将详细介绍这种检测方法的操作步骤和注意事项。
二、检测原理动物布鲁氏菌病荧光PCR检测是一种基于聚合酶链式反应（PCR）技术的检测方法。
它利用荧光标记的探针与PCR扩增产物结合，通过荧光信号的检测来判断样品中是否存在布鲁氏菌。
三、操作步骤1. 样品处理将待检样品（如血液、组织等）收集到无菌离心管中，离心10分钟，取上清液，加入等体积的PBS缓冲液，混匀后离心5分钟，弃上清液，留下沉淀。
2. DNA提取将沉淀加入适量的DNA提取试剂，按照试剂盒说明书进行DNA提取。
3. PCR扩增将提取的DNA加入PCR反应体系中，按照试剂盒说明书进行PCR扩增。
4. 荧光PCR检测将PCR扩增产物加入荧光PCR检测体系中，按照试剂盒说明书进行荧光PCR检测。
四、注意事项1. 样品收集和处理要严格按照规范操作，避免污染和误差。
2. DNA提取和PCR扩增要在无菌条件下进行，避免外源DNA污染。
3. 荧光PCR检测要按照试剂盒说明书进行，避免误判和假阳性。
4. 检测结果要结合临床症状和其他检测结果进行综合分析，避免误诊和漏诊。
五、结论动物布鲁氏菌病荧光PCR检测是一种快速、准确、敏感的检测方法，可以有效地帮助动物卫生监测和疾病防控工作。
但是，它仍然需要在规范操作和科学分析的基础上进行，才能发挥最大的作用。
牛布鲁氏菌病的诊断和防控措施
牛布鲁氏菌病的诊断和防控措施作者：安伯玉来源：《中国动物保健》2024年第01期摘要：布病是由布鲁氏菌引起的人畜共患传染病，对人民的身体健康有着严重危害并且能够影响畜牧业地健康发展，做好防治工作有着重要的意义。
牛养殖中布鲁氏菌病，给养殖业户带来很大经济损失，并影响公共卫生安全。
现针对牛布鲁氏菌病的诊断和防治措施，展开具体的论述，提出防控策略。
关键词：牛；布鲁氏菌病；诊断；防控策略近年来，市场需求不断增加，特别是预制菜产业的盛起，促使牛养殖业保持良好的发展态势。
数据显示，2021年中国肉牛存栏量为9 817.25万头，同比增长2.7%。
从出栏量方面来看，得益于养殖数量及下游需求的增长，近年来我国肉牛出栏量平稳增长。
为保证牛养殖业健康高质量发展，做好疫病的防治，避免疫病的发生带来重大损失，有着重要的意义。
1 布鲁氏菌病的概述牛布鲁氏菌病的潜伏期相对来说较长，大约为14～180 d，主要是隐性感染。
在布病的常发地区，牛布鲁氏菌病的发病过程主要是慢性，并没有显性的发病经过。
不过，若布氏杆菌侵入清净区，那么会呈现急性经过，在妊娠牛群中容易暴发流行。
为有效进行防治，需掌握一定的诊断方法，做到精准诊断与有效防治，进而避免牛布鲁氏菌病的发生带来很大损失。
2 牛布鲁氏菌病的诊断技术2.1 牛布鲁氏菌病的临床症状犊牛感染牛布鲁氏菌病的早期，没有特别明显的特征。
假如是怀孕的母牛得了牛布鲁氏菌病，症状就会较为明显，很多都会出现流产这一特征，特别是在妊娠5～8个月之间更容易流产，即使没有流产的母牛多半也会出现死胎或者虚弱犊牛。
流产后，也可能出现胎盘滞留或子宫内膜炎的情况。
流产以后母牛的阴道还会逐渐把一些褐色的恶臭液体排出。
还有其他患病的病牛有的也會引起一些相对复杂的并发症。
比如说有的公牛还可能会引发睾丸炎和关节炎等。
2.2 实验室诊断方法1）血清学诊断法。
一般来说，牛布鲁氏菌病的血清学诊断方法，主要是S-LPS（光滑型脂多糖），比如虎红平板凝集试验（RBT）、试管凝集试验（SAT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、补体结合试验（CFT）等。
布鲁氏菌病抗体检测试纸条对布病检测的准确性评价
表 2 牛羊血清中布病抗体的综合率 表 3 牛羊全乳全血布病抗体符合率
2.2.1 相关制品布氏杆菌抗体检测卡（血清）；布氏杆菌病虎 红平板凝集试验抗原、阳性血清和阴性血清；布氏杆菌病试 管凝集试验抗原、阳性血清和阴性血清；布鲁氏菌 ELISA 抗 体检测试剂盒。
畜牧兽医科技信息
2020 年第 05 期 19
2.2.2 待检样品采集分离的牛血清 100 份、羊血清 50 份。 2.2.3 结果记录分别记录布氏杆菌抗体检测卡、布氏杆菌病 虎红平板凝集试验、布鲁氏菌 ELISA 抗体检测试剂盒及布氏杆 菌病试管凝集试验四种方法对牛、羊血清样品的检测结果，并分 别计算布氏杆菌抗体检测卡与其它三种检测方法的符合率。 3 结果比对
全乳布病抗体检测试纸条与布氏杆菌全乳环状试验检 测牛、羊全乳中布病抗体的符合率（见表 1）
布氏杆菌抗体检测卡与布氏杆菌病虎红平板凝集试验、 布鲁氏菌 ELISA 抗体检测方法及布氏杆菌病试管凝集试验 检测牛、羊血清中布病抗体的符合率（见表 2）
布氏杆菌抗体检测卡检测血清与全乳布病抗体检测试 （见表 3）
试验研究
布鲁氏菌病抗体检测试纸条对
布病检测的准确性评价
杨铭芬，张 兵，杨锦兰，黄栎莹
（南宁市动物疫病预防控制中心，广西 南宁 530001）
关键词：布鲁氏菌；试验方法；结果对比
DOI:10援3969/J.ISSN援1671-6027援2020援05.014
布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种自然疫源性人畜 共患传梁病，以下简称布病。该病特点为人感染后，病程长， 反复发作，长期不愈。家畜感染则出现流产和不育，严重危害 畜牧业生产和人类健康。因为家畜布病的存在，每年会减少 肉类的产量，牛产乳量的下降。广西南宁市奶牛和山羊的养 殖量位列全区前矛，因此在养殖过程中，一种快速、便捷的布 病检测方法，能够很好地帮助养殖户筛查出感染个体，做到 早诊断早隔离，利于牛羊养殖业的发展。为此，我中心实验室 近年来，研究布病抗体检测试纸条（卡），与常用的虎红平板 凝集试验、布鲁氏菌 ELISA 抗体检测以及环状试验检测方法
牛羊不同布鲁氏菌病血清学检测方法的比较
