动物组织基因组 DNA 提取试剂盒(心、肝、肌肉)(磁珠法)使用说明
动物基因提取实验报告
![动物基因提取实验报告](https://img.taocdn.com/s3/m/f009d140640e52ea551810a6f524ccbff121caf9.png)
一、实验目的1. 掌握动物组织基因组DNA提取的操作方法。
2. 理解并应用琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA的方法。
3. 学习DNA纯度与含量的测定方法。
二、实验原理动物组织基因组DNA提取的原理主要是通过破碎细胞膜和核膜,释放出DNA分子,然后通过特定的方法去除杂质,最终获得高纯度的DNA。
实验中,常用的破碎细胞膜和核膜的方法有:- 使用十二烷基磺酸钠(SDS)和蛋白酶K等试剂,使蛋白质变性并溶解细胞膜中的脂质,导致细胞裂解。
- 利用溶菌酶、蜗牛酶等酶类,水解细胞壁和细胞膜,释放DNA。
获得细胞裂解物后,通过加入苯酚和氯仿等有机溶剂,使蛋白质变性并形成有机相和水相,从而分离核酸和蛋白质。
由于DNA不溶于有机溶剂,因此可以通过离心分离获得含有DNA的上清液。
上清液中加入无水乙醇,DNA会从溶液中沉淀出来。
将沉淀的DNA溶解于TE缓冲液中,即可获得高纯度的DNA。
琼脂糖凝胶电泳是检测DNA纯度和大小的重要手段。
DNA分子在琼脂糖凝胶中,在电场的作用下,根据分子大小和所带电荷的不同,在凝胶中移动的速度不同,从而实现分离。
DNA纯度可以通过紫外吸收法测定,根据DNA在260nm处的吸光度值计算DNA的纯度。
三、实验材料与试剂1. 实验材料:动物肝脏组织样本2. 试剂:- DNA提取试剂盒- 十二烷基磺酸钠(SDS)- 蛋白酶K- 溶菌酶、蜗牛酶- 苯酚、氯仿、异丙醇- 无水乙醇- TE缓冲液- 琼脂糖- 电泳缓冲液- 标准DNA分子量标记物四、实验器材与仪器1. 器材:离心管、移液器、电泳槽、凝胶成像系统、PCR仪等2. 仪器:超净工作台、恒温培养箱、高速离心机、微波炉等五、实验步骤1. 取动物肝脏组织样本,称重后加入适量提取试剂,进行细胞破裂和蛋白质水解。
2. 加入苯酚和氯仿,混合均匀,离心分离,取上清液。
3. 上清液中加入无水乙醇,混合均匀,离心分离,收集沉淀。
4. 将沉淀溶解于TE缓冲液中,即为提取的DNA。
基因组DNA提取试剂盒 说明书
![基因组DNA提取试剂盒 说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/e681d24676232f60ddccda38376baf1ffd4fe351.png)
基因组DNA 提取试剂盒使用说明书此说明书仅适用于此说明书仅适用于基因组基因组DNA 提取试剂盒提取试剂盒,,使用前请务必仔细阅读说明书有关内容使用前请务必仔细阅读说明书有关内容,,若有任何疑问若有任何疑问,,欢迎致电厦门欢迎致电厦门致致善生物科技有限公司生物科技有限公司((4006618810*************)进行咨询进行咨询,,您也可以登录我们公司的网站您也可以登录我们公司的网站(( )了解相关信息或者通过E-mail ( ****************) 与我们进行沟通与我们进行沟通。
一 产品简介基因组DNA 提取试剂盒采用本公司自行研制的磁珠,用于从抗凝全血、新鲜或冻存组织、培养细胞、石蜡包埋组织、唾液、培养细菌等一系列不同样品中分离、纯化高质量的基因组DNA。
我们根据磁珠的独特分离作用,提供了一个极其简便的操作程序:样品裂解、磁珠吸附、洗涤以及洗脱。
在最适的试剂及操作条件下,可获得高质量DNA。
该方法具有简便、快捷、高效等特点,整个提取过程无须使用苯酚、氯仿等有机溶剂。
品名规格 货号 基因组DNA 提取试剂盒100T 4hk001裂解液DL 120ml ×2 磁粒 40ml 洗涤液 50ml ×5 洗脱液 45ml 缓冲液HTL 20ml ×1 二硫苏糖醇(DTT ) 10管,0.18g/管 说明书 1份储存条件储存条件::本试剂盒所有试剂(除DTT 外)均可以室温保存,应避免阳光直射。
当室温低于15℃时,裂解液中可能有结晶析出,38℃水浴加热几分钟,恢复澄清后即可使用,提取效率不受影响。
DTT 需要于冰箱4℃保存。
本试剂盒有效期为12个月, 请于有效期内使用。
安全信息:试剂中含刺激性化合物,操作时应小心,避免沾染皮肤,眼睛和衣服,若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医疗咨询。
三 使用者自配试剂DTT 溶液使用浓度为1mol/L 。
磁珠法动物组织总rna提取试剂
![磁珠法动物组织总rna提取试剂](https://img.taocdn.com/s3/m/a8e28649b42acfc789eb172ded630b1c59ee9b3f.png)
磁珠法动物组织总rna提取试剂磁珠法动物组织总RNA提取试剂是一种常用于从动物组织中提取总RNA的试剂。
总RNA是指包括mRNA、tRNA、rRNA等各种类型的RNA,它们在细胞中起到重要的生物学功能。
动物组织总RNA的提取对于研究基因表达、生物学功能以及疾病研究等领域具有重要意义。
下面将详细介绍磁珠法动物组织总RNA提取试剂的原理、操作流程以及优缺点。
一、原理:磁珠法动物组织总RNA提取试剂的原理是利用磁珠在磁场中的作用来实现RNA的分离和纯化。
磁性珠子(磁珠)是一种微米级别的颗粒,表面含有特异性结合分子(如寡聚核苷酸、抗体等),可以与RNA特异性结合。
通过结合物的磁场作用,可以将RNA与其他杂质分离开,并进行纯化。
