中检所抗生素合作项目剖析

7.045500e+003 6.931824e+003 7.564622e+003 6.179543e+003 7.354279e+003 6.611101e+003 7.235574e+003 7.915245e+003 1.306059e+004 9.585852e+003 9.506094e+003
红霉素分析比较
色谱柱：Hypersil BDS 250×4.6 mm，5μm 流动相:以0.2 mol/L磷酸铵缓冲液 （取磷酸二氢铵1.15g，加水50ml溶解，用三乙胺调节pH值至6.5） -0.2mol/L四甲基氢氧化铵溶液（取25%四甲基氢氧化铵14.6ml，加水100ml，用磷酸调节pH值至6.5，再加水 稀释至200ml） —乙腈—水（5∶20∶30∶45） 检测波长为215nm
Rs=26, USP=1.26
吉他霉素的分析
吉他霉素又称柱晶白霉素（Leucomycin），含有多个组 分，其基本结构由16元环大环内酯（macrolide）、碳 霉素（carbomycin）和碳霉氨糖（L-arcanose）造成， 各组分间的差别仅为16元环大环内酯环上3位的酰基和碳 霉氨糖部分4位的酰基（R2）不同。酰基基团越大，极性 越小；反之，则极性越大，-COCH3的极性大于COCH2CH(CH3)2。
0.1
0.0
6.665
9.612
17.518
0.0
-0.1 0 10 20 Minutes 30 40 50
-0.1
Volts
注射用阿莫西林钠 -- Xbridge Shield RP18
流动相A为0.05mol/L磷酸盐缓冲液 （取0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，用2mol/L氢氧化钠溶液调节 pH值至5.0）-乙腈（99：1）； 流动相B为0.05mol/L磷酸盐缓冲液（pH 5.0）-乙腈（80：20） ； 检测波长为254nm， 流速为每分钟1.0ml Xbridge Shield RP18 4.6*150mm 5um 时间（分钟） 流动相A（％） 流动相B（％） 0 92 8 25 0 100 40 0 100 41 92 8 55 92 8
0.010
8 1 23 4 5
7.364 8.367 10.712 11.706 31.168
7
19.563
9
33.109
0.005

0.000
-0.005 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00 32.00 34.00 36.00 38.00 40.00 42.00 44.00 46.00 48.00 50.00 分钟
RP18
-- Symmetry Shield
要求：阿莫西林峰和相邻杂质峰的分离度应大于1.5
流动相A为0.05mol/L磷酸盐缓冲液 （取0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，用2mol/L氢氧化钠溶液调节 pH值至5.0）-乙腈（99：1）； 流动相B为0.05mol/L磷酸盐缓冲液（pH 5.0）-乙腈（80：20） 检测波长为254nm， 流速为每分钟1.0mlSymmetry Shield RP18 4.6*150mm 5um 时间（分钟） 流动相A（％） 0 92 8 25 0 100 40 0 100 41 92 8 55 92 8
麦迪霉素A1
R1=COCH2CH3 R2=H R2=COCH2CH3
R3=COCH2CH3 R3=H
吉他霉素A6： R1=H
挑战:化合物偏碱性---色谱柱寿命和方法的稳定性
麦白霉素-- XBridge C18
W2996 254.0nm-1.2 - W2996 PDA 254.0 nm at 1.2
17.969
0.025
XBridge C18 150 × 4.6 mm，5μm 6 × 4.6 XBridge C18 150 mm ， 5 μ m 流动相: 0.2mol/L甲酸铵溶液（用三乙
胺调节pH值7.3*）-乙腈（62:38） 检测波长:232nm ,柱温30℃；
0.020
0.015
AU
*调整到碱性条件方法会更简化
头孢克洛胶囊-XbridgeC18
头孢克洛胶囊-UPLC方法
色谱柱:Acquity BEH C18 2.1*50mm 1.7um
注射用氨苄西林钠HPLC方法
柱温：25度 流动相： A=10mMH2PO4+0.06%HAC,pH=3. 24 B=CAN 色谱柱:Waters XBridge C18 4.6X150mm 5um
Volts
流动相B（％）
Detector A (220nm) AMOXICILLIN-hot-60 amoxilin024 Retention Time 0.2
RS=13.8
25.317 26.325 26.733
0.2
20.032 20.765 21.462
0.1
2.615 2.862 3.762 3.995 4.965 5.508
2
3.263
UK1
1075354
2.19
4.055420e+003
1.528213e+000
3
3.633
U
388367
0.79
5.083768e+003
1.813646e+000
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
