槐米中芦丁的提取分离与鉴定
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❖ 1、样品：槐花米 ❖ 试剂：硼砂、CaO、浓盐酸 ❖ 仪器：每一组需要： 电炉、1000ml烧杯、
小烧杯、 500ml烧杯、玻璃棒、pH试纸、玻 璃漏斗、滴管 ❖ 公共需要：棉花、天平
芦丁的提取分离与鉴定
子项目一 槐米中芦丁的提取
提
取
槐花米 （22g）
加0.4%硼砂 沸水200ml
搅拌下加 入石灰乳
取芦丁水解后的滤液15m1，加 氢氧化钡粉中和至中性（搅拌下进行）滤去白色的硫酸钡沉淀(漏斗滤纸），滤液在沸水浴上蒸干后， 加1－2 ml乙醇溶解，作为糖的供试液。
槲皮素 93g和邻苯二甲酸1.
放冷沉淀，抽滤，保存滤液（应为澄清无色液体），作为糖的检查，沉淀物为芸香苷苷元（槲皮素），用蒸馏水洗至中性，抽干水分 ，晾干，称量。 注意安全，严防火灾、烧伤或中毒事故发生。
调节 pH8-9
加热
保持微 沸
20min 补充水分， 保证pH值
趁热用棉花
在60-70度下，用
滤过
滤液 浓盐酸调pH3-4 静置
残渣
❖ .11月，实验结果：食品091班30克槐米制 得的粗芦丁大约5－8克不等。
子项目二 槐米中芦丁的精制和水解
思考问题
先进行项目二，冷却后等沉沉析出时候，再讨论项目3
❖ 2 10%α-萘酚乙醇溶液 25ml
❖ 3 2%三氯化铁乙醇溶液 20ml
❖ 4、展开剂：醋酸乙酯-甲酸-水（8：1：1）（我们实验需要 配300ml
❖ 5、5组配一瓶配200ml正丁醇-乙酸-水（4：1：5）放到分液 漏斗中，平衡后取上层备用
❖ 配两瓶
❖ 6、 2%AlCl3乙醇溶液 100ml
❖ 每组需要：1个蒸发皿、玻璃漏斗、玻璃棒、10ml试
管8支、2个小烧杯、胶头滴管
❖ 需要配制的试剂:
❖ 1 苯胺—邻苯二甲酸试剂配法：苯胺0.93g和邻苯二甲酸 1.66g溶于100ml水饱和的正丁醇中。 （我们实验需要配 100ml）(用分液漏斗中加入50ml水和 100ml正丁醇震摇后 静置取上层即为水饱和的正丁醇）
子项目一 槐米中芦丁的提取
思考问题
1、加入硼砂目的是什么？ 2、为什么要加入石灰水，在芦丁的提取中能
起到什么作用？ 3、酸沉pH值为什么不宜过低？
❖ 那个天然产物的实验，要算下得率,粗芦丁重 量/槐米的重量； 精制芦丁的重量/粗芦丁的 重量；并且计算下，每克芦丁分子中槲皮素 和糖所占的百分比。
所需的试剂和设备
色 三氯化铁乙醇溶液 准备3支试管（一个空白管，样品用蒸馏水代替，一个是芦丁、一个是槲皮素）
4、黄酮类薄层色谱中常用到AlCl3乙醇溶液显色？显色后一般呈什么颜色？
谱 展开剂：醋酸乙酯-甲酸-水（8：1：1） 2、为什么要加入石灰水，在芦丁的提取中能起到什么作用？
冷却（可以用流动水快速冷却）静置 子项目三 芦丁和槲皮素的鉴别
❖ 1mol/lHCL配法:取约90毫升浓盐酸定容至1000毫升
❖ 注意观察现象：未加热时，瓶内为混悬 液（芦丁不溶于冷水），加热后，混悬 液逐渐变为澄清液（芦丁易溶于热水）， 继续加热，有鲜黄色沉淀析出（槲皮素不 溶于水）
❖ 滤液处理：
❖ 取芦丁水解后的滤液15m1，加 氢氧化钡粉 中和至中性（搅拌下进行）滤去白色的硫酸 钡沉淀(漏斗滤纸），滤液在沸水浴上蒸干后， 加1－2 ml乙醇溶解，作为糖的供试液。 （如果加 氢氧化钡加过量后可以加少量的硫 酸回调pH)
4' O
3 OH
OH
O
槲皮素
OH OH
OH OH
芦丁
槐花
相关内容介绍
芦丁的提取分离与鉴定
槐米
槐花为豆科植物槐Sophora japonica L．的干燥
花及花蕾
相关内容介绍
芦丁的提取分离与鉴定
❖ 性能：苦，性微寒。 ❖ 功效：凉血止血、清肝泻火
❖ 应用：用于便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、 衄血、肝热目赤、头痛眩晕等。
❖ 硫酸可以同时沉淀Ba2+ Ba2+ + SO4 2========BaSO4↓ 使芦丁水解后的滤液更 纯净
❖ 学生做的结果：芦丁的得率大约是：20-25%
❖
精制芦丁的得率是大约87%
❖
槲皮素占芦丁分子是：13%到
20
芦丁的提取分离与鉴定
定
性 反
芦丁供试品溶液：取精制芦丁约5mg，用5ml甲 醇（无水乙醇）使溶液，备用。
❖ 5、过滤完之后，先抽掉抽滤瓶接管，后关抽气泵。 （防止倒吸）
子项目三 水解芦丁得到槲皮素
思考问题
1、芦丁是？苷（ N- 苷 、O-苷、S-苷or C苷?
