微生物的生长和纯培养

合集下载
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
微生物的生长和纯培养
3.平板菌落计数法
技术要求:样品充分混匀,操作熟练快速 (15~20min完成操作),严格无菌操作;
注意事项:每一支吸管只能用于一个稀释度,样品 混匀处理,倾注平板时的培养基温度;
适用范围:中温、好氧和兼性厌氧、能在营养琼脂 上生长的微生物;
误差:多次稀释造成的误差是主要来源,其次还有 由于样品内菌体分布不均匀、以及不当操作。
在微生物学中把从一个细胞或一群相同的细胞 经过培养繁殖而得到的后代,称纯培养。
在微生物学中培养和发酵两个概念是相同。在 工业上大规模的进行微生物培养称为微生物 发酵。
微生物的生长和纯培养
第一节 微生物生长测定
描述不同种类、不同生长状态的微生物生长情况, 需选用不同的测定指标。
(一)微生物细胞数目的检测法 直接法(血球计数板、比例计数法) 间接法(活菌计数法、液体稀释法、膜过滤法) (二)微生物生长量和生理指标测定法 直接法(干重法,堆体积法) 间接法(比浊法,碳、氮含量法,其它生理指标)
微生物的生长和纯培养
10、涂片染色法
应用:可同时计数不同微生物的菌数,适 于土壤、牛奶中细菌计数。
方法:用镜台测微尺计算出视野面积;取 0.1ml菌液涂于1cm2面积上,计数后代入公式: 每ml原菌液含菌数= 视野中平均菌数×涂布面积/视野面积 ×100
×稀释倍数
微生物的生长和纯培养
二、间接测定法
微生物的生长和纯培养
一、直接计数法
1、显微计数法(血球计数板法) 原理:将1cm2×0.1mm的薄层空间划分为400小格,
从中均匀分布地选取80或100小格,计数其中 的细胞数目,换算成单位体积中的细胞数。
微生物的生长和纯培养
适用范围:个体较大细胞或颗粒,如血球、 酵母菌等。不适用于细菌等个体较小的细胞, 因为(1)细菌细胞太小,不易沉降;(2)在 油镜下看不清网格线,超出油镜工作距离。
微生物的生长和纯培养
6、细胞堆积体积测定法
方法:将细胞悬浮液装入毛细沉淀管内,离心, 根据堆积体积计算含菌量。
该法快速、简便,培养液中如有其他固体颗粒, 则误差较大。
也可以用有刻度的离心管离心,通过所得的沉淀 体积推算出细胞的质量。
微生物的生长和纯培养
7、电子计数器法
方法:在计数器中放有电解质及两个电极,将电 极一端放入带微孔的小管,通电抽真空,使含 有菌体的电解质从小孔进入管内。当细胞通过 小孔时,电阻增大,电阻增大会引起脉冲变化, 则每个细胞通过时均被记录下来。因样品的体 积已知,故可以计算菌体的浓度,同时菌体的 大小与电阻的大小成正比。
1、测定细胞的组分含量进行估算 (1)测定DNA的含量 (2)测定蛋白质的含量 (3)测定ATP的含量
微生物的生长和纯培养
2、从培养基中的某营养物的消耗来估算 3、从菌体代谢产物来估算 4、从发酵液的黏度来估算 5、从发酵的放热量估算 6、从发酵液的酸碱度来估算
1ml 1ml 1ml
1m l
1ml
×3
9ml 9ml 1ml
×3
9ml 1ml
9ml
×3
微生物的生长和纯培养
9、薄膜过滤计数法
常用该法测定含菌量较少的空气和水中的微 生物数目。 将定量的样品通过薄膜(硝化纤维素薄膜、 醋酸纤维薄膜)过滤,菌体被阻留在滤膜上, 取下滤膜进行培养,然后计算菌落数,可求 出样品中所含菌数。
该方法方便、快捷,但不能测定含有颗粒的菌液, 对链状和丝状菌无效。
微生物的生长和纯培养
8来自百度文库液体稀释法
液体稀释法
对 样 品 做 10倍 连 续 稀 释 , 从 适 宜 的 3个 连 续 稀 释 度 中 各 取 5m l试 样 , 接 种 3组 共 9支 装 有 培 养 液 的 试 管 中 ( 每 管 接 入 1m l) 。 经 培 养 后 , 记 录 每 个 稀 释 度 出 现 生 长 的 试 管 数 , 然 后 查 M .P .N .表 ( m ost probable num ber, 最 大 可 能 数 ) , 根 据 样 品 稀 释 倍数就可计算处其中的活菌含量。
养物中细胞浓度达到2×109个/ml时,100ml培养 物可得10~90mg干重的细胞。
微生物的生长和纯培养
5、菌丝长度测定法
该法适用于对丝状真菌生长长度的测定。 方法:将真菌接种在固体培养基的平皿中央,定
时测定菌落的直径或面积,直到菌落覆盖整个 平皿。 缺点:不能反映菌丝的纵向生长,不能计算菌落 的厚度和培养集中的菌丝。接种量也能影响结 果,不能反映菌丝的总量。 也可用U型管培养法,该法方便不易污染,但通 气不良。
微生物的生长和纯培养
4、干重测定法
将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离 出来,然后烘干(干燥温度可采用105℃、100℃或 80℃)、称重。一般干重为湿重的10%—20%,而 一个细菌细胞一般重约10-12—10-13g。
该法适合菌浓较高的样品。 如大肠杆菌一个细胞一般重约10–12~10–13g,液体培
特点:快速,准确,对酵母菌可同时测定出 芽率,或在菌悬液中加入少量美蓝可以区分死 活细胞。
微生物的生长和纯培养
微生物的生长和纯培养
微生物的生长和纯培养
2、比浊法(比色发)
原理是在一定范围内,菌悬液中的细胞 浓度与混浊度成正比,即与光密度成正比, 菌数越多,光密度越大。因此,借助于分光 光度计,在一定波长下测定菌悬液的光密度, 就可反应出菌液的浓度。 特点:快速、简便;但易受干扰。
个体生长——微生物细胞个体吸收营养物质,进 行新陈代谢,原生质与细胞组分的增加为个体 生长。
群体生长——群体中个体数目的增加。可以用重 量、体积、密度或浓度来衡量。(由于微生物 的个体极小,所以常用群体生长来反映个体生 长的状况)个体生长个体繁殖 群体生长 群体生长 = 个体生长 + 个体繁殖
微生物的生长和纯培养
第四章 微生物的生长和纯培养
生长与繁殖的概念
——微生物细胞吸收营养物质,进行新陈代谢, 当同化作用>异化作用时,生命个体的重量和体 积不断增大的过程。
繁殖——生命个体生长到一定阶段,通过特定方 式产生新的生命个体,即引起生命个体数量增 加的生物学过程。
微生物的生长和纯培养
发育——从生长到繁殖,是生物的构造和机能从 简单到复杂、从量变到质变的发展变化过程, 这一过程称为发育。
相关文档
最新文档