局灶性脑缺血模型的建立
局灶性脑缺血动物模型的制备
２ 动 物 种 类 的选 择
２ １ 大 动 物 以 大 动 物 （ 猴 、 、 、 ） 模 型 研 究 脑 缺 ． 如 猪 狗 猫 为 血 的优 点 ： 虽 然 近 年 来 某 些 影 像 学 技 术 已可 用 于 啮 齿 类 小 ①
久 或 临 时 阻 断 大 脑 中动 脉 的 近端 或远 端 。
１ 局灶 性脑 缺血 动物 模型 的 要求
国际 脑 血 管 病 委 员 会 于 １ ８ ９ ４年 对 局 灶 性 脑 缺 血 动 物 模 型 提 出 明 确 要 求 ＿ ， 手 术 方 式 的要 求 为 ： 量 减 小 手 术 对 １对 ］ 尽 脑 的 损 害 ， 免 颅 内 组 织 暴 露 于 空 气 ， 免 颅 内 环 境 稳 定 性 避 避 遭 到 破 坏 。对 模 型 设 计 的 要 求 为 ： 根 血 管 可 反 复 阻 塞 ； 单 该 血 管 引起 的 改 变 可 从 血 流 改 变 等 方 面 进 行 观 察 ； 比 妥 类 药 巴 物 在 血 管 阻 塞 期 间 避 免 反 复 使 用 ， 利 于 神 经 功 能 障 碍 的 观 以 察 ； 验 对 脑 实 质 造 成 的 病 变 应 与 人 类 病 理 改 变 相 似 ； 流 实 血 阻 断后 可 使 血 管 再 通 ， 以恢 复 对 缺 血 区 的再 灌 注 。
神 经 损 伤 与 功 能重 建 ・ ０ ０年 １ ・ ５卷 ・ １期 ２１ 月 第 第
５３
●
［ ＤＯＩ １ ． ８ ０ ｓｓ ｃ． ０ ０ Ｏ ． １ ］ ０ ３ ７ ／ｊｓｊ ２ １ ． １ ０ ５
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综 述
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局 灶 性 脑 缺 血 动 物模 型 的制备 ＊
马 宁 ， 继福 ， 卫 剑 ＃ 蔡 姜
小鼠局灶性脑缺血再灌注模型的建立与评价
小鼠局灶性脑缺血再灌注模型的建立与评价目的建立小鼠局灶性脑缺血再灌注（I/R）模型并予以评价。
方法将昆明小鼠60只随机分为假手术组30只，I/R模型组30只。
改良线栓法制备小鼠大脑中动脉阻塞/再灌注（MCAO/R）模型。
通过神经行为学评分、氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法测定脑梗死比（%）、干湿重法测定脑含水量（%）及HE染色观察脑组织病理改变评价模型可靠性。
结果模型存活率为83.33%，造模总成功率为76.67％。
假手术组的小鼠神经行为学评分为0分，脑梗死比为0，脑含水量（77.29±0.45）%。
I/R模型组的小鼠神经行为学评分为（2.42±0.63）分，脑梗死比为（23.03±3.42）％，脑含水量（83.18±1.65）%，均较假手术组明显增高（P＜0.01）；病理检查出现典型脑梗死病理改变。
结论改良线栓法成功建立简便、可靠的小鼠局灶性I/R模型。
[Abstract] Objective To establish and evaluate the focal cerebral ischemia-reperfusion (I/R) model in mice. Methods Sixty Kunming mice were randomly divided into the sham group (n=30) and the I/R model group (n=30).The middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) model was established by the improved intraluminal filament technique in mice.The reliability of the model was evaluated by the neurologic behavior score,cerebral infarction rate determined by triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining method,brain water content determined by dry-wet method,and brain histopathological change observed. Results The survival rate and total success rate of the model was 83.33% and 76.67％respectively.In the sham group,the neurologic behavior score was 0 point,the cerebral infarction rate was 0,and the brain water content was(77.29±0.45)%.In the I/R group,the neurologic behavior score was(2.42±0.53)points,the cerebral infarction rate was (23.03±3.42)％,and the brain water content was(83.18±2.35)%,and compared with the sham group,the above-mentioned indicators in the I/R model group were all markedly increased (P＜0.01).At the same time,the typical pathological change of cerebral infarctionwas also observed in the I/R group. Conclusion The simple and reliable focal cerebral I/R model has been successfully established by improved intraluminal filament technique in mice.[Key words] Mice;Cerebral ischemia-reperfusion;Middle cerebral artery occlusion;Animal model缺血性脑血管病约占全部脑血管病的80%，具有高发病率、高患病率、高死亡率、高致残率、高复发率的特点，已成为严重危害人类健康的三大疾病之一[1]。