2、苷键的裂解可以用什么方法 ？最常用的方 法是？ 影响酸水解速度的因素有哪些？
2、芦丁水解后的产物是什么？
3、如何进行苷类酸水解操作，如何分离得到 苷元成分？
主要含有芦丁、槲皮素，还含少量皂苷类及多 糖、粘液质等。近代研究表明槐米含芦丁可高 达23.5%，槐花开放后降至13.0%。
相关内容介绍
OH OH
芦丁的提取分离与鉴定
HO
O
OH
OH
O
O
O C H 2O
O OH
OH OH
OH OH
芦丁
性状：浅黄色粉末或极细微淡黄色针 状结晶。 溶解度：在冷水中1:10000，沸水中 1:200；冷乙醇中1:200，沸乙醇中 1:60。沸甲醇中1:7。 酸碱性：芦丁分子中具有较多酚羟基， 显弱酸性，易溶于碱液中，酸化后又 可析出。
1、以热水重结晶法精制芦丁的依据是什么？ 2、重结晶的操作要点有哪些？
需要的仪器设备
❖ 每组需要抽滤设备（需要1000ml的抽滤瓶）、 滤纸、 玻璃棒、1000ml烧杯、加热回流设 备（电热套、冷凝管、烧瓶）、小烧杯、浓 硫酸、浓盐酸
提
取
与
精
制
滤液
芦丁的提取分离与鉴定
第一次实验所得滤液 抽滤，少量水洗涤沉淀至中性
沉淀（粗品芦丁）
重结晶
取粗制芦丁3g,加蒸馏水 200-250ml,煮沸10分钟后， 趁热抽滤
残渣
滤液 冷却（可以用流动水快速冷却）静置
精制芦丁（备用） 抽滤， 干燥、称重
❖ 食品091班得到的精制芦丁大约（粗芦丁4克 精制后大约？）
减压抽滤装置
f8124a90a731,利用抽气泵使抽 滤瓶中的压强降低,达到固液分离的目的.
