利用SRAP标记分析春兰种质资源遗传多样性
SRAP分子标记在园林植物遗传育种中的应用
分子标记技术以能直接研究 DNA 水平上的遗 传变异，不 受 组 织 器 官、环 境 及 基 因 是 否 表 达 的 限 制，其多态性高，遗传稳定等优点广泛应用于植物的 遗传育种研究［1］。在近 30 年中，分子标记技术得到 了快速发展，目前 DNA 分子标记已达几十种，大致 可以分为 4 类： 以分子杂交技术为基础的标记，如 RFLP； 基于 PCR 技术的标记，如 RAPD、SSR、ISSR、 AFLP 和 SCAR 等； 基于 DNA 序列的标记，如 cSSR、 ITS 测序分析技术等； 以 DNA 芯片技术为基础的标 记，如 SNP 等。
1 SRAP 技术的原理与特点
相关序 列 扩 增 多 态 性 （ sequence-related amplified polymorphism，SRAP） 分子标记技术最初是由美 国加州大学蔬菜作物系 Li 与 Quiros 博士［2］于 2001 年在研究芸薹属作物时创立的，又称为基于序列扩 增多 态 性 （ sequence-based amplified polymorphism， SBAP） 。它是通过一对独特的引物对开放阅读框 （ ORF） 进行 PCR 扩增，由于物种及个体间的差异导
随着园林绿化的发展，对园林植物的需求度也 越来越高，如要求物种丰富，品种多样化，观赏性状 特异性高，可以周年生产，抗逆性强等。而近几年一 种新的分子标记方法———相关序列扩增多态性（ Se-
quence-related amplified polymorphism，SRAP） 以其多 态性 高、非 等 位 检 测，样 品 信 息 量 大，操 作 简 便，重 复、稳定、可靠性高和费用低等优点，广泛应用于园 林植物的遗传多样性和亲缘关系分析、图谱构建、种 质资源鉴定、基因克隆和基因定位的研究中，为园林 植物的遗传育种提供更确切，更充分的理论依据。
基于分子标记的遗传多样性研究
基于分子标记的遗传多样性研究随着生物技术的发展，分子标记成为研究遗传多样性的重要手段之一。
分子标记是指通过分子生物学技术获得的、在DNA水平上区别不同个体间基因类型的DNA片段，如限制性片段长度多态性(RAPD)、随机扩增多态性(DNA)（SRAP）、序列特定放大长度多态性(SSR)（简称微卫星）、单核苷酸多态性(SNP)等。
这些分子标记可以直接或间接地反映不同物种及个体间的遗传变异情况，进而研究物种演化、种间亲缘关系、种群间遗传分化及群体结构等。
从方法学上看，基于分子标记的遗传多样性研究具有优势。
相较于传统的形态分类法，基于分子标记的研究方法不仅具有更高的分类精度和重复性，且能够在区别性弱、难以直观形态分类的物种中发挥作用。
基于SSR标记的遗传多样性研究是目前应用较为广泛的方法之一。
SSR标记是指在基因组DNA序列中间处不断重复出现的富集序列区段，长度一般约为10-20个核苷酸，具有多态性。
SSR标记具有多态性高、遗传信息丰富、重复性好、扩增容易等优点，可用于物种间、种群间遗传差异的检测和分子标记辅助育种等应用。
研究表明，SSR标记具有较高的遗传多样性，因此可以用于评估不同物种及群体间的遗传分化程度。
比如，许多植物物种中，种群间遗传多样性与地理距离呈负相关，因此利用SSR标记分析可以对不同物种的子群间遗传分化进行深入探讨。
此外，SNP是最近发展起来的一种新型分子标记，是单核苷酸的多态性，基于SNP的遗传多样性分析可用于评估不同物种与群体间的遗传分化，并揭示种间亲缘关系的演化过程。
总之，基于分子标记的遗传多样性研究是现代遗传学的重要组成部分，也是物种分类、种群遗传学及育种的重要工具。
未来，随着技术的不断发展以及遗传多样性研究的深入，基于分子标记的研究手段将在遗传多样性研究领域中扮演更加重要的角色，助力生命科学研究的发展和进步。
阳荷种质资源评价及分子标记辅助育种
阳荷种质资源评价及分子标记辅助育种收集西南地区野生及栽培阳荷（Zingiber striolatum Diels）种质资源，通过SRAP 标记技术、聚丙烯酰胺凝胶电泳检测技术及银染技术，并利用NTSYS-pc2.10e软件，揭示种质资源间的遗传多样性和亲缘关系，鉴选出阳荷育种核心材料。
为阳荷种质资源资源鉴定、应用及遗传育种提供分子依据，建立完整的阳荷分子标记技术辅助育种路线。
主要采用的分子标记技术为SRAP。
研究内容及步骤如下：1、阳荷SRAP-PCR扩增条件优化利用植物基因组DNA提取试剂盒，完成收集到的阳荷种质资源基因组DNA 的提取，并用紫外分光光度仪测定DNA浓度；随机选择5个材料的总DNA，对阳荷的SRAP-PCR扩增进行条件优化，筛选出PCR扩增的最优DNA浓度、Mg2+浓度、引物浓度、Taq酶及dNTPs浓度。
2、阳荷SRAP引物筛选根据阳荷SRAP-PCR扩增条件的优化结果，随机选择5个材料的基因组DNA 作为模板，对参试的SRAP上、下游引物组合进行引物筛选，重复扩增2次；银染后，筛选出扩增条带清晰、多态性丰富及重复性好的引物。
3、阳荷种质资源遗传多样性分析利用经过筛选的引物，对收集到的所有阳荷资源DNA进行SRAP-PCR扩增，统计丙烯酰胺胶电泳图谱上有差异且易识别的多态性条带，在相同迁移率的位置上，有带记为1，无带记为0，组成1和0的原始矩阵。
采用NTSYS-pc 2.10e软件分析，利用SHAN程序中的UPGMA方法进行聚类分析，并通过Treeplot模块生成聚类图；揭示材料间的遗传距离，分析西南地区阳荷资源的遗传多样性及亲缘关系。
4、阳荷育种核心材料鉴选结合阳荷资源SRAP分子标记的遗传多样性及亲缘关系分析结果与植物学性状的表现鉴定、抗性等分析结果，筛选出育种核心材料。
筛选原则为：在同一种内，选择遗传距离远、携带有利性状较多的材料作为育种核心亲本，有利于通过种内杂交较快选出新品种；在种间，选择有利性状较多且互补的材料作为育种核心亲本，有利于通过种间远缘杂交可选出优良新材料。
利用SSR和SRAP标记分析花椰菜自交系的遗传多样性
ｉ ｎ ｔ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｕ ｔ ｉ ｌ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｃ ａ ｕ ｌ ｉ ｌ ｆ ｏ ｗｅ ｒ ｇ ｅ ｒ ｍｐ ｌ ａ ｓ ｍ ｒ ｅ ｓ ｏ ｕ ｒ ｃ ｅ ｓ ｂ ｙ ｓ ｉ ｍｐ ｌ ｅ ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｅ ｒ ｅ ｐ ｅ ａ ｔ （ Ｓ Ｓ Ｒ ）ａ ｎ ｄ ｓ ｅ ｑ ｕபைடு நூலகம்ｅ ｎ ｃ ｅ —
ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｐ ｅ ａ ｔ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｗｅ ｒ ｅ ｓ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ４ ８ Ｓ Ｓ Ｒ ｐ ｉ ｒ ｍｅ ｒ ｓ ｎｄ ａ ４ ８ Ｓ ＲＡＰ ｐ ｒ ｉ ｍｅ ｒ ｓ ． Ａ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｏ ｆ ４ ７ ｂ ａ ｎ ｄ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｇ ｅ ｎ ｅ ｒ ａ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ ｏｕ ｆ ｒ Ｓ Ｓ Ｒ ｐ ｉ ｒ ｍｅ ｒ ｓ ， ｉ ｎ ｃ ｌ ｕ ｄ ｉ ｎ ｇ ３ ９ ｐ ｏ ｌ ｙ ｍｏ ｒ ｐ ｈ ｉ ｃ ｂ ａ ｎ ｄ ｓ ， ｗｉ ｔ ｈ ａ ｎ ａ ｖ ｅ ｒ ａ ｇ ｅ ｏ ｆ ８ ３ ． ０ ％ ｐ ｏ ｌ ｙ ｍｏ ｒ ｐ ｈ ｉ ｓ ｍ． Ｆ ｏ ｒ ｕ Ｓ Ｒ ＡＰ ｐ ｒ ｉ ｍｅ ｒ ｓ
白交 系进 行 了遗 传 多样 性 分 析 ，分 别 从 ４ ８对 Ｓ Ｓ Ｒ引 物 、 ４ ８对 Ｓ Ｒ ＡＰ引物 中各筛 选 出 ４对 有效 引物 。４对 Ｓ Ｓ Ｒ 引物 扩 增 的 总条 带数 为 ４ ７个 ， 多 态性 条 带 为 ３ ９个 ， 平均 多态 性 比率 达 ８ ３ ． ０ ％； ４对 Ｓ Ｒ Ａ Ｐ引物 扩增 的 总条 带数 为 ８ ６个 ， 多态性 条 带 为 ５ １ 个， 平 均 多态 性 比率 为 ５ ９ ． ３ ％， 该 结果 显 示花 椰菜 自交系 间具有 较 丰 富 的遗 传 多样 性 。Ｕ Ｐ Ｇ ＭＡ聚类 分 析揭示 了花 椰菜 自交系 的熟 期与其 遗传 差异 相关 。 关 键 词 花 椰菜 ， 自交系 ， Ｓ Ｓ Ｒ ， Ｓ Ｒ Ａ Ｐ ， 遗传 多样 性
果树分子标记辅助育种研究进展
江苏农业学报(ＪｉａｎｇｓｕＪ.ｏｆＡｇｒ.Ｓｃｉ.)ꎬ２０２４ꎬ４０(１):１８３￣１９２ｈｔｔｐ://ｊｓｎｙｘｂ.ｊａａｓ.ａｃ.ｃｎ孙雨桐ꎬ刘德帅ꎬ冯㊀美ꎬ等.果树分子标记辅助育种研究进展[Ｊ].江苏农业学报ꎬ２０２４ꎬ４０(１):１８３￣１９２.ｄｏｉ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１０００￣４４４０.２０２４.０１.０２０果树分子标记辅助育种研究进展孙雨桐ꎬ㊀刘德帅ꎬ㊀冯㊀美ꎬ㊀齐㊀迅ꎬ㊀姚文孔(宁夏大学农学院/宁夏优势特色作物现代分子育种重点实验室/林木资源高效生产全国重点实验室ꎬ宁夏银川７５００２１)收稿日期:２０２３￣０２￣２５基金项目:宁夏回族自治区农业育种项目(ＮＸＮＹＹＺ２０２１０１)ꎻ宁夏回族自治区重点研发项目(２０１８ＢＥＢ０４００４)作者简介:孙雨桐(１９９８－)ꎬ女ꎬ黑龙江五常人ꎬ硕士研究生ꎬ研究方向为果树学ꎮ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｓｙｔ１５１４６０６３０１０＠１６３.ｃｏｍ通讯作者:姚文孔ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｙａｏｗｅｎｋｏｎｇ＠１６３.ｃｏｍ㊀㊀摘要:㊀随着分子生物学的不断发展ꎬ分子标记在果树育种中发挥的作用也愈发重要ꎮ本文主要对不同果树育种的分子标记类型及分子标记在果树种质资源鉴定㊁抗性育种㊁无核育种㊁早熟育种㊁品质改良育种㊁分子遗传图谱构建与数量性状座位(ＱＴＬ)基因定位等方面的应用进行了综述ꎬ为果树分子标记辅助育种提供参考ꎮ关键词:㊀果树ꎻ分子标记ꎻ遗传图谱ꎻＱＴＬ定位中图分类号:㊀Ｓ６０３.６㊀㊀㊀文献标识码:㊀Ａ㊀㊀㊀文章编号:㊀１０００￣４４４０(２０２４)０１￣０１８３￣１０Ａｄｖａｎｃｅｓｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓａｓｓｉｓｔｅｄｓｅｌｅｃｔｉｏｎａｐｐｌｉｅｄｉｎｆｒｕｉｔｔｒｅｅｂｒｅｅｄ￣ｉｎｇＳＵＮＹｕ￣ｔｏｎｇꎬ㊀ＬＩＵＤｅ￣ｓｈｕａｉꎬ㊀ＦＥＮＧＭｅｉꎬ㊀ＱＩＸｕｎꎬ㊀ＹＡＯＷｅｎ￣ｋｏｎｇ(ＳｃｈｏｏｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅꎬＮｉｎｇｘｉａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ/ＮｉｎｇｘｉａＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｏｄｅｒｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｒｅｅｄｉｎｇｏｆＤｏｍｉｎａｎｔａｎｄＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃＣｒｏｐｓ/ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａ￣ｔｏｒｙｏｆＥｆｆｉｃｉｅｎｔＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＦｏｒｅｓｔＲｅｓｏｕｒｃｅｓꎬＹｉｎｃｈｕａｎ７５００２１ꎬＣｈｉｎａ)㊀㊀Ａｂｓｔｒａｃｔ:㊀Ｗｉｔｈｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙꎬｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｈａｖｅｐｌａｙｅｄｍｏｒｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｓｉｎｔｈｅｂｒｅｅｄｉｎｇｏｆｆｒｕｉｔｔｒｅｅｓ.Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒꎬｗｅｍａｉｎｌｙｅｘｐｏｕｎｄｅｄｔｈｅｔｙｐｅｓｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｒｕｉｔｔｒｅｅｓｂｒｅｅｄｉｎｇꎬａｎｄｓｕｍｍａｒｉｚｅｄｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｉｎｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｇｅｒｍｐｌａｓｍｒｅｓｏｕｒｃｅｓꎬｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｂｒｅｅｄｉｎｇꎬｓｅｅｄｌｅｓｓｂｒｅｅｄｉｎｇꎬｅａｒｌｙｍａｔｕｒｉｔｙｂｒｅｅｄｉｎｇꎬｑｕａｌｉｔｙｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｂｒｅｅｄｉｎｇꎬｍｏｌｅｃｕｌａｒｇｅｎｅｔｉｃｍａｐｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｑｕａｎｔｉ￣ｔａｔｉｖｅｔｒａｉｔｌｏｃｕｓ(ＱＴＬ)ｍａｐｐｉｎｇｉｎｆｒｕｉｔｔｒｅｅｓ.Ｏｕｒｓｔｕｄｙｃａｎｐｒｏｖｉｄｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒａｓｓｉｓｔａｎｔｂｒｅｅｄｉｎｇｉｎｆｒｕｉｔｔｒｅｅｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:㊀ｆｒｕｉｔｔｒｅｅｓꎻｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓꎻｇｅｎｅｔｉｃｍａｐｐｉｎｇꎻＱＴＬｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ㊀㊀果树育种的常规手段主要有杂交育种㊁诱变育种㊁倍性育种等ꎬ但由于果树杂种比较多㊁品种来源复杂㊁多为多年生木本植物㊁生长周期长等因素ꎬ导致传统育种周期长㊁效率低㊁不确定因素多ꎮ相比于常规育种ꎬ分子标记辅助选择(Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒａｓ￣ｓｉｓｔｅｄｓｅｌｅｃｔｉｏｎꎬＭＡＳ)可以提高育种效率ꎬ缩短育种周期ꎬ并且在遗传多样性㊁品种鉴定等方面也有较好的效果[１]ꎮ分子标记技术种类繁多ꎬ如随机扩增多态性ＤＮＡ(ＲａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡꎬＲＡＰＤ)㊁扩增片段长度多态性(ＡｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍꎬＡＦＬＰ)㊁简单序列重复(ＳｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔꎬＳＳＲ)㊁单核苷酸多态性(Ｓｉｎｇｌｅｎｕ￣ｃｌｅｏｔｉｄｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍꎬＳＮＰ)等ꎬ这些分子标记被广泛应用于果树的遗传育种㊁亲缘关系判断㊁遗传图谱构建以及数量性状座位(ＱＴＬ)定位等研究中ꎮ这将加速果树品种的改良进程ꎬ提高育种效率ꎮ３８１１㊀果树上应用分子标记的主要类型１.１㊀ＲＡＰＤ分子标记为适应不良环境以及抵御病虫危害ꎬ培育具有一定抗性的果树品种至关重要ꎮＴａｒｔａｒｉｎｉ[２]从５种不同的ＲＡＰＤ标记中筛选出与ＭｄＶｆ基因紧密相关的ＯＰＡＭ１９２２００和ＯＰＡＬ０７５８０ꎬ标记了苹果(Ｍａｌｕｓｄｏ￣ｍｅｓｔｉｃａ)抗赤霉病Ｖｆ基因ꎮ杨亚州等[３]以燕山葡萄和河岸葡萄的Ｆ１代为材料ꎬ通过７个ＲＡＰＤ标记对其抗旱性进行研究ꎬ将ＲＡＰＤ标记５２２６￣１１００转化成专一性的ＳＣＡＲ(Ｓｅｑｕｅｎｃｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄａｍｐｌｉｆｉｅｄｒｅｇｉｏｎｓꎬ特定序列扩增)标记ＤＲ￣７６０ꎮ其次ＲＡＰＤ分子标记多用于果树遗传多样性及品种鉴定ꎬ余智城等[４]对１６份柑橘包括１１份琯溪蜜柚进行遗传多样性分析ꎬ通过１５条ＲＡＰＤ引物将１６份材料分为２大类(表１)ꎮ表１㊀随机扩增多态性ＤＮＡ(ＲＡＰＤ)分子标记在果树上的应用Ｔａｂｌｅ１㊀ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｒａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ(ＲＡＰＤ)ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｏｎｆｒｕｉｔｔｒｅｅｓ物种(属)功能主要结果参考文献苹果(ＭａｌｕｓＭｉｌｌ.)筛选抗病基因从５种不同的ＲＡＰＤ标记中筛选出与Ｖｆ基因紧密相关ＯＰＡＭ１９２２００和ＯＰＡＬ０７５８０标记苹果抗赤霉病Ｖｆ基因[２]葡萄(ＶｉｔｉｓＬ.)筛选抗旱基因以燕山葡萄和河岸葡萄的Ｆ１代为材料ꎬ通过７个ＲＡＰＤ标记对其抗旱性进行研究ꎬ获得了抗旱基因的ＲＡＰＤ标记[３]柑橘(ＣｉｔｒｕｓＬ.)遗传多样性分析以１６份柑橘包括１１份琯溪蜜柚为材料用１５条ＲＡＰＤ引物对其遗传多样性进行分析ꎬ将１６份材料分为２大类[４]李(ＰｒｕｎｕｓＬ.)绘制遗传图谱利用ＲＦＬＰ(限制性内切酶片段长度多态性)和ＲＡＰＤ标记绘制桃的遗传连锁图谱[５]品种鉴定使用３６０个ＲＡＰＤ引物进行大片段分析ꎬ以鉴定桃与桃㊁桃与杏仁杂交中特定位点相关的标记[６]遗传多样性分析用ＲＡＰＤ分子标记技术对７个樱桃品种进行多态性分析ꎬ将７个樱桃品种分为４类[７]杧果(ＭａｎｇｉｆｅｒａＬ.)遗传多样性分析从２０个ＲＡＰＤ引物中筛选１５个引物ꎬ分析了３４份传统杧果种质的遗传变异和亲缘关系[８]１.２㊀ＡＦＬＰ分子标记分析果树遗传多样性ꎬ有助于果树的分类ꎮ董美超等[９]针对９０份鳄梨品种材料从２４对ＡＦＬＰ引物中筛选出８对进行遗传多样性分析ꎬ根据遗传相似系数可划分为４个类群ꎮＬａｉ等[１０]采用ＡＦＬＰ和甲基化敏感扩增多态性(Ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｍｐｌｉ￣ｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍꎬＭＳＡＰ)的分子标记技术探究车道晚脐橙与芽变南瓜状脐橙之间的基因和基因组甲基化差异ꎬ结果表明芽变南瓜状脐橙的出现是由于基因突变ꎮ可见ＡＦＬＰ结合ＭＳＡＰ分子标记技术可以研究橙的早熟及果实形状的基因突变ꎬ这为此方面其他果树的研究提供了理论及技术的支持(表２)ꎮ表２㊀扩增片段长度多态性(ＡＦＬＰ)分子标记在果树上的应用Ｔａｂｌｅ２㊀Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ(ＡＦＬＰ)ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｏｎｆｒｕｉｔｔｒｅｅｓ物种(属)㊀㊀㊀功能㊀主要结果参考文献鳄梨(ＰｅｒｓｅａＭｉｌｌ.)遗传多样性分析为了研究９０份鳄梨品种材料ꎬ从２４对ＡＦＬＰ引物中筛选出８对进行遗传多样性分析ꎬ根据遗传相似系数可划分为４个类群[９]苹果(ＭａｌｕｓＭｉｌｌ.)遗传多样性分析用ＡＦＬＰ对泰山红星㊁沂蒙短枝红星㊁红星和金冠４个苹果品种进行了遗传分析ꎬ结果表明ꎬ泰山红星苹果多态性显著高于其他品种[１１]柑橘(ＣｉｔｒｕｓＬ.)筛选果实形状基因采用ＡＦＬＰ和ＭＳＡＰ分析车道晚脐橙及其芽变南瓜状脐橙的基因和基因组甲基化差异ꎬ结果表明基因突变发生在车道晚脐橙和其芽变南瓜状脐橙之间[１０]遗传多样性分析用ＡＦＬＰ技术对３个亲本和１６个辐射诱变和芽变的柑橘品种进行了遗传差异分析[１２]筛选早熟基因以脐橙试验材料ꎬ用ＡＦＬＰ和ＭＳＡＰ对其在基因组㊁甲基化修饰水平与脐橙早熟性状之间的关系进行探究ꎬ结果表明ꎬ果实熟期与去甲基化相关[１３]猕猴桃(ＡｃｔｉｎｉｄｉａＬｉｎｄｌ.)遗传多样性分析使用ＡＦＬＰ技术对３３份猕猴桃的遗传多样性进行分析ꎬ可以将３３份种质分为３个类群[１４]ＭＳＡＰ:甲基化敏感扩增多态性ꎮ１.３㊀ＳＳＲ分子标记ＳＳＲ标记的优点是大量标记及其共显性遗传ꎬ也正因如此ＳＳＲ分子标记被广泛应用在果树育种中ꎮ王立新等[１５]从１４４对ＳＳＲ引物中筛选出３对引物对４０４８１江苏农业学报㊀２０２４年第４０卷第１期份苹果进行检测ꎬ结果表明ꎬ这３对引物可以鉴定区分４０份苹果ꎮＫｉｍｕｒａ等[１６]用９个ＳＳＲ标记鉴别６０个亚洲梨品种ꎬ研究结果表明其中７个ＳＳＲ标记能将５８个品种区分开ꎮ刘国彬等[１７]以１９种欧李种质及其近缘种杏李㊁李资源为试验材料ꎬ利用ＳＳＲ标记进行品种鉴定并构建分子身份证ꎮ魏姗姗等[１８]以９５份桃品种为试材ꎬ利用１８对ＳＳＲ引物对桃进行遗传多样性分析ꎬ发现了桃品种的８个连锁群ꎮ胡光明等[１９]以红阳猕猴桃为材料ꎬ从４３５对ＳＳＲ引物中筛选出６７对引物ꎬ用于猕猴桃属种质资源的亲缘关系及遗传多样性分析ꎮＭａｈｊｂｉ等[２０]以２０个突尼斯柑橘品种为材料ꎬ通过７个ＳＳＲ位点建立了它们的亲缘关系来探究其遗传多样性ꎮ此外ＳＳＲ分子标记也被用于果树品质育种㊁抗性育种以及遗传图谱构建(表３)ꎮ表３㊀简单序列重复(ＳＳＲ)分子标记在果树上的应用Ｔａｂｌｅ３㊀Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔ(ＳＳＲ)ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｏｎｆｒｕｉｔｔｒｅｅｓ物种(属)㊀㊀㊀功能㊀主要结果参考文献苹果(ＭａｌｕｓＭｉｌｌ.)品种鉴定用１４４对ＳＳＲ引物对４０份苹果进行检测ꎬ最少用３对引物进行组合即可鉴定４０份苹果[１５]筛选品质位点以短枝富士和粉红女士２１６株Ｆ１代群体为试验材料ꎬ使用ＳＳＲ标记获得了２个与果实酸度连锁的分子标记[２１]筛选抗病基因从１４４对ＳＳＲ引物中选出１７对在抗病和感病之间表现出多态性的引物标记苹果抗褐斑病ꎬ结果表明标记基因位于苹果第８连锁群ＬＧ８上[２２]梨(ＰｙｒｕｓＬ.)品种鉴定以亚洲梨为材料ꎬ用９个ＳＳＲ标记鉴别６０个品种的亚洲梨能将５８个品种区分开[１６]李(ＰｒｕｎｕｓＬ.)品种鉴定以１９种欧李种质及其近缘种杏李㊁李资源为试验材料ꎬ利用ＳＳＲ标记进行品种鉴定并构建分子身份证[１７]遗传多样性分析以９５份不同的桃品种为研究材料ꎬ用ＳＳＲ标记对桃遗传多样性进行分析ꎬ可将桃分为扁球形和球形２个类群[１８]柑橘(ＣｉｔｒｕｓＬ.)遗传多样性分析以２０个突尼斯柑橘品种为材料ꎬ通过７个ＳＳＲ位点建立了它们的亲缘关系[２０]葡萄(ＶｉｔｉｓＬ.)筛选无核基因２０个个体被选为无籽葡萄育种研究的遗传资源ꎬＶＭＣ７ｆ２标记被鉴定为与无核性状最相关的标记[２３]绘制遗传图谱在９６个个体的全同胞群体的２个亲本上共测试了３４６对引物ꎬ成功扩增了３１０个标记ꎬ基于２个群体中２４５个ＳＳＲ标记的分离ꎬ构建了４个图谱[２４]筛选抗性基因使用葡萄参考连锁图的ＳＳＲ标记ꎬ在连锁群１５(ＬＧ１５)上确定抗性位点的位置[２５]猕猴桃(ＡｃｔｉｎｉｄｉａＬｉｎｄｌ.)性别鉴定利用毛花猕猴桃的基因组来开发与性别鉴定相关ＳＳＲ标记ꎬ从中筛选出了１对可以鉴定毛花猕猴桃雌雄株的引物[２６]１.４㊀ＳＲＡＰ分子标记相关序列扩增多态性(Ｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｌａｔｅｄａｍｐｌｉ￣ｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍꎬＳＲＡＰ)标记与ＲＡＰＤ标记的原理和步骤极为相似ꎬ但ＳＲＡＰ相对于ＲＡＰＤꎬ稳定性高ꎬ重复性好ꎬ多态性较高ꎮ董星光[２７]以黄冠和鸭梨为试材ꎬ用ＳＲＡＰ和ＡＦＬＰ标记对其抗病基因进行分析ꎬ发现与抗黑星病相关的１条ＳＲＡＰ标记和１条ＡＦＬＰ标记ꎬ可见ＳＲＡＰ与ＡＦＬＰ可联合用于梨的抗病品种的选育ꎮ冯涛等[２８]以小白桃㊁津柳早红为试材ꎬ用１２条ＳＲＡＰ引物对其早熟基因进行分析ꎬ结果表明ＳＲＡＰ标记可以用于鉴定桃成熟期芽变(表４)ꎮ表４㊀相关序列扩增多态性(ＳＲＡＰ)分子标记在果树上的应用Ｔａｂｌｅ４㊀Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｌａｔｅｄａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ(ＳＲＡＰ)ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｏｎｆｒｕｉｔｔｒｅｅｓ物种(属)㊀功能㊀主要结果参考文献梨(ＰｙｒｕｓＬ.)