两种乙肝表面抗原免疫检测方法的比较分析谢晓羽

两种乙肝表面抗原免疫检测方法的比较分析谢晓羽
发布时间：2023-06-07T08:37:09.213Z 来源：《中国医学人文》2023年5期作者：谢晓羽
[导读] 对酶联免疫吸附法(ELISA)与胶体金法检测乙肝表面抗原(HBsAg)进行方法学比较。

方法以来我院体检的200例体检者作为研究对象，其血清标本同时用酶联免疫吸附法(ELISA)和胶体金法检测乙肝表面抗原(HBsAg)，以酶联免疫吸附法(ELISA)为标准，对胶体金法的灵敏度、特异性进行评价。

结果①酶联免疫吸附法(ELISA)检测的阳性率虽高于胶体金法，但两者间的差异无统计学意义（P>0.05）。

②酶联免疫吸附法(ELISA)检测的灵敏度高于胶体金法，且两组间的差异具有统计学意义（P＜0.05）。

结论酶联免疫吸附法(ELISA)步骤多，时间长，特异性强，灵敏度高，适合批量检测。

胶体金法快速简便，单份检测，无需任何仪器，适合急诊检测，但灵敏度、特异性稍差，特别是针对小三阳和乙肝携带者有漏诊可能。

因此临床检验科室在实际工作中，应根据需要并结合工作情况选用检测方法。

武汉轻工大学医院湖北武汉 430023
摘要：目的对酶联免疫吸附法(ELISA)与胶体金法检测乙肝表面抗原(HBsAg)进行方法学比较。

方法以来我院体检的200例体检者作为研究对象，其血清标本同时用酶联免疫吸附法(ELISA)和胶体金法检测乙肝表面抗原(HBsAg)，以酶联免疫吸附法(ELISA)为标准，对胶体金法的灵敏度、特异性进行评价。

结果①酶联免疫吸附法(ELISA)检测的阳性率虽高于胶体金法，但两者间的差异无统计学意义（P>0.05）。

②酶联免疫吸附法(ELISA)检测的灵敏度高于胶体金法，且两组间的差异具有统计学意义（P＜0.05）。

结论酶联免疫吸附法(ELISA)步骤多，时间长，特异性强，灵敏度高，适合批量检测。

胶体金法快速简便，单份检测，无需任何仪器，适合急诊检测，但灵敏度、特异性稍差，特别是针对小三阳和乙肝携带者有漏诊可能。

因此临床检验科室在实际工作中，应根据需要并结合工作情况选用检测方法。

关键词：乙肝表面抗原(HBsAg)；胶体金法；酶联免疫吸附法(ELISA)
0引言
乙型肝炎病毒（HBV）感染可导致肝脏的炎症，乙型病毒肝炎是威胁我国人群健康的最重要传染病之一，80%～90%的人在感染HBV 后不出现临床症状。

在乙肝病毒感染后，人体内首先出现的免疫指标是乙型肝炎表面抗原(HBsAg)，乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是乙肝病毒的外壳蛋白。

其本身不具有传染性，但它的出现常伴随乙肝病毒的存在，所以它是已感染乙肝病毒的标志，可作为乙肝的早期诊断和普查指标。

该抗原的出现意味着乙肝病毒的感染状态[1]。

目前检测乙肝表面抗原(HBsAg)的方法以酶联免疫吸附法(ElISA)为代表，该法以其操作简便、快速、灵敏、准确、重复性好、无放射污染等特点被广泛使用；胶体金法是在乙肝表面抗原(HBsAg)基础上发展起来的一种检测技术，由于其具有操作简便、快捷、可单份检测、便于保存、不需特殊设备等优点，被广泛应用于乙肝表面抗原(HBsAg)的初筛。

本文对两种方法检测结果进行比较，探讨其阳性率、特异性间的差异。

1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2022年 3月至2023年 3月在我院体检的200例体检者，选其作为本次研究对象。

其中，200例体检者中，男性体检者有125例，女性体检者有75例，他们的年龄为18--72 岁，平均年龄为41.9±4.8 岁。

1.2 方法
抽取这200例体检者的静脉血4ml作为检测样本，将这4ml 血液样本分为两份，每份2ml。

一份血液样本采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定乙肝表面抗原(HBsAg)，另一份血液样本采用胶体金法测定乙肝表面抗原(HBsAg)。

测定乙肝表面抗原(HBsAg)所使用的仪器为酶标仪，洗板机，使用的试剂为酶联免疫吸附法(ELISA)法试剂盒和胶体金试条。

具体的测定方法为：对血液样本进行离心处理以分离血清，血清分离出后，分别应用两种检测方法检测乙肝表面抗原(HBsAg)。

1.2.1 酶联免疫吸附法(ELISA)
①用加样枪取对照血清、待测标本及质控品各50ul加入到相应孔当中并做好标记,封板，置37℃温箱中孵育30分钟。

②洗板拍干后，将酶标抗体50ul加入到对照血清、待测样本及质控品当中，充分混匀后封板，置37℃温箱中孵育30分钟。

③再次洗板拍干后，添加底物A、底物B各50ul,充分混匀后封板，置37℃温箱中孵育15分钟。

④将终止液50ul加入到各孔中，混匀。

⑤应用酶标仪读数，取波长450nm，读取各孔OD值,并计算出S/ CO 值。

1.2.2胶体金法
将胶体金试条条浸入待测标本10min（注意不要将标志线浸没），之后将试纸条取出并根据红线条数判定检测结果。

1.3乙肝表面抗原(HBsAg)的结果判定标准
采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定乙肝表面抗原(HBsAg)时，其判定标准为：（1）如 S/CO 值＜ 1.0，则乙肝表面抗原(HBsAg)为阴性。