结论及解释
芦丁的提取分离与鉴定
定 盐酸-镁粉反应
黄酮母核
性
将样品溶液1ml，先滴加1－2滴浓盐酸再加入少许
反 镁粉振摇，1-2min内，观察颜色变化。（注意顺序） 应
Molish反应
苷类
将样品溶液1ml，加入与样品等体积10%α-萘 酚溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加适量浓硫 酸（约2ml），至分层注意观察两界面产生的变 化。（不要摇动）
样品：分别取精制的芦丁、槲皮素适量，加95%乙醇溶解成每1ml含1mg的溶液，备用。
( 溶液澄明度和5颜色的变化)3为什么出现这种情况？
1:23。可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、 6能6够g溶运于用1酸00水m解l水的饱操和作的技正术丁对醇槐中米。中O芦H 丁进行水解 冰乙酸、吡啶，不溶于水、氯仿、乙 水解 抽滤 洗涤沉淀 干燥 称重 醚、苯和石油醚等。 5%，槐花开放O后H降至13.O
子项目三 水解芦丁得到槲皮素
实验成品应写明名称、规格、配制者、配制时间及班O H组号，交实验指导教师验收。 槲将皮样素 品占溶芦液丁1m分l，子先是滴：加131%－到2滴20浓盐酸再3加' 入4' 少许镁粉振摇，1-2min内，观察颜色变化。
性状：黄色针状结晶（稀乙醇）。 5子、H项O5目组三配一芦瓶丁配和20槲0m皮l正素O丁的醇鉴-别乙酸-水（4：1：5）放到分液漏斗中，平衡后取上层备用 溶解度：冷乙醇中1:300，热乙醇中 子项目三 水7解芦丁得到槲皮素
芦丁的提取分离与鉴定
相关内容介绍
OH
OH
HO
O
OH
OH
O
O
O C H 2O
O OH
用于治疗毛细管脆弱引 起的出血病，并用作高 血压的辅助治疗剂。
OH OH
OH OH
芦丁
芦丁的提取分离与鉴定
相关内容介绍
先进行项目二，冷却后等沉沉析出时候，再讨论项目3
4实%验硼指砂导沸教水师2对00破ml损缺少的仪器药品应查O明H原因，按本院校对仪器药品破损处理办法提出处理意见。
应 槲皮素供试品溶液：取粗槲皮素约5mg，用5ml
甲醇（无水乙醇）使溶液，备用。
其余试剂：镁粉、浓盐酸、10%α-萘酚溶液、浓硫酸、2% 三氯化铁乙醇溶液 准备3支试管（一个空白管，
样品用蒸馏水代替，一个是芦丁、一个是槲皮素）
试验记录
试剂
盐酸-镁粉反 应
Molish反应 FeCl3反应
试验现象 空白 芦丁 槲皮素
谱
105℃烘10min显色(显棕色或棕红色斑点)
鉴 定 试验记录：
粘附纸色谱，并计
算斑点的Ｒf值
１２
３
当溶剂走到溶剂前沿6－ 8cm即可，约需40分钟
芦丁的提取与定性反应
薄 样品：分别取精制的芦丁、槲皮素适量，加95%
层 其余试剂：镁粉、浓盐酸乙、10醇%α-溶萘酚解溶液成、浓每硫酸1、m2% l含1mg的溶液，备用。
FeCl3反应
酚羟基
将样品溶液1ml，加入1～2滴2%Fecl3溶液，
观察现象。
子项目四 芦丁和槲皮素的鉴别
思考问题
1、纸色谱的原理及操作要点？ 2、黄酮类化合物有哪些显色方法，各针对哪类黄酮？ 3、黄酮类薄层色谱中，经常用到的吸附剂有哪几类？
各自的原理有什么不同？ 4、黄酮类薄层色谱中常用到AlCl3乙醇溶液显色？显色
பைடு நூலகம்
❖ 装置:布式漏斗,抽滤瓶,胶管,抽气泵,滤纸
❖
过程:
❖ 1、安装仪器,检查布式漏斗与抽滤瓶之间连接是否 紧密，抽气泵连接口是否漏气；