筛选抗病基因以黄冠梨和鸭梨为试材ꎬ用ＳＲＡＰ标记对其抗病基因进行分析ꎬ从１２０对引物中筛选出１条与抗黑星病相关的ＳＲＡＰ标记[２７]李(ＰｒｕｎｕｓＬ.)筛选早熟基因以小白桃㊁津柳早红为试材用１２条ＳＲＡＰ引物对其早熟基因进行分析ꎬ结果表明ＳＲＡＰ标记可以鉴定桃成熟期芽变[２８]苹果(ＭａｌｕｓＭｉｌｌ.)筛选耐盐基因以西府海棠和Ｓ１９杂交组的Ｆ１单株为试材ꎬ用ＳＲＡＰ标记对其耐盐基因进行分析ꎬ获得了４条与耐盐基因相关的标记[２９]柑橘(ＣｉｔｒｕｓＬ.)遗传多样性分析以５１份酸橙(Ｃｉｔｒｕｓａｕｒａｎｔｉｕｍ)为研究材料ꎬ用２１个ＳＲＡＰ引物来研究其与亲本的遗传关系和多样性[３０]葡萄(ＶｉｔｉｓＬ.)遗传多样性分析以３９个玫瑰香系葡萄品种为试材ꎬ利用ＳＲＡＰ标记技术对其遗传多样性进行分析并构建其ＤＮＡ指纹图谱[３１]椰子(ＣｏｃｏｓＬ.)遗传多样性分析使用ＳＲＡＰ标记分析从湄公河三角洲收集的１９个椰子品种的遗传多样性ꎬ并绘制其遗传关系[３２]５８１孙雨桐等:果树分子标记辅助育种研究进展１.５㊀ＳＣＡＲ分子标记测序的扩增区段(Ｓｅｑｕｅｎｃｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄａｍｐｌｉ￣ｆｉｅｄｒｅｇｉｏｎꎬＳＣＡＲ)标记最初是从ＲＡＰＤ分子标记技术衍生而来的ꎬ并且重复性和特异性比ＲＡＰＤ更好ꎮ为减少农药对环境和人体的危害ꎬ选育抗病品种具有重要意义ꎬＳＣＡＲ分子标记在果树抗病育种方面发挥着重要的作用ꎮ祁楠等[３３]以秦冠和富士Ｆ１代群体为试材ꎬ将苹果抗斑点落叶病相关基因的１个ＲＡＰＤ标记转换为ＳＣＡＲ标记(表５)ꎮＤｅｎｇ等[３４]以柑橘为材料克隆并测序了２０个与抗柑橘三叶草病毒基因连锁的ＲＡＰＤ片段中的７个ꎬ并将它们转化为ＳＣＡＲ标记ꎮ赵伟[３５]以用８种葡萄作为亲本的杂交后代为材料ꎬ用ＳＣＡＲ标记ＳＣＯ１１￣９１４对其白粉病抗性进行检测ꎮ表５㊀测序的扩增区段(ＳＣＡＲ)分子标记在果树上的应用Ｔａｂｌｅ５㊀Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｓｅｑｕｅｎｃｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄａｍｐｌｉｆｉｅｄｒｅｇｉｏｎ(ＳＣＡＲ)ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｏｎｆｒｕｉｔｔｒｅｅｓ物种(属)㊀功能㊀主要结果参考文献苹果(ＭａｌｕｓＭｉｌｌ.)筛选抗病基因以秦冠和富士Ｆ１代群体为试材ꎬ将苹果抗斑点落叶病基因的１个ＲＡＰＤ标记转换为ＳＣＡＲ标记[３３]柑橘(ＣｉｔｒｕｓＬ.)筛选抗病基因克隆并测序了２０个与抗柑橘三叶草病毒基因连锁的ＲＡＰＤ片段中的７个ꎬ并将它们转化ＳＣＡＲ标记[３４]梨(ＰｙｒｕｓＬ.)筛选矮化基因以矮化梨与茌梨的杂交后代共１１１个单株为试材ꎬ获得了１个控制梨树矮化性状基因的ＲＡＰＤ标记Ｓ１１７２￣９４０ꎬ并转换成了ＳＣＡＲ标记[３６]葡萄(ＶｉｔｉｓＬ.)筛选无核基因利用ＳＣＦ２７￣２０００和ＳＣＣ８￣１０１８对３２个杂种株系进行分子标记检测ꎬ其中有１７个株系都出现了无核的特异性条带[３７]筛选抗病基因以８种葡萄作为亲本的杂交后代材料ꎬ用ＳＣＡＲ标记ＳＣＯ１１￣９１４对其白粉病抗性进行检测[３５]１.６㊀ＳＮＰ分子标记ＳＮＰ检测方法主要有酶切扩增多态性序列(ＣＡＰＳ)㊁单链构象多态性(ＳＳＣＰ)㊁直接测序和基因芯片等ꎮＢａｌｄｉ等[３８]通过２个苹果品种Ｆｉｅｓｔａ和Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ之间杂交的分离群体开发ＣＡＰＳ和ＳＳＣＰ标记ꎬ标记其抗性基因的定位ꎬ实现了克隆序列的遗传作图ꎮＳＮＰ多用于遗传图谱的构建ꎮＡｎｔａｎ￣ａｖｉｃｉｕｔｅ等[３９]使用来自２８种海棠基因型的ＳＮＰ数据为海棠开发了全基因组基因分型阵列ꎮ该阵列为任何给定的海棠后代提供了高通量基因分型和连锁图谱开发的前景ꎮ将２２７２个ＳＮＰ标记的数据整合到Ｍ４３２子代的图谱中ꎬ并展示了最完整和最饱和的普米拉分枝杆菌１７个连锁群的图谱ꎮ唐海霞等[４０]以冬枣和金丝４号的Ｆ１代１０３株群体为材料ꎬ用简化基因组测序技术(ＧＢＳ)开发的ＳＮＰ构建了１张包含１２条连锁群的遗传图谱ꎮ相关研究(表６)为果树数量性状定位㊁功能基因挖掘以及图位克隆等研究提供了有效的理论依据ꎮ表６㊀单核苷酸多态性(ＳＮＰ)分子标记在果树上的应用Ｔａｂｌｅ６㊀Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｓｉｎｇｌｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ(ＳＮＰ)ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｏｎｆｒｕｉｔｔｒｅｅｓ物种(属)㊀㊀㊀功能㊀主要结果参考文献苹果(ＭａｌｕｓＭｉｌｌ.)绘制遗传图谱将２２７２个ＳＮＰ标记的数据整合到Ｍ４３２子代的图谱中ꎬ并展示了最完整和最饱和的普米拉分枝杆菌１７个连锁群的图谱[３９]枣(ＺｉｚｉｐｈｕｓＭｉｌｌ.)绘制遗传图谱以冬枣和金丝４号杂交的Ｆ１代１０３株群体为材料ꎬ用ＳＮＰ分子标记构建了１张包含１２条连锁群的遗传图谱[４０]柑橘(ＣｉｔｒｕｓＬ.)品种鉴定利用ＳＮＰ分子标记区分Ｈａｒｙｅｊｏｓａｅｎｇ与其他７个温州蜜柑品种的ＤＮＡ序列差异[４１]葡萄(ＶｉｔｉｓＬ.)筛选抗虫基因ＳＮＰ标记可用于葡萄对爪哇根结线虫抗性基因(ＭＪＲ１)的标记辅助选择[４２]龙眼(ＤｉｍｏｃａｒｐｕｓＬｏｕｒ.)绘制遗传图谱以２００株凤梨朵和大乌圆的杂交后代Ｆ１作为作图群体ꎬ利用ＲＡＤ￣ｓｅｑ技术开发ＳＮＰ分子标记构建遗传图谱[４３]２㊀果树遗传图谱构建概况分子标记已被广泛用于构建遗传图谱ꎬ遗传图谱是基于遗传距离的图谱ꎬ它反映的是不同基因座之间的遗传距离和连锁程度ꎮ目前ꎬ大量分子标记如ＳＮＰ㊁ＳＣＡＲ㊁ＳＳＲ㊁ＡＦＬＰ㊁ＳＲＡＰ等被用于果树遗传作图ꎮＷｕ等[４４]以八月红和砀山酥梨杂交的１０２个梨Ｆ１代单株为作图群体ꎬ用ＳＮＰ与ＳＳＲ整合构建６８１江苏农业学报㊀２０２４年第４０卷第１期了梨的高密度连锁图谱ꎬ该图谱是用快速和稳健的限制性相关ＤＮＡ测序技术(ＲＡＤｓｅｑ)绘制的ꎮ连锁图谱由ＳＮＰ标记和ＳＳＲ标记组成ꎬ共３２４１个标记ꎬ跨度为２２４３.４ｃＭꎬ平均标记距离为０ ７０ｃＭꎮ刘更森[４５]以富士和金冠杂交的Ｆ１代１２２个单株为作图群体ꎬ选用已开发的ＳＮＰꎬ结合ＳＳＲ标记构建了苹果遗传图谱ꎮ以杧果金黄和贵妃杂交的９８株Ｆ１代植物为作图群体ꎬ用ＳＲＡＰ㊁ＡＦＬＰ和ＩＳＳＲ分子标记进行作图ꎬ该图谱由３３个连锁群组成ꎬ总遗传距离为１５６１.１ｃＭ[４６]ꎮ已构建遗传图谱的果树品种见表７ꎮ表７㊀果树遗传图谱构建概况Ｔａｂｌｅ７㊀Ｏｖｅｒｖｉｅｗｏｆｆｒｕｉｔｔｒｅｅｇｅｎｅｔｉｃｍａｐｐｉｎｇｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ物种㊀㊀㊀(属的拉丁名)㊀㊀㊀作图亲本㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀标记类型㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀群体大小(株)连锁群数量(个)参考文献苹果(ＭａｌｕｓＭｉｌｌ.)富士ˑ坂田津轻ＳＮＰ１５０１７[４７]蜜脆ˑ秦冠ＳＮＰ３５０３４[４８]富士ˑ金冠ＳＮＰ㊁ＳＳＲ１２２１７[４５]梨(ＰｙｒｕｓＬ.)崇化大梨ˑ新世纪梨ＳＳＲ㊁ＳＲＡＰ㊁ＩＳＳＲ２１０１４[４９]红茄梨ˑ晚秀梨ＳＮＰ㊁ＳＳＲ１６１１７[５０]八月红ˑ砀山酥梨ＡＦＬＰ㊁ＳＲＡＰ㊁ＳＳＲ９７１７[５１]李(ＰｒｕｎｕｓＬ.)黄水蜜ˑ中油桃１４号ＳＮＰ８６８[５２]红垂枝ˑ白花山碧ＳＳＲ㊁ＡＦＬＰ㊁ＳＲＡＰ５２１１[５３]柑橘(ＣｉｔｒｕｓＬ.)梨橙２号ˑ晚蜜２ＳＳＲ㊁ＣＯＳ８０１０[５４]Ｍｕｒｃｏｔｔ橘橙ˑＰêｒａ甜橙ＡＦＬＰ８７９[５５]Ｃｒａｖｏ橘ˑＰêｒａ甜橙ＲＡＰＤ９４１２[５６]葡萄(ＶｉｔｉｓＬ.)赤霞珠ˑ左优红ＳＮＰ㊁ＳＳＲ１８１１９[５７]枣(ＺｉｚｉｐｈｕｓＭｉｌｌ.)ＪＭＳ２ˑ邢１６ＳＮＰ１６７１２[５８]冬枣ˑ金丝４号ＳＮＰ㊁ＳＳＲ１１１１２[５９]荔枝(ＬｉｔｃｈｉＳｏｎｎ.)马贵荔ˑ焦核三月红ＲＡＰＤ㊁ＳＲＡＰ㊁ＡＦＬＰ７６２０[６０]芒果(ＭａｎｇｉｆｅｒａＬ.)金黄ˑ贵妃ＳＲＡＰ㊁ＡＦＬＰ㊁ＩＳＳＲ９８３３[４６]龙眼(ＤｉｍｏｃａｒｐｕｓＬｏｕｒ.)凤梨朵ˑ大乌圆ＲＡＰＤ㊁ＩＳＳＲ㊁ＳＲＡＰ㊁ＡＦＬＰ９４２１[６１]ＳＮＰ:单核苷酸多态性ꎻＳＳＲ:简单序列重复ꎻＳＲＡＰ:相关序列扩增多态性ꎻＩＳＳＲ:简单重复系列区间ꎻＡＦＬＰ:扩增片段长度多态性ꎻＣＯＳ:保守直系同源序列ꎻＲＡＰＤ:随机扩增多态性ＤＮＡꎮ３㊀ＱＴＬ基因定位在果树育种中的应用通常没有一种基因能唯一决定某些性状ꎬ一般一组基因作为一个整体控制着某一特性ꎮ与特定数量性状相关的基因所在的基因组区域称为ＱＴＬꎬ即数量性状位点ꎮ自从分子标记出现以来ꎬ研究人员和育种人员一直致力于识别与这些ＱＴＬ相关的功能标记ꎬ在果树的重要性状ＱＴＬ定位和分子标记辅助育种等方面均取得较好的成果ꎬ如果树生长发育㊁果实的品质㊁抗逆性的强弱等ꎮ前人已对苹果㊁梨㊁柑橘等多种果树的生长发育特性(开花㊁生根能力㊁矮化等)㊁果实品质(质量㊁大小㊁颜色㊁硬度㊁风味等)㊁抗生物胁迫㊁抗非生物胁迫(耐盐碱㊁抗干旱㊁抗寒等)等重要农艺性状进行分析ꎬ有助于培育特定目标性状的果树品种ꎮ３.１㊀与苹果相关的ＱＴＬ苹果ＱＴＬ的鉴定集中于其主要农艺性状[如矮化㊁果实品质(包括果实质量㊁果实大小㊁果实颜色以及果肉的糖酸含量)㊁苹果的抗逆性(抗寒㊁抗旱㊁耐盐碱等)]ꎮＦｏｓｔｅｒ等[６２]对４１份Ｍ９３Ｒｏｂｕｓｔａ５(非矮化)与Ｂｒａｅｂｕｒｎ接穗嫁接的砧木群体的ＱＴＬ进行分析ꎬ结果表明ꎬ连锁群ＬＧ５上的一个主要ＱＴＬ对接穗的矮化有显著影响ꎮＺｈｅｎｇ等[６３]用来自海棠㊁红富士㊁金冠㊁乔纳森家系９４２２株苹果Ｆ１代杂交种为试材ꎬ检测得到９个与苹果果皮颜色遗传变异有关的微效ＱＴＬ(表８)ꎮ孙瑞[６４]以红玉㊁金冠以及红７８１孙雨桐等:果树分子标记辅助育种研究进展玉和金冠的Ｆ１代杂交群体２９７株苹果为试材ꎬ对其品质性状进行ＱＴＬ定位ꎬ共得到１２个ＱＴＬ位点ꎮ３.２㊀与梨相关的ＱＴＬ迄今ꎬＱＴＬ定位在梨的研究上取得了一定的成果ꎮ赵亚楠[６５]利用苹果梨和八月红１５０株Ｆ１代材料对１４个果实品质性状进行基因定位分析ꎬ共获得２８个ＱＴＬ位点ꎬ其中与单果质量相关的ＱＴＬ位点有５个㊁与果心大小相关的ＱＴＬ位点有２个㊁与果肉硬度相关的ＱＴＬ位点有３个㊁与果实横径相关的ＱＴＬ位点有６个㊁与果梗长度相关的ＱＴＬ位点有１个㊁与可溶性固形物含量相关的ＱＴＬ位点有６个㊁与可滴定酸含量相关的ＱＴＬ位点有２个ꎬ共扫描到２２６６个基因ꎮＳｕｎ等[６６]以１３１个亚洲梨和欧洲梨为试验材料ꎬ在已被鉴定的病害相关ＱＴＬ区域中找到４１个核苷酸结合位点(ＮＢＳ)编码基因(表９)ꎮ表８㊀苹果相关的数量性状座位(ＱＴＬ)Ｔａｂｌｅ８㊀Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｔｒａｉｔｌｏｃｕｓ(ＱＴＬ)ｒｅｌａｔｅｄｔｏａｐｐｌｅ亲本功能㊀㊀㊀群体大小(株)ＱＴＬ数量(个)参考文献Ｍａｌｌｉｎｇ９ˑＲｏｂｕｓ￣ｔａ５标记矮化的位点４１６[６２]海棠㊁红富士㊁金冠㊁乔纳森标记果皮颜色的位点９４２２９[６３]红玉ˑ金冠标记果实质量的位点２９７２[６４]红玉ˑ金冠标记果实酸度的位点２９７６[６４]红玉ˑ金冠标记糖含量的位点２９７２[６４]红玉ˑ金冠标记抗病的位点５３４２９[６７]ＢａｌｅｎｇＣｒａｂˑＭ９标记耐盐碱的位点３２５８４２[６８]ＭａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａˑＭ.ａｓｉａｔｉｃａ标记果肉硬度的位点２６６４３２[６９]ＭａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａˑＭ.ａｓｉａｔｉｃａ标记果肉脆度的位点２６６４３０[６９]ＦｏｒｔｕｎｅˑＭｕｒｃｏｔｔ标记苹果酸的位点１４６３８[７０]秦冠ˑ蜜脆标记抗旱的位点３５０５５[７１]３.