海姆泊芬光动力治疗BN大鼠脉络膜新生血管的实验探究

卜海交通大学医学院博．ｉ一学位论文网膜下出血，６１点出现玻璃体出血，其中２点为］４０ｍｗ组，其余均属于１６０ｍＷ组。

光凝后ｉｄ，激光光凝部位视网膜不同程度变白，边界稍糊，能量高者呈白垩色，部分因玻璃体出觑影响眼底观察；３ｄ视网膜水肿明显，出血无吸收：７ｄ时１４０ｍｗ和１６０ｍＷ组视网膜仍水肿，出血开始吸收，伴少量色素形成；１４ｄ视网膜水肿基本消退，出血有较明显吸收；２ｌｄ色素明显，疤痕形成，大部分出血吸收，未吸收者大部分属于１６０ｍＷ组（图２）；５６ｄｆｆｙＪ－可见激光瘢痕及明显色素增殖，部分玻璃体出血未完全吸收，色暗红。

激光后不同时间各组眼底情况详见表ｌ，２，３。

图１激光光凝后１ｄ，光凝部位出现不同程度视网膜变白，伴局部出血（】６０ｍＷ）二、ＦＦＡ及ＩＣＧＡ表现图２激光光凝后２１ｄ，光凝部位疤痕形成色素游离，部分出血未吸收（１６０ｒｏＷ）光凝后ｉｄ，ＦＦＡ见各组光凝部位出现圆形、均匀、边界稍糊的荧光着色（图３），ＩＣＧＡ早期显示脉络膜无灌注低荧，晚期为圆形、均匀充盈（图４，５），以１４０和１６０ｍＷ组较为明显；３ｄ造影早期光凝部位ＦＦＡ表现为低荧光，晚期视网膜毛细血管稍扩张，呈云雾状高荧光，光凝斑着色不明显（图６），ＩＣＧＡ无灌注有所改善，但无渗漏出现（图７）；光凝后７ｄ，各组部分光凝点轻度点状荧光渗漏，１６０ｍＷ组ＩＣＧＡ仍见轻度脉络膜无灌注：１４ｄ，荧光渗漏及ＩＣＧＡ充盈点增多增强；２１ｄ荧光渗漏及ＩＣＧＡ充盈数量和强度达到高峰，１４０和１６０ｍＷ组大部分光凝斑可见明显荧光渗漏，典型Ｉｌ卜海交通大学医学院博：ｌ：学位论文者早期即散在出现点状强荧光，晚期继续扩大为边界清晰的高荧光区（图８）：２８ｄ时荧光渗漏的光斑数量和程度基本稳定；５６ｄ时，荧光渗漏点及渗漏范围、程度较前有所减少。

各时间点ＩＣＧＡ变化情况与ＦＦＡ基本～致（图９），有时ＩＣＧＡ充盈的位点较ＦＦＡ略多，但在出血致密的部位ＦＦＡ和ＩｃＧＡ都不能很好显示（图１０，１１）。

所有对照眼ＦＦＡ及ＩＣＧＡ均未见荧光渗漏和充盈。

各组激光后不同时间ＦＦＡ及ＩｃＧＡ情况详见表ｌ，２，３，图１２。

图３光凝后１ｄ，ＦＦＡ显示光凝部位出现圆形、比较均匀、边界模糊的荧光着色图４光凝后ｌｄ，ＩＣＧＡ早期显示光凝部位脉络膜无灌注低荧图５光凝后ｌｄ，ＩＣＧＡ晚期表现为吲形、均匀的染料充盈上海交通大学医学院博十：学位论文图６光凝后３ｄ，ＦＦＡ晚期示扩张毛细血图７光凝后３ｄ，ＩＣＧＡ示无灌注管呈云雾状高荧光，光凝斑着色不明显改善，无染料渗漏及充盈出现幽８光凝后２１ｄ，ＦＦＡ显示光凝部位出现的边界较为清晰的高荧光区图１０光凝后２１ｄ，一光凝位点由于出血量未吸收，影响ＦＦＡ显影（１６０ｍＷ）图９光凝后２１ｄ，ＩＣＧＡ显示光凝部位染料充盈图１１光凝后２１ｄ，明显出血未吸收影响ＩＣＧＡ的显影及观察（１６０ｍＷ）１０三、光学显微镜检查『Ｆ常ＢＮ大鼠视网膜及脉络膜组织结构清晰、完整，ＲＰＥ连续（图１３）。