❖ 2、修剪滤纸，使其略小于布式漏斗，但要把所有 的孔都覆盖住，并滴加蒸馏水使滤纸与漏斗连接紧密；
❖ 3、将固液混合物转移到滤纸上；
❖ 4、打开抽气泵开关，开始抽滤。
芦丁的提取分离与鉴定
子项目三 水解芦丁得到槲皮素
注意观察整个过程的现 象！( 溶液澄明度和颜色 的变化)为什么出现这种 情况？
精制芦丁1.5g
加入2%硫酸或者 (1mol/lHCL)100ml，加热 回流30min(从有液滴滴下开 始计时），放冷静置，抽滤
滤液 作糖的检识用
沉淀 粗品槲皮素
水解 抽滤 洗涤沉淀 干燥 称重
❖ 7、硅胶预制板，用之前105度烘半个小时。
子项目三 芦丁 和槲皮素的鉴别
糖 的 鉴 定
残渣
芦丁的提取分离与鉴定
水解所得滤液 20ml
用饱和Ba(OH)2调PH值至 中性，折叠滤纸过滤
滤液 蒸干，放冷 加2-3ml乙醇溶解
供试品溶液 纸色谱
芦丁的提取分离与鉴定
糖
标准品：葡萄糖、鼠李糖
的
展开剂：正丁醇-乙酸-水（4：1：5）上层液
鉴 显色剂：2%AlCl 乙醇溶液，105℃加热至斑 加入2%硫酸或者(1mol/lHCL)100ml，加热回流30min(从有液滴滴下开始计时），放冷静置，抽滤
1、预习实验内容：要明确实验目的与要求。
3
别 点清晰，置紫外灯(365nm)下观察。 冷乙醇中1:200，沸乙醇中1:60。
105℃烘10min显色(显棕色或棕红色斑点)
后一般呈什么颜色？ 5、薄层色谱的操作要点有哪些？
❖ 所需要的药品和设备：氢氧化钡、葡萄糖、鼠李糖、 正丁醇、乙酸、苯胺、邻苯二甲酸盐、无水乙醇、甲
醇、乙酸乙酯、甲酸、AlCl3、镁粉、浓盐酸、 α-萘酚溶液、浓硫酸、三氯化铁、紫外灯、新 华1号滤纸、点样毛细管、水浴锅、硅胶G预制板 11块、分液漏斗 喷雾器几个
纸 色 谱
显色剂：苯胺—邻苯二甲酸试剂。 105℃烘10min显色(显棕色或棕红色斑点)
鉴
定
新华一号滤纸 标本缸 倒入缸内约30毫升的展开剂
芦丁的提取分离与鉴定
糖 的
标准品：葡萄糖、鼠李糖 展开剂：正丁醇-乙酸-水（4：1：5）放到分 液漏斗中，平衡后取上层备用。
纸 色
显色剂：苯胺—邻苯二甲酸试剂。
❖ 具体做法：芦丁水解方法： 取精制芦丁1.5g，研细后 置于250ml圆底烧瓶中，加入2％硫酸或 （1mol/lHCL)100m1，加热回流 30min，瓶中浑浊 液逐渐变为澄清的棕黄色液体，最后生成鲜黄色沉淀。 放冷沉淀，抽滤，保存滤液（应为澄清无色液体）， 作为糖的检查，沉淀物为芸香苷苷元（槲皮素），用 蒸馏水洗至中性，抽干水分，晾干，称量。得粗制槲 皮素，再用乙醇重结晶得精制槲皮素。
实训目的
❖ 能够运用碱溶酸沉法和结晶法的操作技术对 槐米中的芦丁进行提取分离
❖ 能够运用酸水解的操作技术对槐米中芦丁进 行水解
❖ 能够运用纸色谱、薄层色谱法和化学法鉴别 芦丁、槲皮素和糖类化合物
实训结果
得到两个单体化合物
OH OH
HO
O
OH
OH
O
O
O C H 2O
O OH
OH
HO 7 5
OH 3'
小烧杯、 500ml烧杯、玻璃棒、pH试纸、玻 璃漏斗、滴管 ❖ 公共需要：棉花、天平
芦丁的提取分离与鉴定
子项目一 槐米中芦丁的提取
提
取
槐花米 （22g）
加0.4%硼砂 沸水200ml
搅拌下加 入石灰乳
取芦丁水解后的滤液15m1，加 氢氧化钡粉中和至中性（搅拌下进行）滤去白色的硫酸钡沉淀(漏斗滤纸），滤液在沸水浴上蒸干后， 加1－2 ml乙醇溶解，作为糖的供试液。
槲皮素 93g和邻苯二甲酸1.