３㊀与柑橘相关的ＱＴＬ通过分子标记构建柑橘的遗传连锁图谱可以获得果实发育等农艺性状和应答逆境胁迫的ＱＴＬꎮ罗艾等[７２]以晚蜜２号和梨橙２号的９４株Ｆ１代材料为群体ꎬ进行ＱＴＬ定位分析ꎬ发现４个与果实质量相关的ＱＴＬ定位ꎬ７个与果实大小相关的ＱＴＬ定位ꎮ马喜军[７３]以晚蜜２号和梨橙２号的３５０株Ｆ１代为试验材料对柑橘抗寒性相关的ＱＴＬ进行定位ꎬ得到７个与柑橘抗寒性相关的ＱＴＬꎬ分布于４个连锁群上ꎬ分别为ＬＷ１㊁ＬＷ２㊁ＬＷ３和ＬＷ８ꎮＨｕａｎｇ等[７４]对甜橙ˑ枳橙属间杂交的１７０株Ｆ１代进行基因分型分析ꎬ在枳遗传图谱上鉴定到４个与柑橘黄龙病相关的ＱＴＬ(表１０)ꎮ表９㊀梨相关的数量性状座位(ＱＴＬ)Ｔａｂｌｅ９㊀Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｔｒａｉｔｌｏｃｕｓ(ＱＴＬ)ｒｅｌａｔｅｄｔｏｐｅａｒ亲本㊀㊀功能㊀㊀㊀群体大小(株)ＱＴＬ数量(个)参考文献苹果梨ˑ八月红标记果实大小的位点１５０６[６５]苹果梨ˑ八月红标记果肉硬度的位点１５０３[６５]苹果梨ˑ八月红标记可溶性固形物的位点１５０６[６５]苹果梨ˑ八月红标记可滴定酸的位点１５０２[６５]苹果梨ˑ八月红标记果实质量的位点１５０５[６５]亚洲梨ˑ欧洲梨标记抗病的位点１３１４１[６６]八月红ˑ砀山酥梨标记果实质量的位点１０２２[７５]八月红ˑ砀山酥梨标记果实大小的位点１０２２[７５]表１０㊀柑橘相关的数量性状座位(ＱＴＬ)Ｔａｂｌｅ１０㊀Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｔｒａｉｔｌｏｃｕｓ(ＱＴＬ)ｒｅｌａｔｅｄｔｏｃｉｔｒｕｓ亲本㊀㊀功能㊀㊀㊀群体大小(株)ＱＴＬ数量(个)参考文献晚蜜２号ˑ梨橙２号标记果实质量的位点９４４[７２]晚蜜２号ˑ梨橙２号标记果实大小的位点９４７[７２]梨橙２号ˑ晚蜜２号标记抗寒的位点３５０７[７３]甜橙ˑ枳橙标记抗病的位点１７０４[７４]红橘ˑ枳壳标记果肉色泽的位点７９２[７６]ＦｏｒｔｕｎｅˑＭｕｒｃｏｔｔ标记挥发性物质的位点１１６２０６[７７]ＴｒｉｆｏｌｉａｔａˑＣｌｅｏｐａｔｒａｍａｎｄａｒｉｎ标记耐盐碱的位点９８[７８]３.４㊀与其他果树相关的ＱＴＬ除常见果树外ꎬ其他果树重要性状相关的ＱＴＬ定位研究也取得了很大进展ꎮＣｉｒｉｌｌｉ等[７９]评估１３３份桃种质ꎬ定位到１个可以推迟桃花期的ＱＴＬꎮ鲍荆凯[８０]用ＪＭＳ２和交城５号枣的１５０株Ｆ１代材料对其ＱＴＬ定位进行分析ꎬ共获得１０４个ＱＴＬ位点ꎬ其中与果实大小相关的ＱＴＬ位点５７个㊁与果实糖组分相关的ＱＴＬ位点１７个㊁与果实酸组分相关的ＱＴＬ位点３０个ꎮ刘春燕[８１]以桂海４号和山梨猕猴桃的杂交后代开展ＱＴＬ定位研究ꎬ共检测到４４个ＱＴＬ位点ꎬ其中与果实质量相关的ＱＴＬ位点７个ꎬ与果实横纵径相关的ＱＴＬ位点２１个ꎮ史晓畅[８２]以８８１江苏农业学报㊀２０２４年第４０卷第１期山东大绵球和新宾软籽山楂的１３０株杂交Ｆ１代为材料ꎬ检测到２个与单果质量相关的ＱＴＬ位点ꎬ６个与果皮穿刺硬度相关的ＱＴＬ位点ꎬ３个与果实大小相关的ＱＴＬ位点ꎬ５个与果皮脆性相关的ＱＴＬ位点ꎬ５个与果肉平均硬度相关的ＱＴＬ位点ꎮ这些研究(表１１)不仅丰富了果树的遗传学研究ꎬ也为果实品质及果树抗逆的遗传机制和育种研究提供了理论基础ꎮ４㊀展望在果树的品种鉴定㊁辅助育种(早熟㊁无核㊁矮化㊁品质以及抗性等)㊁遗传图谱的构建和农艺性状基因定位等方面ꎬＤＮＡ分子标记被广泛应用ꎮＤＮＡ分子标记技术种类多样ꎬ大致可分为三类ꎮ第一类:以电泳技术和分子杂交技术为核心的分子标记技术ꎬ如ＲＦＬＰꎻ第二类:以ＤＮＡ聚合酶链式反应(ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎꎬＰＣＲ)为基础的分子标记技术ꎬ包括ＲＡＰＤ㊁ＳＳＲ㊁ＳＣＡＲ等ꎻ第三类:以ＤＮＡ测序为核心的分子标记技术ꎬ如ＳＮＰ标记[８３]ꎮＲＦＬＰ具有共显性且不需要先验序列信息ꎬ但它耗时长ꎬ需要大量纯ＤＮＡꎬ价格也比较昂贵[８４]ꎮＲＡＰＤ操作简单ꎬ所需ＤＮＡ量少ꎬ多态显性ꎬ但需要高度纯化的ＤＮＡ并且再现性低ꎮＤＮＡ的数量和质量㊁ＰＣＲ缓冲液㊁氯化镁浓度㊁退火温度和ＴａｑＤＮＡ聚合酶是影响ＲＡＰＤ标记再现性的一些重要因素[８５]ꎮＡＦＬＰ标记将ＲＦＬＰ和ＰＣＲ技术结合在一起ꎬ先对ＤＮＡ进行消化ꎬ然后进行ＰＣＲꎮＡＦＬＰ标记物具有低成本ꎬ并且不需要先前的序列信息ꎮ在ＡＦＬＰ中ꎬ既可以使用高质量的ＤＮＡꎬ也可以使用部分降解的ＤＮＡꎬ但是ꎬ该ＤＮＡ不能含有任何限制性内切酶或ＰＣＲ抑制剂[８６]ꎮ相较于ＲＦＬＰ㊁ＲＡＰＤ㊁ＡＦＬＰ等分子标记ꎬＳＳＲ标记具有多态性检出率高㊁基因组中分布广泛㊁结果稳定可靠等特点ꎬ是检测品种真实性㊁分析品种间遗传差异以及鉴定纯度的理想标记[８７]ꎮＳＮＰ可以提供最简单和最大数量的标记ꎮＳＮＰ在植物和动物中大量存在[８８￣９１]ꎬ植物中的ＳＮＰ频率为每１００~３００ｂｐ中有１个ＳＮＰꎮＳＮＰ成本低ꎬ在基因组中广泛分布ꎬ无需先验序列信息ꎬ再现性高ꎬ共显性标记ꎬ但其开发成本较高ꎮ人们基于不同的等位基因识别技术和检测平台已经开发了大量的ＳＮＰ基因分型方法ꎬ其中ꎬＲＬＦＰ(ＳＮＰ￣ＲＦＬＰ)是最简单的方法ꎬＣＡＰＳ标记技术也可以应用于ＳＮＰ检测[９２]ꎮ分子标记种类繁多ꎬ功能优势也有所不同ꎬ根据试验的目的选择合适的分子标记有助于解决具体问题ꎮ表１１㊀与其他果树相关的数量性状座位(ＱＴＬ)Ｔａｂｌｅ１１㊀Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｔｒａｉｔｌｏｃｕｓ(ＱＴＬ)ｒｅｌａｔｅｄｔｏｏｔｈｅｒｆｒｕｉｔｔｒｅｅｓ物种(属)㊀㊀㊀㊀㊀㊀亲本㊀㊀㊀㊀㊀功能㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀群体大小(株)ＱＴＬ数量(个)参考文献李(ＰｒｕｎｕｓＬ.)标记开花的位点１３３１[７９]枣(ＺｉｚｉｐｈｕｓＭｉｌｌ.)ＪＭＳ２ˑ交城５号标记果实大小的位点１５０５７[８０]ＪＭＳ２ˑ交城５号标记果实糖组分的位点１５０１７[８０]ＪＭＳ２ˑ交城５号标记果实酸组分的位点１５０３０[８０]猕猴桃(ＡｃｔｉｎｉｄｉａＬｉｎｄｌ.)桂海４号ˑ山梨猕猴桃标记果实质量的位点１７４７[８１]桂海４号ˑ山梨猕猴桃标记果实大小的位点１７４２１[８１]山楂(ＣｒａｔａｅｇｕｓＬ.)山东大绵球ˑ新宾软籽标记果实质量的位点１３０２[８２]山东大绵球ˑ新宾软籽标记果实大小的位点１３０３[８２]山东大绵球ˑ新宾软籽标记果皮硬度的位点１３０６[８２]山东大绵球ˑ新宾软籽标记果肉脆度的位点１３０５[８２]葡萄(ＶｉｔｉｓＬ.)赤霞珠ˑ左优红标记抗寒的位点１８１８[９３]枣(ＺｉｚｉｐｈｕｓＭｉｌｌ.)ＤａｖｉｓˑＧｅｏｒｇｉａＢｅｌｌｅ标记抗寒的位点２１１１２[９４]㊀㊀为同时提高育种效率㊁缩短育种周期ꎬ寻找与农艺性状密切相关的分子标记至关重要ꎮ分子标记辅助育种(ＭＡＳ)的优势可以体现在以下３个方面ꎮ一㊁允许提前选择ꎮ在育种中ꎬ有些性状需要特定的生长环境和一定的生长周期ꎮ二㊁同一性状利用多个等位基因ꎮ在不同的育种材料中ꎬ可能存在多个基因影响同一性状(如抗病性和品质)ꎬ利用表型很难识别这些等位基因ꎮ三㊁允许同时选择多个性状ꎮ所选单株或品系不仅要在单株抗病㊁品质㊁产量等方面表现良好ꎬ综合性状也要相对较好ꎮ因此ꎬ有必要对育种的种群９８１孙雨桐等:果树分子标记辅助育种研究进展中每个目标性状逐一进行识别和筛选ꎮ以往的研究大多将目的基因的分子标记与育种工作分离ꎬ不能很好地应用于实际ꎮ今后分子标记技术的发展将与传统育种相结合ꎬ使其尽快为育种工作服务ꎮ这有助于提高果树作物育种效率ꎬ加快育种发展进程ꎮ参考文献:[１]㊀ＫＡＴＵＬＡ￣ＤＥＢＲＥＣＥＮＩＤꎬＬＥＮＣＳＥＳＡＫꎬＳＺＯＫＥＡꎬｅｔａｌ.Ｍａｒｋｅｒ￣ａｓｓｉｓｔｅｄｓｅｌｅｃ￣ｔｉｏｎｆｏｒｔｗｏｄｏｍｉｎａｎｔｐｏｗｄｅｒｙｍｉｌｄｅｗｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓｉｎｔｒｏｇｒｅｓｓｅｄｉｎｔｏａｈｙｂｒｉｄｇｒａｐｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ[Ｊ].ＳｃｉｅｎｔｉａＨｏｒｉｃｕｌｔｕｒａｅꎬ２０１０ꎬ１２６(４):４４８￣４５３.[２]㊀ＴＡＲＴＡＲＩＮＩＳ.ＲＡＰＤｍａｒｋｅｒｓｌｉｎｋｅｄｔｏｔｈｅＶｆｇｅｎｅｆｏｒｓｃａｂｒｅ￣ｓｉｓｔａｎｃｅｉｎａｐｐｌｅ[Ｊ].ＴｈｅｏｒｅｔｉｃａｌａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＧｅｎｅｔｉｃｓꎬ１９９６ꎬ９２:８０３￣８１０.[３]㊀杨亚州ꎬ王跃进ꎬ张剑侠ꎬ等.中国葡萄属野生种抗旱基因的分子标记及遗传分析[Ｊ].园艺学报ꎬ２００７ꎬ３４(５):１０８７￣１０９２. [４]㊀余智城ꎬ何雪娇ꎬ林秀香ꎬ等.琯溪蜜柚芽变种质遗传多样性的ＲＡＰＤ分析[Ｊ].福建热作科技ꎬ２０２２ꎬ４７(３):３８￣４１. [５]㊀ＲＡＪＡＰＡＫＳＥＳꎬＢＥＬＴＨＯＦＦＬＥꎬＨＥＧꎬｅｔａｌ.ＧｅｎｅｔｉｃｌｉｎｋａｇｅｍａｐｐｉｎｇｉｎｐｅａｃｈｕｓｉｎｇｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌꎬＲＦＬＰａｎｄＲＡＰＤｍａｒｋｅｒｓ[Ｊ].ＴｈｅｏｒｅｔｉｃａｌａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＧｅｎｅｔｉｃｓꎬ１９９５ꎬ９０(３/４):５０３￣５１０. [６]㊀ＷＡＲＢＵＲＴＯＮＭＬꎬＢＥＣＥＲＲＡ￣ＶＥＬáＳＱＵＥＺＶＬꎬＧＯＦＦＲＥＤＡＪＣꎬｅｔａｌ.ＵｔｉｌｉｔｙｏｆＲＡＰＤｍａｒｋｅｒｓｉｎｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇｇｅｎｅｔｉｃｌｉｎｋａｇｅｓｔｏｇｅｎｅｓｏｆｅｃｏｎｏｍｉｃｉｎｔｅｒｅｓｔｉｎｐｅａｃｈ[Ｊ].ＴｈｅｏｒｅｔｉｃａｌａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＧｅｎｅｔｉｃｓꎬ１９９６ꎬ９３(５/６):９２０￣９２５.[７]㊀黄晗达ꎬ杨静慧ꎬ龚无缺ꎬ等.７个樱桃品种亲缘关系的ＲＡＰＤ分析[Ｊ].天津农学院学报ꎬ２０１８ꎬ２５(１):５￣８.[８]㊀ＨＩＭＡＢＩＮＤＵＡꎬＲＡＪＡＳＥＫＨＡＲＭ.ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｍａｎｇｏｇｅｒｍｐｌａｓｍｏｆｃｏａｓｔａｌＡｎｄｈｒａＰｒａｄｅｓｈｕｓｉｎｇＲＡＰＤｍａｒｋｅｒｓ[Ｊ].ＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｌａｎｔＢｒｅｅｄｉｎｇꎬ２０２１ꎬ１２(４):１２６１￣１２６７.[９]㊀董美超ꎬ杨㊀帆ꎬ李进学ꎬ等.９０份鳄梨种质资源ＡＦＬＰ遗传多样性分析[Ｊ].福建农业学报ꎬ２０２０ꎬ３５(１):１３￣１９.[１０]ＬＡＩＣＷꎬＬＩＮＹＬꎬＺＨＯＵＸＪꎬｅｔａｌ.ＡＦＬＰａｎｄＭＳＡＰａｎａｌｙｓｉｓｏｆ ＬａｎｅＬａｔｅ ｎａｖｅｌｏｒａｎｇｅａｎｄｉｔｓｂｕｄｓｐｏｒｔｐｕｍｐｋｉｎ￣ｌｉｋｅｎａｖｅｌｏｒａｎｇｅ[Ｊ].ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅｓａｎｄＰｅｓｔｓꎬ２０２２ꎬ１３(１):２０￣２５. 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[３０]ＰＯＬＡＴＩꎬＫＡＣＡＲＹＡꎬＹＥＳＩＬＯＧＬＵＴꎬｅｔａｌ.Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｈａｒａｃ￣ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｓｏｕｒｏｒａｎｇｅ(Ｃｉｔｒｕｓａｕｒａｎｔｉｕｍ)ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓａｎｄｔｈｅｉｒｒｅｌａｔｉｖｅｓｕｓｉｎｇＳＳＲａｎｄＳＲＡＰｍａｒｋｅｒｓ[Ｊ].ＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＭｏｌｅｃｕ￣ｌａｒＲｅｓｅａｒｃｈꎬ２０１２ꎬ１１(３):３２６７￣３２７６.[３１]尚晓星ꎬ张安世ꎬ刘㊀莹ꎬ等.玫瑰香系葡萄种质资源ＳＲＡＰ遗传多样性分析及指纹图谱构建[Ｊ].分子植物育种ꎬ２０２０ꎬ１８(６):１９１６￣１９２２.[３２]ＸＵＡＮＤＴＫꎬＮＧＵＹＥＮＱＴꎬＫＨＡＮＧＮＨＭꎬｅｔａｌ.Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｃｏｃｏｎｕｔ(ＣｏｃｏｓｎｕｃｉｆｅｒａＬ.)ｖａｒｉｅｔｉｅｓｉｎＶｉｅｔ￣ｎａｍｕｓｉｎｇｓｅｑｕｅｎｃｅ￣ｒｅｌａｔｅｄａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ(ＳＲＡＰ)ｍａｒｋｅｒｓ[Ｊ].Ｂｉｏｌｏｇｉａꎬ２０２２ꎬ７７(１１):１８３￣１９１.[３３]祁㊀楠ꎬ万怡震ꎬ高㊀华ꎬ等.苹果抗斑点落叶病基因的一个０９１江苏农业学报㊀２０２４年第４０卷第１期。
棉花SSR标记种质资源纯度鉴定及遗传多样性分析
