重组人免疫球蛋白DFc片段蛋白的构建
重组人血小板生成素拟肽-fc融合蛋白-解释说明
重组人血小板生成素拟肽-fc融合蛋白-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分主要介绍本文的研究主题以及研究背景。
本文旨在探讨重组人血小板生成素拟肽-fc融合蛋白的相关研究进展。
血小板生成素是一种重要的生物活性因子，对于血小板的产生和成熟起着关键作用。
然而，由于其天然来源有限且存在一定的局限性，研究人员开始利用生物技术手段进行重组血小板生成素的合成和改造，以满足临床需求。
近年来，拟肽-fc融合蛋白作为一种新型药物设计策略备受关注。
拟肽是一种具有生物活性的多肽序列，而Fc区域则是免疫球蛋白的结构域，可以增强融合蛋白的稳定性和药效。
将重组人血小板生成素与Fc区域融合，可以进一步提高其在体内的半衰期和药效，从而更好地发挥其临床应用的潜力。
本文将从背景介绍开始，系统地介绍重组人血小板生成素和拟肽-fc 融合蛋白的研究进展。
重点讨论重组人血小板生成素拟肽-fc融合蛋白在临床治疗上的应用前景，并对其未来的研究方向进行展望。
总之，本文将通过对重组人血小板生成素拟肽-fc融合蛋白的深入研究，为临床医学领域的治疗策略提供新的思路和方向。
通过对该领域的理论和实践研究进行梳理和总结，旨在促进相关领域的发展和应用。
1.2 文章结构本文主要以“重组人血小板生成素拟肽-fc融合蛋白”为题，旨在对该融合蛋白的研究进行全面的介绍和归纳。
为了达到这一目的，本文将分为引言、正文和结论三个部分。
在引言部分，我们将首先对整篇文章进行概述，简要介绍重组人血小板生成素拟肽-fc融合蛋白的相关背景和研究现状。
接着，我们将详细说明本文的文章结构，以便读者能够清晰地了解每个章节的内容。
最后，我们将明确本文的目的，即通过综合分析和总结已有的研究成果，提供对重组人血小板生成素拟肽-fc融合蛋白研究的新的视角和思考。
在正文部分，我们将依次展开讲述背景介绍、重组人血小板生成素、拟肽-fc融合蛋白以及重组人血小板生成素拟肽-fc融合蛋白的研究进展。
在背景介绍中，我们将介绍与本课题相关的基本概念和研究背景，以便读者对该课题有一个全面的了解。
重组蛋白质类药物生产工艺流程
重组蛋白质类药物生产工艺流程1.首先，需要获得蛋白质的基因序列。
First, the gene sequence of the protein needs to be obtained.2.接下来，将蛋白质基因序列插入到表达载体中。
Next, the protein gene sequence is inserted into an expression vector.3.在转染宿主细胞前，需要构建表达载体。
Before transfecting the host cells, the expression vector needs to be constructed.4.然后，将表达载体导入宿主细胞中。
Then, the expression vector is introduced into the host cells.5.宿主细胞表达蛋白质的过程需要进行培养和表达。
The host cells need to be cultured and expressed to produce the protein.6.在蛋白质的生产中，需要定期检测细胞培养液中的蛋白质含量。
The protein content in the cell culture medium needs tobe regularly monitored during protein production.7.紧接着，需要提取和纯化表达的蛋白质。
Next, the expressed protein needs to be extracted and purified.8.在蛋白质甲氨基酸序列分析之后，确定正确的蛋白质结构。
The correct protein structure needs to be determinedafter analyzing the protein amino acid sequence.9.蛋白质类药物需要进行体内外药效学研究。
免疫球蛋白PPT演示课件
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二、单克隆抗体（McAb）
是应用杂交瘤技术制备的，针对单一抗 原表位，由一个B细胞分化增殖的子代细胞 集团合成的高特异性和高均一性抗体，称之 。
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本章重点
1、概念：抗体、免疫球蛋白、多克隆抗 体、单克隆抗体。 2、Ig的基本结构和功能。 4、免疫球蛋白的生物学功能。 5、各类Ig的主要特征及功能。
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㈡ 分泌型IgA（SIgA ）
1、为二聚体，由两 个 IgA 单 体 ， 一 个 J 链 和一个分泌片共同组 成。
2、婴儿可从初乳中 获得SIgA 。出生4~6个 月后开始合成IgA。
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四、IgE
1、以单体形式存在，在种系进化中最晚 出现，并且在血清中含量最低。
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（四）功能区
1、L链可分为可变区（VL）和恒定区（CL ）两个功能区。
2、H链功能区：IgG、IgA和IgD的H链各有 一个可变区（VH）和三个恒定区（CH1、CH2、 CH3）共四个功能区；IgM和IgE则多有一个CH4 共五个功能区。
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铰链区
高变区
图 免疫球蛋白的结构 2020/3/21
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3、CDR ：VH和VL的HVR区共同构成抗 原结合部位，因该部位在空间结构上与表位 （抗原决定基）形成精密的互补，故又称为 互补决定区（CDR）。
2020/3/21 图 抗体高变区与表位结合
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3、CDR ：VH和VL的HVR区共同构成抗 原结合部位，因该部位在空间结构上与表位 （抗原决定基）形成精密的互补，故又称为 互补决定区（CDR）。
第04章免疫球蛋白
多链糖蛋白， γ球蛋白
抗体（Antibody，Ab） BCR
B B
B B
特异性抗体
免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）：
具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白
免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig） 与抗体（antibody，Ab）
免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）：
MRC Laboratory of Molecular Biology in Cambridge
Gerald M. Edelman （1929-）
Frederick Sanger （1918—） United Kingdom
四、 水解片段
MRC Laboratory of Molecular Biology in Cambridge, 1948
二、 免疫球蛋白的结构域（功能区） （一）结构域
• 结构域： • H链和L链可通过链内二硫 键折叠成若干个球形结构
键内二硫键
（二）功能区
• CL和CH1： • 同种异型（不同个体） 的遗传标记 • CH2和CH2： • 补体结合位点
（三） 铰链区 （hinge region）
• 位于CH1～CH2之间； • 对蛋白酶敏感，易伸展弯曲
• 3、五种免疫球蛋白的分类是根据____ • A、H链和L链均不同 B、V区不同 C、L链不同 • D、H链不同 E、连接H链的二硫键位置和数目不同
• 4、免疫球蛋白的高变区位于_____ • A、VH 和CH B、VL 和VH • D、VH 和CL E、CL 和CH • • • • • • • • • • 5、CDR即为_____ A、Fab段 B、Fc段 D、HVR E、互补决定区
课堂测试
某大学生物工程学院《细胞生物学》考试试卷(2055)
某大学生物工程学院《细胞生物学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（50分，每题5分）1. 恶性肿瘤的迅速增长是由于细胞周期的时间变短，细胞分裂加快。
（）答案：错误解析：恶性肿瘤的迅速增长是因为肿瘤细失去了最高分裂次数，没有接触抑制现象，从而使得细胞分裂的速度加快。
2. 基因组印记是指基因组中某些基因的甲基化模式。
（）答案：错误解析：基因组印记是指基因根据亲代的不同而有不同的表达。
印记基因的存在能导致细胞中两个等位基因的一个表达而另一个不表达。
3. 激光扫描共焦显微术利用激光切割细胞产生光切片（optical section），从而得到该层的清晰图像。
（）答案：错误解析：激光扫描共焦显微镜利用光学切片即改变交点获得一系列细胞不同切面上的图像，经叠加后便可重构样品的三维结构，并不是利用激光对样本进行切割。
4. 胆固醇使得脂质在双层中堆积更紧密，但它并没有降低膜的流动性。
（）[复旦大学2019研]答案：正确解析：胆固醇使得脂质在双层中堆积更为紧密，但它并没有降低膜脂的流动性，在大部分动物细胞膜中高浓度的胆固醇还可以防止碳氢链聚合以及结晶态的形成。
5. 泛醌和细胞色素c都是可扩散的电子载体。
（）答案：正确解析：泛醌和细胞色素c均可在膜平面上迅速地移动。
6. 细胞在有充足营养条件下，从G1期进入M期。
（）[上海交通大学2007研]答案：正确解析：细胞具有自我保护意识，当周围的环境不适合分裂增殖时不会进入M期，只有当周围环境适合（如有充足营养条件）才会进入M 期。
7. 在内质网，脂质合成的部位和催化糖基化的部位都位于内质网腔面的一侧。
（）答案：错误解析：脂质合成发生在细胞质基质侧，糖基化修饰发生在内质网前面一侧。
8. 信号分子有水溶性和脂溶性之分，但它们的作用机理是相同的。
免疫学试题一