二、操作流程:磁珠法动物组织总RNA提取试剂的操作流程通常可以分为样品处理、细胞破碎、RNA结合、磁珠分离、洗涤和洗脱等步骤。
(一)样品处理:首先要将收集到的动物组织样品进行样品处理,如清洗、离心等,以去除表面的杂质并提取细胞。
(二)细胞破碎:将经过样品处理的细胞进行破碎,以释放细胞内的RNA。
目前常用的破碎方法包括机械破碎、酶解和超声破碎等。
选择不同的破碎方法需要根据所研究的组织类型、细胞数量以及目标RNA 的适应性来确定。
(三)RNA结合:将破碎后的细胞溶液与磁珠结合试剂加入,并进行混匀。
通过磁性珠子表面的特异性结合分子与RNA结合,使得RNA能够与磁珠结合。
(四)磁珠分离:通过磁力,将含有磁性珠子的RNA溶液与其他不具有磁性的杂质分离。
可以利用磁力器将磁性珠子收集到一侧,将无磁性的溶液倒掉,从而分离纯化RNA。
(五)洗涤:为了去除残留的污染物,可以进行洗涤步骤。
将洗涤缓冲液加入含有磁珠的管中,再次使用磁力使磁性珠子沉淀,倒掉上清液,然后重复该步骤多次以保证洗涤的彻底性。
(六)洗脱:最后,用洗脱缓冲液将RNA从磁珠上洗脱下来。
将洗脱缓冲液加入磁性珠子所在的管中,轻轻摇晃管子,使RNA溶解在洗脱缓冲液中,从而得到纯化的RNA溶液。
通用基因组DNA提取试剂盒使用说明书
![通用基因组DNA提取试剂盒使用说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/20a3ed914693daef5ef73d6e.png)
北京索莱宝科技有限公司通用基因组DNA提取试剂盒使用说明书货号:D2100规格:50T/100T保存:室温(15℃-25℃)干燥保存,复检期12个月,2℃-8℃保存时间更长。
开封后请将RNase A,蛋白酶K于-20℃保存。
试剂盒内容:D2100-50T D2100-100TRNase A1ml1ml×2蛋白酶K1ml1ml×2溶液A25ml50ml溶液B25ml50ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液15ml30ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份产品简介:本试剂盒为通用型,适合于从土壤,粪便,昆虫,以及其他样本中提取基因组DNA。
对细菌,真菌,昆虫等样本都具有很好的裂解效果,最大限度的保留了生物DNA的多态性。
使用本试剂盒提取的DNA产量大、完整性好,可直接用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
操作步骤:使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。
所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、样品的处理:1)土壤:称取0.1-0.3g(根据干湿)土壤,放入研钵中,倒入适量的液氮,立即研磨,重复3次,第1页共3页使土壤颗粒研成粉末,加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。
2)粪便:称取0.1-0.3g(根据干湿)粪便,加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。
3)昆虫:称取0.1-0.3g昆虫,倒入适量的液氮,立即研磨,重复3次,使昆虫研成粉末,加500ul 溶液A,振荡至彻底悬浮。
4)未知样品,如为细未状,可直接称取0.1-0.3g(根据干湿)加500ul溶液A,如为块状,可0.1-0.3g 用液氮研磨成粉未,再加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。
2、向悬浮液中加入20ul的RNase A(10mg/ml),55℃放置10min。
3、加入20ul的蛋白酶K(10mg/ml),充分混匀,55℃水浴消化,30min。
动物组织基因组DNA提取试剂盒说明书
![动物组织基因组DNA提取试剂盒说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/59c6f97e1ed9ad51f11df20c.png)
磁珠法动物组织基因组DNA提取试剂盒MagBeads Tissues Gen DNA Extraction Kit【目录号】TGDE-5005、TGDE-5030【运输条件】2~25℃;【保存条件】磁珠悬浮液2~8℃,其它组分室温保存;【试剂盒组成】【注意事项】1. 磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心,使用前请充分混匀;2. 使用前请检查裂解液1和裂解液2是否出现结晶,如有结晶请置于65℃水浴重新溶解;3. 在使用本试剂盒前,请用户自配80%乙醇;4. 如需去除RNA请自备RNase A溶液(100mg/mL, 分散液10mM Tris-HCl,1mM EDTA, pH值8.0);5. 本操作指南经本公司反复验证,使用前请仔细阅读,并且按照操作指南的建议操作。
磁珠法·自动化:为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案【产品简介】本产品适用于从各种动物组织以或者细胞样本中提取基因组DNA。
试剂盒采用具有独特分离作用的纳米磁珠和独特的缓冲液系统。
特殊技术包埋的纳米磁珠在特定条件下对核酸具有极强的亲和力,而当条件改变时可以释放所吸附的核酸,从而达到快速分离纯化核酸的目的。