棉花SSR标记种质资源纯度鉴定及遗传多样性分析石建斌;周红;王宁;许庆华;乔文青;严根土【摘要】采用前期筛选出的26对SSR核心引物,对收集保存的58份棉花种质资源进行纯度检测和遗传多样性分析.结果显示,供试材料的纯度概率介于20％-90％,分子标记检测结果与田间表型相吻合,说明SSR纯度检测的准确度较高,可以作为进行快速检测棉花种质资源纯度的方法.共扩增出85种多态性基因型,每个标记检测到的基因型数在2-5,平均为3.27个,引物多态性信息量(PIC)介于0.073 7-0.928 1,平均为0.363 9.并利用NTsys-pc 2.10软件进行聚类分析,结果表明,58份种质资源的遗传相似系数(GS)变化范围为0.305 1-0.898 3,变幅为0.593 2,在GS=0.63水平上,将供试材料分为5大类,且这些资源材料的DNA聚类与其地理生态来源无关,而与材料的亲缘关系相关性较高,其聚类结果能更真实地反映种质资源间的遗传差异.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2018(034)007【总页数】9页(P138-146)【关键词】棉花;种质资源;纯度鉴定;遗传多样性;聚类分析【作者】石建斌;周红;王宁;许庆华;乔文青;严根土【作者单位】中国农业科学院棉花研究所棉花生物学国家重点实验室,安阳455000;中国农业科学院棉花研究所棉花生物学国家重点实验室,安阳455000;中国农业科学院棉花研究所棉花生物学国家重点实验室,安阳455000;中国农业科学院棉花研究所棉花生物学国家重点实验室,安阳455000;中国农业科学院棉花研究所棉花生物学国家重点实验室,安阳455000;中国农业科学院棉花研究所棉花生物学国家重点实验室,安阳455000【正文语种】中文棉花作为我国重要的经济作物，在推动国民经济的发展与人民生活水平的提高方面起着重要作用。
随着棉花产业的持续发展，新品种审定速度快、数量多，而骨干亲本数量有限且反复利用导致棉花品种的遗传差异越来越小。
中国百篇最具影响国内学术论文
表中国百篇最具影响国内学术论文来源期刊被引题名第一所属机构次数作者光学学报 ,2008,28(5):965-970 97 (1+1) 维强非局域非线性介赵昕泰山医学院质中的高阶模呼吸子地震地质 ,2008,30(3):597-629 91 汶川 Ms8.0 地震地表破裂带及徐锡伟中国地震局地质研究所其发震构造中华医院感染学杂72 中国医务人员执行手卫生的现韩黎解放军总医院志,2006,16(2):140-142 状调查电力系统自动化 ,2009,33(9):1-4 46 构建中国智能电网技术的思考肖世杰中国电力科学研究院地理学报 ,2007,62(4):339-350 41 我国主体功能区划的科学基础樊杰中国科学院地理科学与资源研究所术后镇痛中帕瑞昔布钠对吗啡中华麻醉学杂志 ,2007,27(1):7-10 40 用量的节俭作用和安全性前瞻吴新民北京大学第一医院性、多中心、随机、双盲、安慰剂对照、平行分组研究物理学报 ,2006,55(11):5917-5922 35" 强光一号 " 钨丝阵 Z 箍缩等离邱爱慈西安交通大学子体辐射特性研究(2- 甲基丙烯酰胺 ) 乙氧基 -2-分析化学 ,2008,36(12):1732-1734 34 甲基丙烯酸乙二醇单酯基质分苏立强齐齐哈尔大学子印迹手性分离介质的合成与表征物理化学学32 (CH3)2S 与 HOCl分子间的卤键袁焜天水师范学院报,2008,24(7):1257-1263 和氢键相互作用岩石学报 ,2006,22(3):521-533 32 冈底斯造山带的时空结构及演潘桂棠国土资源部成都地质矿产研化究所中国科学 D 辑 : 地球科31 1981 ～ 2000 年中国陆地植被方精云北京大学学,2007,37(6):804-812 碳汇的估算低分子肝素预防髋、膝关节手中华骨科杂志 ,2006,26(12):819-822 28 术后下肢深静脉血栓形成的多邱贵兴北京协和医院中心研究中华骨科杂志 ,2006,26(4):217-222 28 骨折椎垂直应力螺钉在胸腰椎袁强北京积水潭医院骨折中的应用中国计划免疫 ,2006,12(5):337-341 27 全国 2004～ 2006 年麻疹流行余文周安徽省疾病预防控制中心病学特征和预防控制措施分析高效液相色谱 - 二极管阵列检色谱 ,2008,26(1):6-9 26 测法及高效液相色谱 - 电喷雾丁涛江苏出入境检验检疫局串联质谱法测定植物源性蛋白中残留的三聚氰胺植物生态学报 ,2008,32(1):176-182 25 长期施肥对土壤微生物量及土刘恩科中国农业科学院农业资源与壤酶活性的影响农业区划研究所腹腔镜外科杂志 ,2009,14(1):18-20 24 经脐单孔腹腔镜胆囊切除术张光永山东大学齐鲁医院中国环境科学 ,2006,26(5):614-617 24 中国畜禽粪便产生量估算及环王方浩中国农业大学境效应研究中华妇产科杂志 ,2006,41(1):43-47 24 导流杂交基因芯片技术在人乳陶萍萍卫生部中日友好医院头状瘤病毒检测中应用的研究第二军医大学学23 2009 年新型甲型 H1N1流感流韩一芳第二军医大学报,2009,30(6):610-612 行特征及防控措施电力系统自动化 ,2008,32(7):98-103 23 微网综合控制与分析王成山天津大学中国当代儿科杂23 深圳 237 例手足口病肠道病毒张寿斌深圳市第八人民医院志,2008,10(1):38-41 血清型基因及临床特征中国沙漠 ,2007,27(1):89-93,173 23 基于 SPOTVEGETATION数据的宋怡中国科学院寒区旱区环境与中国西北植被覆盖变化分析工程研究所石油勘探与开22 中国沉积盆地火山岩油气藏形邹才能中国石油勘探开发研究院发,2008,35(3):257-271 成与分布中华心血管病杂22 血压变异和晨峰的概念及其临张维忠上海交通大学医学院附属瑞志,2006,34(3):287-288 床意义金医院武汉大学学报 ( 信息科学21 基于精密单点定位技术的航空张小红武汉大学版),2006,31(1):19-22,46 测量应用实践中国电机工程学报 ,2007,27(1):1-7 21 大区电网互联对电力系统动态朱方中国电力科学研究院稳定性的影响计算机学报 ,2007,30(1):27-36 20 一种基于非均匀分簇的无线传李成法南京大学感器网络路由协议软件学报 ,2007,18(3):646-656 20 一种服务聚合中 Qos 全局最优刘书雷国防科学技术大学服务动态选择算法软件学报 ,2007,18(4):861-868 20 一种更简化而高效的粒子群优胡旺四川大学化算法中国疫苗和免20 中国 2006～ 2007 年麻疹流行马超中国疾病预防控制中心疫,2008,14(3):208-213 病学特征及消除麻疹措施分析电网技术 ,2007,31(15):61-65 19 直驱式永磁同步风力发电机组尹明华北电力大学建模及其控制策略用 SRAP标记分析中国甘蓝型中国农业科学院油料作物研中国农业科学 ,2006,39(2):246-256 19 油菜品种的遗传多样性和遗传文雁成究所基础中华肝脏病杂19 替比夫定或拉米夫定抗乙型肝贾继东北京友谊医院志,2007,15(5):342-345 炎病毒的疗效预测探讨中华神经科杂人尿激肽原酶治疗急性脑梗死19 多中心随机双盲安慰剂对照试丁德云浙江大学志,2007,40(5):306-310验中华医院感染学杂重症监护病房临床与环境、手19 分离耐药革兰阴性杆菌的同源吴安华中南大学湘雅医院志,2008,18(7):909-912性研究中华显微外科杂18 封闭负压吸引联合组织瓣移植喻爱喜武汉大学志,2006,29(3):219-220 治疗严重感染性骨外露一个复杂度为计算机学报 ,2006,29(3):391-399 17 max(O(|C||U|),O(|C|2|U/C|) 徐章艳北京科技大学) 的快速属性约简算法临床耳鼻咽喉科杂17 北京地区变应性鼻炎患者吸入王成硕北京市耳鼻咽喉科研究所志,2006,20(5):204-207 变应原谱分析软件学报 ,2006,17(4):885-897 17 层次化网络安全威胁态势量化陈秀真西安交通大学评估方法(R)-2-[{4-(3- 甲氧基丙氧有机化学 ,2008,28(12):2155-2158 17 基 )-3- 甲基吡啶 -2- 基 } 甲基亚徐宝财北京工商大学硫酰基 ]-1H- 苯并咪唑的合成中国科学 E 辑 : 信息科17 函数 S- 粗集与规律辨识史开泉山东大学学,2008,38(4):553-564中华检验医学杂17 泌尿生殖道支原体感染趋势及陈东科卫生部北京医院志,2006,29(2):170-172 耐药性分析环境科学与技16 潜在生态危害指数法评价中重徐争启成都理工大学术,2008,31(2):112-115 金属毒性系数计算生态环境 ,2007,16(1):191-196 16 长期定位施肥对农田土壤酶活王俊华中国科学院南京土壤研究所性及其相关因素的影响石油学报 ,2008,29(1):1-9 16 南海北部大陆边缘盆地油气地朱伟林中国海洋石油总公司质特征与勘探方向水产学报 ,2008,32(1):77-83 16 黄斑篮子鱼肌肉营养成分与品庄平中国水产科学研究院质的评价岩石力学与工程学16 有效应力对煤层气解吸渗流影唐巨鹏辽宁工程技术大学报,2006,25(8):1563-1568 响试验研究遗传 ,2008,30(10):1379-1382 16 聚丙烯酰胺凝胶快速、高效银梁宏伟中国水产科学研究院染方法的建立中草药 ,2009,40(7):1015-1018 16 羽芒菊化学成分研究徐润生浙江农林大学中华护理杂志 ,2008,43(2):134-135 16 肿瘤患者 PICC 置管主要并发吴红娟浙江省肿瘤医院症及其相关因素分析不同微咸水组合灌溉对土壤水农业工程学报 ,2007,23(11):71-76 15 盐分布和冬小麦产量影响的田吴忠东西安理工大学间试验研究光学学报 ,2006,26(5):657-662 14 基于二代 curvelet 变换的李晖西北工业大学图像融合研究晖硅酸盐学报 ,2006,34(11):1406-1410 14 热处理对凹凸棒石结构、形貌陈天虎合肥工业大学和表面性质的影响实用儿科临床杂14 肺炎支原体感染的致病机制与董宗祈武汉市儿童医院志,2007,22(4):243-245 治疗的关系水土保持学报 ,2006,20(4):120-122 14 保护性耕作对土壤微生物特性王芸山东农业大学及酶活性的影响岩土力学 ,2007,28(1):97-101 14 有限元强度折减法在公路隧道张黎明青岛理工大学中的应用探讨B 超引导经皮肾镜气压弹道联中华外科杂志 ,2006,44(6):386-388 14 合超声碎石术治疗无积水肾结李建兴北京朝阳医院石放牧对高寒嵩草草甸土壤微生中国科学院西北高原生物研草业学报 ,2008,17(2):39-46 13 物量碳的影响及其与土壤环境王启兰究所的关系传感技术学13 基于 RSSI 测距分析方震中国科学院电子学研究所报,2007,20(11):2526-2530光学精密工程 ,2008,16(4):598-604 13 基于径向基函数网络的光电编洪喜中国科学院长春光学精密机码器误差补偿法械与物理研究所NaCl 胁迫下星星草幼苗 MDA含生态学报 ,2006,26(1):122-129 13 量与膜透性及叶绿素荧光参数汪月霞扬州大学之间的关系生态学报 ,2006,26(4):1144-1150 13 大豆连作对土体和根际微生物李春格中国农业大学群落功能的影响现代铸铁 ,2007,27(7):13-18 13 HT300 高强度缸体缸盖材料熔逄伟中国第一汽车集团公司炼技术研究中国中西医结合急救杂血必净注射液对脓毒症大鼠组13 织肿瘤坏死因子- α及凝血功李银平天津市天和医院志,2007,14(2):104-107能的影响中华泌尿外科杂13 微创经皮肾穿刺取石术中肾盂曾国华广州医学院第一附属医院志,2007,28(2):101-103 内压变化的临床研究中华医院感染学杂13 2006-2007 年 Mohnarin 细菌耐肖永红北京大学第一医院志,2008,18(8):1051-1056 药监测临床神经病学杂12 血清超敏 C 反应蛋白与急性脑王秀艳华北煤炭医学院附属开滦医志,2006,19(3):210-212 梗死的相关性研究院生态学报 ,2007,27(5):1960-1968 12 不同土地利用方式下土壤呼吸王小国中国科学院水利部成都山地及其温度敏感性灾害与环境研究所水生生物学报 ,2006,30(1):7-11 12 三峡水库富营养化问题与对策蔡庆华中国科学院水生生物研究所研究岩石力学与工程学12 距离判别分析法在岩体质量等宫凤强中南大学报,2007,26(1):190-194 级分类中的应用中国农业科学 ,2008,41(1):286-294 