免疫学试题一work Information Technology Company.2020YEAR1、机体免疫系统识别和清除突变细胞的功能称为 ( )2、A、免疫调节B、免疫缺陷C、免疫耐受D、免疫防御E、免疫监视2、首次应用类毒素进行预防接种的科学家是 ( )A、PasteurB、BehringC、JennerD、BorderE、Burner3、最早提出克隆选择学说的科学家是 ( )A、KohlerB、BorderC、KochD、BurnetE、Pasteur4、参与固有性免疫应答的免疫分子是 ( )A、TCRB、BCRC、NK细胞D、补体E、Ab5、最早用人痘苗预防天花的国家是 ( )A、美国B、日本C、英国D、德国E、中国6、免疫对机体是 ( )A、有害的B、有利的C、正常条件下有利，异常条件下有害D、有利无害E、有害无利7、中枢免疫器官与外周免疫器官的区别是 ( )A、中枢免疫器官是T细胞分化成熟的场所B、外周免疫器官是B细胞分化成熟的场所C、中枢免疫器官是B细胞分化成熟的场所D、外周免疫器官是B细胞分化成熟的场所E、中枢免疫器官是免疫细胞产生、分化成熟的场所，而外周免疫器官是淋巴细胞分布、定居和产生免疫应答的场所8、人类B淋巴细胞分化成熟的场所是 ( )A、腔上囊B、脾C、胸腺D、淋巴结E、骨髓9、免疫系统的组成是 ( )A、中枢免疫器官、外周免疫器官B、免疫细胞、黏膜免疫系统、中枢免疫器官C、中枢免疫器官、免疫细胞、皮肤免疫系统D、免疫分子、黏膜免疫系统、皮肤免疫系统E、免疫器官和组织、免疫细胞、免疫分子10、人体免疫细胞产生、发育、分化成熟的场所是 ( )A、胸腺和淋巴结B、胸腺和骨髓C、淋巴结和脾D、骨髓和黏膜免疫系统E、脾和胸腺11、胸腺的作用是 ( )A、T细胞成熟、分化场所B、B细胞定居场所C、T细胞发生场所D、B细胞产生免疫应答的场所E、T细胞定居场所12、超抗原 ( )A、可以多克隆激活某些T细胞或B细胞B、须经抗原呈递细胞加工处理C、与自身免疫病无关D、有严格的MHC限制性E、只能活化一个相应的T细胞克隆13、下列关于抗原的叙述，哪一项是错误的 ( )A、大分子蛋白质抗原常含有多种不同的抗原决定基B、抗原诱导免疫应答必须有T细胞辅助C、不同的抗原之间可以有相同的抗原决定基D、抗原不一定只诱导正免疫应答E、半抗原虽无免疫原性，但可与相应抗体结合14、属于自身抗原的是 ( )A、ABO血型抗原B、肺炎球菌荚膜多糖C、类脂D、眼晶体蛋白E、破伤风类毒素15、某些抗原称为TI-Ag，这是因为 ( )A、抗原来源于非胸腺组织B、它诱生的抗体是在骨髓中产生的C、它诱生的抗体属于IgG类抗体D、抗原往往具有复杂和不相同的抗原决定簇E、它能直接刺激B细胞产生抗体，无需T细胞辅助16、属于异嗜性抗原的是 ( )A、Rh抗原与人的RBCB、AFP与乙肝病毒C、马血清与破伤风杆菌D、大肠杆菌O14型的多糖抗原与人结肠粘膜E、类毒素与抗毒素17、与载体偶联才具有免疫原性的物质称为 ( )A、变应原B、完全抗原C、载体D、佐剂E、半抗原18、动物血清抗毒素对人而言属于 ( )A、异种抗原B、同种异型抗原C、独特型抗原D、共同抗原E、合成抗原19、甲、乙两种抗原都能与某一抗体发生特异性结合反应，这两种抗原相互称为 ( )A、半抗原B、共同抗原C、TD-AgD、TI-AgE、完全抗原20、超抗原与T细胞结合的特点，下列哪项是错误的 ( )A、主要与CD4T细胞结合B、不需APC加工C、与TCRVβ链结合D、直接与APC的MHCⅡ类分子非多态区外侧结合E、有MHC限制性21、关于TI抗原哪项是错误的 ( )A、包括细菌脂多糖、肺炎球菌荚膜多糖、伤寒杆菌鞭毛抗原B、产生的抗体只能是IgMC、刺激机体不引起免疫记忆，故不表现再次应答D、不引起细胞免疫应答E、能刺激无胸腺或无T细胞机体产生抗体22、只具有与抗体结合能力，而单独不能诱导抗体产生的物质是 ( )A、自身抗原B、半抗原C、完全抗原D、胸腺依赖性抗原E、胸腺非依赖性抗原23、抗原的特异性取决于 ( )A、抗原决定基的性质、数目和空间构象B、抗原决定基的数目C、抗原的免疫反应性D、抗原的异物性E、抗原的分子量24、凡具有强免疫原性的物质，分子量一般为 ( )A、100kDB、<10kDC、<4kDD、≥l0kDE、10kD25、下列生物制品中对人无免疫原性的物质是 ( )A、人血浆丙种球蛋白B、BSAC、类毒素D、动物来源的抗毒素E、苯胺26、抗原在机体中不可能诱导出现 ( )A、免疫耐受B、超敏反应C、免疫缺陷D、自身免疫性疾病E、免疫排斥27、抗体对具有相同或相似决定基的不同抗原的反应称为 ( )A、特异性反应B、非特异性反应C、交叉反应D、过敏反应E、以上都是28、决定抗原与抗体反应特异性的物质基础是 ( )A、载体B、抗原决定基C、佐剂D、TI-AgE、TD-Ag29、阿司匹林引起服用者出现溶血现象是由于 ( )A、药物可引起人红细胞溶解B、由针对药物的抗体引起C.由细胞因子引起D、通过阿司匹林激活补体而使红细胞溶解E、载体-半抗原结合效应所致30、下列属于天然佐剂是 ( )A、多聚核苷酸B、内毒素C福氏完全佐剂D百日咳杆菌E、福氏不完全佐剂31、与载体蛋白偶联后可获得免疫原性的物质是 ( )A、超抗原B、完全抗原C、酵母多糖D、半抗原E、DNA32、B细胞识别抗原决定基的特点是 ( )A、特异性识别隐蔽抗原决定基B、特异性识别载体与隐蔽的抗原决定基C、特异性识别载体决定基D、特异性识别抗原分子表面的决定基E、特异性识别所有的抗原决定基33、兄弟姐妹间进行器官移植引起排斥反应的物质是 ( )A、异种抗原B、自身抗原C、异嗜性抗原D、同种异体抗原E、超抗原34、血清半衰期最长的Ig是 ( )A、IgAB、IgMC、IgED、IgDE、IgG35、下列哪种物质不是抗体 ( )A、抗毒素血清B、刀豆蛋白C、淋巴细胞抗血清D、胎盘丙种球蛋白E、白喉抗毒素36、下列分泌液中不含IgA的是 ( )A、唾液B、初乳C、支气管黏液D、肠道分泌液E、汗液37、下列成分有可能与大分子抗原结合而出现肉眼可见反应的是 ( )A、IgG的H链B、IgG的L链C、Fab段D、Fc段E、F(ab′)2段38、新生儿从母乳中获得的抗体是 ( )A、IgG类抗体B、IgM类抗体C、IgA类抗体D、IgD类抗体E、IgE类抗体39、在种系发生过程中最早出现的Ig是 ( )A、IgGB、IgDC、IgED、IgME、IgA40、天然ABO血型抗体属于 ( )A、IgAB、IgMC、IgGD、IgDE、IgE41、合成sIgA分泌片的细胞是 ( )A、巨噬细胞B、血管内皮细胞C、浆细胞D、黏膜上皮细胞E、肥大细胞42、不具有FcγR的细胞是 ( )A、单核细胞B、浆细胞C、中性粒细胞D、巨噬细胞E、NK细胞43、人体内开始合成IgM的时间是 ( )A、胎儿早期B、出生后1个月C、出生后3个月D、出生后6个月E、胎儿晚期44、脐血中哪类Ig增高提示胎儿有宫内感染 ( )A、IgGB、IgAC、IgGD、IgDE、IgE45、有四个重链恒定区的Ig是 ( )A、IgD和IgMB、IgA和IgMC、IgD和IgAD、IgM和IgEE、IgA和IgE46、3～6个月婴儿易患呼吸道感染主要是因为哪类Ig不足 ( )A、IgMB、IgGC、IgED、sIgAE、IgD47、儿童患肠道寄生虫病时血液和肠粘液中哪种Ig可增高 ( )A、IgGB、IgAC、IgMD、IgDE、IgE48、中和作用最强的Ig是 ( )A、IgMB、IgGC、IgED、IgAE、IgD49、IgG通过经典途径激活补体至少需要 ( )A、1个B、2个C、4个D、5个E、3个50、sIgA的J链的合成细胞是 ( )A巨噬细胞B淋巴结中的浆细胞C、B细胞D黏膜下浆细胞E、黏膜上皮细胞51、血清中含量最高的Ig是 ( )A、IgMB、IgEC、IgAD、IgDE、IgG52、人类IgD的主要分布细胞是 ( )A、B细胞B、DC细胞C、单核巨噬细胞D、T细胞E、肥大细胞53、关于抗体，下列描述错误的是 ( )A、抗体都是体外产生的B、抗体主要存在于血液、体液、黏膜表面及分泌液中C、抗体是能与相应抗原特异性结合的球蛋白D、抗体都是免疫球蛋白E、抗体是指具有免疫功能的球蛋白54、下列哪个部位的浆细胞一般情况下不能产生IgE ( )A、胃肠道黏膜B、鼻咽C、支气管D、扁桃体E、脾脏55、与抗原结合后，激活补体能力最强的Ig是 ( )A、IgAB、IgDC、IgGD、IgME、IgE56、在抗感染过程中，补体发挥作用依次出现的途径是 ( )A、经典途径--MBL途径--旁路途径B、旁路途径--经典途径--MBL途径C、旁路途径--MBL途径--经典途径D、经典途径--旁路途径--MBL途径E、MBL途径--经典途径--旁路途径57、能牢固地附着于细胞表面，但溶细胞能力有限的是 ( )A、C5bB、C5b6C、C5b67D、C5b678E、C5b678958、补体MBL途径的激活物是 ( )A、抗原抗体复合物B、脂多糖C、聚合IgAD、甘露聚糖E、酵母多糖59、全身性细菌感染时，补体活性片段发挥免疫效应作用主要通过 ( )A、溶解细胞作用B、ADCC作用C、调理作用D、清除免疫复合物E、引起炎症反应60、补体系统激活必须参加的成分是 ( )A、C1s、C1rB、C4和C2C、B因子和D因子D、C3 C5～C9E、D因子和P因子61、能与免疫球蛋白Fc段补体结合点相结合的补体分子是 ( )A、C1qB、C1sC、C3D、C1rE、以上都不是62、过敏毒素作用最强的补体裂解片段是 ( )A、C3bB、C2aC、C3aD、C4aE、C5a63、具有较强的趋化作用和过敏毒素作用的补体裂解片段是 ( )A、C3aB、C3bC、C4aD、C5aE、C2a64、能够激活补体旁路途径的Ig是 ( )A、IgG1B、IgG2C、IgG3D、IgME、凝聚的IgA65、在补体经典激活过程中，不被裂解的组分是 ( )A、C1B、C2C、C3D、C4E、C666、以下不参加旁路激活途径的是 ( )A、D因子、P因子B、C3、C5C、C4、C2D、C6、C7E、B因子、C967、能通过Fc段与C1q结合的Ig是 ( )A、IgG1、IgG3、IgG4、IgMB、IgG1、IgG2、IgG3、IgAC、IgG1、IgG2、IgD、IgM D、IgG1、IgG2、IgG3、IgME、IgG、IgA、IgM、IgG468、以下在补体激活效应的放大作用中起重要作用的是 ( )A、C3B、C2C、C1D、C5E、C469、经典途径中激活补体能力最强的Ig是 ( )A、IgMB、IgG3C、IgG2D、IgG1E、IgA70、关于补体描述正确的是 ( )A、参与凝集反应B、对热稳定C、在免疫病理过程中发挥重要作用D有免疫调节作用，无炎症介质作用E补体只在特异性免疫效应阶段发挥作用71、以下参与旁路激活途径的补体成分是 ( )A、C3～C9B、C1～C9C、C5～C9D、C1～C4E、C1、C2、C472、关于补体三条激活途径描述错误的是 ( )A、三条途径的膜攻击复合物相同B、旁路途径在感染后期发挥作用C、经典途径从C1激活开始D、旁路途径从C3激活开始E、MBL途径中形成的C3转化酶是C4b2b73、以下不参与旁路激活途径的是 ( )A、D因子B、B因子C、C1D、C3E、P因子74、血清中含量最高的补体固有成分是 ( )A、C1B、C9C、B因子D、C3E、C575、同时参与补体三种激活途径的成分是 ( )A、C1qB、C4和C2C、C3D、B因子E、D因子76、在经典激活途径中，补体的识别单位是 ( )A、C1qB、C2C、C4D、C1rE、C1s77、MBL活化途径的C3转化酶是 ( )A、C1sB、C4b2bC、C3bBbD、C3bBbPE、D因子78、与C5转化酶形成无关的补体成分是 ( )A、B因子B、C5C、C4D、C3E、C279、以下具有调理作用的补体裂解片段是 ( )A、C5aB、C5bC、C3aD、C3bE、C4a80、能协助清除IC的补体裂解片段是 ( )A、C3aB、C3dC、iC3bD、C5aE、C3b81、关于CK的作用特点叙述错误的是 ( )A、以特异性方式发挥作用B、合成和分泌是一种自我调控的过程C、主要参与免疫反应和炎症反应D、生物学效应强E产生和作用具有多向性82、可刺激多种造血细胞分化成熟的CK是 ( )A、TGFB、ILC、TNFD、IFNE、SCF83、属于CXC趋化性细胞因子，对中性粒细胞具有趋化作用的IL是 ( )A、IL-1B、IL-2C、IL-3D、IL-4E、IL-884、以下IL-2的主要产生细胞是 ( )A、巨噬细胞B、NK细胞C、树突状细胞D、肥大细胞E、活化T细胞85、集落刺激因子不包括 ( )A、EPOB、TNFC、TPOD、GM-CSFE、SCF86、与肿瘤病人进行性消瘦有关的CK是 ( )A、IL-8B、IFNC、IL-2D、TNF-αE、IL-187、在Ig类别转换中，能促进IgM转换为IgE的CK是 ( )A、IL-1B、IL-2C、IL-4D、IL-6E、TNF88、不属于CK特性的是 ( )A、重叠性B、拮抗性C、特异性D、多效性E、协同性89、CD4主要表达于 ( )A、CTLB、B细胞C、NK细胞D、ThE、Mφ90、CD8主要表达于 ( )A、CTLB、B细胞C、NK细胞D、ThE、APC91、CD2分子又称为 ( )A、LFA-1B、LFA-2C、LFA-3D、ICAM-1E、ICAM-292、CD28分子的配体是 ( )A、CD58B、ICAM-1C、MHCⅠ类分子D、TCRE、CD80／CD8693、CD4分子为单链跨膜糖蛋白，共有4个IgSF结构域，其中可与HIVgp120相结合的结构域是 ( )A、第1、2个V结构域B、第2个V结构域C、第2个C2结构域D、第1个V结构域E、第1个C2结构域94、特异性识别抗原的受体是 ( )A、CRB、T细胞受体C、B细胞受体D、NK细胞受体E、IgFc受体95、下列哪一种细胞不表达HLAⅠ类抗原 ( )A、T淋巴细胞B、B淋巴细胞C、成熟的红细胞D、上皮细胞E、中性粒细胞96、属于a型Ⅰ类的HLA基因是 ( )A、DP、DQ、DRB、A、B、CC、E、G、FD、K、D、LE、Eb、Ea.Ab、Aa97、MHC分子中不形成Ag结合槽的结构域是 ( )A、Ⅱ类分子的α1B、Ⅱ类分子的β1C、Ⅱ类分子的α2和β2D、Ⅰ类分子的α1E、Ⅰ类分子的α298、HLAⅠ类抗原的主要功能是 ( )A、向Th细胞提呈外源性抗原肽B、向Tc细胞提呈内源性抗原肽C、向Th细胞提呈外源性抗原肽D、向Tc细胞提呈外源性抗原肽E、向γδTc细胞提呈内源性抗原肽99、人类HLAⅠ类抗原β2m链编码基因的染色体定位是 ( )A、第2号染色体短臂B、第6号染色体长臂C、第9号染色体长臂D、第l5号染色体短臂E、第6号染色体短臂100、MHC分子中不参与构成Ag结合槽的结构域是 ( )A、Ⅰ类分子的α1B、Ⅰ类分子的α2C、Ⅰ类分子的α3D、Ⅱ类分子的α1E、Ⅱ类分子的β1101、抗原肽中与HLA肽结合区结合的氨基酸称为 ( )A、锚定残基B、可变区C、Ig样区D、共同基序E、跨膜区102、不属于MHC经典Ⅰ类和Ⅱ类基因的是 ( )A、HLA-AB、HLA-BC、HLA-ED、HLA-DRE、HLA-C103、下列可参与非特异性免疫作用的细胞是 ( )A、CD4Th1细胞B、CD4Th2细胞C、γδT细胞D、αβT细胞E、CD8Tc细胞（CTL细胞）104、感染期间患者体内产生的急性期蛋白是 ( )A、MBLB、乳铁蛋白C、热休克蛋白D、C4结合蛋白E、免疫球蛋白105、早期非特异性免疫应答阶段发生于感染后 ( )A、0－4小时之内B、0－24小时之内C、4－48小时之内D、4－96小时之内E、24－96小时之内106、对寄生虫具有吞噬杀伤作用的免疫细胞是 ( )A、中性粒细胞B、单核细胞C、嗜酸性粒细胞D、嗜碱性粒细胞E淋巴细胞107、巨噬细胞所不具备的受体是 ( )A、IgGFc受体B抗原识别受体C、细胞因子受体D、甘露糖受体E、C3b受体108、下列淋巴细胞中，不属固有免疫细胞的是 ( )A、γδT细胞B、αβT细胞C、NKT细胞D、NK细胞E、B1细胞选择题答案1、E2、B3、D4、D5、E6、C7、E8、E9、E 10、B11、A 12、A 13、B 14、D 15、E 16、D 17、E 18、A 19、B 20、E 21、B 22、B 23、A 24、A 25、E 26、D 27、C 28、B 29、E 30、D 31、D 32、D 33、D 34、E 35、B 36、E 37、E 38、A 39、D 40、B 41、D 42、B 43、E 44、A 45、D 46、D 47、 48、A 49、B 50、D 51、E 52、A 53、A 54、E 55、D 56、C 57、D 58、D 59、C 60、D 61、A 62、E 63、D 64、E 65、E 66、C 67、D 68、A 69、A 70、C 71、C 72、B 73、C 74、D 75、C 76、A 77、B 78、B 79、D 80、E 81、A 82、E 83、E 84、E 85、B 86、D 87、C 88、C 89、D 90、A 91、B 92、E 93、A 94、B/C 95、C 96、B 97、C 98、B、 99、D 100、C 101、A 102、C 103、C 104、C 105、C 106、A 107、B 108、B。
某大学生物工程学院《细胞生物学》考试试卷(1309)
某大学生物工程学院《细胞生物学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（50分，每题5分）1. 包围所有细胞的糖衣称为糖萼，它使细胞更润滑。
（）答案：正确解析：多糖是黏液的主要成分，由多糖和寡糖组成的糖萼是很重要的润滑剂。
2. 原核生物核糖体的大亚基可以与真核生物核糖体的小亚基重组。
（）答案：错误解析：原核生物核糖体的大亚基与真核生物核糖体的小亚基重组后的核糖体将丧失蛋白质合成的作用，所以两者不能重组。
3. 纤连蛋白以不溶的方式存在于血浆，以可溶的方式存在于细胞外基质。
（）答案：错误解析：纤连蛋白以不溶的方式存在于细胞外基质，以可溶的方式存在于血浆。
4. 当植物富含NADP＋时，会发生循环式光合磷酸化。
（）答案：错误解析：由于非循环式光合磷酸化消耗NADP＋，故当植物缺少NADP＋时，才会发生循环式光合磷酸化，只产生ATP。
5. 原生质是细胞内除了细胞核以外的所有生活物质。
（）答案：错误解析：原生质包括细胞内所有的生活物质，是细胞内生命物质的总称。
它的主要成分是糖类，蛋白质，核酸，脂质。
原生质分化产生细胞膜、细胞质和细胞核，构建成具有特定结构体系的原生质体，即细胞。
6. 146bp的DNA双螺旋盘绕组蛋白八聚体两圈整，并由组蛋白H1锁住核小体DNA的进出端。
（）答案：错误解析：146bp的DNA双螺旋盘绕组蛋白八聚体1.75圈；组蛋白H1在核心颗粒外结合额外的20bp DNA，锁住核小体DNA的进出端。
7. 钙泵即钙通道蛋白，可以对生物膜内外Ca2＋进行跨膜转运。
（）答案：错误解析：钙泵介导直接消耗ATP的主动运输，逆浓度梯度将Ca2＋由胞质（低浓度）泵入内质网或者细胞外（高浓度）。
而钙通道介导是被动运输，不消耗能量，顺浓度梯度协助扩散Ca2＋进入胞质。
免疫球蛋白的结构
第一节免疫球蛋白的结构（The Structure of Immunoglobulin)B淋巴细胞在抗原刺激下增殖分化为浆细胞，产生能与相应抗原发生特异性结合的免疫蛋白，这类免疫球蛋白被称为抗体（antibody, Ab）。
1937年，Tiselius用电泳方法将血清蛋白分为白蛋白、α1、α2、β及γ球蛋白等组分，其后又证明抗体的活性部分是在γ球蛋白部分。
因此，相当长一段时间内，抗体又被称为γ球蛋白（丙种球蛋白）。
实际上，抗体的活性除γ球蛋白外，还存在于α和β球蛋白处。
1968年和1972年的两次国际会议上，将具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统一命名为免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。
Ig是化学结构的概念，它包括正常的抗体球蛋白和一些未证实抗体活性的免疫球蛋白，如骨髓瘤病人血清中的M蛋白及尿中的本周氏（Bence Jones, BJ）蛋白等。
免疫球蛋白可分为分泌型（secreted Ig,SIg）和膜型（membrane Ig, mIg）。
前者主要存在于血清及其他体液或外分泌液中，具有抗体的各种功能；后者是B细胞表面的抗原识别受体。
☆☆相关素材☆☆图片正常人血清电泳分离图一免疫球蛋白的基本结构 The basical structure of immunoglobulin免疫球蛋白分子是由两条相同的重链（heavy chain，H链）和两条相同的轻链（light chain，L链）通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。
X射线晶体结构分析发现，IgG分子由3个相同大小的节段组成，位于上端的两个臂由易弯曲的铰链区（hinge region）连接到主干上形成一个"Y"形分子，称为Ig分子的单体，是构成免疫球蛋白分子的基本单位。
☆☆相关素材☆☆图片免疫球蛋白分子的基本结构图片 IgG分子结构示意图（一）重链和轻链免疫球蛋白重链的分子量约为50～75kD，由450～550个氨基酸残基组成。
某理工大学生物工程学院《细胞生物学》考试试卷(961)
某理工大学生物工程学院《细胞生物学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（20分，每题5分）1. 细胞间接触性依赖的通讯，其信号分子和受体都是细胞的跨膜蛋白。
（）答案：正确解析：细胞间直接接触，通过与质膜结合的信号分子影响其他生物体。
2. 加入秋水仙碱可抑制丽藻细胞中的胞质环流运动。
（）[中山大学2008研]答案：正确解析：秋水仙碱是微管组装肌动蛋白的阻断剂，用它处理细胞控管会导致细胞内微管系统的解体，从而抑制胞质环流群众运动。
3. 包围所有细胞的糖衣称为糖萼，它使细胞更润滑。
（）答案：正确解析：多糖是黏液的主要就成分，由多糖和多糖组成的糖萼是很重要的润滑剂。
4. 与微丝不同，中间丝蛋白合成后，基本上均组装为中间丝，没有大量游离的单体存在。
（）答案：正确解析：另一侧丝的装配与去装配是动态的，合成后基本上均装配为前体中间丝，游离的单体很少。
2、名词解释题（20分，每题5分）1. prokaryotic cell[武汉大学2005、2015研]答案：prokaryotic cell的中文名称是原核细胞。
原核细胞是指因没有典型的核结构中结构，遗传物质没有被磷脂膜包裹，具有细胞体积小、遗传信息小、无细胞内膜系统等特点的一类细胞结构，主要包括支原体、衣原体、细菌、蓝藻等。
解析：空2. 核仁致密纤维组分（dense fibrillar component，DFC）[南京师范大学2006研]答案：致密纤维组分是核仁超微结构中密度最高的部分，呈环形或者弯月形内圈包围纤维中心，由致密的纤维构成，通常见不到颗粒。
rRNA以很高的密度出现在DFC。
解析：空3. 受体介导的内吞作用[吉林大学2004]答案：受体介导的内吞是指细胞依靠细胞表面的受体特异性地摄取细胞外蛋白或其他化合物的过程。
第四章免疫球蛋白
第四章免疫球蛋白第四章免疫球蛋白抗体(antibody，Ab)是介导体液免疫的重要效应分子，是B细胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞所产生的糖蛋白，主要存在于血清等体液中，能与相应抗原特异性地结合，显示免疫功能。
早在十九世纪后期，von Behring及其同事Kitasato就发现白喉或破伤风毒素免疫动物后可产生具有中和毒素作用的物质，称之为抗毒素(antitoxin),随后引入抗体一词来泛指抗毒素类物质。
1937年Tiselius 和Kabat用电泳方法将血清蛋白分为白蛋白、α1、α2、β及γ球蛋白等组分，并发现抗体活性存在于从α到γ的这一广泛区域（图4-1），但主要存在于γ区，故相当长一段时间内，抗体又被称为γ球蛋白（丙种球蛋白）。
