犬α干扰素的克隆、表达及纯化

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一
３５一
中国动物检疫
２０年第２０１７卷第１期
犬Ｑ干扰素的克隆、表达及纯化
项黎丽闰若潜盛敏ｚ程增青。，，，（．１济源市畜产品质量监测检验中心，河南济源４４５；５６０
２河南省动物疫病预防控制中心，．河南郑州
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纯的ＣＩＮｃ蛋白。本研究为以后ｃＩＮｃ的活性及临床应用研究奠定了基础。ａＦ－【ａＦ－ｔ关键词：犬干扰素；隆；达；克表纯化中图分类号：８４４０８文献标识码：文章编号：０５９４２１）１０３— ４Ｓ５．；７５Ａ１０ — ４Ｘ（００Ｏ — ０５０
＾ｂＩｃ＝ＡｃｏｄｎｏｔｅｎｗｎＣａｎａｇｎｎＤＤＢＪＧｅＢａｋａｒｏｒｍｅｓｃｎｎｎｐｎｎｌｅｔｅ曲囊蠢ｃｒｉｇｔｈｋｏＩｅｅｉ／ｎｎ，ａｐｉｆｐｉｒｏｍｉｉｇＳｈＩａｄＨｉｄＩｒｓｒ．Ｉｉ
４６０２
摘要：根据ＤＢ／ｅＢｎ基因库中已登录的犬Ｏ干扰素序列，ＤＪＧｎａｋ【设计了含ＳｈＩＨｎＩ酶切位点的一对引ｐ和ｉｄＩＩ物，采取聚合酶链式反应（Ｃ）术以犬基因组ＤＡ为模板进行了ＣＩＮ的成熟肽基因的克隆，ＰＲ技ＮａＦ一扩增产物与克隆载体ｐＥ — ａｙｅｔｒＧＭＹＥｓＶｃｏ连接后转入大肠杆菌Ｊ１９Ｍ０，经ＰＲ鉴定和Ｅｏ酶切鉴定，初步证实为ＣＩＮｃ，ＣｃＲＩａＦ — 【用ＳｈＩＨｎＩ双酶切重组质粒，目的片段与表达载体ｐＥ０ｐ和ｉｄＩＩ将Ｏ３连接，然后转入大肠杆菌Ｊ１９经ＰＲ鉴定、ｐＭ０，ＣＳｈＩ和Ｈｎｌ双酶切鉴定、列测定证实已经成功克隆了ＣＩＮｘ，建了重组表达质粒ＰＥ０ＣＩＮ１。将重组表达ｉｄＩＩ序ａＦ—Ｉ构Ｑ３／ａＦ－２１菌液培养至Ｏ６００５Ｄ０为．时加入ＩＴＰＧ诱导表达，ＳＳＰＧ经Ｄ－ＡＥ分析ＣｌＮｏ在大肠杆菌中得到了表达，达的目的ａＦ—ｔ表蛋白以包涵体形式存在，表达量约占细菌总量的２％Ｏ左右。将诱导表达的菌液经超声裂解、变性、复性、透析后，得较
ｔｎｉｗｅｅｅｉｎｄｉｓｅｏｔｒｄｓｅ．ＴｅｇｈＣａＦａｇｎｓａｌｄｙＰＲ．ＴｅＣＲｒｄｃｓｃｏｅｎｏＰＭ — ＥｓｃｏＩＮ．ｅｅｗａｍｐｉｂＣｅｈＰｐｏｕｔｗａｌｎｄｉｔＧＥＴａｙＶｅｔｒ
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