12 烟草种质资源遗传多样性与亲梁景霞福建农林大学缘关系的 ISSR 聚类分析中华结核和呼吸杂12 中国内地首例甲型H1N1流感陈红成都市传染病医院志,2009,32(7):482-484 病例的临床特点与预后分析草业学报 ,2009,18(3):12-19 11 围栏封育措施对退化羊草草原古万庆中国科学院植物研究所植物群落特征影响研究干旱区典型流域近30 年土地中国科学院新疆生态与地理干旱区地理 ,2008,31(1):75-81 11 利用 / 土地覆被变化的分形特李义玲研究所征分析 -- 以玛纳斯河流域为例过程工程学报 ,2007,7(3):501-505 11 机械活化对木薯淀粉醋酸酯化黄祖强广西大学反应的强化作用摩擦学学报 ,2006,26(4):367-371 11 不同型面微孔对激光加工多孔彭旭东浙江工业大学端面机械密封性能的影响物理学报 ,2006,55(12):6470-6475 11 一维准周期结构声子晶体透射曹永军内蒙古师范大学性质的研究稀有金属 ,2008,32(5):659-667 11 稀土元素在镁合金的中的作用张景怀中国科学院长春应用化学研及其应用究所系统仿真学11 聚焦波束形成声图近场被动定梅继丹哈尔滨工程大学报,2008,20(5):1328-1333 位技术仿真研究岩土工程学报 ,2008,30(6):918-923 11 边坡地震动力响应规律及地震徐光兴西南交通大学动参数影响研究中国科学 G辑 : 物理学力学天文11 基于嫦娥一号卫星激光测高观平劲松中国科学院上海天文台学,2008,38(11):1601-1612 测的月球地形模型CLTM-s01中西医结合肝病杂11 慢性重型肝炎中医辨证与临床李筠解放军第 302 医院志,2007,17(6):343-344 分期及预后分析高技术通讯 ,2006,16(11):1190-1194 10 用核糖体工程技术二次开发海于志斌中国海洋大学洋微生物菌株资源的研究土壤水分胁迫对胡杨、灰叶胡林业科学 ,2007,43(5):30-35 10 杨光合作用 -- 光响应特性的影伍维模武汉大学响食品科学 ,2007,28(10):200-203 10 响应曲面法优化微波辅助提取黄璞南昌大学黑灵芝孢子多糖工艺的研究食品与发酵工业 ,2006,32(3):67-72 10 花色苷分离鉴定方法及其生物徐渊金浙江工商大学活性水利学报 ,2007,38(1):94-99 10 基于熵权的改进DRASTIC模型孟宪萌河海大学在地下水脆弱性评价中的应用中国科学 A辑: 数10 图的距离不大于β 的点可区别张忠辅兰州交通大学学,2006,36(10):1119-1130 的全染色中国人口·资源与环10 中国东、中、西部地区经济发谭丹南京大学境,2008,18(3):54-57 展与碳排放的关联分析及比较中华麻醉学杂10 不同剂量舒芬太尼预处理对大刘鲲鹏卫生部中日友好医院志,2009,29(5):405-408 鼠的延迟性心肌保护作用铁道标准设计 ,2009,(11):28-30 9 CRTSⅠ双块式无砟轨道综合整赵东田铁道部宜万铁路建设指挥部理技术中国安全生产科学技9 重大事故动力学演化刘铁民中国安全生产科学研究院术,2006,2(6):3-6中国公路学报 ,2007,20(5):101-105 9 高速公路隧道进出口视觉震荡杜志刚同济大学与行车安全研究中国激光 ,2008,35(8):1165-1168 9 多台阶衍射光学元件的工刘强中国科学技术大学艺优化航空动力学报 ,2008,23(4):598-604 8 收缩 - 扩张形气膜孔提高气膜刘存良西北工业大学冷却效率的机理研究化工学报 ,2009,60(4):965-971 8 多孔扇形分布端面机械密封性赵中浙江工业大学能的数值分析生物工程学8 厌氧氨氧化膨胀床反应器的运张蕾浙江大学报,2008,24(7):1240-1247 行性能中国运动医学杂有氧运动对胰岛素抵抗小鼠骨6 骼肌球形脂联素及腺苷酸活化牛燕媚天津体育学院志,2009,28(1):36-40蛋白激酶的影响核技术 ,2006,29(1):77-80 5 HPGeγ探测器的点源效率函数王崇杰辽宁师范大学及其参数确定。
药用植物重楼的分子生物学研究进展
城市避难场所是指城市居民在面对灾害和突发事
件时，采取保护人身财产安全的行为，通常是躲避到相 对安全的空间。从场地安全性、避难人员意愿、权属关
系和方便投资建设等方面的角度考虑，城市绿地、广 场、学校、体育馆和避难建筑等是较好的选择。 1 校园开敞空间在防灾避难中的优势
根据近年来国内几次大地震后，受灾市民对避难
定，结果表明，ITS 序列可有效鉴别正品重楼及其混伪
基金项目：西南科技大学大学生创新基金精准资助专项 （JZ20-071）； 西 南 科 技 大 学 大 学 生 创 新 基 金 项 目（CX20-044， CX20-045）。 作者简介：孙杰，在读本科生，研究方向：中药材植物的分子生物学。
輨 輰 訛
其生长周期长，且不同种植物的根茎形态、组织结构较
为相似，利用传统方法难以对其进行鉴定。而分子标记
是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传
标记技术，具有信息量大、重复性好、不易受外界环境 影响等优点。现已用于重楼鉴定的分子标记技术有
DNA 条形码、SSR 分子标记、CDDP 分子标记、SCoT 分 子标记等技术及 HPLC 指纹图谱，其中 DNA 条形码技
张晓瑞等[13]对 4 个产地的 17 份重楼样品进行分 析，结果发现，ITS2 序列的遗传位点和聚类进化与重 楼品种有关，并且不同地域环境对其遗传序列有重要 影响。次年，周武先等[11]利用 CDDP 分子标记发现 13 份重楼属种质资源遗传多样性丰富。程虎印等[10]采用 SCoT 分子标记及 UPGMA 分析得出 6 种重楼属植物 在物种水平上具有较高的遗传多样性，并对其进行了 排序，由高到低依次为七叶一枝花、宽叶重楼、具柄重 楼、狭叶重楼、宽瓣重楼和北重楼。同时，结果表明，七 叶一枝花与北重楼为不同种群，支持将宽瓣重楼、宽叶 重楼等划分变种的观点分类体系。Zhao 等[14]采用 SCoT 结合 SRAP 的分子标记技术发现，达比山脉的 33 个重 楼植物遗传基础较窄，其种质资源遗传多样性丰富，并 且发现 SCoTng 等[15]采用 RAPD 技术调查发 现，来自 4 个生态区域的 55 份重楼样本间遗传多样性 有明显差异，且不同区域之间重楼遗传多样性水平较 高（Gst=0.301）。Wang 等[16]研究确定的 EST-SSR 标记 可以作为重楼育种的标记之一，结果揭示了重楼种质 资源适度的遗传多样性 （He=0.527） 和低遗传分化 （Fst= 0.103）。陈中苏直等[17]采用 SSR 分子标记分析得 出，云南省内 5 个不同居群共 115 份滇重楼样品具有 较 高 的 遗 传 多 样 性，且 遗 传 变 异 主 要 发 生 在 各 居 群 内。吴喆等[18]采用 FTIR 结合化学计量学的方法分析云 南重楼及其近缘种的亲缘关系，结果发现，PLS-DA 分 类效果更好，能将 5 种野生重楼属植物准确区分，同 时，云南重楼与南重楼和百花重楼之间的亲缘关系较 近，而与毛重楼和五指莲的关系较远。Huang 等[19]基于 AFLP 标记对 15 个野生种群和 17 个栽培品种进行遗 传多样性分析，研究表明，在物种水平上，栽培品种遗 传多样性高于野生种群，但大多数基因变异存在于各 自种群中，并且贵州野生种群比云南种群表现出更丰 富的遗传多样性。尹晓蛟等[20]对从 13 份重楼属植物中 选取的 18 个表型性状进行分析，结果发现，重楼样品 的 16 个性状在各种质间达到显著或极显著差异水平； 遗传多样性指数达 1.88~2.66，类型丰富；经主成分分 析发现，累计百分比高于 85%的 5 个主成分累计贡献 率为 88.918%，对重楼表型差异影响大；同时，性状相
基于分子标记的植物种群遗传多样性研究
基于分子标记的植物种群遗传多样性研究植物种群遗传多样性是种群进化和生态发展的基础，它反映出种群内遗传差异的程度和分布状况。
作为植物保育的重要指标之一，研究植物遗传多样性可以为种群保护和生态修复提供科学依据。
目前，随着生物信息学和分子生物学的发展，种群遗传多样性的研究方法也得到了大幅度提升。
分子标记是遗传学领域中的一种研究工具，通过对某一特定DNA序列进行研究，可以快速揭示出物种间遗传多样性的程度。
在植物学的研究中，常用的分子标记包括核酸序列和蛋白质序列。
其中，核酸序列分子标记的研究主要包括限制性片段长度多态性 (RFLP)、序列标记间隔法 (SSR)、随机扩增多态性DNA (RAPD)、DNA指纹图谱 (AFLP)、单倍型分析 (HAPLOTYPE)、SNP等等。
这些分子标记方法有不同的优缺点，可以根据实际需要选择适合的方法来深入研究植物物种间的遗传多样性。
限制性片段长度多态性(RFLP)法是一种可以对DNA特定部位进行定性、定量分析的方法。
它通过限制性内切酶的作用将DNA片段分割成若干不同长度的碎片，然后利用电泳法分离这些碎片，得到有相对特异性的DNA带谱图。
该方法优点在于能够研究复杂的基因多态性，可以避免PCR扩增过程中对GC含量和DNA质量的要求，缺点在于步骤繁琐、时间长、成本高。
序列标记间隔法 (SSR)是基于微卫星分子进化的一种分子标记方法。
这种方法依托细胞质基因组中的微卫星序列来构建一个高分辨率的多态性标记。
高度多态性的核酸片段不仅在植株自交系动态变化过程中具有稳定的遗传学特征，同时该标记还可以锁定一段DNA特定区域，避免了较复杂酶切和PCR扩增过程中的非特异性DNA等因素的干扰，因此使用范围广泛。
随机扩增多态性DNA (RAPD)是利用PCR扩增DNA片段，然后在EA界面上用电泳分离并可视化DNA片段，再把不同的PCR产物的可视化图谱进行比较，确定不同个体的分子特征。
由于RAPD标记在PCR反应扩增中对操作者、PCR反应条件、反应系统组成及质量等方面的要求较高，同时仅能分析0.5~10kb左右大小的DNA片断，因此被SSR和AFLP方法所替代。
SRAP和ISSR分子标记研究进展
SRAP与ISSR分子标记的研究进展摘要：SRAP与ISSR等分子标记技术已广泛应用到科研工作中。
本文简单的介绍SRAP与ISSR的原理、功能、应用以及对使用分子标记技术揭示生物菌的作用机理进行了展望。
DNA分子标记是指能反映生物个体或种群间基因组中某种差异特征的DNA片段，它能直接反映基因组DNA间的差异，是继形态学标记、细胞学标记及生化标记之后，近年来广泛应用的一种新的遗传标记。
近年来,随着DNA 标记技术的研究日渐成熟,其应用也日益广泛。
目前,各种分子遗传标记技术在科研中的应用已深入开展，为种质资源的鉴定、基因的定位与克隆、数量性状位点的遗传分析、遗传多样性评估、物种起源和分子标记辅助育种等遗传研究提供了有价值的工具。
目前常用的分子标记有RFLP、AFLP、RAPD、SSR、ISSR 、SRAP等。
1 SRAP分子标记的发展与应用1.1 SRAP分子标记的发展SRAP(Sequence-Related Amplified Polymorphism)即相关序列扩增多态性是一种基于PCR 的新型标记，由美国加州大学作物系Li和Quiros博士提出的序列相关扩增多态性(sequence-related amplifiedpolymorphism, SRAP)。
SRAP 技术是与RAPD 技术相似的一种标记技术，即SRAP 可用一对引物，但所用的引物是在SSR 的基础上设计的。
SRAP 标记原理是利用基因外显子里G、C 含量丰富，而启动子和内含子里A、T含量丰富的特点设计两套引物，对开放阅读框架进行扩增。
SRAP 技术是一种无需任何序列信息即可直接PCR 扩增的新型分子标记技术。
SRAP分子标记技术具有重复性强、简便、易于分离条带和测序、中等产量高、高共显性、便于克隆测序目标片段等特点,目前SRAP 标记已在植物遗传多样性检测、遗传图谱构建、重要基因定位、品种鉴定和种子纯度检测上得到了广泛应用，而在真菌界的应用相对较少。
基于SRAP的15种鸢尾的遗传多样性和亲缘关系分析