本试剂盒提取所得基因组DNA产物得量高、纯度好,适用于各种下游分子生物学实验,如:酶切、PCR、QPCR、文库构建、Southern 杂交、芯片检测和高通量测序等。
本试剂盒可配合核自动化酸提取仪或工作站使用,实现高通量操作。
【试剂盒说明】【自备仪器、耗材及试剂】仪器自动版研钵(或组织研磨机、匀浆机)、英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪、核酸提取仪配套用磁棒套、水浴锅或金属浴、涡旋振荡仪、96孔方孔圆底板、80%乙醇、异丙醇、液氮。
手动版研钵(或组织研磨机、匀浆机)、水浴锅或金属浴、涡旋振荡仪、真空干燥箱、80%乙醇、异丙醇、2.0mL离心管、离心管配套用磁力架、液氮。
【仪器自动版操作步骤】本操作以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例,同步可完成32个样本的提取。
磁珠法核酸提取试剂盒说明书
![磁珠法核酸提取试剂盒说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/5e87b8b47d1cfad6195f312b3169a4517723e5e0.png)
磁珠法核酸提取试剂盒说明书磁珠法核酸提取试剂盒说明书在科学研究和临床诊断中,核酸提取是至关重要的一步。
随着技术的不断发展,磁珠法核酸提取试剂盒逐渐成为了研究人员和临床医生们的首选。
那么,什么是磁珠法核酸提取试剂盒?它的工作原理是什么?在使用过程中需要注意哪些事项?本文将从广度和深度两方面进行全面评估,带你深入了解磁珠法核酸提取试剂盒。
一、磁珠法核酸提取试剂盒的工作原理磁珠法核酸提取试剂盒是利用磁珠的磁性特性,结合核酸和其他杂质的不同特性,通过磁场的作用将目标核酸分离提取出来的一种试剂盒。
具体步骤包括细胞裂解、磁珠与核酸结合、洗涤和最终洗脱等过程。
通过这一系列步骤,能够快速、高效地从样本中提取出纯度较高的核酸,为后续的分子生物学实验和临床检测打下基础。
磁珠法核酸提取试剂盒本质上是一种高度精密的技术产品,涉及到多方面的知识和技术。
在使用过程中需要严格按照说明书上的操作步骤进行,以确保提取的核酸具有良好的质量。
二、磁珠法核酸提取试剂盒的使用注意事项在使用磁珠法核酸提取试剂盒时,有一些注意事项是需要特别关注的。
首先是样本的处理和裂解步骤,不同样本的裂解条件可能会有所不同,需要根据具体情况进行调整。
其次是磁珠的使用,需要注意磁珠的悬浮情况和使用量,以确保能够有效地结合目标核酸。
在洗涤和洗脱步骤中,也需要注意洗涤缓冲液的温度和使用次数,以及洗脱缓冲液的使用量和温度等细节。
只有严格按照说明书上的要求进行操作,才能够得到高质量的核酸提取物。
三、磁珠法核酸提取试剂盒的个人观点和理解从个人角度来看,磁珠法核酸提取试剂盒无疑是一种高效、便捷的核酸提取工具。
相比传统的有机溶剂提取法和硅基膜法,磁珠法核酸提取试剂盒具有操作简便、提取效率高、纯度好等优点。
在日常的科研工作或临床诊断中,使用磁珠法核酸提取试剂盒能够大大提高工作效率,节约时间和成本。
总结回顾通过本文对磁珠法核酸提取试剂盒的深度评估,相信读者已经对这一产品有了更全面、深刻的理解。
磁珠法基因组DNA 提取试剂盒 (细胞)
![磁珠法基因组DNA 提取试剂盒 (细胞)](https://img.taocdn.com/s3/m/2e4d91081a37f111f1855bd7.png)
磁珠法基因组DNA 提取试剂盒(细胞)样本前处理:细胞用PBS洗两次后,6000rpm/min 离心3min,弃上清,加入500ul Buffer CGP重悬沉淀,12000rpm/min离心1min,弃上清,取沉淀备用。
2.裂解结合:在细胞沉淀中,加入500μLBuffer CGL,室温放置5-10min,再加入500μl异丙醇和30ul磁珠悬浮液(MB) (使用前充分重悬),颠倒混匀,室温放置5min(期间不时颠倒混匀);将离心管放置于磁力架上,待磁珠完全吸附后吸弃液体。
3.漂洗:(1)将离心管从磁力架上取下,向离心管中加入500 μl Buffer CGW 0,涡旋振荡5s,重悬磁珠,将离心管放置于磁力架上,待磁珠完全吸附后吸弃液体,重复该步骤1次。
(2)将离心管从磁力架上取下,向离心管中加入500 μl Buffer CGW I,涡旋振荡5s,重悬磁珠,将离心管放置于磁力架上,待磁珠完全吸附后吸弃液体。
重复该步骤一次,待磁珠完全吸附后吸弃液体(液体一定要弃尽,不然残留会影响下游实验),晾干2min。
实验准备56°C加热源磁珠用前一定要充分混匀;使用前需在Buffer CGW I中加入相应体积的无水乙醇。
4.洗脱:将离心管从磁力架上取下加入50-100μl Buffer EB ,涡旋振荡结合移液器吹打,充分吹散磁珠(一定要完全吹散磁珠,若未充分重悬会影响DNA 得率),56°C 放置5min(每隔2min振荡混匀重悬磁珠),置于磁力架上,将上清DNA转移至一新的离心管中,放入-20 °C保存备用,保质期为2 年。
纯度效果评价通过测定洗脱液中DNA的A260来确定RNA产量,通常情况下A260值在0.1~1.0之间数据比较可信。
如果不在此范围内,请稀释或浓缩样品调整;通过测定洗脱液中RNA的A280和A230来确定DNA纯度,A260/A280比值在1.8-2.0之间,小于1.8表示可能有蛋白质污染。
磁珠法细菌基因组DNA提取试剂盒
![磁珠法细菌基因组DNA提取试剂盒](https://img.taocdn.com/s3/m/630cefc450e2524de5187e35.png)