放冷沉淀，抽滤，保存滤液（应为澄清无色液体），作为糖的检查，沉淀物为芸香苷苷元（槲皮素），用蒸馏水洗至中性，抽干水分 ，晾干，称量。 注意安全，严防火灾、烧伤或中毒事故发生。
调节 pH8-9
加热
保持微 沸
20min 补充水分， 保证pH值
趁热用棉花
在60-70度下，用
滤过
滤液 浓盐酸调pH3-4 静置
残渣
❖ .11月，实验结果：食品091班30克槐米制 得的粗芦丁大约5－8克不等。
子项目二 槐米中芦丁的精制和水解
思考问题
先进行项目二，冷却后等沉沉析出时候，再讨论项目3
❖ 2 10%α-萘酚乙醇溶液 25ml
❖ 3 2%三氯化铁乙醇溶液 20ml
❖ 4、展开剂：醋酸乙酯-甲酸-水（8：1：1）（我们实验需要 配300ml
❖ 5、5组配一瓶配200ml正丁醇-乙酸-水（4：1：5）放到分液 漏斗中，平衡后取上层备用
❖ 配两瓶
❖ 6、 2%AlCl3乙醇溶液 100ml
❖ 每组需要：1个蒸发皿、玻璃漏斗、玻璃棒、10ml试
管8支、2个小烧杯、胶头滴管
❖ 需要配制的试剂:
❖ 1 苯胺—邻苯二甲酸试剂配法：苯胺0.93g和邻苯二甲酸 1.66g溶于100ml水饱和的正丁醇中。 （我们实验需要配 100ml）(用分液漏斗中加入50ml水和 100ml正丁醇震摇后 静置取上层即为水饱和的正丁醇）
子项目一 槐米中芦丁的提取
思考问题
1、加入硼砂目的是什么？ 2、为什么要加入石灰水，在芦丁的提取中能
起到什么作用？ 3、酸沉pH值为什么不宜过低？
❖ 那个天然产物的实验，要算下得率,粗芦丁重 量/槐米的重量； 精制芦丁的重量/粗芦丁的 重量；并且计算下，每克芦丁分子中槲皮素 和糖所占的百分比。
所需的试剂和设备
色 三氯化铁乙醇溶液 准备3支试管（一个空白管，样品用蒸馏水代替，一个是芦丁、一个是槲皮素）
4、黄酮类薄层色谱中常用到AlCl3乙醇溶液显色？显色后一般呈什么颜色？
谱 展开剂：醋酸乙酯-甲酸-水（8：1：1） 2、为什么要加入石灰水，在芦丁的提取中能起到什么作用？
冷却（可以用流动水快速冷却）静置 子项目三 芦丁和槲皮素的鉴别
❖ 1mol/lHCL配法:取约90毫升浓盐酸定容至1000毫升
❖ 注意观察现象：未加热时，瓶内为混悬 液（芦丁不溶于冷水），加热后，混悬 液逐渐变为澄清液（芦丁易溶于热水）， 继续加热，有鲜黄色沉淀析出（槲皮素不 溶于水）
❖ 滤液处理：
❖ 取芦丁水解后的滤液15m1，加 氢氧化钡粉 中和至中性（搅拌下进行）滤去白色的硫酸 钡沉淀(漏斗滤纸），滤液在沸水浴上蒸干后， 加1－2 ml乙醇溶解，作为糖的供试液。 （如果加 氢氧化钡加过量后可以加少量的硫 酸回调pH)
4' O
3 OH
OH
O
槲皮素
OH OH
OH OH
芦丁
槐花
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槐米
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❖ 性能：苦，性微寒。 ❖ 功效：凉血止血、清肝泻火
❖ 应用：用于便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、 衄血、肝热目赤、头痛眩晕等。
❖ 硫酸可以同时沉淀Ba2+ Ba2+ + SO4 2========BaSO4↓ 使芦丁水解后的滤液更 纯净
❖ 学生做的结果：芦丁的得率大约是：20-25%
❖
精制芦丁的得率是大约87%
❖
槲皮素占芦丁分子是：13%到
20
芦丁的提取分离与鉴定
定
性 反
芦丁供试品溶液：取精制芦丁约5mg，用5ml甲 醇（无水乙醇）使溶液，备用。
❖ 5、过滤完之后，先抽掉抽滤瓶接管，后关抽气泵。 （防止倒吸）
子项目三 水解芦丁得到槲皮素
思考问题
1、芦丁是？苷（ N- 苷 、O-苷、S-苷or C苷?
2、苷键的裂解可以用什么方法 ？最常用的方 法是？ 影响酸水解速度的因素有哪些？
2、芦丁水解后的产物是什么？
3、如何进行苷类酸水解操作，如何分离得到 苷元成分？
主要含有芦丁、槲皮素，还含少量皂苷类及多 糖、粘液质等。近代研究表明槐米含芦丁可高 达23.5%，槐花开放后降至13.0%。
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OH OH
芦丁的提取分离与鉴定
HO
O
OH
OH
O
O
O C H 2O
O OH
OH OH
OH OH
芦丁
性状：浅黄色粉末或极细微淡黄色针 状结晶。 溶解度：在冷水中1:10000，沸水中 1:200；冷乙醇中1:200，沸乙醇中 1:60。沸甲醇中1:7。 酸碱性：芦丁分子中具有较多酚羟基， 显弱酸性，易溶于碱液中，酸化后又 可析出。
1、以热水重结晶法精制芦丁的依据是什么？ 2、重结晶的操作要点有哪些？
需要的仪器设备
❖ 每组需要抽滤设备（需要1000ml的抽滤瓶）、 滤纸、 玻璃棒、1000ml烧杯、加热回流设 备（电热套、冷凝管、烧瓶）、小烧杯、浓 硫酸、浓盐酸
提
取
与
精
制
滤液
芦丁的提取分离与鉴定
第一次实验所得滤液 抽滤，少量水洗涤沉淀至中性
沉淀（粗品芦丁）
重结晶
取粗制芦丁3g,加蒸馏水 200-250ml,煮沸10分钟后， 趁热抽滤
残渣
滤液 冷却（可以用流动水快速冷却）静置
精制芦丁（备用） 抽滤， 干燥、称重
❖ 食品091班得到的精制芦丁大约（粗芦丁4克 精制后大约？）
减压抽滤装置
f8124a90a731,利用抽气泵使抽 滤瓶中的压强降低,达到固液分离的目的.