1968年和1972年世界卫生组织和国际免疫学会联合会的专门委员会先后决定，将具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统一命名为免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。
免疫球蛋白可分为分泌型（secreted Ig，SIg）和膜型（membrane Ig, mIg）。
前者主要存在于血液及组织液中，具有抗体的各种功能；后者构成B 细胞膜上的抗原受体。
第一节免疫球蛋白的结构一、免疫球蛋白的基本结构X射线晶体衍射结构分析发现，免疫球蛋白由四肽链分子组成，各肽链间有数量不等的链间二硫键。
结构上Ig可分为三个长度大致相同的片段，其中两个长度完全一致的片段位于分子的上方，通过一易弯曲的区域与主干连接，形成一”Y”字型结构（图4－2），称为Ig 单体，构成免疫球蛋白分子的基本单位。
图4?2（一）重链和轻链任何一类天然免疫球蛋白分子均含有四条异源性多肽链，其中，分子量较大的称为重链(heavy chain, H)，而分子量较小的为轻链(light chain, L)。
同一天然Ig 分子中的两条H链和两条L链的氨基酸组成完全相同。
1. 重链分子量约为50～75kD，由450～550个氨基酸残基组成。
重组人蛋白细胞因子的使用常见问题 - 细胞因子 - MedChemExpress
重组人蛋白细胞因子的使用常见问题- 细胞因子- MedChemExpress1．重组蛋白分类2．重组蛋白表达体系MCE 重组蛋白表达体系主要有：大肠杆菌，酵母细胞，昆虫细胞和哺乳动物细胞。
3．重组蛋白纯度和浓度测定重组蛋白纯度测定方法：a. SDS-PAGE 测定法；b. HPLC 测定法；c. 银染测定法。
重组蛋白浓度测定方法：a. Bradford 蛋白定量测定法；b. BCA 蛋白定量测定法；c. SDS-PAGE 蛋白定量测定法。
4．重组蛋白运输状态MCE 的大部分重组蛋白产品为冻干粉，在室温环境中都是稳定的，一般采用蓝冰或是室温运输。
5．重组蛋白表达体系对比6．重组蛋白表达体系选择7重组蛋白开盖使用前处理为防止冻干粉产品的粉末沾在管壁或管盖上，使用前请勿开盖，离心(约13000 rpm)处理20-30 秒，使附于管盖或管壁的蛋白收集于管底。
MCE 保证每管产品的蛋白总量达到标示含量。
8．重组蛋白复溶a. 使用前先离心(约13000 rpm)处理20-30 秒，使附于管盖或管壁的蛋白收集于管底。
b. 严格依据说明书，使用推荐的溶液将蛋白冻干粉溶解至推荐的浓度。
大多数重组蛋白建议溶解在灭菌超纯水中，浓度不低于100 μg/mL，以便于后续进一步稀释至工作浓度。
c. 用移液枪轻吹混匀，或将管盖盖好后轻柔颠倒数次进行混匀，低速离心数秒。
d. 复溶后的重组蛋白在室温放置数分钟，以保证蛋白能够充分溶解。
9.重组蛋白储存由于每次冻融都会造成蛋白的部分变性，因此建议客户收到产品后适量分装避免反复冻融。
a. 短期储存：冻干粉状态产品在室温下存放3 周，不影响活性。
复溶后的产品在4℃ 可稳定储存1-2 周。
b. 长期储存：冻干粉状态产品在-20℃ 下，可稳定保存至少一年；推荐-80℃ 长期保存，以获得更稳定性能的产品。
可选择包含一定浓度载体蛋白(0.1% BSA，5% HSA，10% FBS，或5% 海藻糖)的溶液或培养基复溶产品，分装后冻存于-20℃ 下，可保存至少三个月；推荐-80℃ 长期保存，以获得更稳定性能的产品。
人免疫球蛋白的正确使用方法
人免疫球蛋白的正确使用方法
嘿，你问人免疫球蛋白的正确使用方法？这可挺重要呢！咱就来唠唠。
这人免疫球蛋白啊，可不是随便就能用的。
首先得听医生的话。
医生让用咱才能用，医生说咋用咱就咋用。
可不能自己瞎用哦，不然可能会出问题。
要是医生说能用了，那也得注意使用的方法。
一般来说，人免疫球蛋白是通过注射的方式使用的。
就像打针一样，把免疫球蛋白打进身体里。
在注射之前呢，得先把要注射的地方消毒好。
可以用酒精棉球擦一擦，把细菌啥的都擦掉。
不然细菌跑进身体里，那可就麻烦了。
然后呢，护士姐姐会把人免疫球蛋白准备好。
这时候咱可别紧张，放松点。
看着护士姐姐把针扎进皮肤里，可能会有点疼，但是别怕，一下子就过去了。
注射的时候速度不能太快，也不能太慢。
太快了身体可能受不了，太慢了又浪费时间。
护士姐姐会掌握好速度
的，咱就放心吧。
注射完了之后，也不能马上就走。
得在医院里观察一会儿，看看有没有什么不舒服的地方。
要是有过敏啊、发烧啊啥的症状，就得赶紧告诉医生。
而且啊，用了人免疫球蛋白之后，也不是就万事大吉了。
还得注意休息，多喝水，让身体好好恢复。
不能太累了，也不能乱吃东西。
哎呀，这人免疫球蛋白的使用方法可得记住了。
听医生的话，注意消毒，放松心情，观察身体反应，注意休息。
这样才能让免疫球蛋白发挥出最大的作用，让咱的身体更健康。
下次要是用到人免疫球蛋白，就知道该怎么做了吧。
加油！。
人免疫球蛋白G酶解制备Fab和Fc片段及其分离纯化_唐思远
ｈＩｇＧ） 是人体 受 外 来 抗 原 刺 激 后 由 Ｂ 淋 巴 细 胞 产 生的一类球 蛋 白， 目 前 免 疫 球 蛋 白／抗 体 类 产 品 制 备受到 普 遍 关 注 。 ［１－５］ 木 瓜 蛋 白 酶 （ｐａｐａｉｎ） 可 以
２０１２－０９－０５ 收 到 初 稿 ，２０１２－１２－０５ 收 到 修 改 稿 。 联系人：林东 强。 第 一 作 者： 唐 思 远 （１９８７—）， 男， 硕 士 研
（化学工程联合国家重点实验室，浙江大学化学工程与生物工程学系，浙江 杭州 ３１００２７）
摘要：为了制备抗体 Ｆａｂ和 Ｆｃ片段，采用木瓜蛋白酶酶解人免疫球蛋白 Ｇ （ＩｇＧ），通 过 优 化 酶 解 条 件 和 色 谱 法
分离过程，得到了纯度较高的 Ｆａｂ片段和 Ｆｃ片段。考 察 了 酶 解 ｐＨ、 酶 加 入 量、 添 加 半 胱 氨 酸 和 酶 解 时 间 等 对
１．２ ｈＩｇＧ 的酶解 酶解步骤参考文献［１０］，采用１ｍｌ反应 体系，
酶解产物 置 于 超 纯 水 中 透 析 过 夜 后，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ 电泳分析。
１．２．１ 酶解ｐＨ 称取４份１０ｍｇ ｈＩｇＧ 和０．５ｍｇ 木瓜 蛋 白 酶 粉， 分 别 加 入 ４０ μｌ 半 胱 氨 酸 溶 液 （０．５ｍｏｌ·Ｌ－１） 和２０μｌ ＥＤＴＡ 溶 液 （０．１ ｍｏｌ· Ｌ－１，ｐＨ ７．０）， 并 分 别 加 入 １ ｍｌ ｐＨ ６．０、ｐＨ ７．０、ｐＨ７．６、ｐＨ ８．０ 的０．１ｍｏｌ·Ｌ－１磷 酸 盐 缓 冲 液，置于３７℃、２５０ｒ·ｍｉｎ－１恒 温 金 属 浴 中 酶 解 ２ ｈ。酶 解 结 束 后 加 入 １００ μｌ碘 乙 酰 胺 溶 液 （０．２ ｍｏｌ·Ｌ－１） 冰浴半小时以终止反应。 １．２．２ 酶加入量影响 称取 ４ 份１０ ｍｇ ｈＩｇＧ， 分 别加入４０μｌ半 胱 氨 酸 溶 液 （０．５ ｍｏｌ·Ｌ－１）、２０ μｌ ＥＤＴＡ 溶液 （０．１ ｍｏｌ·Ｌ－１，ｐＨ ７．０） 和 １ ｍｌ ｐＨ ７．６的０．１ｍｏｌ·Ｌ－１磷 酸 盐 缓 冲 液， 并 分 别 加 入 ０．１、０．２、０．５、１ ｍｇ 的 木 瓜 蛋 白 酶， 置 于 ３７℃、２５０ｒ·ｍｉｎ－１ 恒 温 金 属 浴 中 酶 解 ２ｈ。 酶 解 结束后加入１００μｌ碘乙 酰 胺 溶 液 （０．２ ｍｏｌ·Ｌ－１） 冰浴半小时以终止反应。
免疫球蛋白的基本结构
McAb 划时代的生物学革命 1984年获得诺贝尔奖
（一）、单克隆抗体制备的基本过程 1、B细胞的制备：用抗原免疫小鼠 经抗原免疫的小鼠脾细胞（B细胞）能产生 大量抗体，但在体外不能无限增殖。 2、骨髓瘤细胞的制备：体外培养 小鼠骨髓瘤细胞在体内、外可无限增殖，但 不能分泌抗体。
Disulfide bond
•
Carbohydrate
CL VL
CH1
CH2
Hinge Region
VH
CH3
1、重链（heavy chain，H链） （1）每条重链由420-440个氨基酸组成； （2）在 N 端的约110个氨基酸的序列变化很大， 称为可变区（variable region，V区），其余 的氨基酸序列相对稳定，称为恒定区 （constant region，C区）。
IgG 440，IgM、IgE，称为高变区；高变区之外区域称为骨架区；
（4）据重链 C 区氨基酸的组成和排列的不同，将重 链分为五类及μ、γ、α、 δ 、 ε ， 依此将Ig分为 IgM、 IgG、IgA、IgD、IgE
2、轻链（light chain，L链） （1）由220个氨基酸组成； （2）轻链N端的109个氨基酸为V区，其余 为C区； （3）V区有3个高变区； （4）轻链分为κ（Kappa）和λ（Lambda） 两型。
3、铰链区 （1）位于CH1与
CH2之间； （2）易于弯曲；
含有丰富的脯氨酸 （3）易被木瓜蛋白酶、
胃蛋白酶水解。
二、免疫球蛋白的水解片段及生物学活性 1、木瓜蛋白酶水解片段 Ig被木瓜蛋白酶水解后得到3个片段，2个相
同的 Fab 片段和1个 Fc 片段。
（1）Fab片段：即抗原结合片断 （antigen-binding fragment）
免疫球蛋白PPT课件
裂解部位，铰链区H链间二硫键（N端）能。 裂解片段，2个Fab（54KD），一个Fc（
50KD）Fab与抗原结合，不发生凝集反 应。
2．胃蛋白酶（pepsin）水解片段 （1）裂解部位，铰链区H链间二硫键（C
端）裂解片段，F（ab’)2，无Fc片段 与抗原结合可发生凝集反应
• mIgM是BCR的主要成分 • 也可参与II、III型超敏反应。
24
IgA
• 分为血清型和分泌型两种。 • 血清型IgA主要由肠系膜淋巴组织中的浆细胞产生，为
单体。 • 而分泌型IgA（sIgA）是由呼吸道、消化道、泌尿生殖
道等处的固有层中浆细胞产生，为双体、三体或多体 • sIgA主要存在于乳汁、唾液、泪液、以及呼吸道、消
噬细胞,粒细胞,B细胞,NK细胞)，不同的Ig在结合不同的细胞时可产生不同的 免疫效应。IgE的Cε2和Cε3功能区与结合肥大细胞和嗜碱性粒细胞FcεRI有 关。
15
4、铰链区（hinge region）
位于CH1～CH2之间。富含脯氨酸，对蛋白酶敏 感，易伸展弯曲。
作用：
1.弯曲利于V区与不同距离的抗原表位结合。 2.使Ig分子发生“T” “Y”的构型改变，暴露补体结 合位点。
27
IgE
• 血清中含量最低 ng/ml • 可与肥大细胞、嗜碱性粒细胞上的高亲和力
FcεRⅠ结合，引起Ⅰ型超敏反应 • FcεRⅡ分布于巨噬细胞、B细胞、嗜酸粒细胞 • 分子量: ~190,000 。 • 可能在寄生虫免疫中起作用，IgE抗体，本是杀伤寄生虫
的，但又是引起过敏的重要抗体。它虽然量很小，只占全部免疫球蛋白的
及含糖量都比较稳定 L链C端1/2处，105个氨基酸， H链C端3/4-4/5处，331-431个氨基酸 在同一种属动物中是比较恒定的，是制备第二
重组人抗血栓蛋白在大肠杆菌中的自诱导表达及纯化