布鲁氏菌病（以下简称布病）是由布鲁氏菌属细菌侵入机体引起的一种人畜共患传染病，动物感染布病主要表现为流产、睾丸炎、附睾炎等[1]，造成生产性能和繁殖机能的下降；全球有170多个国家和地区都报告过布病病例[2]，每年报告约50万人感染布病[3]，造成巨大的经济损失和社会公共卫生问题。
我国将其列为乙类传染病、二类动物疫病。
自21世纪以来，随着畜牧业发展，动物流动性增加等原因，我国牛羊布病感染状况总体呈上升趋势，近年来，全国动物疫控系统通过不断推进布病防治、监测和净化，取得了一定的成效。
但受动物流动性大、基层防疫体系薄弱、淘汰病畜难度大、防治经费投入不足等因素影响，我国布病防控形势依然十分严峻。
布病的实验室诊断方法包括病原学方法和血清学方法。
由于病原分离耗时长，对实验室生物安全级别要求高、存在风险等原因，因此并不常用；血清学诊断方法操作简单、适用性广，包括虎红平板凝集试验（RBT ）、试管凝集试验（SAT ）、补体结合试验（CFT ）、乳牛全乳环状试验（MRT ）、酶联免疫吸附试验（ELISA ）、荧光偏振测试（FPA ）、胶体金免疫层析法（GICA ）[4]等。
SAT 法优点是价格便宜，可以定量测定抗体水平，具有较高的特异性，因此多用于布病检测的复核确认[5]。
ELISA 法操作方便，灵敏度高，一次可以完成大量样品的检测，在2018年纳入我国法定布病检测方法。
cELISA 不仅可以检测交叉感染，还可以鉴别疫苗接种和野毒株感染[6]。
胶体金免疫层析技术具有快速检测的特点，不需要配置仪器，但需要通过肉眼判定结果，敏感度不够高，存在假阳性和假阴性，比较适合于流行病学调查及野外现场检测[7]。
为检测对比各种试剂的有效性，确保布病检测结果准确，减少漏诊和误诊情况，本研究对3种布病血清学检测方法进行了比对试验。
1材料与方法1.1材料1.1.1检测试剂布鲁氏菌病试管凝集试验抗原，购自中监所，批号20191030，布鲁氏菌病竞争ELISA 抗体检测试剂盒，购自青岛立见诊断技术发展中心，批号020162004，布鲁氏杆菌抗体高敏荧光检测试剂盒，购自成都微瑞生物有限公司，批号BRB20102116379。
竞争ELISA和间接ELISA方法应用于牛布鲁氏菌病净化的研究
竞争ELISA和间接ELISA方法应用于牛布鲁氏菌病净化的研究赵灿奇;冯宇;吕浪;李彦军;魏玉磊;丁家波;陈祥;蒋卉【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2024(55)5【摘要】旨在评价竞争ELISA方法和间接ELISA方法联合使用在布鲁氏菌病(以下简称“布病”)净化中的效果,为布病防控提供技术支撑。
采用本实验室开发的动物布鲁氏菌病竞争ELSIA(cELISA)抗体检测试剂盒、牛布鲁氏菌病间接ELISA(iELISA)抗体检测试剂盒及微量法补体结合试验(mCFT),对西北某牛场3 271份牛血清进行检测。
本研究采用cELISA初筛、iELISA确诊的净化策略,对检测阳性牛进行淘汰,可疑牛和阴性牛在完全消毒后隔离饲养,并在前一次检测后每隔1个月重新对群体采样,进行多次连续的“检—淘”策略,在群体的个体阳性率低于2%或全部转阴后使用微量补体结合试验(mCFT)进行验证。
并在群体全部转阴后继续检测2个月后确定净化结果。
结果显示,首次检测阳性率35.36%的感染群体实施本净化策略后,在第1个月阳性率下降至25.41%,第2个月下降至7.16%,第3个月下降为1.86%,到第4个月则实现了布病阳性群体的全面转阴,mCFT验证个体阴性率100%。
此后持续检测2个月,个体阳性率均为0,至此实现了感染群体的布病净化,使得群体内近一半的牛免于扑杀,大大减少了经济损失。
综上发现,将cELISA用于布病初筛,iELISA用于布病确诊的联合使用,经多次连续检测并结合常规的隔离消毒措施,可以在短时间内实现对于布病感染群体的全面净化。
【总页数】8页(P2146-2153)【作者】赵灿奇;冯宇;吕浪;李彦军;魏玉磊;丁家波;陈祥;蒋卉【作者单位】中国农业科学院北京畜牧兽医研究所;云南省大理州动物疫病预防控制中心;内蒙古阿拉善右旗动物疫病预防控制中心;内蒙古阿拉善左旗宗别立镇综合保障和技术推广中心;江苏省人兽共患病学重点实验室江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心【正文语种】中文【中图分类】S852.614【相关文献】1.检测新城疫病毒中和抗体的间接ELISA和竞争ELISA方法的初步建立2.牛布鲁氏菌病间接ELISA检测方法的建立及应用3.CFT、间接ELISA、竞争ELISA检测牛布氏杆菌病4.动物过敏原牛血清白蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立5.环丙沙星间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测方法的建立因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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仅供科研使用，不得用于临床检验。
牛布鲁氏菌病抗体定性检测试剂盒（ELISA）说明书
【产品名称】
通用名称：牛布鲁氏菌病抗体定性检测试剂盒（ELISA）
英文名称：Test Kit for Antibodies to Bovine Brucella ELISA KIT
【包装规格】
96人份/盒
【预期用途】
仅供科研使用，布鲁氏菌病是由布鲁氏菌（Brucella）引起的人、畜共患传染病，其特征是生殖器官和胎膜炎，引起流产、不育和各种组织的局部病灶。
本试剂用于检测牛血清中布鲁氏杆菌抗体，可用于布鲁氏菌疫苗免疫效果评价。