（2）如S/CO 值≥ 1.0，则乙肝表面抗原(HBsAg)为阳性。

采用胶体金法测定乙肝表面抗原(HBsAg)时，其判定标准为：（1）如检测线与对照线之间的红线为1 条，则乙肝表面抗原(HBsAg)为阴性。

（2）如检测线与对照线之间的红线为 2 条，则乙肝表面抗原(HBsAg)为阳性。

（3）如检测线与对照线之间并没有红线出现，则测定无效。

1.4 统计学处理
本次研究的所有数据均应用SPSS21.0 统计学软件进行分析，组间差异进行X2检验。

P<0.05时为差异具有统计学意义。

2 结果
2.1 检测的阳性率
胶体金法检测的阳性率为5.0%（10 例），酶联免疫吸附法(ELISA)检测的阳性率为5.5%（11 例）。

酶联免疫吸附法(ELISA)检测的阳性率虽高于胶体金法，但两者间的差异无统计学意义（P>0.05）。

2.2 检测的灵敏度
将酶联免疫吸附法(ELISA)的检测结果作为标准（100%），胶体金法检测的灵敏度为90.9%。

酶联免疫吸附法(ELISA)检测的灵敏度高于胶体金法，且两组间的差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。

3讨论
据研究显示，我国大约有1.2亿人长期携带乙肝病毒。

其主要传播途径为血液传播、母婴垂直传播、性行为及密切接触传播。

由于乙肝是一种传染性极强的疾病，因此我国早已将乙肝表面抗原(HBsAg)检测作为健康体检的常规项目。

正确及时地筛查乙肝表面抗原（HBsAg）阳性的人群，可以有效防止乙肝病毒的传播。

目前，临床上检测乙肝表面抗原(HBsAg)的方法主要有胶体金法和酶联免疫吸附法(ELISA)两种。

胶体金法是一种免疫检测法，其检测原理为，将胶体金颗粒作为酶标记抗（HBs）的替代物，利用夹心法对血清及全血当中的乙肝表面抗原(HBsAg)进行快速检测。

如果乙肝表面抗原(HBsAg)为阳性，则乙肝表面抗原(HBsAg)就会在标记抗中形成HBsAb-HBsAg 复合物，并在固定膜与毛细效应的作用下形成红色条带。

如果乙肝表面抗原(HBsAg)为阴性，则不会形成 HBsAb-HBsAg复合物，测试区也不会出现红色条带[2]。

从上述原理我们不难发现，应用胶体金法检测乙肝表面抗原(HBsAg)具有方便快捷、可以一次性检测大量样本和对检测设备无特殊要求等优点，因此我们可以在基层医院的健康体检中推广使用胶体金法。

但从另一方面讲，胶体金法在检测乙肝表面抗原(HBsAg)时也存在不足，如灵敏度较低、容易漏诊。

乙肝表面抗原(HBsAg)低滴度标本以及容易受到标本溶血的影响等都会对结果产生影响[3]。

在本次研究中，胶体金法检测的阳性率为5.0%，酶联免疫吸附法(ELISA)检测的阳性率为5.5%。

酶联免疫吸附法(ELISA)检测的阳性率虽高于胶体金法[4]，但两者间的差异无统计学意义（P>0.05），因此可以认为胶体金法的特异度与酶联免疫吸附法(ELISA)相同。

酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙肝表面抗原（HBsAg），其具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特点，但是，酶联免疫吸附试验方法（ELISA 法）在操作过程中，存在着人工操作的步骤，如加样、洗板、甩干等，并且也存在有许多影响因素，如试剂使用前有无平衡至室温，加样有无气泡溅出，加样在孔壁上的非包被区，洗板是否洗干净等情况，以上因素，都会直接影响乙肝表面抗原（HBsAg）检测的结果。

所以其对检验人员操作要求更严格。

综上所述，酶联免疫法和胶体金法均能够有效检测乙肝表面抗原(HBsAg)，但由于胶体金法的灵敏度略低，因此在临床上如果对血源的要求较高，在实际检验操作中，应在进行胶体金免疫层析法筛选的基础上再进行酶联免疫法检测，以提高乙肝表面抗原检测的准确度。

参考文献
[1]王克成. 酶联免疫法和胶体金法测定HBsAg 的比较[J]. 中国现代医生.2010(05).
[2]袁玲 .两种检测乙肝表面抗原方法的比较[J].口岸卫生控制 .2006(03).
[3]周红保.两种常用乙肝表面抗原检测方法的结果比较[J].中国社区医师，2012，16（14）：276.
[4]王力达.不同方法检测乙肝表面抗原的结果分析[J].临床输血与检验，2013，1（15）： 42-44.。