大鼠局灶性脑缺血模型的建立
缺 血 侧 ， 侧 为 正 常 对 照 。 １ 水 合 氯 醛 腹 腔 内 注 射 麻 醉 ， 右 用 Ｏ 游 离左 侧 颈 总 动脉 （ Ａ） 甲状 腺 上 动脉 及 其 细 小 分 支 ， ＣＣ ， 分
～ １ 者 ， 水 肿 不 明 显 。光 镜 观 察 ： 组 左 侧 大 脑 皮 层 可 见 分 脑 Ｃ
高 ， 起 人 们 对 溶 栓 疗 法 的 重 新 认 识 。 目 前 适 用 于 溶 栓 研 有 不 足 之 处 。我 们 采 用 并 改 良 Ｏｖ ｒ ａ ｒ ｅ ｇ ａ ｄ ＫⅢ 等 的 颈 内 动 脉 注 入 自体 血 凝 块 的 方 法 ， 作 制
大 鼠 局 灶 性 脑 缺 血 模 型 ， 模 型 具 有 与 人 类 脑 缺 血 极 其 相 似 此
的特 点 ， 适 用 于溶 栓研 究 ， 报 道如 下 。 最 现
１ 材 料 与 方 法
散 在 的 小 缺 血 灶 ， 经 细 胞 轻 度 肿 胀 ， 神 经 元 胞 核 及 胞 浆 神 但
分 为 Ｃ 、 Ｃ Ｃ 、 共 ３组 （ ： 指 长 度 为 ２ ｍ 的 血 栓 栓 子 制 注 Ｃ ａ ｒ
隙 增 大 ， 质 间 隙 略 增 大 。缺 血 ２ ｈ组 缺 血 区 淡 染 的 同 时 缺 白 ４
血 局部 可 见 神经 元 变性 ， 固性 坏 死 ， 胞 周 围间 隙增 大 ， 凝 细 胞 浆 均匀 呈 嗜伊 红 改变 ， 核 结构 不清 ， 色加 深 。 期 的缺血 胞 染 此 范围最 大 ， 显 著 的 改变是 此 期 缺血 组 织 与正 常 组织 的 分界 最 最 清 晰可 辩 ， 质疏 松 ， 显淡 染 ， 大 量空 泡形 成 。 血 ４ｈ 白 明 有 缺 ８ 组 缺 血 中 心 区 可 见 凝 固 性 坏 死 ， 经 元 胞 浆 与 胞 核 结 构 不 神
老年和成年大鼠局灶性脑缺血后SVZ和SGZ细胞增殖分化的比较实验
东南大学硕士学位论文老年和成年大鼠局灶性脑缺血后SVZ和SGZ细胞增殖分化的比较实验研究姓名：刘俊华申请学位级别：硕士专业：人体解剖学指导教师：晋光荣20040510 老年和成年大鼠局灶性脑缺血后ＳＶＺ和ＳＧＺ细胞增殖分化的比较实验研究摘要目的：通过建立大鼠局灶性脑缺血模型，观察正常和脑缺血情况下老年大鼠和成年大鼠侧脑室下区和齿状回颗粒下区细胞增殖分化的时间规律和差异，分析缺血对神经再生的影响以及脑老化对神经再生的作用。
材料与方法：通过右侧大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型：用５一嗅脱氧尿核苷（ＢｒｄＯ）标记ＤＮＡ合成期（Ｓ期）细胞即增殖细胞；用苏木素一伊红染色观察缺血后神经元坏死情况；用ＢｒｄＵ免疫组化单标、ＢｒｄＵ／ＮｅｕＮ和ＢｒｄｌＪ／ＧＦＡＰ免疫组化双标法，检测老年大鼠和成年大鼠局灶性脑缺血９０ｍｉｎ后再灌注的不同时间段上（分别为３ｄ、７ｄ、１４ｄ、２１ｄ、２８ｄ），侧脑室下区和齿状回颗粒下区细胞的增殖与分化的状况。
结果：１．实验组动物术后都出现不同程度左侧肢体偏瘫。
ＨＥ染色：缺血后３ｄ缺血侧尾壳核出现细胞坏死区，随缺血时间的延长，坏死区面积逐步增大，至缺血后期，坏死灶进一步扩大，尾壳核、顶颞叶皮质出现明显坏死液化区，袭明短暂性局灶性脑缺血模型的制作是成功的。
２．正常老年大鼠侧脑室ＳＶＺ区和海马齿状回ＳＧＺ区的增殖细胞数明显少于正常成年大鼠。
３．脑缺血后，成年大鼠和老年大鼠缺血侧和缺血对侧的ＳＶＺ区出现细胞增殖的加强，３ｄ时增殖细胞明显增加，７ｄ时达到高峰，之后逐渐减少：两组相应时间点间相比较，老年大鼠的增殖细胞数明显低于成年大鼠。
在老年大鼠ＳＧＺ区增殖细胞７ｄ时明显增加，１４ｄ达到高峰。
之后逐渐下降。
成年大鼠ＳＧＺ区则未见明显变化。
４．增殖细胞定向分化研究结果显示：老年和成年大鼠ＳＶＺ有部分增殖细胞表达神经胶质标记物（ＧＦＡＰ），其阳性率是老年大鼠（１２．５６％）多于成年大鼠（６．２９％）；仅有极少量表达神经元标记物（ＮｅｕＮ），其阳性率是老年大鼠（０．９８％）明显少于成年大鼠（２．４９％）。
缺血性脑卒中的动物模型完整版
缺血性脑卒中的动物模型HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】缺血性脑卒中研究中的动物模型想要进行一项基础研究，动物模型必不可少。
缺血性脑卒中研究如火如荼，动物模型也多种多样，有哪些常用的动物模型，以及它们各自的特点就成了研究人员在选择模型时十分关注的问题。
在缺血性卒中过程中，最终的梗死体积和神经功能预后受到多种因素的影响，例如缺血的持续时间、缺血的严重程度、侧枝循环、系统的血压以及梗死产生的原因和位置。
此外，年龄、性别和相对复杂的药物遗传背景也会对其产生影响。
因为卒中是如此复杂的一个疾病，因而动物模型也往往只能覆盖其中个别方面的特点。
虽然中风是一种复杂的疾病，但其存在一些共同的特点，这使得我们有机会用实验来模拟卒中的发生。
缺血性脑卒中的一个重要特点是进展，这也解释了缺血半暗带的存在。
