第五组

质粒DNA的提取
注意事项 1.Eppendorf管应放置在冰上 2.吹打沉淀应充分，且离心过后的沉淀应尽可能干 燥
结果分析 由电泳结果可知，大肠杆菌质粒电泳有两条带，其 中一条大于2000bp，颜色较暗，另一条为100bp， 颜色很亮。2000bp的条带为质粒DNA，100bp为一 些相对分子质量较小的杂质
生物化学与分子生物学实验
小组成员：刘兰 朱海燕 薛青波
植物总DNA的提取
• 实验分析 • 本组实验材料为含笑叶片若干，用95%乙醇提取 纤维状DNA沉淀失败，可能原因如下：1.沉淀未 干燥完全2. 搅拌过于剧烈，未提取到DNA沉淀 • 实验结果 • 纯的DNA样品A260/280=1.8,本实验结果为1.18， 说明样品不纯，含有杂质
• 结果分析 完整的RNA琼脂糖电泳有三条带，5S(最暗)，18S （中等）,25S（最亮）。由实验结果可知，实验较 为理想
问题 完整的RNA电泳结果为何会是三条带？
不连续SDS-PAGE
• 注意事项 • 1.玻璃板要干净干燥 • 2.用琼脂封底时要注意不要产生气泡，封底要均 匀，待其凝固后方能加分离胶 • 3.10%过硫酸铵的配制 • 3.分离胶和积层胶都容易凝固，要现配现用， TEMED应在灌胶前加入 • 4.电泳时，电极缓冲液始终应该没过短板，要用 夹子把橡胶管夹住，电泳时还应注意电压的切换 • 5.注意跑胶时间，不要让样品跑到胶底部
SDS-PAGE电泳结果图
蛋白质含量的测定
• 注意事项 • 比色皿的使用应保持分光光度计的内部干净整洁 ，以免腐蚀分光光度计，用完之后比色皿要用乙 醇清洗
谢谢大家！
质粒DNA电泳结果和PCR电泳结果 DNA marker （左一） 质粒DNA（右二到右四）
PCR(右边两个)
PCR基因扩增
• 改进方面 • 1.反应体系应加到同一Eppendorf管中，然后分装 ，这样有利于Taq酶作用 • 2.取样不要污染药品，可能造成PCR结果条带弥 散 • 3.配好反应体系后把PCR管放在冰上
大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
• 待改进方面 1.实验过程中，Eppendorf管要放置于冰上，离心时 应用4℃离心机 2.严格控制42℃的水浴时间（90秒） 3.涂布培养皿是不应用涂布棒，以免消毒不干净的 涂布棒污染培养皿，且感受态细胞应均匀分布于培 养皿表面
总RNA的提取
右三为RNA电泳结果