基于SRAP的15种鸢尾的遗传多样性和亲缘关系分析许玉凤;闫小风;邵美妮;关萍;陈旭辉;曲波【摘要】为探讨北方地区15种鸢尾的遗传多样性和亲缘关系,采用SRAP分子标记的方法对鸢尾遗传多样性的亲缘关系进行评价.结果表明:利用优化的SRAP-PCR 反应体系和筛选出的6对引物组合对15种鸢尾扩增,共得到207条清晰稳定的条带,片段大小是50～1500bp,多态位点百分比为100％.多态信息含量为0.3976,遗传多样性参数分别为Na=2.000,Ne=1.6947±0.2416,H=0.3967±0.0941,I--0.5816±0.1065,说明15种鸢尾在种水平上有较高的遗传多样性,并有较大的遗传分化.鸢尾的亲缘关系通过UPGMA聚类分析和主成分分析两种方法进行,在遗传相似性系数为0.589时,15种鸢尾被分成六大类群.该研究为鸢尾属植物种质资源的分类、鉴定、保护及新品种选育等方面提供参考.【期刊名称】《沈阳农业大学学报》【年(卷),期】2015(046)005【总页数】7页(P568-574)【关键词】鸢尾;SRAP;遗传多样性;亲缘关系【作者】许玉凤;闫小风;邵美妮;关萍;陈旭辉;曲波【作者单位】沈阳农业大学生物科学技术学院,沈阳110161;沈阳农业大学生物科学技术学院,沈阳110161;沈阳农业大学生物科学技术学院,沈阳110161;沈阳农业大学生物科学技术学院,沈阳110161;沈阳农业大学生物科学技术学院,沈阳110161;沈阳农业大学生物科学技术学院,沈阳110161【正文语种】中文【中图分类】Q94鸢尾属（Iris L.）为鸢尾科（Iridaceae）多年生草本植物，全世界范围内约300种，我国有60个种、13个变种和5个变型，主要分布于东北、西北、西南等地[1]。
鸢尾花色丰富、姿态优美、栽培管理简便、养护成本低，被广泛地应用于园林绿化。
一些种类如溪荪（I.sanguinea）、马蔺（ctea var.chinensis）等具有抗旱、耐盐碱、耐水湿等特性，可用于滩涂、盐碱地的改良[2]；一些鸢尾种还有药用价值，如马蔺、野鸢尾等，根、茎、叶、花和种子都可入药，其所含的黄酮类化合物具有良好的清热解毒作用。
利用SRAP标记划分甘蓝型油菜杂种优势群
江西农业学报2011,23(4):1~4Acta Agr i culturae Jiangxi利用S RAP 标记划分甘蓝型油菜杂种优势群邹小云,宋来强,陈伦林,李书宇,邹晓芬,张建模收稿日期3基金项目江西省农业科学院创新基金(青年基金)项目;国家63计划项目()。
作者简介邹小云(),男,助理研究员,硕士,主要从事作物遗传育种与栽培技术研究。
(江西省农业科学院作物研究所、江西省农业科学院油料作物重点实验室,江西南昌330200)摘要:利用S RAP 分子标记研究了来自国内外50个甘蓝型油菜(B ra ssica napus L .)品种的遗传变异,从120对S RAP 引物组合中,筛选出扩增带型稳定的15对引物进行遗传多样性分析,共获得了140个多态性标记,平均每个位点检测到的等位基因变异数为9.3个,变化范围2~16个;平均P IC 值为0.529,变化范围为0.27~0.73;遗传距离范围为0.0838~0.4326。
经遗传多样性分析和聚类分析,将50份供试材料分为6个类群,群间遗传距离大于群内遗传距离,基本反映了品种的地源差异,表明SRAP 标记可以有效地区分甘蓝型油菜的遗传多样性,划分结果客观合理。
关键词:甘蓝型油菜;SRAP 标记;遗传多样性;杂种优势群中图分类号:S565.4文献标识码:A 文章编号:1001-8581(2011)04-0001-04C lassificati on of H eterosis G roups for R apeseed (Bra ssica napus )by S RAP M arkersZ O U X i ao-yun ,S ONG La i -qiang ,CHE N Lun-li n ,LI Shu-yu ,Z OU X i ao-fen ,Z HANG Jian-m o (Insti tute of Cro p Sc i ences ,JiangxiA cademy ofAgricultural Sc iences ;Key Laboratory of O il C rops ,Jiangxi Acade my ofAgricu lt ural Sciences ,Nanchang 330200,Ch i na)Abstra ct :In t he present st udy ,15of 120S RAP pr i m er co mb i nati ons were screened o ut to analyze the genetic diversity a m o ng 50rapeseed (Bra ssica napus L .)varieti es ,the genetic d i versity bet ween t w o var ieti es was defi ned w ith genetic d i stance (GD)by Ne iM m et hod ,and a ll culti vars were ana l yzed by cl usteringm ethod .The resu lts sho wed t hat 140SRAP m arkerswere obta i ned .The nu m ber of a lleles per S RAP l ocus averaged 9.3with the range fro m 2to 16.The va l ue of poly m orph is m i nfor m ati on co ntent (P IC )for a ll SRAP pri m ers varied fro m 0.27to 0.73w it h an average of 0.529.The GD a mong the 50var i e ties ranged be t w een 0.0838~0.4326.The UPG MA cl usteri ng ana l ysis divi ded 50varieti es i nto 6gro ups .A fte r c l assificati on ,the average GD among gro ups was h i ghe r t han that w it h i n groups ,which was appro xi m ate l y i n accordance w it h t he ir di versity of cultura l area .So the c l ass ificati on of the hete rosis groups f or rapeseed (Bra ssica napus)by S RAP m akers i n th i s work is appropriate .K ey wor ds :B ra ssica napus ;SRAP marker ;Gene tic di ve rsity ;H eteros i s group杂种优势是生物界普遍存在的一种现象,杂种优势利用是作物育种的重要途径之一。
亚麻EST-SSR和SRAP标记研究
亚麻EST-SSR和SRAP标记研究亚麻EST-SSR和SRAP标记研究摘要：亚麻是一种重要的纤维作物，具有丰富的营养价值和广泛的应用前景。
为了深入了解亚麻的遗传多样性和进一步推进选育工作，本研究运用EST-SSR和SRAP标记技术对亚麻进行了遗传多样性分析。
结果表明，亚麻遗传多样性较高，具有丰富的遗传变异。
引言：亚麻（Linum usitatissimum）是一种古老而重要的纤维作物，广泛分布于世界各地。
亚麻纤维具有优良的物理性能，被广泛应用于纺织、制纸和其他工业领域。
此外，亚麻籽含有丰富的营养成分，具有饲料和食品加工的潜力。
亚麻品种资源的遗传多样性是亚麻育种和种质资源保护的基础。
传统的遗传多样性评价方法常常耗费时间和资源，不适用于亚麻这样的大基因组植物。
因此，本研究选择了EST-SSR （表达序列标记重复序列）和SRAP（序列相关扩增多态性）标记技术进行遗传多样性研究。
材料与方法：本研究选取了20个亚麻品种为研究材料，通过EST数据库进行SSR标记分析，并设计了相应的引物。
采用PCR扩增和电泳分析的方式，对亚麻品种进行了遗传多样性分析。
结果：通过EST-SSR分析，共筛选出了50个多态性较高的EST-SSR标记。
通过SRAP分析，共筛选出了100个多态性较高的SRAP标记。
亚麻品种之间的遗传相似性系数介于0.60-0.90之间，表明亚麻遗传多样性较高，具有丰富的遗传变异。
讨论：本研究表明，EST-SSR和SRAP标记技术是评估亚麻遗传多样性的有效方法。
EST-SSR标记具有较高的多态性和稳定性，可作为亚麻分子标记辅助育种的有力工具。
SRAP标记具有高通量和高变异性的特点，可用于亚麻遗传多样性分析和种质保护的研究。
此外，通过亚麻遗传多样性的研究，可以为亚麻种质资源的收集、整理和利用提供科学依据。
进一步深入了解亚麻的遗传多样性也有助于挖掘亚麻与其他作物的共享基因，推动植物遗传学的研究和亚麻育种的进程。
分子标记——SRAP分解
我们本次实验主要在于引物的筛选，分别用来自 不同地区的各DNA样品从现有引物中筛选出合适的 引物。
步
步
温 94 94 35 72 骤 94 50 72 骤 72 4
度℃℃℃℃循℃℃℃循℃℃
环
环
时 5 1 1 1 5 1 1 1 35 10 保
间分
次
次
存
钟
六、琼脂糖凝胶电泳：
SRAP扩增反应结束后，扩增产物用2%的琼脂 糖凝胶电泳分析多态性。
DNA分子在琼脂糖中泳动时有电荷效应和分子 筛效应，在分子筛作用下，分子大小和构象不同的核 酸分子泳动率出现较大差异，从而分离核酸片段检测 其大小。核酸分子中嵌入荧光染料（EB）后，在紫 外灯下可观察到核酸片段所在的位置。
二、SRAP标记的原理：
SRAP标记原理是利用基因外显子里G、C含量 丰富，而启动子和内含子里A、T含量丰富的特点设 计两套引物，对开放阅读框架进行扩增。该标记具有 简便、稳定、产率高、便于克隆目标片段的特点，并 已被应用于图谱构建、性状的标记和遗传多样性分析。
三、SRAP标记中引物的设计与选择：
琼脂糖凝胶电泳设备：
DNA 琼脂 糖凝 胶电 泳
胶图展示：
胶图展示：
条带不稳现象
电泳注意事项：
1、凝胶一定要加热溶解完全，均匀； 2、一般情况下，梳子越薄而长，条带越好看； 3、上样量不宜过多，会造成条带的相互挤压； 4、如果点样孔多余，将样点到中间，尽量避免边缘效应， 中间电场比较均匀； 5、做胶的缓冲液和跑胶的缓冲液浓度应该一致； 6、加样时不要太快，让其自然沉底，均匀分布在电泳孔 内； 7、电泳开始时可采用低电压使其跑出孔后，再调高电压。 。
利用SRAP分子标记分析结球大白菜的遗传多样性
中 筛选 出８ 引 物 应 用于 扩 增 基 因 组Ｄ Ａ 对 Ｎ ，共 获 得 ３ ８ ２ 条重 复性 好 、 清 晰 可 辨 的 条带 ， 大 小在 ２ ０ ０ｂ之 间 ， 其 ０ ～２ ５ ０ｐ
中２ ３ ８ 条为 多态 性 带 （６２ ％） ８ ．８ 。其 平 均 多样 性 指 数 为０ ３ ４ ，每 个 位 点 的有 效 等位 基 因 数是 １４ Ｏ ．８ ０ ． １ ，遗 传 相 异 性 系 ７
数 分 布 在 ０ ０ ０ ． ５ ３ 间 ，平 均 ０ ５ ０ ， 标 准差 为 ９ ４ ×１ 。利 用Ｕ Ｇ Ａ 法 聚 类 分 析 ，可 将 试 材 分 成 五 大 ．５ ～０ ７ ５ 之 ．５ ８ ．７ ０ ＰＭ 方
类 群 ， 与 传 统 的 形 态 学 分 类 有 一 定 差 异 。 第 一 、 二 、三 类 群 为 高桩 材 料 ， 第 四 类 群 仅 包括 Ｖ ０ －１ ， 第五 类群 囊 Ｂ６ ８ 括 绝 大 多 数 的 矮桩 材 料 。 第五 类 群 又明 显 分成 两 个 亚 群 ，春 材 料 集 中 分 布 在 一 亚群 之 中 。 结 果 显 示 ：结球 大 白 菜
关键 词 ： 结球 大 白 菜 ；ＳＡ 标 记 ； 自交 系 ；遗 传 多样 性 ｇＰ
白菜 类 蔬 菜 原 产 于 中 国 ，包 括 结 球 白 菜 、不 结 球 白 菜 （ 叶 、花 心 、半 结球 变 种 ） 芜 菁 ３ 亚 种 类 型ｌ 散 和 个 １ 】 中结 球 。其 白菜 ，又 名 大 白菜 （ ｒｓｉａ ｃｍｐ ｓｒ ｓｐ Ｐ ｋ ｅ ｓ ） Ｂ ａｓｃ ａ ｅｔ ｓＬ． ．ｅ ｉ ｎ ｉ ， ｉ ｓ ｎ ｓ 因营 养丰 富 、食 用 广 泛 、耐 贮 藏 而 成 为 我 国 种 植 面 积 最 大 的 蔬 菜 作 物 之 一 。传 统 上 ，大 白菜 主 要 通 过 常 规 育 种 进 行
第八讲(2)SRAP技术课件
9
n
M 3.2 2.7 2.2 1.7 1.2
0.7
2000bp
1500bp
n
n 500bp
n 100bp
M：100bp plus DNA ladder marker
n 图3 Taq酶浓度对SRAP反应的影响
10
n
M 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
n
n 2000bp
n 1500bp
SRAP标记技术
1
1 SRAP标记技术的概念 相关序列扩增多态性(Sequence-related amplified
polymorphism，SRAP)是一种新型的基于PCR的标记 技术， 由美国加州大学蔬菜作物系Li和Quiros博士于2019 年提出的，又称为基于序列扩增多态性(Sequencebased amplified polymorphism，SBAP)。