当血流量降至基线值的15-20%以下时，只要几分钟就会产生不可逆的脑损伤核心，并且迅速相周围发展。
其周围的脑组织血流减少得相对较轻，所以此时神经功能缺失而组织结构却是完整的。
但如果脑血流不能恢复，那么这些所谓的半暗带组织就会被纳入梗死核心区。
最常用的一种模型是啮齿动物的线拴法大脑中动脉闭塞模型（MCA），方法是将普通的血管内缝线或特制的线拴放入大脑中动脉开口处，从而达到阻塞血管造成血流量减少的目的。
这种方法的优点是：不需要开颅的手术，并且通过拔出线拴的方法还可以达到在特定时间再通血管的目的，虽然瞬间的血管开通与人体一般的病理生理过程相去甚远，但与近来应用越来越广泛的机械取栓治疗的病理过程不谋而合。
因此，虽然在模型的制作上存在一些问题，但仍是目前最广受认可的一种脑卒中动物模型。
另一种常用的方法是用各种方式直接地闭塞血管，分为永久地闭塞血管（如凝断）和暂时闭塞血管（如结扎），但大多都需要开颅的手术操作。
使用内皮素－1（一种强血管收缩剂）可以诱导短暂的局灶性脑缺血，其产生的病灶可以分布于脑组织任何位置，常常被用于制作腔隙性梗死的模型制作。
TREM2通过激活Th17细胞调节神经免疫炎症并保护局灶性脑缺血再灌注损伤
doi：10.3969/j.issn.1000-484X.2023.09.006TREM2通过激活Th17细胞调节神经免疫炎症并保护局灶性脑缺血再灌注损伤①陈海云颜博何超明张磊②（三亚中心医院，海南省第三人民医院神经内科，三亚 572000）中图分类号R743.3 文献标志码 A 文章编号1000-484X（2023）09-1822-07［摘要］目的：探讨髓细胞触发受体2（TREM2）调节局灶性脑缺血再灌注损伤和神经免疫炎症的作用和机制。
方法：对小鼠的大脑行中动脉闭塞术（MCAO）以建立局灶性缺血再灌注损伤模型，分为假手术组（sham组）和MCAO组（n=6）。
小干扰RNA（siRNA）构建TREM2的沉默质粒（TREM2 siRNA组），构建TREM2过表达质粒（pcDNA-TREM2组），以及各自的阴性对照（CON siRNA）组和pcDNA组分别感染MCAO小鼠。
采用IL-17抑制剂苏金单抗（SEC）联合pcDNA-TREM2处理MCAO组（MCAO+pcDNA-TREM2+SEC组）。
qPCR和Western blot检测TNF-α、IL-1β、IL-17和TREM2表达；免疫荧光法检测脑部TREM2定位；TTC染色评价脑损伤程度；流式细胞术检测Th17细胞比例。
结果：TREM2表达于小胶质细胞，且MCAO组TREM2表达均增加（P<0.05）。
沉默TREM2诱导神经元细胞凋亡（F=206.971，P=0.001）、梗死体积和神经功能障碍评分升高（均P<0.05），TNF-α和IL-1β的mRNA水平升高，IL-10降低（均P<0.05）。
过表达TREM2导致TNF-α、IL-1β表达降低，而IL-10和IL-17表达及Th17阳性细胞比例升高（均P<0.05）。
与MCAO+pcDNA-TREM2组比较，MCAO+pcDNA-TREM2+SEC组的Th17细胞比例降低、神经元百分比降低，脑损伤程度增加，TNF-α、IL-1β表达升高，IL-10和IL-17表达降低（均P<0.05）。
线栓法大鼠脑缺血再灌注模型的制备
线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型的方法研究马贤德1孙宏伟1 柴纪严1 赵金茹1（1 辽宁中医药大学，辽宁沈阳 110032；）摘要①目的建立一种比较系统，操作简单，成功率高的大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注动物模型，达到只要读者根据本文所述的方法操作就能制作出MCAO再灌注模型的目的。
②方法成年健康雄性 SD大鼠40只，参照Longa法并适当改进建立MCAO模型20只，假手术组20只。
本文将详细叙述手术过程以及再灌注时间点的合理选择。
最后利用行为学测试、四氮唑(TTC)染色对模型成功与否进行判定。
③结论线栓法是一种操作简单的制备MCAO 再灌注动物模型的方法，并且此方法的再灌注效果较为明显。
关键词动物模型；脑缺血；再灌注；线栓法Establishment a model of rat ischemia-reperfusion injury with intraluminal sutureMa Xian-de1 Sun Hong-wei1 Chai Ji-yan1 Zhao Jin-ru1(1.Liaoning University of Chinese Traditional Medicine, Shenyang, 110032) Abstract: Objective To establish a model of rat ischemia-reperfusion injury, in terms of the model, the operation will be simple, and the achievement ratio will be high. Methods: 40 Male Sprague-Dawley ( SD ) rats were separated into two groups randomly: 20 were model of rat ischemia-reperfusion injury based on Longa method, and the other 20 were sham-operated group. The process of the operation and the selection of different time point following ischemic-reperfusion were discussed in the paper. What’s more , the model was appraised