磁珠法细菌基因组DNA提取试剂盒概述本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统,从样品中分离纯化高质量基因组DNA,特殊包被的磁珠,在一定条件下对目的DNA 具有很强的亲和力,而当条件改变时,磁珠释放吸附的DNA,能够达到快速分离纯化DNA的目的。
整个过程不涉及有毒试剂,安全、便捷、提取的DNA纯度高。
使用本试剂盒纯化的基因组DNA (OD260-OD320)/(OD280-OD320)均在1.7~2.0之间,可以应用到各类下游分子生物学实验。
适用范围适用于从各种革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌等中提取基因组DNA,适用于自动化核酸提取平台。
试剂盒包装及组成试剂盒组成数量Buffer A20 ml×1瓶Buffer B 1 ml×1瓶Buffer C 1 ml×1瓶磁珠结合液25 ml×1瓶洗涤液Ⅰ50 ml×1瓶洗涤液Ⅱ30 ml×1瓶,使用前加入80 ml无水乙醇,混匀洗脱液10 ml×1瓶使用说明书1份注意事项1. Buffer A在使用前在温浴设备中温育至白色沉淀完全溶解后使用。
2.如果下游实验对RNA污染比较敏感,可在裂解中第⑶步加1µl RNaseA(10mg/ml)。
3. Buffer B 4℃保存,可能会析出白色粉末状沉淀,使用前混合均匀,不影响使用效果。
4.磁珠结合液用前一定要充分混匀。
5.溶菌酶用缓冲液稀释,缓冲液为(20mMTris,pH8.0;2mMNa2-EDTA;1.2%TritonX-100 )。
6.如果同等取样量下欲得到更多DNA可以增加洗脱次数(洗脱次数最好不要超过3次)。
操作方法1.裂解⑴取1ml过夜培养的菌液至1.5ml EP管中,12000 rpm离心1min,尽量吸净上清。
⑵如果样品为革兰氏阳性菌(葡萄球菌除外,葡萄球菌可直接按照阴性菌步骤操作,加入适量溶葡萄球菌酶裂解效果更好)可加入25µl20mg/ml的溶菌酶(客户自备)反复吹打使菌体充分悬浮,37℃消化30~60min(注:消化时间取决于所用的菌种),如果样品为革兰氏阴性菌可直接进行步骤⑶。
生工基因组提取试剂盒说明书
![生工基因组提取试剂盒说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/af56a0027cd184254b35354b.png)
Ezup柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒产品编号:SK8255/SK8256包装规格:50次/100次试剂盒组成组分 SK8255,50次 SK8256,100次纯化套件(吸附柱+收集管) 50套 100套Buffer Digestion 10 ml 20 mlBuffer BD 12 ml 24 mlPW Solution (concentrate) 18 ml 36 mlWash Solution (concentrate)7.5 ml 15 mlCE Buffer (pH 9.0) 15 ml 30 mlProteinase K 1.2 ml 2.4 mlEnzymatic lysis buffer 10 ml 20 ml操作手册1份1份保存方法及注意事项试剂盒于常温运输,室温(15~25°C)保存,有效期见包装,4°C保存时间更长。
该试剂盒中提供的Proteinase K溶液为特别优化的配方,方便使用,而且非常稳定,可以在室温保存半年以上而活性不受明显影响,如需进一步延长保存期限,请置4°C保存。
Buffer Digestion中含有刺激性的化合物,操作过程中应穿上实验服,戴好乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,防止吸入口鼻。
沾染皮肤或眼睛后,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。
产品介绍本试剂盒是生工生物工程(上海)有限公司最新研制成功的一种细菌基因组DNA抽提试剂盒。
本产品对经典的SDS裂解液进行了改良,并使用高浓度的蛋白变性剂,大大提高了裂解的效率,缩短了裂解的时间。
无需使用苯酚、氯仿等有毒试剂。
从1 ml过夜培养的细菌菌液可以获得10~20 µg DNA,OD260/OD280比值一般为1.7~1.9。
抽提出的DNA可用于酶切、PCR、文库构建、Southern blot等相关实验。
标准抽提步骤自备材料:水浴锅、小型高速离心机(最大离心力≥ 12,000 × g)、1.5 ml离心管、无水乙醇、异丙醇、RNase A溶液(20 mg/ml)等。
游离DNA提取试剂盒(磁珠法)说明书
![游离DNA提取试剂盒(磁珠法)说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/8768ec9732d4b14e852458fb770bf78a64293a74.png)
游离DNA提取试剂盒(磁珠法)说明书【产品名称】通用名称:核酸提取或纯化试剂商品名称:游离DNA 提取试剂盒(磁珠法)英文名称:Magbind CFDNA Kit 该试剂盒提供了一种简单、快速、高效的游离DNA (Free circulating / Cell-free DNA)提取方法,适用于从血清、血浆、淋巴液、尿液等无细胞体液中提取游离DNA 。
纯化得到的离DNA 质量稳定、可靠,可用于下游常规实验。
该试剂盒可与转移液体法的核酸提取仪配套使用,简单、快速地进行大规模提取,大大降低了实验者的工作量和实验中的人为误差。
