大量全血基因组DNA提取试剂盒操作方法及步骤说明书
基因组DNA提取试剂盒 说明书
基因组DNA 提取试剂盒使用说明书此说明书仅适用于此说明书仅适用于基因组基因组DNA 提取试剂盒提取试剂盒，，使用前请务必仔细阅读说明书有关内容使用前请务必仔细阅读说明书有关内容，，若有任何疑问若有任何疑问，，欢迎致电厦门欢迎致电厦门致致善生物科技有限公司生物科技有限公司（（4006618810*************）进行咨询进行咨询，，您也可以登录我们公司的网站您也可以登录我们公司的网站（（ ）了解相关信息或者通过E-mail ( ****************) 与我们进行沟通与我们进行沟通。
一 产品简介基因组DNA 提取试剂盒采用本公司自行研制的磁珠，用于从抗凝全血、新鲜或冻存组织、培养细胞、石蜡包埋组织、唾液、培养细菌等一系列不同样品中分离、纯化高质量的基因组DNA。
我们根据磁珠的独特分离作用，提供了一个极其简便的操作程序：样品裂解、磁珠吸附、洗涤以及洗脱。
在最适的试剂及操作条件下，可获得高质量DNA。
该方法具有简便、快捷、高效等特点，整个提取过程无须使用苯酚、氯仿等有机溶剂。
品名规格 货号 基因组DNA 提取试剂盒100T 4hk001裂解液DL 120ml ×2 磁粒 40ml 洗涤液 50ml ×5 洗脱液 45ml 缓冲液HTL 20ml ×1 二硫苏糖醇（DTT ） 10管，0.18g/管 说明书 1份储存条件储存条件：：本试剂盒所有试剂（除DTT 外）均可以室温保存,应避免阳光直射。
当室温低于15℃时，裂解液中可能有结晶析出，38℃水浴加热几分钟，恢复澄清后即可使用，提取效率不受影响。
DTT 需要于冰箱4℃保存。
本试剂盒有效期为12个月， 请于有效期内使用。
安全信息：试剂中含刺激性化合物，操作时应小心，避免沾染皮肤，眼睛和衣服，若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
三 使用者自配试剂DTT 溶液使用浓度为1mol/L 。
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明一、试剂盒组成及存储条件：1.试剂盒包括蛋白酶K、缓冲液、洗涤缓冲液、脱水溶液等。
2.试剂盒应存放在4℃以下避光干燥处，避免冻结。
二、实验前准备：1.准备所需的实验耗材和设备，如离心管、恒温振荡器、离心机等。
2.取出全血样品，可以是新鲜全血或已离心制备的全血细胞。
三、DNA提取步骤：1.取出全血样品，用洗涤液洗涤细胞沉淀并离心收集，去除红细胞。
2.加入蛋白酶K将细胞裂解，释放DNA。
3.加入缓冲液和脱水溶液，沉淀DNA并洗涤。
4.最终稀释DNA并保存在适当的条件下。
四、实验注意事项：1.操作过程中需注意无菌操作，避免污染。
2.加入蛋白酶K的量应准确控制，不要过多或过少。
3.混合溶液时需轻轻摇匀，避免气泡的产生。
4.稀释保存DNA时，需使用无核酸酶的载体溶液，如TE缓冲液。
五、质控及结果分析：1.可以通过琼脂糖凝胶电泳或比色法检测提取的DNA质量。
2.检测DNA浓度和纯度，确保提取的DNA适用于后续实验。
3.可以保存提取好的DNA样品，以备后续实验使用。
六、应用领域：1.该试剂盒适用于从全血样品中提取DNA，可用于基因分析、疾病诊断、遗传研究等领域。
2.可以用于个体基因检测、种群遗传学研究、药物反应性研究等。
总结：全血基因组DNA提取试剂盒是用于从全血样品中提取DNA的重要工具，操作简便、提取效率高。
在实验中需注意操作规范，保证提取的DNA质量和纯度。
该试剂盒广泛应用于科研领域，为基因研究和临床诊断提供了有力支持。
希望上述使用说明能够帮助用户正确、高效地使用全血基因组DNA提取试剂盒。
实验二 全血基因组DNA的提取
实验二：全血基因组DNA的提取一实验目的：1．学习并掌握动物全血提取DNA的方法2．从全血中提取到一定量的纯净的DNA样品二实验原理DNA存在于细胞核中，用细胞裂解液除取红细胞，核裂解液破坏白细胞，氯仿使蛋白质变性，用无水乙醇洗涤DNA，从而得到纯净的DNA分子。