光凝后１ｄ光凝斑处视网膜结构紊乱，１２０ｍＷ组ＲＰＥ保持完整或轻微破坏，１４０ｍＷ及１６０ｍｗ组则大部分可见ＲＰＥＳＨＢｒｕｃｈ’ｓ膜连续性破坏；３ｄ部分光斑可见浆液性视网膜脱离，视网膜结构紊乱、水肿，色素游离，炎性细胞开始增生，未见ＣＮＶ形成（图１４）；７ｄ可见光凝区脉络膜和ＲＰＥ之削增殖斑块形成，炎性细胞较多，偶见ＣＮｖ结构：１４ｄ光凝斑增厚，色素细胞膜和增生、移行，部分见ＣＮＶ；２ｌｄ视网膜下光凝斑明显增厚，１２０ｍＷ组ＣＮＶ形成不明显（图１５），１４０ｍＷ及１６０ｍＷ组较１２０ｍｗ组光凝斑更大且厚，相应处脉络膜与神经视网膜之Ｉ＇ＨＪ大部分见明显纤维增殖斑块，其中可见大量由血管内皮细胞田成的新生血管腔，部分管腔内可见血浆成分聚集，炎性细胞丌始减少，纤维母细胞７ＦＩ］ＲＰＥ邹］胞进一步增殖（图１６，１７，１８）；２８ｄ纤维血管增殖斑块明显、稳定，ＲＰＥ细胞增殖、迁移并包绕ＣＮＶ（图１９）；５６ｄ，光凝斑局部变薄，仍可见ＣＮＶ，瘢痕组织收缩，导致内层视网膜下陷（图２０）。

图１３正常ＢＮ大鼠视网膜各层及脉络膜组织结构清晰、排列整齐，ＲＰＥ连续、完整圈１４１４０ｍＷ组激光光凝后３ｄ，外颗粒层消失，内颗粒层Ｆ陷，色素上皮层连续性中断，色素颗粒游离，视网膜Ｆ积液形成，视网膜隆起幽１５１２０ｍＷ组激光光凝后２１ｄ，激光斑部位外颗粒层消失，内颗粒层移位，视网膜色素上皮连续性破坏，色素游离，色素上皮Ｆ纤维增生，未见明显ＣＮＶ形成。

图１７１６０ｍＷ组激光光凝后２１ｄ，视网膜内、外颗粒层细胞消失，ＲＰＥ连续性中断，色索游离至视网膜浅层，增生斑块基底宽大，可见较多ＣＮＶ结构。

２４幽１６１４０ｍＷ组激光光凝后２Ｉｄ，激光斑部位内、外颗粒层儿乎消失，视网膜色素上皮连续性破坏，色素细胞增生、游离，纤维细胞增生，斑块较宽大，呈梭形，其中可见明显ＣＮＶ结构。

图１８左阁放大，１６０ｍＷ组激光光凝后２１ｄ，梭形增生斑块中可见较多ＣＮＶ，其中内皮细胞围成的较大的新生血管管腔中可见红细幽１９２８ｄ纤维血管增殖斑块明显、稳定ＲＰＥ细胞增殖、迁移并包绕ＣＮＶ四、免疫组织化学检测Ｉ划２０１６０ｍＷ组激光光凝屙５６ｄ，增生组织斑块不再扩大，仍见ＣＮＶ，由丁瘢痕组织收缩，内层视网膜Ｆ陷『Ｆ常ＢＮ大鼠视网膜组织中无明显ＣＤ３４表达；激光后７ｄ，在光凝斑中偶见ＣＤ３４染色阳性的细胞：２１ｄ及２８ｄＣＤ３４染色阳性的细胞较多较明显（图２１）：５６ｄｌｔ寸ＣＤ３４染色阳性的细胞减少（图２２）。