结论及解释
芦丁的提取分离与鉴定
定 盐酸-镁粉反应
黄酮母核
性
将样品溶液1ml，先滴加1－2滴浓盐酸再加入少许
反 镁粉振摇，1-2min内，观察颜色变化。（注意顺序） 应
Molish反应
苷类
将样品溶液1ml，加入与样品等体积10%α-萘 酚溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加适量浓硫 酸（约2ml），至分层注意观察两界面产生的变 化。（不要摇动）
样品：分别取精制的芦丁、槲皮素适量，加95%乙醇溶解成每1ml含1mg的溶液，备用。
( 溶液澄明度和5颜色的变化)3为什么出现这种情况？
1:23。可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、 6能6够g溶运于用1酸00水m解l水的饱操和作的技正术丁对醇槐中米。中O芦H 丁进行水解 冰乙酸、吡啶，不溶于水、氯仿、乙 水解 抽滤 洗涤沉淀 干燥 称重 醚、苯和石油醚等。 5%，槐花开放O后H降至13.O
子项目三 水解芦丁得到槲皮素
实验成品应写明名称、规格、配制者、配制时间及班O H组号，交实验指导教师验收。 槲将皮样素 品占溶芦液丁1m分l，子先是滴：加131%－到2滴20浓盐酸再3加' 入4' 少许镁粉振摇，1-2min内，观察颜色变化。
性状：黄色针状结晶（稀乙醇）。 5子、H项O5目组三配一芦瓶丁配和20槲0m皮l正素O丁的醇鉴-别乙酸-水（4：1：5）放到分液漏斗中，平衡后取上层备用 溶解度：冷乙醇中1:300，热乙醇中 子项目三 水7解芦丁得到槲皮素
芦丁的提取分离与鉴定
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OH
OH
HO
O
OH
OH
O
O
O C H 2O
O OH
用于治疗毛细管脆弱引 起的出血病，并用作高 血压的辅助治疗剂。
OH OH
OH OH
芦丁
芦丁的提取分离与鉴定
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先进行项目二，冷却后等沉沉析出时候，再讨论项目3
4实%验硼指砂导沸教水师2对00破ml损缺少的仪器药品应查O明H原因，按本院校对仪器药品破损处理办法提出处理意见。
应 槲皮素供试品溶液：取粗槲皮素约5mg，用5ml
甲醇（无水乙醇）使溶液，备用。
其余试剂：镁粉、浓盐酸、10%α-萘酚溶液、浓硫酸、2% 三氯化铁乙醇溶液 准备3支试管（一个空白管，
样品用蒸馏水代替，一个是芦丁、一个是槲皮素）
试验记录
试剂
盐酸-镁粉反 应
Molish反应 FeCl3反应
试验现象 空白 芦丁 槲皮素
谱
105℃烘10min显色(显棕色或棕红色斑点)
鉴 定 试验记录：
粘附纸色谱，并计
算斑点的Ｒf值
１２
３
当溶剂走到溶剂前沿6－ 8cm即可，约需40分钟
芦丁的提取与定性反应
薄 样品：分别取精制的芦丁、槲皮素适量，加95%
层 其余试剂：镁粉、浓盐酸乙、10醇%α-溶萘酚解溶液成、浓每硫酸1、m2% l含1mg的溶液，备用。
FeCl3反应
酚羟基
将样品溶液1ml，加入1～2滴2%Fecl3溶液，
观察现象。
子项目四 芦丁和槲皮素的鉴别
思考问题
1、纸色谱的原理及操作要点？ 2、黄酮类化合物有哪些显色方法，各针对哪类黄酮？ 3、黄酮类薄层色谱中，经常用到的吸附剂有哪几类？