三、实验仪器、材料、试剂（一）仪器1．高速离心机 2．烘箱 3．冰箱4．水浴锅5．微量移液器6．高压灭菌锅（二）材料1．鸡血、2．细胞裂解液3．核裂解液、4．饱和NaCl、5．氯仿、6．无水乙醇、7．ddHO、8.滤纸、9．微量取液器、10.1.5mL/2mL 离心管、11.一次性2手套、12.离心管架、13.记号笔等（三）试剂配制细胞裂解液:10mm/l Tris-Hcl(1mol/L) ,11%w/l蔗糖,5 mmol/L Mgcl2,1%v/vEDTA, 10mm/L Triton 核裂解液：10mm/l Tris-Hcl, 1%w/v SDS, 10mm/L Na2柠檬酸三钠四、实验步骤1．吸取500ul血液至2ml离心管，加入1000ul的细胞裂解液，上下颠倒2-3min。
2．在4°C，6000rpm转速离心3min,弃上清液。
3．重复1-2步（1-3次），直至洗净红细胞，颜色变白为止。
4.加入300ul核裂解液，上下颠倒2min,室温静置2min。
5.加入100ul饱和NaCl和600ul氯仿，轻轻上下颠倒2min, 4°C，6000rpm 转速离心5min。
6.小心吸取上清液（不能吸入下层液体），移至新的1.5ml的离心管。
7.加入600ul冷藏无水乙醇，轻轻摇动，观察有无絮状物质。
8. 4°C，13000rpm转速离心3min，小心倒掉上清液，用滤纸吸取管壁周围的液体，室温下是离心管完全干燥。
（1h左右）9.沿管壁慢慢加入50ul ddHO，然后轻轻吹打均匀。
210.-20°C的冰箱保存。
promega公司全血DNA提取试剂盒说明书
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Wizard®基因组 DNA 纯化试剂盒简明操作步骤
1. 10ml 全血样品：向无菌 50ml 离心管内加入 30ml 细 注释：若在步骤 6 中另加了核裂解液，那么应加入 4ml 蛋
胞裂解液。
白沉淀液（而不是 3.3ml）。
重要：血样样品必须使用 EDTA、肝素或柠檬酸的 9. 2,000 x g 室温离心 10 分钟。
彻底重悬才能有效裂解白细胞。
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Wizard®基因组 DNA 纯化试剂盒简明操作步骤
6．向重悬细胞溶液中加入核裂解液（300ul 血样的加 12．300ul 血样的于 13,000-16,000 x g 室温离心 1 分钟；3ml
仅供实验室使用。每个试剂盒包含的试剂，足够进行 100 次从 300ul 全血中提取基因组 DNA 的实验：
z 500ml z 250ml
Cell Lysis Solution Nuclei Lysis Solution
z 100ml z 50ml z 25ml
Cell Lysis Solution Nuclei Lysis Solution Protein Precipitation Solution
Solution）（300ul 血样的加 100ul；3ml 血样的加 250ul），
65oC 孵育 1 小时溶解 DNA。期间可轻弹管壁混匀溶液。 8．向核裂解物中加入蛋白沉淀液（300ul 血样的加 100ul； 也可以室温或 4oC 孵育过夜。
3ml 血样的加 1.0ml；见下列注释），用涡旋振荡器剧 16. 2-8oC 保存 DNA。
血液、细胞、组织基因组DNA提取试剂盒步骤
血液、细胞、组织基因组DNA提取试剂盒步骤使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1. 处理材料a. 如提取材料为血液，可直接使用200ul新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，不足200ul可加入缓冲液GA补足；注意：如需处理更大体积血液，如300ul-1ml，可按以下步骤操作：在样品中加入3倍体积红细胞裂解液（例如300ul血液加入900ul红细胞裂解液），颠倒混匀，室温放置5min，期间再颠倒混匀几次。
10000rpm(~11500×g)离心1min（若离心机最高转数不允许，可3000rpm(~3400×g)离心5min），吸去上清，留下白细胞沉淀，加200ul缓冲液GA，振荡至彻底混匀。