重组人抗血栓蛋白在大肠杆菌中的自诱导表达及纯化龚志飞;杨翔;颜法宝;陈强;孙小强;华子春【摘要】旨在优化重组人抗血栓蛋白(rHAP)工程菌的自诱导培养基,以提高菌体产量及可溶性的重组rHAP蛋白含量.选取蛋白胨、酵母提取物、甘油、葡萄糖为因素,各取4个水平,采用正交表L16(45)进行试验设计,时影响菌体生长和可溶性rHAP表达水平的乳糖浓度进行了优化.结果表明自诱导培养基碳氮源的最优配比:2％蛋白胨,1.5％酵母,0.5％甘油,0.03％葡萄糖,0.2％乳糖.此时表达菌密度OD600和可溶性rHAP目标蛋白表达量分别是未优化前的2.04倍和2.85倍.在20 L发酵表达时,rHAP工程菌OD600值高迭93,菌体温量为1 620 g/20L.利用Q-Sepharose和SP-Sepharose纯化,Western blotting结果表明表达蛋白为目的融合蛋白.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2011(000)012【总页数】7页(P192-198)【关键词】抗血栓蛋白;优化培养;发酵;纯化;鉴定【作者】龚志飞;杨翔;颜法宝;陈强;孙小强;华子春【作者单位】常州大学石油化工学院,常州213164;常州靶标生物医药研究所有限公司,常州213164;南京大学常州高新技术研究院,常州213164;常州靶标生物医药研究所有限公司,常州213164;南京大学常州高新技术研究院,常州213164;常州靶标生物医药研究所有限公司,常州213164;南京大学常州高新技术研究院,常州213164;常州大学石油化工学院,常州213164;南京大学常州高新技术研究院,常州213164【正文语种】中文重组人抗血栓蛋白（rHAP）[1]正是利用蛋白质工程和基因工程技术，将人胎盘抗凝蛋白与水蛭素C端结构域结合在一起的一种新的抗凝蛋白，分子量大小约为38 kD。
初步研究表明，重组人胎盘抗凝蛋白变体保留了Annexin V和血小板结合的性质，同时又具有明显的凝血酶抑制活性，而且其凝血酶抑制活性具有明显的剂量依赖关系[2]。
免疫球蛋白分子的结构与功能
学号：10161015 姓名：杨宝钦班级：信息（5）班免疫球蛋白分子的基本结构与功能免疫球蛋白(英文：immunoglobulin，ig)是一组具有抗体活性的蛋白质，由浆细胞产生，主要存在于生物体血液和其他体液(包括组织液和外分泌液)中，约占血浆蛋白总量的20%,还可分布在B细胞表面。
一、免疫球蛋白分子的基本结构Ig分子的基本结构是由四肽链组成的。
即由二条相同的分子量较小的肽链称为轻链和二条相同的分子量较大的肽链称为重链组成的。
轻链与重链是由二硫键连接形成一个四肽链分子称为Ig分子的单体，是构成免疫球蛋白分子的基本结构。
Ig单体中四条肽链两端游离的氨基或羧基的方向是一致的，分别为氨基端（N端）和羧基端（C端）。
图1免疫球蛋白分子的基本结构示意图（1）轻链和重链1．轻链(L链)轻链大约由214个氨基酸残基组成，通常不含碳水化合物，分子量约为24kD。
每条轻链含有两个由链内二硫键内二硫所组成的环肽。
轻链共有两型：κ型与λ型，同一个天然Ig分子上L链的类型总是相同的。
2．重链（H链）重链大小约为轻链的2倍，含450～550个氨基酸残基,每条H链含有4～5个链内二硫键所组成的环肽。
不同的H链由于氨基酸组成的排列顺序、二硫键的数目和位置、含的种类和数量不同，其抗原性也不相同，根据H链抗原性的差异可将其分为5类：μ链、γ链、α链、δ链和ε链，不同H链与L链（κ或λ链）组成完整Ig的分子分别称之为免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E(IgE)。
γ、α和δ链上含有4个肽，μ和ε链含有5个环肽。
（2）可变区和恒定区氨基端（N-末端）氨基酸序列变化很大，称此区为可变区（V），而羧基末端（C-末端）则相对稳定，变化很小，称此区为恒定区。
1．可变区（V区）:位于L链靠近N端的1/2（约含108～111个氨基酸残基）和H链靠近N端的1/5或1/4（约含118个氨基酸残基）。
2023年检验类之临床医学检验技术(师)题库检测试卷A卷附答案
2023年检验类之临床医学检验技术（师）题库检测试卷A卷附答案单选题（共60题）1、室间质控应在下列哪项基础上进一步实施A.愈小愈好B.先进设备C.室内质控D.在允许误差之内E.质控试剂【答案】 C2、粪便检查见红细胞多于白细胞，并有黏集成团现象，有助于诊断（）。
A.细菌性痢疾B.阿米巴痢疾C.直肠息肉D.溃疡性结肠炎E.急性肠炎【答案】 B3、某患者脑脊液标本静置12～24小时后形成挂漏斗状薄膜，其最可能的诊断是A.化脓性脑膜炎B.结核性脑膜炎C.蛛网膜下腔梗阻D.脑恶性肿瘤E.细菌性脑膜炎【答案】 B4、某患者尿液出现灰白色沉淀，加酸后沉淀物溶解并产生气泡，应考虑为A.磷酸钙结晶B.磷酸盐结晶C.草酸钙结晶D.碳酸盐结晶E.尿酸盐结晶【答案】 D5、白细胞减少症是A.进行性黄疸B.常有肺部感染C.主要临床表现为头晕乏力D.有明显的病因(即原发病)E.良性增生性传染病【答案】 C6、"肉眼血尿"指每升尿中含血量大于()A.1.0mlB.2.0mlC.3.0mlD.4.0mlE.5.0ml【答案】 A7、患者，女性，35岁，因胃部不适入院，主诉伴有腹痛、恶心、胀气等症状，持续1周左右，经检查诊断为胃溃疡，A.25℃B.44℃C.37℃D.4℃E.35℃【答案】 C8、分析外周血中性粒细胞的变化正确的是A.严寒时细胞从循环池转入边缘池，白细胞暂时增高B.化脓感染时白细胞持续增高是由于边缘池粒细胞转入循环池C.伤寒由于细菌内毒素抑制骨髓释放，白细胞暂时性减低D.SLE由于慢性理化损伤引起持续性白细胞减低E.慢性粒细胞白血病由于骨髓造血功能抑制使白细胞持续性减低【答案】 C9、制备免疫球蛋白片段时，木瓜蛋白酶可将IgG裂解成A.2个Fab片段及1个Fc片段B.F(-ab")2片段及c片段C.F(ab")2片段及数个小片段D.不规则肽链E.不规则小片段【答案】 A10、检测外周血嗜酸性粒细胞基础水平应选择A.上午10～12时B.早晨8时C.下午2～4时D.下午任何时间E.夜间时间【答案】 B11、单克隆抗体与多克隆抗体主要的区别之一是A.只和相应的一个抗原决定簇结合B.与抗原结合牢固C.生物活性多样D.对热稳定E.可用固相放射免疫测定含量【答案】 A12、肾在维持酸碱平衡中的重要的作用是A.肾小管分泌ClB.肾小管分泌HCOC.直接排出酮体D.排HE.排Na【答案】 D13、颗粒性抗原中的细胞抗原一般情况下经如何处理即可使用A.100℃处理2～2.5小时B.0.5％～1.0％氯化钙处理C.0.3％～0.5％甲醛处理D.经生理盐水或其他溶液洗净配置成一定浓度E.使用表面活性剂进行处理【答案】 D14、关于血凝仪的检测原理和方法叙述不正确的是A.凝固法中的电流法是利用纤维蛋白具有导电性B.凝固法中的光学法分为透射比浊法和散射比浊法C.发色底物法是利用测定产色物质的吸光度变化来推算所测定物质的含量D.凝固法中的粘度法，随血浆的凝固，血液的粘度减低E.免疫学法是利用抗原抗体的特异性结合反应来对被测物质进行定量【答案】 D15、下列哪项是T细胞亚群分离时常用的方法A.尼龙毛柱分离法B.E花环分离法C.亲和板结合分离法D.Percoll分层液法E.Ficoll分层液法【答案】 C16、临床上IgG型多发性骨髓瘤约占百分数为A.40％B.70％C.30％D.50％E.90％【答案】 B17、关于皮肤采血法，下列叙述中错误的是A.一般用三棱针或专用采血针B.宜一人一针一管C.针刺入皮肤深度以2～3mm为宜D.如血流不畅可在针刺处周围用力挤压E.75%乙醇消毒【答案】 D18、与其他激素性质不同的是A.生长激素B.胰岛素C.促甲状腺激素D.甲状腺激素E.甲状旁腺激素【答案】 D19、以下哪项不是影响抗原抗体反应的因素A.抗体的特异性B.抗体的浓度C.抗原的分子量D.抗原的纯度E.反应环境的pH值【答案】 D20、免疫球蛋白的分类是根据什么决定的A.重链B.轻链C.铰链区D.二硫键E.分泌链【答案】 A21、传染性单核细胞增多症A.NAP积分明显增高B.NAP积分明显减低C.骨髓穿刺常常干抽D.外周血有异型淋巴细胞E.红细胞沉降率明显增快【答案】 D22、血液学的主要研究对象是A.血液病患者B.血液和造血组织C.造血干细胞及造血细胞D.血液疾病E.造血器官【答案】 B23、粪便显微镜检查中查见肌肉纤维，可见细胞核，提示A.腹泻B.肠蠕动亢进C.胰腺外分泌功能减退D.坏死性肠炎E.下消化道炎症【答案】 C24、干扰素的生物活性不包括A.抗病毒B.免疫调节C.抗肿瘤D.移植排斥E.以上都对【答案】 D25、干扰HiCN血红蛋白法测定结果的是A.碳氧血红蛋白B.氧合血红蛋白C.高铁血红蛋白D.过高量白细胞E.结合珠蛋白【答案】 D26、下列均属于丝虫病患者的临床表现，除外的是A.微丝蚴血症B.慢性期阻塞性病变C.夜现周期性D.急性期过敏和炎症反应E.隐性丝虫病【答案】 C27、采血时止血带缚绑时间过长A.血清KB.血清ClC.血清NaD.血清ClE.血清K【答案】 D28、反映前列腺功能的酶是A.ALPB.纤溶酶C.LD.ACPE.柠檬酸脱氢酶【答案】 D29、人体内储存铁的蛋白质是A.铁蛋白B.含铁血黄素C.铜蓝蛋白D.转铁蛋白E.高铁血红蛋白【答案】 A30、下列哪些活动不会传播艾滋病A.输血B.蚊虫叮咬C.性接触D.共用牙刷E.器官移植【答案】 B31、嗜血杆菌生长需要的V因子的化学本质是A.高铁血红素B.烟酰胺腺嘌呤二核苷酸C.铁离子D.氨甲蝶呤E.环磷酰胺【答案】 B32、患者男，28岁。
某工业大学生物工程学院《细胞生物学》考试试卷(801)
某工业大学生物工程学院《细胞生物学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（50分，每题5分）1. 第一次减数分裂要发生分子水平上的重组，这种重组发生在任意两条染色体之间。
（）答案：错误解析：第一次减数分裂发生在同源染色体之间。
2. 成体干细胞具有不死性，是永生细胞。
（）答案：错误解析：成体干细胞是存在于一种已经分化组织中的未分化细胞，这种细胞能够自我更新并且能够特化形成组成该特性类型组织的细胞。
成年个体组织中的成体干细胞在正常情况下大多处于休眠状态，在病理状态或在外因诱导下可以表现出不同程度的再生和更新能力，并非是永生细胞。
3. 细菌中，编码核糖体RNA、转运RNA和mRNA的基因是被不同的RNA聚合酶转录的。
（）解析：细菌只有一种RNA聚合酶，转录所有的基因。
相反，真核细胞有细胞器三种不同的聚合酶，每一种用于三类基因班莱班县中其的一类。
4. 电镜的实际分辨率受到生物制样技术的限制，实际分辨率通常低于0.2nm。
（）答案：正确解析：在超薄切片样品中同，电镜的分辨率约为超薄切片的110，低于电镜的分辨率0.2nm。
5. 单细胞生物不存在细胞分化的现象。
（）答案：错误解析：同多细胞哺乳动物一样，单细胞微生物也存在细胞分化现象现象，也涉及一系列基因的诸多特异表达。
6. GTP结合的α亚基能够激活G蛋白耦联受体的其他下游分子。
（）答案：正确解析：结合了GTP的α亚基能够激活酶，无核苷酸结合的βγ激酶能够激活离子通道，而与GDP结合的三聚体G蛋白处于亦非活化状态。
7. 原生动物是复杂的生物，它有一套特化细胞形成的组织，如鞭毛、口部、刺射器以及足状附器。
（）解析：原生动物是有机体生物，因此没有各种组织，这些复杂的结构是细胞高度特化的成分。
8. ribozyme（核酶）的化学本质是RNA，但具有酶的活性，专门负责切割RNA。
