ELISA方法类型及原理

ELISA方法类型及原理
ELISA是一种重要的实验技术，用于检测和定量分析蛋白质、抗体、荷尔蒙、生物学分子等。

ELISA的全称是酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），它通过将目标物（如抗原或抗体）与特定的酶标记物结合，然后利用染色反应来检测、定量或分析目标物。

根据目标物的不同，ELISA可以分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA、间接竞争ELISA和反向ELISA等方法。

1.直接ELISA
直接ELISA是最简单的一种ELISA方法。

它将目标物直接吸附在固相载体表面，然后加入与目标物特异性结合的酶标记抗体来检测目标物。

具体步骤包括：将目标物溶液加入固相载体中，使目标物吸附在载体表面；加入特异性酶标记抗体，与目标物结合；通过染色反应来检测酶的活性和目标物的定量。

2.间接ELISA
间接ELISA是较常用的一种ELISA方法。

它将目标物首先吸附在固相载体表面，然后加入与目标物特异性结合的初级抗体，再加入与初级抗体特异性结合的酶标记二抗来检测目标物。

具体步骤包括：将目标物溶液加入固相载体中，使目标物吸附在载体表面；加入特异性的初级抗体，与目标物结合；加入与初级抗体特异性结合的酶标记二抗；通过染色反应来检测酶的活性和目标物的定量。

3.竞争ELISA
竞争ELISA是一种用于定量测定样品中目标物含量的ELISA方法。

它
将目标物预先包被在固相载体表面，然后加入与目标物特异性结合的酶标
记抗体和待测样品，测定抗体与固相载体表面的目标物竞争的程度来定量
目标物的含量。

具体步骤包括：将目标物溶液加入固相载体中，使目标物
包被在载体表面；加入特异性酶标记抗体和待测样品；通过染色反应来检
测酶的活性和竞争程度来定量目标物的含量。

4.间接竞争ELISA
间接竞争ELISA结合了间接ELISA和竞争ELISA的原理。

首先将目标
物吸附在固相载体上，然后加入与目标物特异性结合的初级抗体，再加入
与初级抗体特异性结合的酶标记二抗和待测样品。

酶标记二抗与初级抗体
竞争结合目标物，其竞争程度与目标物在样品中的浓度成反比。

具体步骤
与间接ELISA类似，不同之处在于加入了待测样品和竞争反应。

5.反向ELISA
反向ELISA是一种用于检测抗体的ELISA方法。

它将待测抗体吸附在
固相载体表面，然后加入与抗体特异性结合的抗原和酶标记的二抗。

具体
步骤与直接ELISA类似，不同之处在于抗体和抗原的位置对调。

ELISA的原理基于抗原与抗体的特异性结合。

在ELISA实验中，固相
载体通常采用多孔板、磁珠等物质，它们能够与抗原或抗体发生特异性结合。

酶标记物一般选用的酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）等，它们能够与抗体结合并产生染色反应。

通过比色反应，可以测定酶的
活性，进而定量目标物的含量。

ELISA的灵敏度高、操作简单、结果可靠，广泛应用于生物医学研究和临床诊断等领域。