by behavioral test and Triphenyl Tetrazolium Choloride（TTC）Staining. Conclusion: The operation of intraluminal suture method is very simple for the establishment of model of rat ischemia-reperfusion, what’s more, the effect of reperfusion is very obvious.Key words: Animal Model, ischemia, reperfusion, intraluminal suture脑缺血再灌注动物模型是研究缺血性脑血管病的一条重要途径，因为脑缺血再灌注动物模型具有很好的重复性并能最大程度模拟人类缺血性卒中的发生。
大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中脑水肿机制的研究的开题报告
大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中脑水肿机制的研究
的开题报告
题目：大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中脑水肿机制的研究
摘要：
近年来，脑卒中已成为影响人类健康和寿命的常见疾病之一。
局灶
性脑缺血再灌注损伤，是脑卒中的重要类型之一，其病理生理机制复杂，包括缺血缺氧、氧化应激、神经元死亡，以及免疫炎症反应等。
其中，
脑水肿作为一种普遍的临床现象，其机制仍然不完全清楚。
因此，本研究将通过建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，根据
血液脑屏障（BBB）破坏、脑内渗出和水通道蛋白（AQP4）表达等方面，探究缺血再灌注损伤中脑水肿的机制和发病过程。
本研究将选择健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠，将其随机分为对照组（简称C组）和实验组（简称I组）。
I组大鼠将通过左侧大脑中动脉暂时性阻塞法（MCAO）建立局灶性脑缺血再灌注损伤模型，C组将接受假手术操作。
通过进行Nissl染色、BBB通透性检测、免疫荧光染色、AQP4 mRNA和蛋白表达分析等方法，研究实验组中脑水肿的机制及其发生的过程。
本研究的预期结果是，通过对大鼠实验组和对照组的对比分析，探
讨大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中脑水肿的机制和发病过程，为脑卒中
相关疾病的预防和治疗提供一定的理论基础。
关键词：局灶性脑缺血再灌注损伤；脑水肿；血液脑屏障；水通道
蛋白；大鼠。
脑卒中动物模型的建立与比较
Chinese Journal of Rehabilitation Medicine, Aug. 2011, Vol. 26, No.8
物质对脑梗死的作用，也可以用于抑制血小板集聚及神经保 护药物的研究。还可用于缺血再灌注损伤的研究以及各种 脑保护药物防治效果的评价；Ⅳ型可用于多发性脑梗死及抗 血小板集聚药物的研究，但不利于长期脑缺血模型的研究。 目前应用于临床药物研究的主要是Ⅰ型和Ⅲ型。
光化学法脑缺血模型的优点有：①动物模型的成功率 高，在严格控制实验条件的情况下基本可达 100%，其中Ⅳ型 的死亡率较高；②无需开颅，损伤相对较小且死亡率较其他 模型低；③因损伤的程度与光照的强度程正相关，可通过控 制实验参数任意改变梗死灶的大小、位置和严重程度，且梗 死灶的重复性和稳定性较好；④通过对实验模型的选择，可 用于对缺血再灌注损伤、抗血小板药物及缺血半暗带等的研 究；⑤四种模型从不同方面模拟了人类的脑卒中，需根据实 验目的进行选择。此法适于研究抗血小板、抗血栓形成药物 和血管内皮细胞保护剂的疗效。这种模型无须开颅，动物存 活时间长适于慢性脑缺血研究而且皮质梗死部位可任意选 择，为皮质功能定位研究提供了条件。其缺点是：它与人类 常见的脑栓塞存在差异，而且是终末动脉永久性闭塞，妨碍 扩血管药的治疗观察。 1.4 微栓子栓塞法
780
2011 年，第 26 卷，第 8 期
脑出血模型已被广泛采用。将 SD 大鼠麻醉局部消毒后固定 于脑立体定位仪上，颅骨钻孔，定位右侧尾壳核，颅骨钻孔将 微量注射器针头垂直插入脑组织右侧尾壳核内，用微量注射 器缓注 0.5μl 胶原酶到尾壳核内[29—30]。适用于研究血肿及脑 水肿在脑出血中的作用及评价脑出血后神经功能的恢复状 况和药物的治疗效果。
该模型具有以下优点：①适于做长期的皮质及皮质下结 构的病理观察，同时该模型造成皮质缺血的部位、大小恒定；
短暂性局灶性脑缺血轴突损伤定量研究方法
ｐｅｅｃ ｓｏｅ１ ｒ ｂｅｃ ＳＯ ｒｓｎｅ（ｃｒ ）ｏ ｓｎｅ（ＣＤ ０）ｏ ａｃｍｕ ｔｄＡ Ｐｉ ａｏａ ｓｅｌ ｇ．Ｓｏｅ ｆｒ ｎｉｉ ａ ｓ ｅ ｗ ｒ ａ ｅ ｆ ｃｕ ｌ ｅ Ｐ ｘｎｌ ｗ ｌｎ ｓ ｃｒｓ ｄｖ ｕｌ ｉｓ ｅ ａ ｎ ｉ ｉ ｏ ｄ ｔ ｅ
总 的 Ａ Ｐ分数和神经元核周 体损伤体 积分别 为 ４ ．５±３２ Ｐ ７７ ．４和 １５ ２ ２ ．８ ｍ ４ ．９± ５ ３ ｒ ＂ ａ 。缺血性损伤体积小的大
鼠 Ａ Ｐ免疫反应增加也较小（ ０ ０ ） Ｐ Ｐ＜ ． １ 。结论
作用 。
种检测轴突缺血性损伤的形 态学方法具有可重复性 、 灵活性 、 敏感性 ， 可用 于评估干预措施对 白质病理变化 的
【 关键 词】 脑白质 ； 脑缺血 ； 类淀粉样前体蛋 白； 轴突 ； 大鼠
中图 分 类 号 ： ７３ ３ Ｒ ４ ．２ 文献 标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ：０ ６３ １ ２ １ ） ３０ １－５ １０ —５ Ｘ（０ ０ ０ ． ６０ － ２