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０１)ꎬａｎｄ３ＲＥＡＣＴＯＭＥｓ(Ｐ<０ ０５).ＨｕｂｇｅｎｅｓｓｕｃｈａｓＰＰＩＥꎬＨＮＲＮＰＡ１ꎬＹＢＸ１ｗｅｒｅｇｉｖｅｎｂｙＭＣＣａｌｇｏ￣ｒｉｔｈｍ.ＡＲＩＤ１ＡꎬＤＨＸ９ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｃｉｓｐｌａｔｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｉｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＰＭＰ２２ｄｅｖｅｌｏｐｓｃｈｅ￣ｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｙｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｂｙｍｕｌｔｉｐｌｅｃｅｌｌｕｌａｒｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓꎬｍｏｌｅｃｕｌａｒｆｕｎｃｔｉｏｎｓꎬｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｅｓａｎｄｐａｔｈ￣ｗａｙｓ.ＨｕｂｇｅｎｅｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇＡＲＩＤ１ＡｅｔｃａｎｄｐａｔｈｗａｙｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｃｅｌｌｃｙｃｌｅꎬｓｐｌｉｃｅｏｓｏｍｅａｎｄｕｂｉｑｕｉｔｉｎｍｅｄｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓꎬｍａｙｂｅｔｈｅｔａｒｇｅｔｓｆｏｒｔｒｅａｔｉｎｇＰＭＰ２２ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｙｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀ｓｔｏｍａｃｈｎｅｏｐｌａｓｍｓꎻｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅꎻＰＭＰ２２ꎻｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓａｎａｌｙｓｉｓꎻｈｕｂｇｅｎｅ网络出版时间:２０１９－３－２６１３:４４㊀网络出版地址:ｈｔｔｐ://ｋｎｓ.ｃｎｋｉ.ｎｅｔ/ｋｃｍｓ/ｄｅｔａｉｌ/３４.１０６５.Ｒ.２０１９０３２２.１７５９.００３.ｈｔｍｌ重组人免疫球蛋白Ｄ￣Ｆｃ片段蛋白的构建张㊀静ꎬ陈文生ꎬ胡晓曦ꎬ黄㊀琼ꎬ吴育晶ꎬ魏㊀伟摘要㊀目的㊀构建重组人免疫球蛋白Ｄ￣Ｆｃ(ＩｇＤ￣Ｆｃ)片段蛋白ꎬ检测ＩｇＤ受体(ＩｇＤＲ)在健康人ＣＤ４＋Ｔ细胞和Ｔ淋巴瘤细胞株Ｊｕｒｋａｔ㊁ＭＯＬＴ￣４上的表达情况ꎬ检测ＩｇＤ￣Ｆｃ与ＩｇＤ竞争结合ＣＤ４＋Ｔ细胞表面ＩｇＤＲ的能力ꎮ方法㊀采用ＰＣＲ法得到人ＩｇＤ￣Ｆｃ目的基因ꎬ经原核蛋白表达和层析纯化ꎬ制备出重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白ꎮ流式细胞术检测ＩｇＤＲ在健康人ＣＤ４＋Ｔ细胞和Ｔ淋巴瘤细胞株Ｊｕｒｋａｔ㊁ＭＯＬＴ￣４上的表达情况ꎬ以及ＩｇＤ㊁重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白与ＣＤ４＋Ｔ细胞表面ＩｇＤＲ的竞争结合情况ꎮ结果㊀成功构建含ＩｇＤ￣Ｆｃ基因片段的原核表达载体ｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣Ｆｃꎬ得到重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片２０１９－０１－０２接收基金项目:国家自然科学基金(编号:８１３３００８１㊁８１６７３４４４㊁８１６０３１２１)ꎻ安徽医科大学博士科研资助项目(编号:ＸＪ２０１６２９)作者单位:安徽医科大学临床药理研究所ꎬ抗炎免疫药物教育部重点实验室ꎬ抗炎免疫药物安徽省协同创新中心ꎬ合肥㊀２３００３２作者简介:张㊀静ꎬ女ꎬ硕士研究生ꎻ魏㊀伟ꎬ男ꎬ博士ꎬ教授ꎬ博士生导师ꎬ责任作者ꎬＥ￣ｍａｉｌ:ｗｗｅｉ＠ａｈｍｕ.ｅｄｕ.ｃｎꎻ吴育晶ꎬ女ꎬ博士ꎬ副教授ꎬ责任作者ꎬＥ￣ｍａｉｌ:ｗｙｊ＠ａｈｍｕ.ｅｄｕ.ｃｎ段蛋白ꎮＣＤ４＋Ｔ细胞及Ｔ淋巴瘤细胞株表面ＩｇＤＲ与ＩｇＤ亲和力相近ꎬ重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白可与ＩｇＤ竞争性结合ＩｇＤＲꎮ结论㊀重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白工艺成熟稳定ꎬ可与ＩｇＤ竞争性结合ＩｇＤＲꎬ可能成为针对ＩｇＤ水平升高的自身免疫性疾病的新型治疗药物ꎮ关键词㊀免疫球蛋白ＤꎻＩｇＤＲꎻ自身免疫性疾病ꎻ蛋白纯化中图分类号㊀Ｒ９６７文献标志码Ａ文章编号１０００－１４９２(２０１９)０４－０５１４－０６ｄｏｉ:１０.１９４０５/ｊ.ｃｎｋｉ.ｉｓｓｎ１０００－１４９２.２０１９.０４.００３㊀㊀免疫球蛋白Ｄ(ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＤꎬＩｇＤ)作为一类免疫球蛋白ꎬ主要以膜结合形式作为Ｂ细胞受体发挥作用ꎬ也可少量以分泌形式作为抗体发挥作用[１]ꎮ病理状态下ＩｇＤ与Ｔ细胞上ＩｇＤ受体(Ｉｇ￣ＤＲ)的过度结合ꎬ可能导致自身抗体生成增多ꎬ自身免疫反应增强ꎬ从而介导自身免疫性疾病的发生[２]ꎮＩｇＤ在一些类风湿关节炎(ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉ￣ｔｉｓꎬＲＡ)㊁系统性红斑狼疮(ｓｙｓｔｅｍｉｃｌｕｐｕｓｅｒｙｔｈｅｍａ￣ｔｏｓｕｓꎬＳＬＥ)患者中高水平表达[３]ꎮ因此ꎬ以ＩｇＤ￣Ｉｇ￣ＤＲ为治疗靶点研发针对治疗高水平ＩｇＤ的自身免疫性疾病的新型生物制剂具有较好的临床前景ꎮ该实验首次制备出重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白ꎬ并检测重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白在健康人ＣＤ４＋Ｔ细胞上与Ｉｇ￣ＤＲ结合的亲和力大小ꎬ起到与ＩｇＤ竞争ＩｇＤＲ的作用ꎬ为进一步研发针对高水平ＩｇＤ自身免疫性疾病的新型生物制剂奠定实验基础ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀样本㊀收集安徽医科大学健康志愿者外周血标本共２０例ꎬ经安徽医科大学伦理委员会批准ꎬ受试者知情同意并签署知情同意书ꎮ１.２㊀主要试剂及仪器㊀人ＩｇＤ蛋白(美国Ａｂｃａｍ公司)ꎻＪｕｒｋａｔ㊁ＭＯＬＴ￣４细胞株(中国科学院上海细胞库)ꎻ胎牛血清(美国Ｇｉｂｃｏ公司)ꎻ红细胞裂解液(美国ＢＤ公司)ꎻＴＲＩｚｏｌ试剂(美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司)ꎻ人淋巴细胞分离液(天津灏洋生物制品有限公司)ꎻＣＤ４＋Ｔ细胞免疫分选磁珠(德国美天妮试剂公司)ꎻＨｉｓ￣Ｔａｇ亲和层析柱(美国ＧＥ公司)ꎻ１０ｋｕ蛋白超滤管(美国Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司)ꎻ琼脂糖胶回收试剂盒㊁质粒提取试剂盒(美国ＯＭＥＧＡ公司)ꎻＩＰＴＧ(美国Ｓｉｇｍａ公司)ꎻ超声细胞破碎仪(南京赛飞生物科技有限公司)ꎻ恒温摇菌箱(美国Ｔｈｅｒｍｏ公司)ꎻ蛋白纯化仪(美国ＧＥ公司)ꎻＦＣ５００流式细胞仪(美国ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ公司)ꎮ１.３㊀方法㊀１.３.１㊀ｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣Ｆｃ表达载体的构建１.３.１.１㊀健康人外周血ｃＤＮＡ获取㊀向１ｍｌ血液中加入３ｍｌ红细胞裂解液ꎬ室温放置１０ｍｉｎ后１００００ｒ/ｍｉｎ离心１ｍｉｎꎻ弃上清液ꎬ加入１ｍｌＴＲＩｚｏｌ试剂混匀ꎬ室温放置５ｍｉｎ后４ħ㊁１２０００ｒ/ｍｉｎ离心１０ｍｉｎꎻ取上清液ꎬ加入０ ２ｍｌ氯仿ꎬ振荡１５ｓ后冰上放置３ｍｉｎꎻ４ħ㊁１２０００ｒ/ｍｉｎ离心１５ｍｉｎꎬ吸取水相ꎬ加入等体积冰冷异丙醇ꎬ冰上放置２０ｍｉｎ后４ħ㊁１２０００ｒ/ｍｉｎ离心１０ｍｉｎꎻ弃上清液ꎬ加入１ｍｌ７５％乙醇ꎬ４ħ㊁１００００ｒ/ｍｉｎ离心２ｍｉｎꎬ弃上清液ꎻ室温干燥１０ｍｉｎꎬ加入２０μｌＤＥＰＣ水ꎬ溶解ＲＮＡꎻ将ＲＮＡ反转录得到的ｃＤＮＡ保存在－２０ħ待用ꎮ１.３.１.２㊀ＩｇＤ￣Ｆｃ基因片段的扩增及重组表达载体的构建㊀设计上游引物:５ᶄ￣ＧＣＴＡＧＣＡＴＧＴＧＴＣ￣ＣＧＡＧＣＣ￣３ᶄꎬ下游引物:５ᶄ￣ＴＣＴＧＡＧＣＴＡＧＴＴＧＡＧ￣ＣＡＧＡＧＴＣＣＧ￣３ᶄꎬ以上步ｃＤＮＡ为模板ꎬ扩增条件为９４ħ变性５ｍｉｎꎬ９４ħ３０ｓꎬ５８ħ３０ｓꎬ７２ħ１ｍｉｎꎬ共３５个循环ꎬ７２ħ延伸１０ｍｉｎꎮＰＣＲ产物进行电泳检测并回收纯化目的片段ꎮ将ＩｇＤ￣ＦｃＰＣＲ产物与ｐＧＭＴ￣ｅａｓｙ克隆载体连接ꎬ转化至大肠杆菌ＤＨ５α感受态细胞后均匀涂布于含氨苄霉素的培养板ꎬ挑取单克隆菌落ꎬ３７ħ摇菌培养１２ｈ后碱裂解法抽提质粒ꎮＩｇＤ￣ＦｃｐＧＭＴ￣ｅａｓｙ克隆载体双酶切ꎬｐＥＴ２８ａ(＋)表达载体双酶切ꎬ凝胶电泳分离并回收酶切产物ꎬ将双酶切后的目的片段连接于ｐＥＴ２８ａ(＋)表达载体ꎬ转化至ＤＨ５ａꎬ提取质粒ꎬ进行ＩｇＤ￣Ｆｃ表达载体酶切初步验证和测序鉴定ꎮ１.３.２㊀重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白的诱导表达㊀将ｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣Ｆｃ原核表达载体转化至ＢＬ２１(ＤＥ３)感受态细胞中ꎬ挑取单菌落于含卡那霉素的ＬＢ培基中ꎬ１５０ｒ/ｍｉｎ扩大培养至ＯＤ６００ｎｍ值为０ ６时加入终浓度为０ ４ｍｍｏｌ/Ｌ的ＩＰＴＧꎬ２０ħ诱导表达６ｈꎮ１.３.３㊀重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白的亲和层析㊁分子筛纯化及产物测定㊀向离心后的菌液沉淀中加入适量裂菌液(ＮａＨ２ＰＯ４ ２Ｈ２Ｏ２０ｍｍｏｌ/ＬꎬＮａＣｌ５００ｍｍｏｌ/Ｌꎬ甘油１０％ꎬＴｒｉｔｏｎＸ￣１００１％ꎬＰＭＳＦ１ｍｍｏｌ/Ｌꎬ溶菌酶１ｍｇ/ｍｌ)并重悬ꎬ冰上裂解３０ｍｉｎ后冰浴超声破碎１５ｍｉｎꎬ４ħ㊁１２０００ｒ/ｍｉｎ离心１５ｍｉｎꎬ上清液留存ꎬＳＤＳ￣ＰＡＧＥ分析ＩｇＤ￣Ｆｃ重组蛋白表达形式ꎮ采用Ｈｉｓ￣Ｔａｇ预装柱纯化ＩｇＤ￣Ｆｃ重组蛋白ꎬ收集洗脱产物后采用１０ｋｕ蛋白超滤管进行二次纯化ꎮ将蛋白产物经ＳＤＳ￣ＰＡＧＥꎬ考马斯亮蓝染色ꎬ通过扫描灰度值分析ＩｇＤ￣Ｆｃ重组蛋白纯度ꎮ１.３.４㊀ＣＤ４＋Ｔ细胞的分离㊁Ｔ淋巴瘤细胞株的培养㊀密度梯度离心法分离血液中单个核细胞ꎬ每１０７细胞加５０μｌＣＤ４＋磁珠ꎬ混合均匀ꎬ３０ħ孵育３０ｍｉｎꎻ加入１ｍｌＢＤ清洗Ｂｕｆｆｅｒ混匀后放至磁力架上孵育１０ｍｉｎꎻ吸弃流式管内上清液ꎬ加入１ｍｌＢＤ清洗Ｂｕｆｆｅｒꎬ孵育５ｍｉｎꎬ并重复操作ꎻ重悬阳性成分ꎬ转入含５％胎牛血清的ＲＰＭＩ￣１６４０培养液中用于实验ꎮＴ淋巴瘤细胞株采用含１０％胎牛血清的ＲＰＭＩ￣１６４０㊁３７ħ㊁５％ＣＯ２进行培养ꎬ取对数生长期细胞用于实验ꎮ１.３.５㊀外周血ＣＤ４＋Ｔ细胞和Ｔ淋巴瘤细胞株表面ＩｇＤＲ的表达㊀利用ＦＩＴＣ荧光标记试剂盒标记人ＩｇＤ蛋白(ＦＩＴＣ￣ＩｇＤ)ꎬ具体操作参见说明书ꎬ向ＣＤ４＋Ｔ细胞及Ｊｕｒｋａｔ㊁ＭＯＬＴ￣４细胞株中加入不同浓度的ＦＩＴＣ￣ＩｇＤꎬ共同３７ħ孵育１ｈꎬ并设置空白对照组ꎬＰＢＳ洗涤后适量重悬细胞ꎬ流式细胞仪检测荧光强度ꎮ１.３.