【预期用途】 样品裂解后,在高盐存在时,DNA 结合于硅基包被的磁珠表面,漂洗后,高纯度DNA 被洗脱于洗脱缓冲液或去离子水中。
DNA 得率与样品的类型、储存条件、时间以及个体间差异有很大关系。
【检验原理】50次/盒;400次/盒【包装规格】版本号:11/2020【样本要求】1.适用标本类型:新鲜或冷冻的全血(用柠檬酸盐、EDTA 或肝素等抗凝剂处理过的血液样品)、血浆、血清、淋巴细胞、无细胞体液等样本。
2.标本处理与保存:血清及血浆样本按常规方法制备,新鲜样本应尽快处理或分装后于-70℃冻存,避免反复冻融。
3.样本运输:应采用冰壶或者泡沫箱加冰或干冰密封运输。
【检验方法】实验前准备:向蛋白酶K 中加入指定用量的蛋白酶K 保存液使其溶解,终浓度为20 mg/ml ,-20℃保存。
1.向1.5 ml 离心管中加入20 μl 蛋白酶K 溶液。
2.向上一步的离心管中加入200 μl 血清/血浆样品。
注意:冻存样品需提前在4℃冰箱中放置使其溶化。
溶化过程中反复颠倒样品储存管使其混匀。
3.向上一步的离心管中加入200 μl 裂解缓冲液,涡旋振荡5秒钟使其充分混匀后将离心管放于56℃、1300 rpm 的Thermomixer 上振荡裂解10分钟。
注意:1)如无Thermomixer ,需将离心管放于56℃水浴锅或金属浴中孵育10分钟,期间每隔2分钟涡旋振荡5秒钟。
磁珠法血液DNA提取试剂盒-说明书
![磁珠法血液DNA提取试剂盒-说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/f38015398e9951e79a892747.png)
血液DNA提取试剂盒(磁珠法)
【简介】
血液DNA提取试剂盒(磁珠法)适用血液的基因组DNA提取,尤其适用于人类以及哺乳动物的血液基因组DNA提取。
配合核酸自动纯化仪(GNT-SI系列),可实现一键式、自动化操作
【组分】
【血液DNA提取试剂盒(磁珠法)操作说明】(以实际说明书为准)
1、取抗凝全血到离心管中,加入Buffer LB1、Buffer LB2,混合均匀后,将离心管置于水浴
锅中,水浴30min
2、将离心管取出,加入异丙醇,Magnetic Beads。
颠倒混匀数次(期间应静置数秒后继续颠
倒混匀),将离心管置于磁力架,磁分离,吸弃废液
3、将离心管从磁力架上取下,加入Buffer WB I。
颠倒混匀数次(期间应静置数秒后继续颠
倒混匀),将离心管置于磁力架,磁分离,吸弃废液
4、将离心管从磁力架上取下,加入Buffer WB II,颠倒混匀数次(期间应静置数秒后继续颠
倒混匀),将离心管置于磁力架,磁分离,吸弃废液
5、重复步骤5一次,并将废液完全吸弃干净
6、将离心管从磁力架上取下,室温下开盖静置5min
7、加入Elution Buffer,磁珠完全混匀后,置于水浴锅中,水浴10min
8、将离心管置于磁力架,磁分离,小心吸取上清至新的离心管中,进行下游实验
【特点】
1、得率高:200ul人类抗凝全血的普遍产量可达3-8ug
2、纯度高:OD260/280稳定在左右,OD260/230稳定在以上
3、操作简便:手工提取过程无需离心
4、自动化:具有成熟的自动化方案,可配合核酸自动纯化仪,实现一键式操作
【提取效果】。
动物源性基因组DNA提取试剂盒说明书
![动物源性基因组DNA提取试剂盒说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/4964e33787c24028915fc3eb.png)
动物源性基因组DNA提取试剂盒说明书试剂盒简介本试剂盒可用于多种动物源性基因组DNA的提取,将处理好的样品通过裂解后加入到纯化柱内高速离心,核酸可以特异性结合在吸附柱内,通过洗涤液处理可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,获取高纯度、质量稳定的DNA。
试剂盒用途本试剂盒适用于饲料、多种动物细胞和动物组织等样品的动物源性基因组DNA提取与纯化。
试剂盒组成(50T/Kit)注:请自备无水乙醇(分析纯)储存条件及有效期蛋白酶K于-20 ℃保存,其余组分均室温保存。
有效期一年。
注意事项1.当缓冲液DA、DB及洗液1于低温保存时,可能会有沉淀析出,将试剂瓶于室温下放置一段时间,使析出物充分溶解并混匀即可。
2.缓冲液DA、DB及洗液1中含有胍盐,与次氯酸钠、漂白液(粉)以及酸性液体混合会产生毒性气体,切记不能将两类液体倒在一起。
3.如样本脂类含量过高,影响操作,可在操作步骤1结束后用等体积氯仿抽提一次,避免脂类对后面操作的影响。
4.所有离心步骤室温下进行即可。
5.为了避免外源DNA酶或细菌降解DNA提取物,操作时请戴口罩和手套。
准备工作13 ml洗液1浓缩液加入17 ml无水乙醇;7ml洗液2浓缩液加入23 ml无水乙醇。
操作步骤1. 样品处理1.1 饲料:将饲料充分研磨粉碎后,称取50 mg样本加入到1.5 ml洁净的离心管中,加入300μl缓冲液DA、20 μl蛋白酶K溶液。
振荡混匀后56 ℃水浴1 h,每隔10~15 min取出颠倒混匀一次。
1.2 动物细胞或组织:剪取不超过50 mg样本加入到1.5 ml洁净的离心管中,用研磨棒充分研磨,加入300 μl缓冲液DA、20 μl蛋白酶K溶液。
振荡混匀后56 ℃水浴1 h,每隔10~15 min取出颠倒混匀。
2. 向处理好的样品加入400 μl的缓冲液DB,振荡混匀后70 ℃水浴10 min后,12 000 rpm离心3 min。
取400 μl上清液到新的1.5 ml洁净的离心管中。
磁珠法病毒DNARNA提取试剂盒使用说明书原理及用途
![磁珠法病毒DNARNA提取试剂盒使用说明书原理及用途](https://img.taocdn.com/s3/m/ba0837eb710abb68a98271fe910ef12d2af9a973.png)
磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒使用说明书原理及用途本试剂盒利用磁珠的特殊分离作用,采用独特的缓冲液系统,从组织研磨液、血清、血浆、淋巴液、无细胞体液、细胞培养上清液、尿液或各种病毒保存液中分离纯化高质量病毒DNA或RNA。
特殊包埋的磁珠,在一定条件下对核酸具有很强的亲和力,而当条件改变时,磁珠释放吸附的核酸,能够达到快速分离纯化核酸的目的。
提取的病毒DNA/RNA得率高、纯度高、质量稳定可靠。
使用本试剂盒纯化的核酸可适用于各种常规操作,包括反转录、PCR、RT-PCR、荧光定量PCR、荧光定量RT-PCR等各种下游实验。
试剂盒组成储存条件1. 所有缓冲液在室在温条件下(15–25℃)保存。
2. 在原始状态下,Carrier RNA冻干粉可在室温条件下储存至有效期;已配好的工作液时必须按照“Carrier RNA工作液的配制”要求进行配制、储存、使用。
3. 有效期:1年样品处理1.组织样品处理:每份组织分别从三个不同的位置称取样品约1g,用手术剪剪碎混匀后取0.05 g于研磨器中研磨,加入1.5 mL生理盐水继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液用于检测。
2.排泄物样品处理:取约0.05g排泄物于1.5 mL灭菌离心管中,加入1mL生理盐水涡旋振荡,8000 rpm离心2 min,取上清液用于检测。
3.其它液体样品:直接取上清液用于检测注意事项(请务必在使用本试剂盒之前仔细阅读)1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的核酸片段较小且提取量降低。
2.若缓冲液RLCK中有沉淀,可于37℃水浴重新溶解,摇匀后使用。
3.需要用户自行准备的试剂:生理盐水、异丙醇、无水乙醇。
4.实验前应仔细阅读说明书,在提取核酸时提前配制缓冲液RLCK、Carrier RNA工作液、漂洗液PWI和漂洗液PWII工作液。
缓冲液的配制1.缓冲液RLCK使用前应加入5 mL异丙醇,并在瓶签上勾选已配制标识,以方便操作时确认。
磁珠法测定鸡血中DNA含量操作步骤
![磁珠法测定鸡血中DNA含量操作步骤](https://img.taocdn.com/s3/m/dc14f065b80d6c85ec3a87c24028915f804d840b.png)
操作步骤使用前请先在缓冲液GDA和漂洗液PWD中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶子上的标签。
一、手工操作步骤;1、取200μl血液样品至2 ml离心管(白备)中。
注意:本试剂盒可从100 μl-1 ml哺乳动物血液中分离纯化高质量基因组DNA。
当哺乳动物血液样品处理量为100-250μl时:按下表加入裂解液和异丙醇用量。
当哺乳,动物血液样品处理量为250 μl-1 ml时:需细胞裂解液CL(TIANGEN,RK151) (自备) 处理,具体步骤如下;在样品中加入1-2.5倍血液样品体积的细胞裂解液CL,颠例混匀,10.000 rpm (~11.500×g )高心1 min,吸去上清,留下细胞核沉淀(如果裂解不物底:可加入1-2.5倍血液样品体积的细胞袋解液CL重复裂解一次),向细胞核沉淀中加50川缓冲液GS(TIANGEN,RK152)(自备),振荡至彻底混匀,再进行下一步实验。
当处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液,红细胞有核细胞,因此处理量为5-20 μl,可加适当的缓冲液补足200 μl,再进行下一步实验。
以鸡血基因组DNA为例,可使用PBS缓冲液或TB缓冲液进行稀释(例200 μl鸡血加1800 μl PBS缓冲液或TB缓冲液稀释,取100 μl(200 μl)进行后续实验)。
如提取其他禽类或两栖类血液基因组DNA,建议参照鸡血稀释方法开展预实验评估,如提取效果不符合要求,可在稀释示例基础上调整稀释倍数。
2. 加入20 μl Proteinase K溶液。
3. 加入300 μl裂解液GHL,振荡混匀。
注意:当样本数目比较大时,可以按每300 μl 裂解液GHL加入20 μl Proteinase K的比例预先混合,混合后每个样本用量为320 μl,混合后的溶液室温放置不要超过1h,最好现用现配。
4. 将离心管置于65℃,游育15 min,期间颠倒混匀3回,每回3-5次。
《2024年磁珠法提取鸡血液基因组DNA效果研究》范文
![《2024年磁珠法提取鸡血液基因组DNA效果研究》范文](https://img.taocdn.com/s3/m/071e855abfd5b9f3f90f76c66137ee06eff94e0f.png)
《磁珠法提取鸡血液基因组DNA效果研究》篇一一、引言基因组DNA的提取是分子生物学研究中的关键步骤之一。
针对这一目标,近年来,磁珠法以其快速、简便且高效的特点在基因组DNA提取领域获得了广泛应用。
鸡作为重要的经济动物,其血液基因组DNA的提取对于家禽遗传学、医学及生物学研究具有深远意义。
本研究通过磁珠法提取鸡血液基因组DNA,探讨其效果,以期为相关研究提供参考。
二、材料与方法1. 材料(1)样品:选取健康无病的成年鸡,采集其新鲜血液样本。