Ｑｕ ｎｉ ｔ ｎａｓｓｍｅ ｔ ｆ ｘ ｎ ｉ ａ ｇ ａ ｓ ｎ ｃｌ ｅｅｒｌｓｈ ｍｉ Ｗ Ｎ ｉｕｎ Ｚ Ａ ｕｍ ｉ ａ ｔａｉ ｓｅｓ ｎ ｏ ａ ｄｍａ ｅ ｎｔ ｎ ｉ ｔｏａ ｒｂａ ｉ ｅ ａ ｔ ｏ ｏａ ｉ ｒ ｅ ｆ ｃ ｃ Ａ ＧＬ－ ａ ， Ｈ Ｏ Ｙ —ｅ， ｊ Ｓ Ｉ ｕ— ｉｇ ｅａｔｅ ｔ ｆ ｅｒ ｏｙ Ｄ ｘ ｇＨ ｓｉ ｌ ｆｈ ａｉ ｌ ｅ ｉ ｌ ｎｖｒｉ ， ｅ ｉｇ１２ ０ ，Ｃ ｉａ Ｈ ｅ ｎ ．Ｄ ｐｒｎｎ ｕｏ ｇ ， ａｉ ｏｐ ａ ｏ ｅＣ ｐｔ ｄｃ ｉｅｓｙ Ｂ ｉｎ ０ ６０ ｈｎ Ｘ ｍ ｌ ｏＮ ｌ ｎ ｔ ｔ ａＭ ａＵ ｔ ｊ
大鼠局灶性脑缺血耐受模型的建立与评价
１６ 病理观 察 及 凋亡 细 胞 检 测 选 取 每组 剩 余 ４只 ． 大 鼠， 心脏 灌注 生理 盐水 、％ 多 聚 甲醛 各 约 ２０ ｌ断 ４ ０ｍ ，
头 取脑 ， 前 囟后 ３～ ｒ 部 分 ，Ｏ ／ 取 ６ｍ ａ ４ ｇ Ｌ多 聚 甲醛 后 固 定 后脱 水 、 明 、 蜡 、 埋 、 片 ， 厚 ５ 透 浸 包 切 片 ｍ。 Ｈ Ｅ染 色后 镜 下 观 察 组 织 病 理 变 化 。 细 胞 凋 亡 检 测 采 用
片， 间距 ２ ｍ，７Ｃ水 浴 ， 光 ， 积 分 数 ０ ０ Ｔ Ｃ磷 ａ ｒ ３￣ 避 体 ． １Ｔ 酸 缓 冲溶液 中染 色 ３ ｍｎ 蒸 馏 水 冲洗 ，０／ ０ ｉ， ４ ｇＬ多 聚 甲 醛 固定 后数 码 相机 照 相 ， 得 各 层 梗 死 面 积 。梗 死 体 测
积 ＝各 层梗 死 面积 之和 ×层 间 隔 。
弃标 准 ： 线栓 插入 深度 不 足 ， 明显 神 经功能 缺损 表现 无 或症 状很 ； 手术 时 出血 较 多 、 状 严 重 ； 网膜 下 腔 症 蛛
制 作对探 讨脑 缺 血耐受 的分子 机制 及如 何启 动脑 缺血
时机体 的 内 源 性 脑 保 护 作 用 有 重 要 意 义 。本 文 参 照 Ｚ ａＬ ｎａ等 ¨ 的大脑 中动 脉 （ Ａ） 栓 法 并 加 以改 ｅ—ｏ ｇ ＭＣ 线 进， 选取 成本低 、 系 纯 合 性 好 、 人 类 有 类 似脑 血 管 种 与 解 剖特点 的 Ｗｉ ａ 大 鼠 ， 后 两 次 线 栓 法 建 立脑 缺 血 ｓｒ ｔ 先
予暴 露 Ｃ Ａ及分 叉 处 ， 以上 两 组 的 １ Ｃ 与 ｄ亚组 同 时 间
出为研 究缺 血性 脑损 伤机 制 和探索 新 的 中风 防 治措施
线栓法制备不同体重KM小鼠局灶性脑缺血／再灌注模型的建立及评价
（ Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍ ａ ｃ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ，Ｋ ｅ ｙ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｏ ｆ Ａ ｎ ｔ ｉ － Ｉ ｎ ｌ ｆ ａ ｍｍ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｉ ｍ ｍ ｕ ｎ ｏ ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ，Ｍ ｉ ｎ ｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ｏ ｆ Ｅ ｄ ｕ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ；
线栓 法制 备小 鼠脑缺 血／ 再灌 注模 型 ， 并 探 讨影 响该模 型 稳定 性 的因素 。方法 Ｋ Ｍ 小 鼠
１ ０ ０只 ， 雌雄各半 ， 体重 ２ Ｏ一３ ９ ｇ ， 分别将雌雄 Ｋ Ｍ 小 鼠随 机 分 为 假 手 术 组 （ ｎ＝２ Ｏ ） 和 不 同体 重 实 验 组 （ ｎ＝８ ０ ） 。其
【 关键词 】 小鼠； 局灶性脑缺血／ 再 灌注模 型 ； 线栓法 ；体重
【 中圈分类号 】Ｑ ９ ５ － ３ ３
【 文献标识码 】
【 文章编号 】１ ０ ０ ５ － ４ ８ ４ ７ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ２ － ０ ０ ３ ９ － ０ ６
Ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ５—４ ８ ４ ７ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ２ ． ０ ０ ８
Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ，Ａｎ ｈ ｕ ｉ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ，Ｈｅ ｆ ｅ ｉ ２ ３ ０ ０ ３ ２，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
Ｅｓ ｔ ａ ｂｌ ｉ ｓ ｈｍ ｅ ｎｔ ａ ｎｄ ｅ ｖ ｌｕ ａ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ａ ｍｏ ｄｅ ｌ ｏ ｆ ｆ ｏ ｃ ａ ｌ ｃ ｅ ｒ ｅ ｂ ｒ ａ ｌ
局灶性脑缺血动物模型制作步骤及方法
局灶性脑缺血动物模型制作步骤及方法大脑中动脉(Middle cerebral artery, MCA)是人类脑卒中的多发部位，大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型被普遍认为是局灶性脑缺血的标准动物模型，主要方法有线栓法、电凝法、光化学法和血栓栓塞法。
1线栓法(thread occlusion of the middle cerebral artery)(1)复制方法雄性SD大鼠，体重为250～300g。
经腹腔注射水合氯醛(350～400mg/kg体重的剂量)或戊丨巴丨比丨妥丨钠(50～60mg/kg体重的剂量)麻醉，仰卧位固定，剃除颈部毛发，手术区域皮肤常规消毒。
切开右侧颈部皮肤，钝性分离胸锁乳突肌和胸骨舌骨肌，显露右侧OCA及迷走神经。
结扎CCA、颈外动脉(exterial cerebral artery, ECA)及其分支动脉。
分离右侧颈内动脉(interial cerebral artery, ICA)，至鼓泡处可见其颅外分支翼腭动脉，于根部结扎该分支。
在ICA 近端备线、远端放置动脉夹，在ECA结扎点(距颈内、颈外动脉分叉5mm处)剪一小口，将一直径为0.22～0.249mm(4-0号)的尼龙线经ECA上剪口插入。
插入前加热处理使插入端变钝(也可在尼龙线头端用L-多聚赖氨酸涂抹后置肝素中浸泡，使成功率增高，梗塞面积恒定)，并做好进入线长度标记。
扎紧备线，松开动脉夹，将尼龙线经ECA、ICA分叉处送入ICA，向前进入17～19mm时会有阻挡感，说明栓线已穿过MCA，到达大脑前动脉的起始部，堵塞MCA开口，造成脑组织局部缺血。
1～3h后可缓慢退出尼龙线实施再灌注。
(2)模型特点线栓法的优点为：无须开颅，动物损伤小，MCA闭塞效果较为理想，目前该模型被认为是惟一能观察到再灌流的局灶性脑缺血模型，近年来较为常用。
注意点：线选择极为重要，较细时不容易穿到MCA，且缺血不明显；较粗时缺血重，容易造成实验动物的死亡。
颈内动脉线栓法建立小鼠局灶性脑缺血再灌注模型及磁共振表现
结果
22h-t2-im8
22h-t2-im9
22小时后T2WI图显示右侧的皮层和基底节区异 常高信号改变，可见占位效应。
结果
22h-DWI-im6
22h-DWI-im7
22小时后DWI图显示右侧皮层及基底节区 高亮异常信号改变。
结论
使用C57小鼠线栓栓塞颈内动脉的方法可以模 拟暂时性缺血的脑卒中。 关于栓塞后各个时间段小鼠的脑部组织状况， 仍需进一步检测以供进一步研究。
感谢各位老师同学的观看，欢迎点评与指正！同时感谢 在项目实施阶段给予我们指导与帮助的老师、师兄师姐 和同学们！
手术：
1. 仰卧位固定于手术显微镜下，取正 中切口。 2. 游离右侧颈总动脉(CCA)、颈内动 脉(ICA)及颈外动脉(ECA)。使用高频 电刀电凝并切断甲状腺动脉及枕动脉， 分别结扎翼颚动脉及颈外动脉远心端。
3. 用两个微血管夹，分别夹闭ICA、 CCA，在ECA结扎线近心端旁剪口， 插入线栓，电凝ECA远端，将线插入显微手术台下 实验器械：显微手术器械
小鼠大脑动脉结构示意
A.occipitalis 枕动脉 MCA 大脑中动脉 ICA 颈内动脉 PPA 翼颚动脉 ECA 颈外动脉 CCA 颈总动脉
线栓栓塞法造模
对象：C57小鼠
麻醉：采用1％戊巴比妥钠生理盐 水溶液(0．06 ms／g, 腹腔注射)麻 醉。使用反馈式水温调节系统使动 物直肠温度维持在(37.0±0.5)℃。
颈内动脉线栓法建立小鼠局灶性脑缺 血再灌注模型及磁共振表现
随着生活水平的提高和饮食结构、生活方式的改变，急 性缺血性脑卒中已成为目前威胁人类健康的主要疾病之一。 缺血性脑卒中即为广义的脑梗塞，是指突然发生的脑组 织局部供血动脉血流灌注减少或血流完全中断，停止供血、 供氧、供糖等，使该局部脑组织崩解破坏。 原因： ①动脉粥样硬化所致血栓栓塞； ②心脏来源的栓子所致脑栓塞； ③各种原因引起的血管炎、血管损伤以及外伤等。
【国家自然科学基金】_局灶性脑缺血模型_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140802
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神经生长因子 神经再生 神经元突触 磷酸化周期素依赖性激酶 磷酸化rb 磁共振成像,弥散 督脉 盐酸川芎嗪 白藜芦醇 电生理 电刺激小脑顶核 甘珀酸 炎症 活性氧/代谢 氨基酸 模型 树突棘 时间窗 改进 抗氧化 抗原,多瘤病毒转化 投药,鼻内 抓取测试 扩散性抑制 成纤维细胞生长因子 慢性期 急性期 微透析技术 微循环 干细胞移植 巢蛋白增殖 局灶脑缺血再灌注 局灶脑缺血/再灌注 局灶性脑缺血模型 局灶性脑缺血再灌注 局灶性脑缺血/治疗 局灶性脑缺血/再灌注 学习 大脑中动脉阻塞 大脑中动脉闭塞 大脑中动脉栓塞 大脑中动脉 大脑 咯利普兰 半胱天冬酶-3 化合物exp-2528 功能恢复 前肢 剂量-效应关系 冰片 再灌注损伤/病理学 再灌注损伤/治疗 内皮素 共移植体
针刺 1 通腑醒神胶囊 1 过氧化物酶体增殖物激活受体α 1 诱导型一氧化碳合酶 1 诱导 1 记忆 1 表皮生长因子 1 行为学 1 行为 1 血脑屏障 1 血管紧张素ⅱ 1 蛋白质组学 1 蛇床子素 1 苍术苷 1 自由基清除剂 1 自由基 1 脾淋巴细胞 1 脑脉通 1 脑缺血损伤 1 脑缺血/针灸疗法 1 脑缺血/病理学 1 脑缺血/治疗 1 脑缺血/再灌注损伤 1 脑缺血/再灌注 1 脑缺血/中医药疗法 1 脑组织/病理学 1 脑源性神经营养因子 1 脑微血管内皮细胞 1 脑出血 1 胶质源酸性纤维蛋白 1 胶质源性神经营养因子 1 胶质原纤维酸性蛋白 1 老龄鼠 1 老年 1 老化 1 羟乙葛根素 1 缺血性卒中 1 缺血再灌注损伤脑,jak-stat信号通路 1 缺血再灌注损伤 1 缺血再灌注 1 缺血/再灌注损伤,脑 1 缺血-再灌注损伤 1 细胞外基质 1 细胞周期 1 线粒体转换孔 1 线粒体氯通道蛋白 1 纹状体 1 突触素p38 1 突触 1 穴位特异性 1 穴,百会 1 穴,大椎 1 神经行为学评分 1 神经胶质原纤维酸性蛋白 1
局灶性缺血性脑卒中大鼠海马Notch信号通路的动态表达.
生堡医堂苤壶垫！生！Ｑ旦垫旦筮塑鲞筮１２塑盟型塑型』堡塾ｉ坠：Ｑ！垫坠竺垫：塑！：ｙ些婴：壁垒！！局灶性缺血性脑卒中大鼠海马Ｎｏｔｃｈ信号通路的动态表达郭怡菁张志琚王少华隋毓秀孙奕滕皋军【摘要】目的观察局灶性缺血性脑卒中大鼠海马Ｎｏｔｃｈ信号通路的表达变化，初步探讨该通路在局灶性缺血性脑卒中后神经再生的调控作用。
方法大脑中动脉阻塞（ＭＣＡＯ）法建立大鼠局灶性脑缺血模型，通过Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法和实时ＲＴ．ＰＣＲ法分别于卒中后１９ｄ和２８ｄ检测各实验组及对照组大鼠海马Ｎｏｔｃｈ，及其配体Ｊａｇｇｅｄ。
的蛋白、基因表达。
结果卒中后１９ｄ，缺血组Ｎｏｔｃｈｌ蛋白和基因表达均分别高于对照组（均Ｐ＜０．０５），缺血组２８ｄ的Ｎｏｔｃｈ。
蛋白和基因表达显著低于１９ｄ的蛋白和基因表达（均Ｐ＜０．０１）。
缺血组１９ｄ和２８ｄ的Ｊａｇｇｅｄ。
蛋白表达（Ｐ＜０．０５）和基因表达（Ｐ＜０．０５）高于对照组，但２８ｄ的Ｊａｇｇｅｄ．蛋白和基因表达与１９ｄ相比差异无统计学意义（均Ｐ＞０．０５）。
结论局灶性缺血性卒中大鼠Ｎｏｔｃｈ信号通路呈现动态表达变化，提示该通路可能参与了对卒中后内源性神经前体细胞增殖、分化的调控。
【关键词】脑梗死；信号传导；神经再生ＤｙｎａｍｉｃｃｈａｎｇｅｓｏｆｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮｏｔｃｈｌａｎｄＪａｇｇｅｄｌｉｎｔｈｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓａｆｔｅｒｆｏｃａｌｉｓｃｈｅｍｉａ：ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｗｉｔｈｒａｔｓＧＵＯＹｉ－ｊｉｎｇ’．ＺＨＡＮＧＺｈｉ－ｊｕｎ，ＷＡＮＧＳｈａｏ—ｈｕａ，ＳＵＩＹｕ—ｘｉｕ，ＳＵＮＹｉ，ＴＥＮＧＣｎｗ－ｊｕｒＬ’ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙ，ＺｈｏｎｇｄａＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｆｉｌｉａｔｅｄｔＯＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；ＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎｏｆＣｅｒｅｂｒａｌＶａｓｃｕｌａｒＤ诂ｅａｓｅｏｆＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９，ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＺＨＡＮＧＺｈｉ－ｊｕｎ。
卒中动物模型的研究进展
卒中动物模型的研究进展尹春雨;朱东亚【摘要】Stroke is one of the major diseases in the world due to its the highest morbidity, disability rate and mortality. The pathological mechanism and prevention treatment are still research focus. Animal model of stroke is of great significance in the pathogenesis and its prevention of the research. This paper aims to summarize the preparation method of traditional and modified models of stroke and its advantages and disadvantages.%卒中是当今世界上发病率、致残率和致死率最高的重大疾病之一,其病理机制以及预防治疗措施仍然是目前研究的热点.卒中动物模型对于卒中的病理机制及其防治的研究具有重要意义.本文针对传统的和改良的卒中动物模型的制备方法及其优缺点进行综述.【期刊名称】《中国卒中杂志》【年(卷),期】2017(012)004【总页数】6页(P364-369)【关键词】卒中;动物模型;方法【作者】尹春雨;朱东亚【作者单位】211166 南京南京医科大学药学院药理学教研室;211166 南京南京医科大学药学院药理学教研室【正文语种】中文卒中是影响全球人类健康的重大疾病之一，它具有较高的发病率、致残率和死亡率。
卒中的发病机制相当复杂，按其机制的不同可以分为缺血性和出血性，针对卒中，目前尚缺乏有效的预防和治疗手段。