６㊀ＩｇＤ与ＣＤ４＋Ｔ细胞和Ｔ淋巴瘤细胞株表面ＩｇＤＲ的亲和力实验㊀将ＣＤ４＋Ｔ细胞和Ｊｕｒｋａｔ㊁ＭＯＬＴ￣４细胞以２ˑ１０６/孔的密度接种至６孔板ꎬ加入不同浓度ＦＩＴＣ￣ＩｇＤꎬ３７ħ孵育２ｈꎮＰＢＳ洗涤后适量重悬细胞ꎬ上机检测荧光强度ꎮ各浓度组的荧光强度减去空白对照组荧光强度ꎬ得到各浓度组ＩｇＤ的特异性结合量ꎬ分别以不同浓度ＦＩＴＣ￣ＩｇＤ为Ｘ轴ꎬ特异性结合量为Ｙ轴ꎬ绘制饱和曲线ꎬ计算最大结合量(Ｂｍａｘ)和解离常数(ＫＤ)[４]ꎮ１.３.７㊀ＣＤ４＋Ｔ细胞的ＩｇＤＲ竞争结合实验㊀ＣＤ４＋Ｔ细胞以２ˑ１０６/孔的细胞密度铺６孔板ꎬ分别加入ＦＩＴＣ￣ＩｇＤ(１０μｇ/ｍｌ)和不同浓度的重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白(０ ０３㊁０ １㊁０ ３㊁１㊁３㊁１０㊁３０μｇ/ｍｌ)ꎬ３７ħ孵育２ｈꎮＰＢＳ洗涤后适量重悬细胞ꎬ上机检测荧光强度ꎮ２㊀结果２.１㊀重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白的表达㊁纯化２.１.１㊀ｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣Ｆｃ原核表达载体构建㊀通过ＰＣＲ法扩增目的基因ꎬ连接克隆载体ꎬ双酶切ꎬ连接表达载体ꎮ经凝胶电泳检测(图１)㊁测序鉴定(图２)ꎬ序列正确ꎬ成功构建原核表达载体ｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣Ｆｃꎮ２.１.２㊀重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白的表达㊀诱导后的上清在３４ｋｕ附近有一条明显的条带(图３)ꎬ与理论值相符ꎮ而未转化重组质粒的ＢＬ２１(ＤＥ３)野生菌株在３４ｋｕ附近无明显条带ꎮ表明重组质粒在ＢＬ２１(ＤＥ３)中诱导表达成功ꎬ且以可溶性蛋白形式存在ꎮ２.１.３㊀重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白的纯化㊀通过Ｈｉｓ￣图１㊀重组质粒ｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣Ｆｃ双酶切鉴定㊀㊀Ｍ:ＤＮＡＭａｒｋｅｒꎻ１:空载体ｐＥＴ￣２８ａ(＋)ꎻ２:重组质粒ｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣Ｆｃꎻ３㊁４:经双酶切处理后的重组质粒ｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣ＦｃＴａｇ亲和层析和分子筛层析两步纯化ꎬ得到纯度９５％以上的重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白(图４㊁５)ꎮ２.２㊀ＣＤ４＋Ｔ细胞和Ｔ淋巴瘤细胞株表面ＩｇＤＲ的表达㊀ＦＩＴＣ￣ＩｇＤ与ＩｇＤＲ结合后ꎬ流式细胞仪检测细胞表面ＦＩＴＣ荧光强度ꎮ结果显示:随ＦＩＴＣ￣ＩｇＤ浓度增高ꎬ流式峰图显著右移ꎬ证明ＣＤ４＋Ｔ细胞(图６)㊁Ｊｕｒｋａｔ和ＭＯＬＴ￣４细胞(图７㊁８)上均有ＩｇＤＲ表达ꎮ２.３㊀ＩｇＤ与ＣＤ４＋Ｔ细胞及Ｔ淋巴瘤细胞株表面ＩｇＤＲ的亲和力㊀不同浓度ＦＩＴＣ￣ＩｇＤ与细胞共同孵育后流式细胞仪检测ＦＩＴＣ荧光强度ꎬ结果显示随ＦＩＴＣ￣ＩｇＤ浓度增加ꎬ结合到ＩｇＤＲ上的配体逐渐增多ꎬ结合到ＩｇＤＲ的ＩｇＤ可通过流式细胞仪检测其ＦＩＴＣ平均荧光强度(ＭＦＩ)并绘制饱和曲线(图９)ꎬ分别计算ＩｇＤ与ＣＤ４＋Ｔ细胞及Ｔ淋巴瘤细胞株表面ＩｇＤＲ结合的Ｂｍａｘ和ＫＤꎮ结果显示ꎬＣＤ４＋Ｔ细胞图２㊀原核表达载体ｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣Ｆｃ测序图图３㊀ＩｇＤ￣Ｆｃ重组蛋白表达产物的ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ电泳检测㊀㊀Ｍ:蛋白Ｍａｒｋｅｒꎻ１㊁２㊁３:大肠杆菌ＢＬ２１(ＤＥ３)总蛋白ꎻ４㊁５㊁６:转化ｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣Ｆｃ的ＢＬ２１(ＤＥ３)总蛋白图４㊀重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白Ｈｉｓ￣Ｔａｇ亲和层析纯化峰图图５㊀重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白的纯化㊀㊀Ｍ:蛋白Ｍａｒｋｅｒꎻ１㊁２:大肠杆菌ＢＬ２１(ＤＥ３)总蛋白ꎻ３:亲和层析纯化产物ꎻ４:第二步纯化流穿产物ꎻ５:分子筛层析产物图６㊀ＣＤ４＋Ｔ细胞表面ＩｇＤＲ表达图７㊀Ｊｕｒｋａｔ细胞表面ＩｇＤＲ表达图８㊀ＭＯＬＴ￣４细胞表面ＩｇＤＲ表达(Ｂｍａｘ＝４５０２ʃ１４４ ６ꎬＫＤ＝７ ２５４ʃ０ ９５６７ꎬＲ２＝０ ９７５１)㊁Ｊｕｒｋａｔ(Ｂｍａｘ＝２７２２ʃ１１２ ７ꎬＫＤ＝９ ８７６ʃ１ ５８９ꎬＲ２＝０ ９６３２)㊁ＭＯＬＴ￣４细胞(Ｂｍａｘ＝２７５１ʃ１００ ２ꎬＫＤ＝７ ８８ʃ１ １６１ꎬＲ２＝０ ９６８９)表面ＩｇＤＲ与ＩｇＤ亲和力相近ꎮ２.４㊀重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白、ＩｇＤ与ＣＤ４＋Ｔ细胞表面ＩｇＤＲ的竞争结合实验㊀不同浓度重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白与１０μｇ/ｍｌＦＩＴＣ￣ＩｇＤ共同孵育ＣＤ４＋Ｔ细胞ꎬ流式细胞仪检测ＦＩＴＣ荧光强度ꎮ结果显示随蛋白浓度增加ꎬ细胞表面ＦＩＴＣ强度逐渐减弱ꎬ提示重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白浓度依赖性地降低了ＩｇＤ与ＩｇＤＲ的结合ꎮ根据ＦＩＴＣ荧光强度的变化绘制重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白针对ＩｇＤ/ＩｇＤＲ结合的抑制曲线(图１０)ꎬ分别计算ＩＣ５０值ꎬ结果显示ꎬ重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白(ＩＣ５０＝６ ９２７ꎬＬｏｇＩＣ５０＝０ ８４０５ʃ０ ０７７８９ꎬＲ２＝０ ８９３４)可竞争性结合ＩｇＤＲꎮ３㊀讨论㊀㊀人ＩｇＤ是由两条相同的轻链和重链组成具有Ｉｇ超家族特征的可变区(Ｖ)和恒定区(Ｃ)[５]ꎬ其Ｃδ３段由于部分脯氨酸残基缺失以及Ｎ端两个糖基化位点而区别于其他Ｉｇꎬ正是这种结构导致ＩｇＤ的特殊生物学特性[６]ꎮＩｇＤ的两个Ｆａｂ片段主要位于Ｆｃ片段两侧ꎬ由于半延伸铰链的灵活性ꎬＦａｂ可以围绕Ｆｃ片段自由旋转ꎬ因此能在较低浓度下促进抗原图９㊀ＩｇＤ与ＣＤ４＋Ｔ细胞㊁Ｊｕｒｋａｔ细胞㊁ＭＯＬＴ￣４细胞上ＩｇＤＲ结合的饱和曲线Ａ:ＣＤ４＋Ｔ细胞ꎻＢ:Ｊｕｒｋａｔ细胞ꎻＣ:ＭＯＬＴ￣４细胞图１０㊀ＣＤ４＋Ｔ细胞上ＩｇＤＲ的竞争结合实验结合[７]ꎮ㊀㊀自身免疫性疾病是由于对自身抗原失去免疫耐受而引发的一种慢性疾病ꎬ表现为一种可能涉及宿主体内多个器官的异质性疾病群[８]ꎮ遗传易感性和环境诱因使Ｔ细胞逃避中枢和外周耐受性ꎬ对自身抗原产生自激反应ꎬ抵抗自身抗原的Ｔ细胞过度增殖而导致器官损伤[９]ꎮ临床显示ꎬ自身免疫性疾病患者血液中分泌型ＩｇＤ(ｓＩｇＤ)水平较高ꎬ如:ＲＡ㊁ＳＬＥ等[３]ꎮＮｇｕｙｅｎｅｔａｌ[１０]研究认为ꎬ抗ＩｇＤ抗体可以调节人固有和适应性细胞因子反应ꎬ以抗ＩｇＤ为靶点可能在自身免疫性疾病治疗中有一定的应用价值ꎮＴ细胞上ＩｇＤＲ交联可以抑制Ｔ细胞凋亡ꎬ且ＩｇＤＲ能够促进同源Ｔ细胞和初始Ｂ细胞间免疫突触的形成ꎬ增加抗原呈递和抗体产生ꎮＲＡ是一种炎症自身免疫性疾病ꎬ抑制Ｔ细胞过度活化被认为是ＲＡ的潜在临床治疗方法[１１]ꎮ研究[３ꎬ１２]显示ꎬ相比健康对照者ꎬＩｇＤ水平及ＩｇＤＲ的表达在ＲＡ患者中更高ꎬ且ＩｇＤ可诱导ＲＡ患者Ｔ细胞异常活化ꎮＩｇＤ也可促进健康人ＣＤ４＋Ｔ细胞增殖与活化[１３]和Ｔ淋巴瘤细胞株Ｊｕｒｋａｔ㊁ＭＯＬＴ￣４的异常增殖ꎮ以上结果提示在自身免疫性疾病中Ｔ细胞处于过度活化状态ꎬ异常升高的ＩｇＤ和ＩｇＤＲ水平可能在Ｔ细胞异常增殖与活化过程中扮演重要角色ꎬ而ＩｇＤ￣ＩｇＤＲ可能成为ＩｇＤ水平升高的自身免疫性疾病治疗的新靶点ꎮ㊀㊀课题组在蛋白构建过程中ꎬ尝试了三种ＩｇＤ片段的重组:①全长ＩｇＤꎬ由于全长ＩｇＤ包含了ＩｇＤ的功能域与结合域ꎬ故表现出与ＩｇＤ相近的功能ꎬ未能起到阻断ＩｇＤ的促增殖作用ꎻ②ＩｇＤ￣Ｆｃ片段ꎬ去除了ＩｇＤ的Ｆａｂ段ꎬ仍未起到阻断ＩｇＤ功能的作用ꎬ提示ＩｇＤ￣Ｆｃ中包含了ＩｇＤ的功能域及结合域ꎻ③ＩｇＤ重链ＣＨ２￣ＣＨ３结构域ꎬ成功阻断了ＩｇＤ的促增殖作用ꎮ综上ꎬ经蛋白活性筛选ꎬ确定了ＩｇＤ￣ＣＨ２￣ＣＨ３重链结构域才是有药理活性的理想ＩｇＤ片段ꎮ本实验以ＩｇＤ￣ＩｇＤＲ为靶点ꎬ成功扩增出含人ＩｇＤ重链ＣＨ２￣ＣＨ３段结构域的基因片段ꎬ构建了含有该段基因的克隆及原核表达载体ꎬ并进行原核蛋白表达和层析纯化ꎬ制备出重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白ꎮ与分离天然来源和化学合成相比ꎬ在大肠杆菌中重组表达是一种更经济有效的大规模生产重组蛋白的方法[１４]ꎮ本实验采用低诱导温度(２０ħ)和低ＩＰＴＧ浓度(０ ４ｍｍｏｌ/Ｌ)ꎬ通过减慢蛋白合成速率ꎬ增加蛋白正确折叠ꎬ为重组蛋白的正确表达提供了更有利的条件ꎮｐＥＴ载体系统是一种能高效表达重组蛋白的载体蛋白ꎬ具有高度特异性和稳定性ꎬ在外源基因的原核表达中具有广泛的应用价值ꎮ㊀㊀本实验检测了ＣＤ４＋Ｔ细胞及Ｔ淋巴瘤细胞株Ｊｕｒｋａｔ和ＭＯＬＴ￣４表面ＩｇＤＲ的表达情况ꎬ进行ＩｇＤ与ＣＤ４＋Ｔ细胞及Ｔ淋巴瘤细胞株Ｊｕｒｋａｔ和ＭＯＬＴ￣４表面ＩｇＤＲ的亲和力比较ꎬ以及重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白与ＣＤ４＋Ｔ细胞表面ＩｇＤＲ的竞争结合比较ꎮ结果表明ꎬＣＤ４＋Ｔ细胞及Ｔ淋巴瘤细胞株表面均有ＩｇＤＲ表达ꎬＣＤ４＋Ｔ细胞及Ｔ淋巴瘤细胞株表面Ｉｇ￣ＤＲ与ＩｇＤ亲和力相近ꎬ重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白可以竞争性结合ＩｇＤＲꎬ浓度依赖性地降低ＩｇＤ与ＩｇＤＲ的结合ꎬ阻断ＩｇＤ￣ＩｇＤＲ通路ꎬ抑制ＩｇＤ诱导的Ｔ细胞过度活化ꎬ为进一步研发针对高水平ＩｇＤ的自身免疫性疾病的新型生物制剂奠定了实验基础ꎮ参考文献[１]㊀ＸｕＢꎬＷａｎｇＪꎬＺｈａｎｇＭꎬｅｔａｌ.Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆｉｍｍｕｎｏ￣ｇｌｏｂｕｌｉｎＤｉｎｃａｔｔｌｅ(Ｂｏｓｔａｕｒｕｓ)ꎬａｌａｒｇｅｄｏｍｅｓｔｉｃａｔｅｄｕｎｇｕｌａｔｅ[Ｊ].ＰＬｏＳＯｎｅꎬ２０１２ꎬ７(９):ｅ４４７１９.[２]㊀陈恒石ꎬ吴育晶ꎬ黄㊀琼ꎬ等.流式细胞术检测ＩｇＤ与ＩｇＤ受体结合实验方法的建立[Ｊ].安徽医科大学学报ꎬ２０１６ꎬ５１(８):１１０５－１０.[３]㊀ＷｕＹＪꎬＣｈｅｎＷＳꎬＣｈｅｎＨＳꎬｅｔａｌ.ＴｈｅｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＤＦｃｒｅｃｅｐｔｏｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄｏｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ￣ｌｉｋｅｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅｓｆｒｏｍｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏｔｈｅｃｅｌｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎ[Ｊ].ＡｃｔａＰｈａｒｍａｃｏｌＳｉｎꎬ２０１７ꎬ３８(１１):１４６６－７４.[４]㊀ＷｕＹＪꎬＣｈｅｎＨＳꎬＣｈｅｎＷＳꎬｅｔａｌ.ＣＰ￣２５ａｔｔｅｎｕａｔｅｓｔｈｅａｃｔｉ￣ｖａｔｉｏｎｏｆＣＤ４(＋)ＴｃｅｌｌｓｓｔｉｍｕｌａｔｅｄｗｉｔｈｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＤｉｎｈｕｍａｎ[Ｊ].ＦｒｏｎｔＰｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１８ꎬ９:４.[５]㊀ＢｒｅｚｓｋｉＲＪꎬＭｏｎｒｏｅＪＧ.Ｂ￣ｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒ[Ｊ].ＡｄｖＥｘｐＭｅｄＢｉｏｌꎬ２００８ꎬ６４０:１２－２１.[６]㊀陈文生ꎬ黄㊀琼ꎬ吴育晶ꎬ等.ＩｇＤ在自身免疫病中作用的研究进展[Ｊ].中国药理学通报ꎬ２０１４ꎬ３０(３):２９７－３００. [７]㊀ＣｈｅｎＫꎬＣｅｒｕｔｔｉＡ.Ｎｅｗｉｎｓｉｇｈｔｓｉｎｔｏｔｈｅｅｎｉｇｍａｏｆｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕ￣ｌｉｎＤ[Ｊ].ＩｍｍｕｎｏｌＲｅｖꎬ２０１０ꎬ２３７(１):１６０－７９. [８]㊀ＡｎａｙａＪＭ.Ｃｏｍｍｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｄｉｓｅａｓｅｓ(ｔｈｅａｕ￣ｔｏｉｍｍｕｎｅｔａｕｔｏｌｏｇｙ)[Ｊ].ＡｕｔｏｉｍｍｕｎＲｅｖꎬ２０１２ꎬ１１(１１):７８１－８４.[９]㊀ＫｈａｎＵꎬＧｈａｚａｎｆａｒＨ.Ｔｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓａｎｄａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ[Ｊ].ＩｎｔＲｅｖＣｅｌｌＭｏｌＢｉｏｌꎬ２０１８ꎬ３４１:１２５－６８.[１０]ＮｇｕｙｅｎＴＧꎬＬｉｔｔｌｅＣＢꎬＹｅｎｓｏｎＶＭꎬｅｔａｌ.Ａｎｔｉ￣ＩｇＤａｎｔｉｂｏｄｙａｔｔｅｎｕａｔｅｓｃｏｌｌａｇｅｎ￣ｉｎｄｕｃｅｄａｒｔｈｒｉｔｉｓｂｙｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙｄｅｐｌｅｔｉｎｇｍａｔｕｒｅＢ￣ｃｅｌｌｓａｎｄｐｒｏｍｏｔｉｎｇｉｍｍｕｎｅｔｏｌｅｒａｎｃｅ[Ｊ].ＪＡｕｔｏｉｍｍｕｎꎬ２０１０ꎬ３５(１):８６－９７.[１１]ＤｕｌｉｃＳꎬＶａｓａｒｈｅｌｙｉＺꎬＳａｖａＦꎬｅｔａｌ.Ｔ￣ｃｅｌｌｓｕｂｓｅｔｓｉｎｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓｐａｔｉｅｎｔｓｏｎｌｏｎｇ￣ｔｅｒｍａｎｔｉ￣ＴＮＦｏｒＩＬ￣６ｒｅｃｅｐｔｏｒｂｌｏｃｋｅｒｔｈｅｒａｐｙ[Ｊ].ＭｅｄｉａｔｏｒｓＩｎｆｌａｍｍꎬ２０１７ꎬ２０１７:６８９４３７４. [１２]ＷｕＹꎬＣｈｅｎＷꎬＣｈｅｎＨꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｅｌｅｖａｔｅｄｓｅｃｒｅｔｅｄｉｍｍｕｎｏ￣ｇｌｏｂｕｌｉｎＤｅｎｈａｎｃｅｄｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓｉｎｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ[Ｊ].ＰＬｏＳＯｎｅꎬ２０１６ꎬ１１(１):ｅ１４７７８８.[１３]董小洁ꎬ吴育晶ꎬ张㊀静ꎬ等.ＩｇＤ对人外周血Ｔｈ１/Ｔｈ２㊁Ｔｈ１７/Ｔｒｅｇ亚群及核转录因子的影响[Ｊ].中国临床药理学与治疗学ꎬ２０１８ꎬ２３(５):４８８－９７.[１４]ＬｉＹ.ＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｅｐｔｉｄｅｓｉｎＥｓｃｈｅ￣ｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ:ａｒｅｖｉｅｗ[Ｊ].ＰｒｏｔｅｉｎＥｘｐｒＰｕｒｉｆꎬ２０１１ꎬ８０(２):２６０－７.ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＤ￣ＦｃｆｒａｇｍｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎＺｈａｎｇＪｉｎｇꎬＣｈｅｎＷｅｎｓｈｅｎｇꎬＨｕＸｉａｏｘｉꎬｅｔａｌ(ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬＡｎｈｕｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｎｔｉ￣ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙａｎｄＩｍｍｕｎｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎꎬＣｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＣｅｎｔｅｒｏｆＡｎｔｉ￣ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙａｎｄＩｍｍｕｎｅＭｅｄｉｃｉｎｅｓꎬＨｅｆｅｉ㊀２３００３２)Ａｂｓｔｒａｃｔ㊀Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｒｅｃｏｍｂｉｎｅｈｕｍａｎｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＤ￣Ｆｃ(ＩｇＤ￣Ｆｃ)ｆｒａｇｍｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎꎬｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓ￣ｓｉｏｎｏｆＩｇＤｒｅｃｅｐｔｏｒ(ＩｇＤＲ)ｏｎＣＤ４＋ＴｃｅｌｌｓｏｆｈｅａｌｔｈｙｃｏｎｔｒｏｌｓａｎｄＪｕｒｋａｔꎬＭＯＬＴ￣４ＴｌｙｍｐｈｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅｓꎬａｎｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｏｆＩｇＤ￣ＦｃｃｏｍｐｅｔｉｎｇｗｉｔｈＩｇＤｔｏｂｉｎｄｔｏＩｇＤＲｏｎｔｈｅｓｕｒｆａｃｅｏｆＣＤ４＋Ｔｃｅｌｌｓ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＩｇＤ￣ＦｃｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙＰＣＲｍｅｔｈｏｄꎬａｎｄｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎＩｇＤ￣Ｆｃｆｒａｇｍｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ.ＦｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＩｇＤＲｏｎＣＤ４＋ＴｃｅｌｌｓｏｆｈｅａｌｔｈｙｃｏｎｔｒｏｌｓａｎｄＪｕｒｋａｔꎬＭＯＬＴ￣４ＴｌｙｍｐｈｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅｓꎬａｎｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｏｆＩｇＤ￣ＦｃｃｏｍｐｅｔｉｎｇｗｉｔｈＩｇＤｔｏｂｉｎｄｔｏＩｇＤＲｏｎＣＤ４＋Ｔｃｅｌｌｓ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀Ｔｈｅｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓ￣ｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣ＦｃｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｆｒａｇｍｅｎｔｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄꎬａｎｄｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎＩｇＤ￣ＦｃｆｒａｇｍｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄꎬｔｈｅａｆｆｉｎｉｔｙｏｆＩｇＤｂｉｎｄｉｎｇｔｏＩｇＤＲｏｎｔｈｅｓｕｒｆａｃｅｏｆＣＤ４＋ＴｃｅｌｌｓａｎｄＴｌｙｍｐｈｏ￣ｍａｃｅｌｌｌｉｎｅｓｗａｓｓｉｍｉｌａｒꎬＩｇＤ￣ＦｃｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｃｏｕｌｄｃｏｍｐｅｔｉｎｇｗｉｔｈＩｇＤｔｏｂｉｎｄｉｎｇｗｉｔｈＩｇＤＲ.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＴｈｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎＩｇＤ￣ＦｃｆｒａｇｍｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｉｓｍａｔｕｒｅａｎｄｓｔａｂｌｅꎬｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎＩｇＤ￣ＦｃｆｒａｇｍｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｃａｎｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｌｙｂｌｏｃｋＩｇＤｂｉｎｄｉｎｇｔｏＩｇＤＲꎬａｎｄｍａｙｂｅｃｏｍｅａｎｏｖｅｌｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔｒｅａｔｍｅｎｔｆｏｒａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｄｉｓｅａｓｅｓｗｉｔｈｅｌｅｖａｔｅｄＩｇＤｌｅｖｅｌｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀ｉｍｍｕｎｏｇｌｕｂｌｉｎＤꎻＩｇＤｒｅｃｅｐｔｏｒꎻａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｄｉｓｅａｓｅｓꎻｐｒｏｔｅｉｎｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ。