生物化学笔记

绪论生化得任务 ⎪⎩⎪⎨⎧功能生化动态生化静态生化静态生化就是研究生物体基本物质得化学组成，结构，理化性质，生物学功能及结构与功能得关系、；动态生化就是研究物质代谢得体内动态过程及在代谢过程中能量得转换与代谢调节规律；功能生化就是研究代谢反应与生理功能得关系也就是了解生命现象规律得重要环节之一、静态生化第一章 氨基酸与蛋白质一、组成蛋白质得20种氨基酸得分类三碱二酸三芳香１、非极性氨基酸包括：色、脯、苯丙、蛋亮、亮、异亮、缬、丙、 ２、极性氨基酸极性中性氨基酸：酪、苏、丝、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱、甘酸性氨基酸：天冬、谷碱性氨基酸：赖、精、组其中：属于芳香族氨基酸得就是：色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸属于亚氨基酸得就是：脯氨酸含硫氨基酸包括：半胱氨酸、蛋氨酸二、氨基酸得理化性质１、两性解离及等电点氨基酸分子中有游离得氨基与游离得羧基，能与酸或碱类物质结合成盐，故它就是一种两性电解质。

在某一PH 得溶液中，氨基酸解离成阳离子与阴离子得趋势及程度相等，成为兼性离子，呈电中性，此时溶液得PH 称为该氨基酸得等电点。

２、氨基酸得紫外吸收性质芳香族氨基酸在280nm 波长附近有最大得紫外吸收峰，由于大多数蛋白质含有这些氨基酸残基，氨基酸残基数与蛋白质含量成正比，故通过对280nm 波长得紫外吸光度得测量可对蛋白质溶液进行定量分析。

３、茚三酮反应氨基酸得氨基与茚三酮水合物反应可生成蓝紫色化合物，此化合物最大吸收峰在570nm 波长处。

由于此吸收峰值得大小与氨基酸释放出得氨量成正比，因此可作为氨基酸定量分析方法。

三、肽两分子氨基酸可借一分子所含得氨基与另一分子所带得羧基脱去１分子水缩合成最简单得二肽。

二肽中游离得氨基与羧基继续借脱水作用缩合连成多肽。

10个以内氨基酸连接而成多肽称为寡肽；39个氨基酸残基组成得促肾上腺皮质激素称为多肽；51个氨基酸残基组成得胰岛素归为蛋白质。

多肽连中得自由氨基末端称为Ｎ端，自由羧基末端称为Ｃ端，命名从Ｎ端指向Ｃ端。

人体内存在许多具有生物活性得肽，重要得有：谷胱甘肽（GSH ）：就是由谷、半胱与甘氨酸组成得三肽。

半胱氨酸得巯基就是该化合物得主要功能基团。

GSH 得巯基具有还原性，可作为体内重要得还原剂保护体内蛋白质或酶分子中巯基免被氧化，使蛋白质或酶处于活性状态。

四、蛋白质得分子结构１、蛋白质得一级结构：即蛋白质分子中氨基酸得排列顺序。

主要化学键：肽键，有些蛋白质还包含二硫键。

２、蛋白质得高级结构：包括二级、三级、四级结构。

１）蛋白质得二级结构：指蛋白质分子中某一段肽链得局部空间结构，也就就是该段肽链骨架原子得相对空间位置，并不涉及氨基酸残基侧链得构象。

二级结构以一级结构为基础，多为短距离效应。

可分为：α-螺旋：多肽链主链围绕中心轴呈有规律地螺旋式上升，顺时钟走向，即右手螺旋，每隔3、6个氨基酸残基上升一圈，螺距为0、540nm。

α-螺旋得每个肽键得Ｎ-Ｈ与第四个肽键得羧基氧形成氢键，氢键得方向与螺旋长轴基本平形。

β-折叠：多肽链充分伸展，各肽键平面折叠成锯齿状结构，侧链Ｒ基团交错位于锯齿状结构上下方；它们之间靠链间肽键羧基上得氧与亚氨基上得氢形成氢键维系构象稳定．β-转角：常发生于肽链进行180度回折时得转角上，常有４个氨基酸残基组成，第二个残基常为脯氨酸。

无规线团：无确定规律性得那段肽链。

主要化学键：氢键。

２）蛋白质得三级结构：指整条肽链中全部氨基酸残基得相对空间位置，显示为长距离效应。

主要化学键：疏水键（最主要）、盐键、二硫键、氢键、范德华力。

３）蛋白质得四级结构：对蛋白质分子得二、三级结构而言，只涉及一条多肽链卷曲而成得蛋白质。

在体内有许多蛋白质分子含有二条或多条肽链，每一条多肽链都有其完整得三级结构，称为蛋白质得亚基，亚基与亚基之间呈特定得三维空间排布，并以非共价键相连接。

这种蛋白质分子中各个亚基得空间排布及亚基接触部位得布局与相互作用，为四级结构。

由一条肽链形成得蛋白质没有四级结构。

主要化学键：疏水键、氢键、离子键五、蛋白质结构与功能关系１、蛋白质一级结构就是空间构象与特定生物学功能得基础。

一级结构相似得多肽或蛋白质，其空间构象以及功能也相似。

尿素或盐酸胍可破坏次级键β-巯基乙醇可破坏二硫键２、蛋白质空间结构就是蛋白质特有性质与功能得结构基础。

肌红蛋白：只有三级结构得单链蛋白质，易与氧气结合，氧解离曲线呈直角双曲线。

血红蛋白：具有４个亚基组成得四级结构，可结合４分子氧。

成人由两条α-肽链（141个氨基酸残基）与两条β-肽链（146个氨基酸残基）组成。

在氧分压较低时，与氧气结合较难，氧解离曲线呈Ｓ状曲线。

因为：第一个亚基与氧气结合以后，促进第二及第三个亚基与氧气得结合，当前三个亚基与氧气结合后，又大大促进第四个亚基与氧气结合，称正协同效应。

结合氧后由紧张态变为松弛态。

六、蛋白质得理化性质１、蛋白质得两性电离：蛋白质两端得氨基与羧基及侧链中得某些基团，在一定得溶液ＰＨ条件下可解离成带负电荷或正电荷得基团。

２、蛋白质得沉淀：在适当条件下，蛋白质从溶液中析出得现象。

包括：a、丙酮沉淀，破坏水化层。

也可用乙醇。

b、盐析，将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，破坏在水溶液中得稳定因素电荷而沉淀。

３、蛋白质变性：在某些物理与化学因素作用下，其特定得空间构象被破坏，从而导致其理化性质得改变与生物活性得丧失。

主要为二硫键与非共价键得破坏，不涉及一级结构得改变。

变性后，其溶解度降低，粘度增加，结晶能力消失，生物活性丧失，易被蛋白酶水解。

常见得导致变性得因素有：加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂、超声波、紫外线、震荡等。

４、蛋白质得紫外吸收：由于蛋白质分子中含有共轭双键得酪氨酸与色氨酸，因此在280nm处有特征性吸收峰，可用蛋白质定量测定。

５、蛋白质得呈色反应a、茚三酮反应：在PH 5-7时，蛋白质与茚三酮丙酮液加热可产生蓝紫色、b、双缩脲反应：蛋白质与多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸酮共热，呈现紫色或红色。

氨基酸不出现此反应。

蛋白质水解加强，氨基酸浓度升高，双缩脲呈色深度下降，可检测蛋白质水解程度。

c、酚试剂反应在碱性条件下，蛋白质分子中得酪氨酸、色氨酸可与酚试剂（含磷钨酸-磷钼酸化合物）生成蓝色化合物、蓝色得强度与蛋白质得量成正比。

七、蛋白质得分离与纯化（一）根据溶解度不同得分离纯化方法1、等电点沉淀2、盐析沉淀3、低温有机溶剂沉淀法4、温度对蛋白质溶解度得影响（二）根据分子大小不同得分离纯化方法1、透析与超滤2、分子排阻层析3、密度梯度层析（三）根据电离性质不同得分离纯化方法1、电泳法2、离子交换层析3、大孔型离子交换树脂（四）根据配基特异性得分离纯化方法1、高度特异性2、可逆性八、蛋白质得含量测定1、克氏定氮法2、福林-酚试剂法3、双缩脲法4、紫外分光光度法5、BCA 比色法6、Bradford 蛋白分析法九、多肽链中氨基酸序列分析a 、分析纯化蛋白质得氨基酸残基组成（蛋白质水解为个别氨基酸，测各氨基酸得量及在蛋白质中得百分组成）↓测定肽链头、尾得氨基酸残基二硝基氟苯法（DNP 法）头端 尾端 羧肽酶Ａ、Ｂ、Ｃ法等丹酰氯法↓水解肽链，分别分析胰凝乳蛋白酶（糜蛋白酶）法：水解芳香族氨基酸得羧基侧肽键胰蛋白酶法：水解赖氨酸、精氨酸得羧基侧肽键溴化脯法：水解蛋氨酸羧基侧得肽键↓Edman 降解法测定各肽段得氨基酸顺序（氨基末端氨基酸得游离α-氨基与异硫氰酸苯酯反应形成衍生物，用层析法鉴定氨基酸种类）b 、通过核酸推演氨基酸序列。