难度大，费用高。
用SRAP标记技术简便、稳定，适用于遗传作图。
19
4.3 重要性状的标记 通过SRAP技术，将一些重要性状标记出来，在以
后的新品种选育、性状标记的辅助选择等方面都具有 重大的作用。
20
4.4 比较基因组学 研究比较基因组学对研究物种的起源和进化都具有很
重要的意义，而转录图谱是进行比较基因组学研究极为 有效的手段，利用基于PCR的cDNA-SRAP分析来检测 编码区的多态性具有简便、快捷、高效的特点。
72℃ 35个循环 94℃
50℃ 72℃ 72℃
5min 1min 1min 1min 1min 1min 1min 10min
(杨琦，大白菜SRAP反应体系的建立与优化)14
3.3 SRAP-PCR扩增产物的分析 上样 预电泳 电泳 漂洗胶板 银染 照相 漂洗胶板 显影 漂洗胶板 数据处理
基于分子标记的家禽遗传多样性评价
基于分子标记的家禽遗传多样性评价家禽是我国农业中的重要组成部分，其肉、蛋等产品的供应能够满足人们的需求。
然而，随着人口增长和生活水平的提高，对家禽产品的质量、健康和安全要求也越来越高。
因此，家禽遗传多样性的评价变得越来越重要。
传统的遗传多样性评价方法主要基于形态、生理和生化等特征的描述和比较。
然而，由于这些特征易受环境因素影响，只能反映部分遗传信息。
而基于分子标记的遗传多样性评价则可以更准确、更全面地反映家禽遗传多样性水平。
分子标记是指利用分子生物学技术，将DNA等分子标志物作为研究对象的手段。
其中，分子标记主要包括限制性片段长度多态性（RFLP）、序列标记法（SSR）和单核苷酸多态性（SNP）等。
基于分子标记的遗传多样性评价可以通过分析不同家禽品种或群体间基因型之间的差异和相似度，来进行家禽遗传多样性的评价。
例如利用RFLP的方法，可以将不同个体的DNA进行切割，然后通过电泳进行基因型的比较，从而判断不同品种或群体的遗传多样性水平。
而利用SSR和SNP等标记，则可以更加方便和可靠地进行基因型比较和数据处理。
此外，基于分子标记的遗传多样性评价还可以为家禽育种提供重要的参考信息。
例如，通过对家禽品种或群体的遗传多样性进行分析，可以了解其遗传结构、遗传变异、亲缘关系等信息，从而为家禽的育种改良和优化提供依据。
例如在鸡的育种方面，利用基于分子标记的遗传多样性评价，可以筛选出具有良好遗传特性和表现的亲本鸡种，从而提高育种效率和品质。
但是，基于分子标记的遗传多样性评价方法也存在一些局限性和挑战。
例如，分子标记的选取、样本的选择和规模、数据的处理等方面都需要专业的技术和方法来进行处理。
此外，基于分子标记的遗传多样性评价还需要进行多种数据分析和模型预测等，才能更好地解释和理解数据。
总之，基于分子标记的家禽遗传多样性评价不仅可以提供更加准确和全面的遗传信息，而且还可以为家禽育种和管理提供重要的参考信息。
这也为我们进一步探究家禽遗传多样性的保护和利用提供了新的思路和方法。
应用SRAP分子标记构建红麻种质资源分子身份证
应用SRAP分子标记构建红麻种质资源分子身份证刘倩;戴志刚;陈基权;温岚;龚友才;粟建光【期刊名称】《中国农业科学》【年(卷),期】2013(046)010【摘要】[目的]以来源于不同国家和地区的127份红麻栽培种、野生种和近缘种为材料,利用SRAP标记构建红麻种质资源分子身份证.[方法]利用SRAP标记对127份红麻种质进行遗传分析,计算其遗传相似系数.利用UPGMA法作聚类图,构建分子身份证.[结果]40对引物组合在127份红麻种质材料中共扩增出383条DNA片段,其中,375条为多态性片段,总的多态性条带比率(PPB)为97.9％. UPGMA聚类分析结果表明,相似系数为0.70时,127份红麻种质资源被划分为4个类群.用SRAP特征谱带和多种引物组合2种方法可有效区分所有材料,并构建出1 2 7份红麻种质资源特异性分子身份证,置信概率达到99.99％.[结论]基于15对SRAP核心引物组合的36条谱带构建了一套127份红麻种质资源唯一性的分子身份证.【总页数】10页(P1974-1983)【作者】刘倩;戴志刚;陈基权;温岚;龚友才;粟建光【作者单位】中国农业科学院麻类研究所,长沙410205;中国农业科学院麻类研究所,长沙410205;中国农业科学院麻类研究所,长沙410205;中国农业科学院麻类研究所,长沙410205;中国农业科学院麻类研究所,长沙410205;中国农业科学院麻类研究所,长沙410205【正文语种】中文【相关文献】1.基于SRAP标记的国兰种质资源遗传多样性分析及分子身份证构建 [J], 唐源江;曹雯静;吴坤林2.利用ISSR和RAPD标记构建红麻种质资源分子身份证 [J], 郑海燕;粟建光;戴志刚;李燕;陈基权;龚友才3.红麻种质资源遗传多样性和分子鉴定技术研究Ⅰ.红麻AFLP-银染技术和种质资源指纹图谱的构建 [J], 程舟;卢宝荣;王琼;鲛岛一彦;陈家宽4.应用ISSR分子标记绘制红麻种质资源DNA指纹图谱 [J], 汪斌;祁伟;兰涛;陈惠端;徐建堂;粟建光;李爱青;祁建民5.基于SRAP分子标记的特早熟荔枝种质资源遗传多样性分析 [J], 胡福初;吴小波;陈哲;吴凤芝;周文静;冯学杰;范鸿雁;周瑞云;王祥和因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
基于SSR和SRAP标记的苹果品种亲缘关系分析
基于SSR和SRAP标记的苹果品种亲缘关系分析巴巧瑞;赵政阳;高华;王艳丽;孙彪【摘要】【目的】用SSR和SRAP分子标记技术,分析苹果（Malus domestica Borkh.）重要栽培品种的亲缘关系,为苹果杂交育种亲本及组合的选配提供参考。
【方法】用亲缘关系较近的金冠和秦冠筛选SSR和SRAP多态性引物,利用SSR和SRAP分子标记技术对37个苹果栽培品种进行遗传多样性和亲缘关系分析。
【结果】筛选出了用于37个苹果主栽品种亲缘关系分析的10对SSR和10对SRAP引物,其分别产生56和64条扩增带,平均多态性比率分别为61.09%和70.8%。
根据SSR＋SRAP分析结果,37个苹果品种被聚为6大类。
【结论】所选取的引物能够有效地揭示供试苹果品种的遗传多样性,并且苹果品种分类与传统系谱基本一致。
%【Objective】 The study was done in order to select the proper parents in apple breeding.【Method】 The genetic diversity and genetic relationship of 37 apple cultivars were studied with the SSR and SRAP markers.【Result】 The results showed that 56 and 64 bands were obtained by SSR and SRAP markers amplified through 10 selected primers respectively.Polymorphic percentage was 61.09% and 70.8%.【Conclusion】Based on the SSR＋SRAP results,the selected primers were effective in revealing genetic diversity of the tested varieties,and the apple cultivars could be classified into the six groups,which were similar to the traditional classification.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(039)009【总页数】6页(P123-128)【关键词】苹果;SSR;SRAP;遗传多样性;亲缘关系【作者】巴巧瑞;赵政阳;高华;王艳丽;孙彪【作者单位】西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌712100【正文语种】中文【中图分类】S661.1苹果是一个高度杂合的物种，其遗传背景十分复杂[1]，加之童期较长，导致杂交育种周期长、效率低，因此提高苹果育种效率的关键步骤之一就是选配适宜的亲本及组合。
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（ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆＦ ｏ ｒ ｅ ｓ ｔ ｒ ｙ ， Ｓ ｈ ａ ｎ ｄ ｏ ｎ ｇ Ａ ｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｔ ａ ｉ ’ ａ ｎ ２ ７ １ ０ １ ８ ， Ｓ ｈ ａ ｎ ｄ ｏ ｎ ｇ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ；
ｌ ２ ． ２ ７个 多 态 性 位 点 。 引 物 组 合 Ｍｅ ８ ． Ｅ ｍｌ ６的 Ｎｅ ｉ ’ Ｓ 基 因 多样 性 数 ｎ（ ０ ． ３ ９ ９ ３ ） 、 Ｓ ｈ ａ ｎ ｎ ｏ ｎ信 息 指 数 值
（ ０ ． ５ ７ ９ ４ ） Ｊ ｍ 有效等位基 因数 Ｎ ｅ （ １ ． ７ ２ ８ ｏ ） 都是 最高值 。４ ７ 份材料的遗传相似 系数 变化 范围为 ０ ． ６ ３ ～ ０ ． ８ ０ ， Ｕ Ｐ ＧＭＡ聚 类分 析表 明 ， 在 遗 传 相似 系数 为 ０ ． ６ ６ ２处 ， 将４ ７ 份 材 料 划 分成 ５个类 群 。本 研 究较 好 地 揭 示
了４ ７ 份材料 亲缘 关 系的远 近 ， 为春 兰各 品种 间的分类 和 杂交 亲本 的选择 提供 重要 理 论依 据 。
关键 词 ： 春兰； Ｓ Ｒ ＡＰ； 遗传 多样 性 ； 聚 类分析 ； 亲缘 关 系
中图分 类号 ： Ｓ ３ １ １ 文献标 志码 ： Ａ 论文编 号 ： ２ ０ １ ３ ． １ ０ ２ ７
１ ５ ｐ ｏ ｌ ｙ ｍｏ ｒ ｐ ｈｉ ｃ ｐ ｉｍｅ ｒ ｒ ｃ ｏ ｍｂｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｅ ｄ ａ ｎ ｄ ａ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｏ ｆ １ ８ ５ ＤＮＡ ｌ ｏ ｃ ｉ ｗｅ ｒ ｅ ａ ｍｐｌ ｉ ｉｅ ｆ ｄ，１ ８ ４ ｏ ｆ ｗｈ ｉ ｃ ｈ ｗｅ ｒ ｅ ｐ ｏ ｌ ｙ ｍｏ ｒ ｐ ｈｉ ｃ ．Ｔｈ ｅ ａ ｖ ｅ ｒ ａ ｇ ｅ ｎ ｕｍｂ ｅ ｒ ｏ ｆ ｐ ｏ ｌ ｙ ｍｏ ｒ ｐｈ ｉ ｃ ＤＮＡ ｌ ｏ ｃ ｉ ａ ｍｐ ｌ ｉ ｉｅ ｆ ｄ ｂ ｙ ｅ ａ ｃ ｈ ｐ ｉｍｅ ｒ ｒ ｗａ ｓ １ ２ ． ２７ ．Ｐｒ ｉｍｅ ｒ
（ ’ 山 东农 业 大 学林 学 院 ， 山东 泰 安山东泰安 ２ ７ １ ０ ０ ０ ）
摘 要： 利用 Ｓ Ｒ ＡＰ分 子标 记 对 ４ ２ 份 春 兰 品种 及 １ 份 多花 兰 、 １ 份春剑及 ３ 份 杂 交 兰进 行 遗 传 多样 性 分 析 。 筛选 出的 １ ５对 引 物 组 合 共 扩 增 出 １ ８ ５ 个位 点 ， 其 中多 态性 位 点 １ ８ ４个 ， 平 均每 对 引物 组 合 产 生
Ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｎ ｕ ｍｂ ｅ ｒ ｏ ｆ ａ ｌ ｌ ｅ ｌ ｅ ｓ（ １ ． ７ ２ ８ ０ ） ｗ ｅ ｒ ｅ ｔ ｈ ｅ ｈ ｉ ｇ ｈ ｅ ｓ ｔ ． Ｔ ｈ ｅ ｇ ｅ ｎ ｅ ｔ ｉ ｃ ｓ ｉ ｍ ｉ ｌ ａ ｒ ｉ ｔ ｙ ａ ｍ ｏ ｎ ｇ ４ ７ ｇ ｅ ｒ ｍ ｐ ｌ ａ ｓ ｍ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ
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雉 学学握 ２ ０ １ ４ ， ４ （ ８ ） ： ５ ３ — ５ ８
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕｌ ｔ ｕｒ ｅ 、 Ｖ ｗｗ． ｃ ａ ａ ｊ ． Ｏ ｒ ｇ
利用 Ｓ Ｒ ＡＰ 标记分 析春兰种质资源遗传 多样性
牛 田 ， 张 林 ， 王厚 新 ， 李承 秀 ， 聂 硕’ ， 朱翠 翠 ， 王 长 宪
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