(2)试剂与设备:磁珠法提取试剂盒、离心机、磁力架、微量移液器等。
2. 方法(1)采集鸡的新鲜血液样本,并进行适当的处理。
(2)使用磁珠法提取试剂盒进行基因组DNA的提取。
(3)通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测提取的DNA纯度和浓度。
(4)对提取的DNA进行PCR扩增及测序,验证其质量。
三、实验结果1. 琼脂糖凝胶电泳结果通过琼脂糖凝胶电泳检测,发现磁珠法提取的鸡血液基因组DNA条带清晰,无降解现象,表明DNA纯度较高。
2. 紫外分光光度计检测结果经紫外分光光度计检测,磁珠法提取的鸡血液基因组DNA 浓度适中,符合后续实验要求。
同时,经计算,所得A260/A280比值接近理想值(1.8),表明DNA纯度较高。
3. PCR扩增及测序结果PCR扩增及测序结果表明,磁珠法提取的鸡血液基因组DNA 质量较好,能够满足后续的遗传学和分子生物学研究需求。
四、讨论本研究采用磁珠法成功提取了鸡血液基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计检测及PCR扩增和测序等方法验证了其效果。
结果表明,磁珠法在鸡血液基因组DNA提取中具有较好的效果。
磁珠法因其独特的原理和优势在实验室中被广泛采用。
首先,其具有操作简便的特点,即使是初次操作的研究者也能快速掌握;其次,磁珠法提取的DNA纯度高、浓度适中,为后续实验提供了可靠的保障;最后,该方法对样品破坏小,可最大程度地保护DNA的完整性。
《2024年磁珠法提取鸡血液基因组DNA效果研究》范文
![《2024年磁珠法提取鸡血液基因组DNA效果研究》范文](https://img.taocdn.com/s3/m/c1ae51b64bfe04a1b0717fd5360cba1aa9118c6c.png)
《磁珠法提取鸡血液基因组DNA效果研究》篇一一、引言基因组DNA的提取是分子生物学、遗传学、医学诊断等多个领域中不可或缺的步骤。
近年来,磁珠法因其高效、快速、简便的特点,在DNA提取领域得到了广泛应用。
本研究以鸡血液为研究对象,探讨磁珠法提取鸡血液基因组DNA的效果,为鸡遗传学研究及医学诊断提供技术参考。
二、材料与方法1. 材料本研究所用材料主要包括鸡血液样本、磁珠法提取试剂盒、PCR仪、电泳仪等。
所有实验器材均经过严格消毒处理,以避免样本间的污染。
2. 方法(1)收集鸡血液样本,分离出血细胞和血浆。
(2)采用磁珠法提取试剂盒,按照说明书操作步骤提取鸡血液基因组DNA。
(3)利用PCR技术检测DNA纯度与浓度,以及是否具有特异性基因序列。
(4)对提取到的DNA进行电泳,分析其结构与完整性。
(5)将提取到的DNA与传统的酶消化法提取的DNA进行比较,评估磁珠法的效果。
三、实验结果1. 磁珠法提取的鸡血液基因组DNA纯度与浓度通过PCR技术检测,磁珠法提取的鸡血液基因组DNA纯度高,浓度适宜。
DNA的纯度表现在其特异性基因序列明显且无明显污染;而浓度适宜则保证了PCR等后续实验的准确性。
2. 磁珠法提取的鸡血液基因组DNA电泳结果电泳结果显示,磁珠法提取的鸡血液基因组DNA具有明显的带状结构,说明其结构完整。
在琼脂糖凝胶上观察到的DNA 条带清晰,亮度高,这进一步验证了磁珠法在提取基因组DNA 时的完整性与效果。
3. 磁珠法与酶消化法的比较与传统的酶消化法相比,磁珠法在提取鸡血液基因组DNA 时具有更高的纯度和完整性。
此外,磁珠法操作简便快捷,节省时间,更适用于大量样本的DNA提取。
而酶消化法则需要较长的反应时间及较高的技术要求。
四、讨论本研究采用磁珠法成功提取了鸡血液基因组DNA,并对其纯度、浓度及结构进行了分析。
结果表明,磁珠法在提取鸡血液基因组DNA时具有较高的纯度、完整性和简便性。
这为鸡遗传学研究及医学诊断提供了新的技术手段。
《2024年磁珠法提取鸡血液基因组DNA效果研究》范文
![《2024年磁珠法提取鸡血液基因组DNA效果研究》范文](https://img.taocdn.com/s3/m/ed1089655627a5e9856a561252d380eb629423e6.png)
《磁珠法提取鸡血液基因组DNA效果研究》篇一一、引言基因组DNA的提取是分子生物学研究中的关键步骤之一,对于许多基因层面的研究有着极其重要的意义。
随着现代生物技术的发展,磁珠法因其操作简便、高效快速的特点,被广泛应用于DNA的提取中。
本文将重点探讨磁珠法在提取鸡血液基因组DNA中的应用效果,以期为相关研究提供参考。
二、材料与方法1. 材料本实验所需材料包括:鸡血液样本、磁珠法DNA提取试剂盒、相关实验仪器等。
2. 方法(1)血液样本的采集与处理:选取健康鸡只,采集其新鲜血液样本。
(2)磁珠法DNA提取:采用磁珠法DNA提取试剂盒,按照试剂盒操作步骤进行DNA的提取。
(3)DNA纯度与浓度检测:使用紫外分光光度计检测DNA 的纯度与浓度。
(4)PCR扩增及产物检测:对提取的DNA进行PCR扩增,并通过凝胶电泳及测序技术对产物进行检测。
三、实验结果1. DNA提取效率与纯度通过磁珠法成功地从鸡血液中提取了基因组DNA。
经紫外分光光度计检测,所提取的DNA纯度较高,OD260/OD280值接近理想范围,表明磁珠法具有良好的DNA提取效果。
2. PCR扩增及产物检测PCR扩增结果显示,所提取的鸡基因组DNA质量良好,能够成功扩增出目标片段。
凝胶电泳及测序技术进一步证实了PCR 产物的准确性,表明磁珠法提取的DNA适用于后续的分子生物学研究。
四、讨论磁珠法因其操作简便、高效快速的特点,在基因组DNA的提取中具有显著优势。