图２１１４０ｍＷ组２ｌｄ时免疫组织化学可见较多ＣＤ３４染色肿肚细胞及其围成的管图２２１４０ｍＷ组５６ｄ时免疫组织化学见ＣＤ３４染色阶性细胞减少五、透射电镜检查『Ｅ常ＢＮ大鼠视网膜及脉络膜各层超微结构完整，视细胞外节膜盘结构清晰，排列整齐（图２３）；ＲＰＥ细胞表面绒毛突完整，线粒体结构完整，无空泡变性（图２４）。

激光后１ｄ，１２０ｍＷ组ＢＮ大鼠ＲＰＥ与Ｂｒｕｃｈ’Ｓ膜连续性无明显破坏，ＲＰＥ细胞变扁平，水肿，微绒毛结构稍紊乱，视细胞外节膜盘结构尚清晰（图２５）；１４０ｍｗ和１６０ｍＷ组ＲＰＥ色素颗粒碎裂、溢出，线粒体嵴大部消失，较大空泡形成，Ｂｒｕｃｈ。

Ｓ膜连续性破坏，视细胞外节膜盘崩解甚至消失（图２６，２７）。

激光后３ｄ，部分可见浆液性视网膜脱离，炎性细胞丌始出现（图２８）。

７ｄ时见炎性细胞增多，ＲＰＥ增殖，１４０ｍＷ和１６０ｍＷ组较为明显（图２９）。

激光后２１ｄ，１２０ｍＷ组ＲＰＥ细胞脱颗粒，绒毛突结构紊乱、移位，视细胞外节膜盘部分断离，结构破坏。

１４０ｍＷ和１６０ｍＷ组激光光凝部位炎性细胞减少，成纤维细胞增多，胶原组织增多，增殖组织中新生的血管内皮细胞，甚至围成管腔，其中见红细胞（图３０）。

图２３正常ＢＮ大鼠视网膜视细胞外节膜盘结构清晰，排列整齐图２４正常ＢＮ大鼠视网膜视细胞外节膜盘、ＲＰＥ、Ｂｒｕｃｈ’ｓ膜、脉络膜结构清晰，线粒体结构完整，无空泡变性图２５激光后ｌｄ，１２０ｍＷＢｒｕｃｈ’ｓ膜连续性完整，ＲＰＥ细胞变扁平，水肿，微绒毛稍紊乱，视细胞外竹膜盘结构尚清晰圈２７激光后１ｄ，１６０ｍｗ组ＲＰＥ、视细胞外节膜盘、大部分外颗粒层细胞缺如，脉络膜结构直接与残留外颗粒层、外丛状层相接２７图２６激光后１ｄ，１４０ｍＷ组ＲＰＥ色素颗粒碎裂、溢出，微绒毛和视细胞外节膜盘结构紊乱，有空泡形成图２８激光后３ｄ，１４０ｍＷ组激光光凝部位可见浆液性视网膜脱离，ＲＰＥ细胞空泡变性，炎性细胞开始出现｝：海交通人学医学院博ｉ学位论文剀２９激光屙７ｄ，１４０ｍＷ组激光光凝部位周同ＲＰＥ细胞增殖，呈双层排列六、统计学分析结果Ｉ刳３０激光后２１ｄ，１４０ｍＷ组激光光凝部ｆ讧增殖组织中可见新生血管｜＾Ｊ皮细胞形成，甚至围成管腔。

对能量分别为１２０、１４０、１６０ｍｗ的半导体激光光凝ＢＮ大鼠视网膜后在同一时间ＦＦＡ年ＤＩＣＧＡ出现渗漏或充盈的发生率进行方差分析，１２０ｍＷ组与１４０、１６０ｍＷ之间具有显著性差异（Ｐ＜０．０５），而１４０、１６０ｍＷ之间不具显著性差异（Ｐ＞Ｏ．０５）。

讨论机体血管的形成是一个受血管生成调控系统精密调控的复杂过程，正常组织中，促Ｊ缸管生成因子和抑』ｆ『Ｌ管生成因子之间互相制约，维持稳态。

一旦二者失衡，就会直接引起不正常的新生血管形成。

在～些疾病状态女ＬＩＡＭＤ、高度近视、眼组织胞浆菌病时，由于局部微循环条件的变化，各种因子刺激脉络膜毛细血管内皮细胞分裂增殖，以生芽的方式穿过受损的Ｂｒｕｃｈ’ｓ膜，进入ＲＰＥ细胞层或神经视网膜下，成为ＣＮＶ。