4.096 4.572 5.141 5.808 6.657 7.605 8.869 10.230 11.967 12.518 14.542
0.008 0.006 0.004 0.002 0.000 -0.002 -0.004 -0.006 -0.008 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 28.00
色谱柱:XBridge Shield RP18 150(mm)×4.6(mm)，5μm 流动相：0.1mol/Ll磷酸氢二铵缓冲液 （取磷酸氢二铵13.21g，加水1000ml溶解， pH值为8.03）—乙腈（65 : 35）， 柱温：35 C，检测波长：215nm
2.327734e+000 2.302866e+000 2.501327e+000 2.511063e+000 2.810159e+000 2.777504e+000 3.203421e+000 3.112274e+000 3.963449e+000 1.188065e+000 3.663883e+000 9.285713e-001 1.008531e+000 8.484718e-001 9.194027e-001 9.891186e-001 9.223205e-001 1.053348e+000 7.647092e-001 1.078718e+000 1.039613e+000
红霉素--XBridge Shield RP18
0.024 0.022 0.020 0.018 0.016 0.014 0.012 0.010
7.031
Usp =1.04
3.243 11.804 25.407
14.00 分钟 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00
AU
9.472
红霉素
1.红霉素分子由3部分组成：德 糖胺克拉定糖和红霉素内 脂,经分离得到红霉素A、B 、C等组分。 2.红霉素Ａ抗菌活性最强，是 主要的药用成分。红霉素C 为主要杂质，毒性比红霉 素A大2倍活性为红霉素Ａ 的20％。
挑战: 红霉素属碱性化合 物，在该色谱条件下峰 形拖尾现象严重。 红霉素及其杂质紫外吸收 较弱
麦白霉素
麦白霉素（Meleumycin）为麦迪霉素A1（Mydecamycin A1）及吉他 霉素A6（Kitasamycin A6）（柱晶白霉素（Leucomycin））两个组分 为主的混合物，含麦迪霉素A1不得低于35.0％
H3C CH3 CH2CHO HO N CH3 O O OR1 CH3 O O CH3 O CH3 OH CH3 R3 H3CO O OR2
Rs(A5,A6)=3.15
吉他霉素--Symmetry C18
色谱柱:Symmetry C18 4.6*150mm 5um
NH4OAc:MeOH:ACN=30: 65:5柱温60℃
检测波长为231nm
流速:1ml/min
实验结果
色谱柱编 号 保留时间 峰名称 面积 面积归一化含量 理论板数 分离度 拖尾因子 1 3.002 V 1856767 3.78 7.673000e+003
注射用氨苄西林钠UPLC方法
Waters UPLC ,TUV 流动相： A=10mMH2PO4+0.06%HAC,PH=3.24 B=CAN 色谱柱:Waters BEH C18 2.1X50mm 1.7um
抗生素分析 2005版药典方法及改进
注射用阿莫西林克拉维酸钾 -symmetry
背景: 药典2005版难重现的方法
要求:1主成分峰与相邻杂质的分离,2阿莫西林闭环二聚体的分离
条件: Symmetry Shield RP18 4.6X250mm流动相A 为pH 6.0的0.01mol/L磷 酸二氢钾溶液，流动相B为pH 6.0的0.01mol/L磷酸二氢钾溶液- 乙腈(20:80)， 流速为每分钟1.0ml，线性梯度洗脱；检测波长为254nm。
CH3 R3O H3CO OR1 H CH3 O O CH2CHO O OR4 O H H O CH3 H H3C H N CH3 CH3 H OH O CH3 H OR2
H
吉他霉素组分-XBridge Shield RP18
以0.1mol/L醋酸铵溶液-甲醇-乙腈（40:55:5）为流动相； 柱温60℃； 检测波长为231nm 流速:1ml/min XBridge Shield RP18 4.6*250mm 5um
头孢克洛胶囊-药典规定方法
要点:相关杂质的分离
以0.78%磷酸二氢钠溶液(取磷酸二氢钠7.8g，加水溶解并稀释至1000ml，用磷酸调 节pH值至4.0)为流动相A，以0.78%磷酸二氢钠溶液(pH4.0)-乙腈(55∶45)为流动相B ，流速为每分钟1.0ml，检测波长为220nm，线性梯度洗脱： 时间（分钟） 流动相A（％） 流动相B（％） 0 95 5 30 75 25 45 0 100 50 0 100 51 95 5 61 95 5
A9 A8 A7 A6 A5 A4 A1 A3 UK2 A13 UK3
2752126 731218 2352630 1083646 20993021 8465308 4019000 1306178 257600 3200659 632018
5.60 1.49 4.79 2.21 42.74 17.24 8.18 2.66 0.52 6.52 1.29