本研究结果表明,磁珠法在提取鸡血液基因组DNA时具有较高的效率与纯度,能够满足分子生物学研究的需求。
此外,PCR扩增及产物检测结果也证实了磁珠法提取的DNA在后续实验中的适用性。
在鸡基因组DNA的提取过程中,可能存在一些影响因素。
首先,样本的质量与处理过程对DNA的提取效果具有重要影响。
其次,不同种类的磁珠法试剂盒及其操作步骤也可能影响DNA 的提取效果。
因此,在实际操作中,需要根据具体情况选择合适的试剂盒及操作步骤,以获得最佳的DNA提取效果。
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动物组织基因组DNA提取试剂盒(心、肝、肌肉)(磁珠法)使用说明
货号:DM1702
规格:50T
保存:磁珠可以在室温下(15-25℃)运输,但请在4℃冰箱中保存,禁止冻存。
其余试剂可以室温保存,更长时间的保存可置于2-8℃。
复检期1年。
试剂盒内容:
试剂盒组成DM1702-50T
裂解液S1-233ml
裂解液S2 2.2ml
漂洗液1(空瓶)
洗脱液 5.5ml
磁珠 1.4ml×2
说明书1份
产品说明:
动物组织基因组DNA提取试剂盒(心、肝、肌肉)(磁珠法)采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统,可从样品中分离纯化高质量基因组DNA。
特殊包被的磁珠在一定条件下对目的DNA具有很强的亲和力,而当条件改变时,磁珠释放吸附的DNA,能够达到快速分离纯化DNA的目的。
整个过程安全、便捷,提取的DNA纯度高。
使用本试剂盒纯化的基因组DNA的OD260/OD280均在 1.7-1.9之间,可以应用于各类下游分子生物学实验。
使用前请先在漂洗液中配置70%乙醇。
若裂解液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10min溶解
沉淀,摇匀后使用。
操作步骤:
1.裂解
取适量的动物组织样本(肌肉组织≤50mg;心脏≤30mg;肝脏≤20mg;)用液氮研磨成粉末,并迅速转移到已加入600μl裂解液S1-2、40μl裂解液S2的EP管中,吹打或震荡混合均匀。
将EP管置于65℃水浴25~30min。
待冷却到室温,加入400ul氯仿,剧烈震荡15s,静置3min,12000rpm4℃离心5-10min。
2.结合
尽量取净上清于新的1.5mL EP管中,加入等体积的异丙醇以及振荡混匀的50μL磁珠,颠倒混匀1min,静置3min。
将EP管置于磁铁上进行磁分离,吸弃废液(吸净管盖及管底残液)。
3.洗涤
加入600μL漂洗液(使用前请预先配置70%乙醇),轻柔混匀1-2min,将EP管置于磁力架上进行磁分离,吸净管盖及管底的残液;重复本步骤一次。
4.洗脱
室温晾干5~10min至乙醇挥发完全,加入50~100μL洗脱液,缓慢抽吸混匀,65℃水浴10min。
)
(每隔1~2min轻摇EP管几下混匀)。
将EP管置于磁力架上进行磁分离,小心吸取上清液至新的EP管中,进行下游实验。
(判断磁珠晾干的标准:侧面观察磁珠无反光,正面观察磁珠边缘龟裂)
注意事项:
1.动物组织(心、肝、肌肉)要用液氮充分研磨。
2.整个裂解过程操作尽量温和,并在要求时间内完成。
3.如果组织液浓度较高,则建议磁珠量可适当增加,以获取高浓度DNA。
4.客户自备试剂:氯仿、异丙醇、无水乙醇。
5.使用前请在漂洗液瓶中预先配制70%乙醇。
6.磁珠在使用前一定要充分混匀。
常见问题及参考意见:
1.得率低
(1)组织没有完全裂解完,裂解时间不够或没有离心直接进行下一步操作:可适当延长裂解时间,最长不超过60min。
样品裂解后,请一定要离心后再进行下一步操作。
(2)结合不充分:结合过程中要使磁珠一直处于悬浮状态,并且充分颠倒混匀。
(3)取样量大于说明书给出量:取样量请严格按照说明书操作。
2.条带弥散
(1)样品不新鲜或反复冻融多次:尽量用新鲜样品进行实验,如果样品需要保存,可根据实验,分装保存样品,尽量避免反复冻融;
(2)环境温度太高:可以将研钵置于-20℃预冷或置于液氮保存后再进行研磨,如果所提取材料基因组DNA极易降解,可用液氮研磨;
(3)裂解时间太长:裂解时间不要超过60min;
(4)提取后模板DNA放置时间太长:提取后如有需要,请尽量及时进行凝胶电泳实验。
短期内可置于4℃保存,长期请置于-20℃保存(尽量注意避免反复冻融)。
3.DNA液有颜色
(1)洗涤过程不充分:如果结合后磁珠呈团状、丝状或颗粒状,可增加点阵力度及次数,充分吹打混匀。
(2)裂解不充分:适当增加裂解液S1-2和S2用量,也可以延长裂解时间。
(3)样品用量大于说明书给出量而其他试剂用量没有相应调整:严格按照说明书操作,如果需要增大样本量,可以等比例增加裂解液S1-2、S2以及磁珠用量,其他试剂用量不变。
4.DNA样品不纯,干扰后续实验
(1)DNA液有乙醇残留:洗涤时,请注意吸净管盖及管底的残液。
此外,磁珠应完全干燥,保证无乙醇残留。
(2)磁珠洗涤不充分:加入70%乙醇溶液时,请吸打或点阵混匀。
如有必要,可增加一次洗涤步骤。
(3)DNA液中吸入磁珠:如果不小心吸入磁珠,请将上清液返回原管,待磁珠完全吸附至管壁后重新吸取上清。
或者将吸取的上清液10000rpm离心2min,再取上清。
(4)DNA液中含有蛋白质等杂质:建议适当减少样品用量。
或可重复一次提取过程去除杂质。
(5)DNA液中含有轻微盐离子等杂质,此为洗脱液(含有抑制核酸降解的成分)正常现象,不影响下游实验。
如有特殊需要,可使用等量的经高压灭菌的去离子水作为洗脱液。
为方便实验,可将获得的DNA置于-20℃环境分装保存。