由于新生血管的管壁结构不良，通透性较高，极易造成反复出血和渗出，出现浆液性／血性ＲＰＥ脱离或视网膜神经上皮下脱离，继而形成盘状瘢痕，严重影响中Ｌ海交通人学医学院ｆｉ！｝Ｉ。

学位论文较明显，但这时脉络膜、视网膜仍有轻微显影：３０ｍｉｎ后脉络膜、视网膜显影消失。

图３１海姆泊芬注射后１０ｓ，脉络膜火血管平¨视网膜血管同时显影剧３３海姆泊芬注射后１５ｍｉｎ，脉络膜、视网膜显影极弱，ＣＮＶ部位显影仍较明显图３２海姆泊芬注射后３ｍｉｎ，脉络膜、视网膜血管以及ＣＮＶ部位均明显显影图３４海姆泊芬注射后ｌｈ，ＣＮＶ在脉络膜、视网膜黑暗背景下，仍有较明显显影十脉络脱Ｍ刚腆一☆——ＣＮＶ＼＼、０ｏｏｏ０ｓ３０ｓ１１１１１ｉｉ‰ｉｌｌ‘¨＿ｉＩ】ＩＯ．Ｉｉ【１５ｍｉＩＩ３（Ｉｍｉｎｈ２１１ｉｉＩ“ＩＨ３５｝坷蚶汕分叭底向锋造影悄眦二、荧光显微镜下ＢＮ大鼠ＯＮＶ眼组织荧光强度变化时照｝：｜｛ｌＢＮ欠鼠ＣＮＶ眼球绸织切片’比光显微镜Ｈｉ红色荧比ｍ观；实验红【ＢＮ大鼠ＣＮＶ模’彤ｔ静ｊ协汴射海姆泊芬（１０ｍｇ／ｋｇ）后，ＩＲＪ：．＇Ｂ｝ｔｌ织刨片纷荧光，ｄ，ａＱｒ¨Ｊ地２Ｉ：也荧光．静脉注＿｜：｜寸海姆泊＿；５＝甲驯，药物随ＩＩ｝Ｌ管分们于脉络膜、视网膜、ＣＮＶ组纵以及蚍腴、睫：佚体等组钐｛叫＿『，表舰出红色荧光，而无ｍ管胶原组织角膜、巩膜。

Ｉｌ无叫！ｉ．！分们，，随ＩＩ，Ｊ州Ｉ延Ｉ丈前者荧毙强度逐渐减剥，但各组织ｌＪ：ｌ十结构特点荧光减退速度０ｉ，此州角膜、巩膜逐渐ＩＰ，现药物沉积，荧）℃：有所增强（吲３６，３７，３８）。

视网膜、脉络腆以及ＣＮＶ部位不同时削的荧光强度变化如图３９所＿≮。

Ｈ３６海姆泊芬注射斤５ｍｉｎ，视网膜、ＣＮＶ荧光叫亮，脉络膜组纵荧光强度减弱Ｉ割３７海姆泊芬注利后３０ｍｉｎ，ＣＮＶ荧光ｆ’叫亮，视网脱、脓络膜ｆ＿¨织荧光减弱。

向Ｚ迎人学”’｝院Ｉ，ＩＩＩ＋’＃细‘仁文倒３８海州汕芬汁｛１１肝２４ｈ，视Ｈ麒、脉络腆｝ｉｌｊ火，ＣＮＶ仍仃Ｉ剿荧光，玑脱荧光残ｊ７ｆ—＿喀－一ＪＪ水络ｊＪｌ！竹帕蚓３９一芡光显微镜ｒ１：同时间海姆泊芬往ＢＮ人鼠ＣＮＶ分布时６００ｍＷ／ｃｍ２组大部分位点仍见荧光渗漏和ＩＣＧＡ充盈，８００ｍＷ／ｃｍ２组荧光渗漏和ＩＣＧＡ充盈明显好转甚至消失，脉络膜无灌注改善，１０００ｍＷ／ｃｍ２组荧光渗漏和ＩＣＧＡ充盈停止，但脉络膜仍见无灌注低荧区，大血管管壁荧染（图４５，４６，４７）。