【检验原理】
本试剂盒系由预包被布鲁氏菌抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测牛血清、血浆样本中布鲁氏菌抗体。
实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有布鲁氏菌抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm 波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有布鲁氏菌抗体。
【主要组成成分】
主要成分
需要但未提供的材料及耗材
1、酶标仪
2、精密移液器及一次性吸头
3、蒸馏水
4、洗瓶或者自动洗板机
5、37℃水浴锅或恒温箱
6、500ml量筒
7、无粉一次性乳胶手套
【储存条件及有效期】
1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。
2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。
3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。
【适用仪器】
半自动的酶标仪，如Thermo MK3，或者国产酶标仪。
【样本要求】
样本类型和采集
以下只是列出样品采集的一般指南。
所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。
1、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。
2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。
3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。
在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。
样本在2-8℃条件下，可以储存72h，或者在- 20℃储存6个月。
样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。
【检验方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.空白对照孔加样品稀释液100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
4.混匀，置37℃反应30分钟。
5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。
6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。
置37℃反应30分钟。
7.洗涤，同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl，混匀，用空白孔调零(即样本孔吸光值减去空白孔吸光值)，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。
【参考值】实验正常的情况下，阴性对照≤0.15，阳性对照≥0.6。
【检验结果的解释】
1. 样品A值≥0.38为阳性；样品A值＜0.38为阴性。
2.本实验结果为阴性时表明牛只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测牛血清、血浆中布鲁氏菌抗体，根据A值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。
【保存条件】
2℃-8℃保存，有效期6个月。
【注意事项】
生物安全
1、检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。
2、试剂盒的液体组分中，含有proclin-300防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟雾与皮肤接触。
3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。
戴上防护手套，实验完成后彻底洗手。
技术提示
1、混合蛋白溶液时，避免起泡。
2、加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。
3、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是保证实验结果准确性的必要条件。
4、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。
5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为黄色。
6、实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
7、所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。
废物处理
所有使用或未使用的试剂，所有污染性的一次性材料，应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序，每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别，进行废物和污物的处理，同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。