各自的原理有什么不同？ 4、黄酮类薄层色谱中常用到AlCl3乙醇溶液显色？显色
பைடு நூலகம்
❖ 装置:布式漏斗,抽滤瓶,胶管,抽气泵,滤纸
❖
过程:
❖ 1、安装仪器,检查布式漏斗与抽滤瓶之间连接是否 紧密，抽气泵连接口是否漏气；
❖ 2、修剪滤纸，使其略小于布式漏斗，但要把所有 的孔都覆盖住，并滴加蒸馏水使滤纸与漏斗连接紧密；
❖ 3、将固液混合物转移到滤纸上；
❖ 4、打开抽气泵开关，开始抽滤。
芦丁的提取分离与鉴定
子项目三 水解芦丁得到槲皮素
注意观察整个过程的现 象！( 溶液澄明度和颜色 的变化)为什么出现这种 情况？
精制芦丁1.5g
加入2%硫酸或者 (1mol/lHCL)100ml，加热 回流30min(从有液滴滴下开 始计时），放冷静置，抽滤
滤液 作糖的检识用
沉淀 粗品槲皮素
水解 抽滤 洗涤沉淀 干燥 称重
❖ 7、硅胶预制板，用之前105度烘半个小时。
子项目三 芦丁 和槲皮素的鉴别
糖 的 鉴 定
残渣
芦丁的提取分离与鉴定
水解所得滤液 20ml
用饱和Ba(OH)2调PH值至 中性，折叠滤纸过滤
滤液 蒸干，放冷 加2-3ml乙醇溶解
供试品溶液 纸色谱
芦丁的提取分离与鉴定
糖
标准品：葡萄糖、鼠李糖
的
展开剂：正丁醇-乙酸-水（4：1：5）上层液
鉴 显色剂：2%AlCl 乙醇溶液，105℃加热至斑 加入2%硫酸或者(1mol/lHCL)100ml，加热回流30min(从有液滴滴下开始计时），放冷静置，抽滤
1、预习实验内容：要明确实验目的与要求。
3
别 点清晰，置紫外灯(365nm)下观察。 冷乙醇中1:200，沸乙醇中1:60。
105℃烘10min显色(显棕色或棕红色斑点)
后一般呈什么颜色？ 5、薄层色谱的操作要点有哪些？
❖ 所需要的药品和设备：氢氧化钡、葡萄糖、鼠李糖、 正丁醇、乙酸、苯胺、邻苯二甲酸盐、无水乙醇、甲
醇、乙酸乙酯、甲酸、AlCl3、镁粉、浓盐酸、 α-萘酚溶液、浓硫酸、三氯化铁、紫外灯、新 华1号滤纸、点样毛细管、水浴锅、硅胶G预制板 11块、分液漏斗 喷雾器几个
纸 色 谱
显色剂：苯胺—邻苯二甲酸试剂。 105℃烘10min显色(显棕色或棕红色斑点)
鉴
定
新华一号滤纸 标本缸 倒入缸内约30毫升的展开剂
芦丁的提取分离与鉴定
糖 的
标准品：葡萄糖、鼠李糖 展开剂：正丁醇-乙酸-水（4：1：5）放到分 液漏斗中，平衡后取上层备用。
纸 色
显色剂：苯胺—邻苯二甲酸试剂。
❖ 具体做法：芦丁水解方法： 取精制芦丁1.5g，研细后 置于250ml圆底烧瓶中，加入2％硫酸或 （1mol/lHCL)100m1，加热回流 30min，瓶中浑浊 液逐渐变为澄清的棕黄色液体，最后生成鲜黄色沉淀。 放冷沉淀，抽滤，保存滤液（应为澄清无色液体）， 作为糖的检查，沉淀物为芸香苷苷元（槲皮素），用 蒸馏水洗至中性，抽干水分，晾干，称量。得粗制槲 皮素，再用乙醇重结晶得精制槲皮素。
实训目的
❖ 能够运用碱溶酸沉法和结晶法的操作技术对 槐米中的芦丁进行提取分离
❖ 能够运用酸水解的操作技术对槐米中芦丁进 行水解
❖ 能够运用纸色谱、薄层色谱法和化学法鉴别 芦丁、槲皮素和糖类化合物
实训结果
得到两个单体化合物
OH OH
HO
O
OH
OH
O
O
O C H 2O
O OH
OH
HO 7 5
OH 3'