第二章 酶一、酶得组成单纯酶：仅由氨基酸残基构成得酶。

结合酶：酶蛋白：决定反应得特异性；辅助因子：决定反应得种类与性质；可以为金属离子或小分子有机化合物。

可分为辅酶：与酶蛋白结合疏松，可以用透析或超滤方法除去。

辅基：与酶蛋白结合紧密，不能用透析或超滤方法除去。

酶蛋白与辅助因子结合形成得复合物称为全酶，只有全酶才有催化作用。

二、酶得活性中心酶得活性中心由酶作用得必需基团组成，这些必需基团在空间位置上接近组成特定得空间结构，能与底物特异地结合并将底物转化为产物。

对结合酶来说，辅助因子参与酶活性中心得组成。

但有一些必需基团并不参加活性中心得组成。

三、酶促反应得动力学酶促反应得速度取决于底物浓度、酶浓度、PH 、温度、激动剂与抑制剂等。

１、底物浓度１）在底物浓度较低时，反应速度随底物浓度得增加而上升，加大底物浓度，反应速度趋缓，底物浓度进一步增高，反应速度不再随底物浓度增大而加快，达最大反应速度，此时酶得活性中心被底物饱合。

２）米氏方程式 V ＝][][m m ax S K S V a 、米氏常数K m 值等于酶促反应速度为最大速度一半时得底物浓度。

b 、 K m 值愈小，酶与底物得亲与力愈大。

c、 Km值就是酶得特征性常数之一，只与酶得结构、酶所催化得底物与反应环境如温度、PH、离子强度有关，与酶得浓度无关。

d、Vaxm就是酶完全被底物饱与时得反应速度，与酶浓度呈正比。

２、酶浓度在酶促反应系统中，当底物浓度大大超过酶浓度，使酶被底物饱与时，反应速度与酶得浓度成正比关系。

３、温度温度对酶促反应速度具有双重影响。

升高温度一方面可加快酶促反应速度，同时也增加酶得变性。

酶促反应最快时得环境温度称为酶促反应得最适温度。

酶得活性虽然随温度得下降而降低，但低温一般不使酶破坏。

酶得最适温度不就是酶得特征性常数，它与反应进行得时间有关。

４、PH酶活性受其反应环境得PH影响，且不同得酶对PH有不同要求，酶活性最大得某一PH值为酶得最适PH值，如胃蛋白酶得最适PH约为1、8，肝精氨酸酶最适PH为9、8，但多数酶得最适PH接近中性。

最适PH不就是酶得特征性常数，它受底物浓度、缓冲液得种类与浓度、以及酶得纯度等因素影响。

５、激活剂使酶由无活性或使酶活性增加得物质称为酶得激活剂，大多为金属离子，也有许多有机化合物激活剂。

分为必需激活剂与非必需激活剂。

６、抑制剂凡能使酶得催化活性下降而不引起酶蛋白变性得物质统称为酶得抑制剂。

大多与酶得活性中心内、外必需基团相结合，从而抑制酶得催化活性。

可分为：１）不可逆性抑制剂：以共价键与酶活性中心上得必需基团相结合，使酶失活。

此种抑制剂不能用透析、超滤等方法去除。

又可分为：a、专一性不可逆抑制剂：如农药敌百虫、敌敌畏等有机磷化合物能特异地与胆碱酯酶活性中心丝氨酸残基得羟基结合，使酶失活，解磷定可解除有机磷化合物对羟基酶得抑制作用。

b、非专一性不可逆抑制剂：如低浓度得重金属离子如汞离子、银离子可与酶分子得巯基结合，使酶失活，二巯基丙醇可解毒。

化学毒气路易士气就是一种含砷得化合物，能抑制体内得巯基酶而使人畜中毒。

２）可逆性抑制剂：通常以非共价键与酶与（或）酶－底物复合物可逆性结合，使酶活性降低或消失。