显然，建立并完善与临床相关性高的卒中动物模型以及对其深入研究，是揭示卒中病理机制的有效途径，这对卒中新药研发有着十分重要的意义。
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（ 四 军 医 大学 实 验 动 物 中心 ， 安 第 西 ７０ ３ ） １０ ２
【 要】 目的 克隆肝素结合 血凝 素（ Ｂ Ａ 基因 ， 在大肠杆菌 中进 行表达 和纯化。方法 用 Ｐ Ｒ方法从 摘 ＨＨ ） 并 Ｃ
６５ ｒ ． ２ 、 ａ Ｃ２ 量 显 著 增 高 ， 含量 显 著 降低 。病 理 显 示 有 明显 的缺 血 症 状 。 对 照 组 无 明 显 行 为 改 变 ， ． ｃ ３ Ｈ Ｏ Ｎ 、ａ ３ ｎ 含 Ｋ 梗 死 灶 不 明显 。结 论 三氯化铁可有效建立兔脑局灶性缺血模型。
【 关键 词 】 兔 ； 灶 性 缺 血 ； 型 ； 氯化 铁 局 模 三
克隆了 Ｈ Ｈ Ｂ Ａ基 因 ， 对 其 在 Ｅ． ｌ中 进 行 了 表 达 ，Ｄ －Ａ Ｅ及 Ｗｅｔ ｌ 分 析 表 明 表 达 产 物 正 确 。 通 过 亲 和 并 ｃｉ ｏ Ｓ ＳＰ Ｇ ｓｒ ｂ ｔ ｅ ｎ ｏ 层 析 法 得 到 ２ Ｄ纯 化 蛋 白 ， ８ｋ 与文 献报 道 相 符 。结 论 成 功 获 得 了纯 化 的 Ｈ Ｈ Ｂ Ａ蛋 白 ， 进 一 步 研 究 Ｈ Ｈ 为 Ｂ Ａ蛋 白 的
Ｏ０ ） （ ） ．５ ；２Ａ组 的血 清 尿 素 含 量 显 著 高 于 Ｂ组 和 ｃ组 （ Ｐ＜ＯＯ ）但 Ｂ组 和 ｃ组 之 间 差 异 不显 著 （ ＞ ． ） （ ） ３ ．１ ， Ｐ ００ ；３ 在 ５ 个 时 间 点 分别 测定 各组 小 鼠血 中乳 酸 含 量 ， 中 Ａ、 组 小 鼠的 血 乳 酸 含 量 显 著 高 于 Ｃ组 （ 其 Ｂ两 Ｐ＜００ ）且 游 泳 后 休 ．５ ，
息 ３ ｉ， ０ｍ Ａ组小鼠的血乳 酸含量 又显著高于 Ｂ组（ Ｐ＜００） ．５ 。结论
用 ， 不具有统计学意义 。 但
频谱 水对 ｓＦ级 Ｋ Ｐ Ｍ小 鼠抗疲劳有一劳作用 ；Ｆ Ｋ Ｐ 级 Ｍ小 鼠
频谱 水对 Ｓ Ｆ级 Ｋ 小 疲 劳作 用 的实 验研 究 Ｐ Ｍ 鼠抗
袁 进 ，王 玉 珏 ，顾 为 望
（ 方 医 科 大 学 实 验 动 物 中心 ， 州 南 广 ５０ １） １５５
【 摘要 】 目的
统 计 学 分 析 。结 果
探讨频谱水对 ＳＦ级 Ｋ Ｐ Ｍ小 鼠的抗疲劳作用 。方法
致 病 机 理 提 供 了实 验 依 据 。
【 关键词】 结核分枝杆菌 ； Ｂ Ａ； Ｈ Ｈ 表达 ； 纯化
局灶 性 脑 缺 血 模 型 的建 立
肖育 华 ，詹 纯 列 ，许 达 ，唐 成 国
（ 州 军 区 广 州 总 医 院 实 验 动物 中心 ， 州 ５０ １） 广 广 １００
结 核 分 枝 杆 菌 Ｈ ７ ｖ基 因组 扩 增 出 Ｈ Ｈ ３Ｒ Ｂ Ａ基 因 片 段 ， 隆 至 ｐ Ｄ ８Ｔ载 体 中 ， 列 测 定 正 确 后 ， 其 亚 克 隆 到 表 达 克 Ｍ １． 序 将
载 体 ｐ Ｅ０ Ｑ ８Ｌ并 在 大 肠 杆 菌 Ｄ ５ Ｈ ａ中表 达 ， 达 蛋 白 经 Ｓ ＳＰ Ｇ及 Ｗｅｅ ｌ 分 析 后 ， 和 层 析 法 纯 化 蛋 白 。结 果 表 Ｄ －Ａ ｓｒ ｂ ｔ ｔ ｎ ｏ 亲
将７ ５只雄性 Ｓ Ｆ级 Ｋ Ｐ Ｍ小 鼠随机地分成
３组 ， 别 给 予 ３ 不 同 的实 验 处 理 ，０ｄ 测 定 受 试 小 鼠 负 重 游 泳 时 间 、 清 尿 素 、 糖 原 和 血 乳 酸 含 量 ， 进 行 分 种 ３ 后 血 肝 并
统 计 分 析结 果 显 示 ：１ 负 重 游 泳 致 死 时 间 和 肝 糖 原 含 量 ， Ｂ Ｃ３组 之 间 差 异 不 显 著 （ （） Ａ、 、 Ｐ＞
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中国 比较医学杂志 ２０ ０ ８年 １ Ｏ月第 １ ８卷第 １ ０期
Ｃ ｉ ＪＣｍ ｅ ，Ｏ ｔ ｅ ０ ８Ｖ １１． ｏ １ ｈｎ ｏ ｐＭ ｄ ｃ ｂｒ ０ ， ｏ．８ Ｎ ． ｏ ２ ０
结核分枝 杆菌肝素结合血凝 素（ Ｂ Ａ） 白 ＨＨ 蛋 在 大肠 杆 菌 中的表 达 、 化 和鉴 定 纯
【 摘要】 目的
探讨局灶性缺血模型的建立方法 。方法 随机将 ２ ６只新西 兰兔 分成对 照组与缺 血组 ， 利用
兔 大 脑 中动 脉 栓 塞 后 ， 见 不 同 程 度 的对 侧 肢 体 不 全 偏 瘫 ， 死 体 积 为 １．１ 可 梗 ８３ ±
三氯 化 铁 溶 液 刺 激 实 验 组 兔 大 脑 中动 脉 ， 缺 血 ２ 处 死 ， 定 脑 组 织 Ｈ Ｏ、 ａ Ｋ Ｃ２ 量 ， 测 定 脑 梗 死 范 在 ４ｈ 测 ２ Ｎ 、 、 ａ 含 并 围 ， 察模型建立的效果。结果 观