b. 如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核红细胞，因此处理量5-20ul，可加入缓冲液GA补足200ul后进行下面的裂解步骤；c. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液，然后10000rpm(~11200×g)离心1min，倒尽上清，加200ul缓冲液GA，振荡至彻底悬浮；d．动物组织（脾组织用量应少于10mg）应先打碎处理为细胞悬液，然后10000rpm(~11200×g)离心1min，倒尽上清，加200ul缓冲液GA，振荡至彻底悬浮；注意：如果需要去除RNA，可加入4ul RNase A(100mg/ml)溶液（客户自备，目录号：RT405-12），振荡15s，室温放置5min。
2. 加入20ul Proteinase K，混匀。
a. 提取血液基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。
b. 提取细胞基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。
d. 提取组织基因组时，加入Proteinase K混匀后，在56℃放置，直至组织溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。
血液基因组DNA 提取试剂盒 说明书
广州东盛生物科技有限公司 电话：020-87791356
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核酸纯化系列
操作步骤-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------1 取血液样本，每 400 μl 血液加入到一只 1.5 ml 离心管中。加入 2 倍体积的红细胞裂解液 RS。漩涡振荡或上下来回颠倒混匀。 5,000 rpm 离心 3min，弃上清，收集白色或淡红色沉淀。
血液基因组 DNA 提取试剂盒（硅胶膜离心柱法）
核酸纯化系列
产品组分
组分
红细胞裂解液 RS 消化缓冲液 DS 裂解液 MS 蛋白酶 K 去蛋白液 PS 漂洗液 PE 纯化液 TE DNA 纯化柱 说明书
N1121
80 ml 15 ml 20 ml 1 ml 30 ml 15 ml 5 ml 50 个 1份
液氮，并在样品未完全解冻前加入含有抑制核酸酶作用的螯合剂的裂解液。
问：提取的基因组 DNA 生物活性差，为什么？
答：1 提取的基因组 DNA 盐浓度过高，沿管壁四周加入漂洗液 PE，这样有利于提高清洗效果；
2 DNA 中含有乙醇，严格按第 8 步的离心速度和时间操作；
3 进行 DNA 洗脱时请一定在膜的中央加入纯化液，尽量不要沾染管壁。
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全血 DNA 抽提(QIAGEN,德国)
全血DNA 抽提(QIAGEN，德国)
采用血液基因组DNA 提取试剂盒按说明书进行操作，简述如下：
(1)先将无水乙醇加到漂洗液PW 和缓冲液GD 中，并将血液标本置于室温下平衡至标本完全溶解。
(2)取经RNaseA 酶处理过的离心管，按顺序编号后加入500μl 混匀的标本，随后
加入细胞裂解液CL lml，充分混匀后10000rpm 离心1min。
弃去上清，留下细胞
核沉淀。
(3)加入200μ1 缓冲液GS，振荡混匀。
随后加入20μ1 蛋白酶K 溶液，充分混匀。
加缓冲液GB 200μ1，充分混匀后，56℃水浴10min 至溶液变清亮。
取出后，加
无水乙醇200μl，混匀。
(4)上部物质转移到吸附柱内，12000rpm 离心30s。
弃去液体，并将吸附柱CB3 套在收集管上。
(5)加入500 μl 缓冲液GD，12000rpm 离心30s，弃去液体，将吸附柱CB3 放入收集管中。
(6)加入700μl 漂洗液PW，12000rpm 离心30s，弃去液体，将吸附柱CB3 放入收集管中。
(7)加入500μl 漂洗液PW，12000rpm 离心30s，弃去液体。
12000rpm 继续离心2min，弃去液体。
并把吸附柱置于室温数分钟，彻底晾干吸附材料中的漂洗液。
(8)将吸附柱套上一个干净的离心管中。
向吸附膜中间位置悬空滴加80μl 洗脱缓冲液TB，室温放置5min，12000rpm 离心2min。
将溶液收集到离心管中并标号，置于-20℃冰箱中冻存备用。
DNA提取-SOP
全血DNA提取操作规程一．生物安全要求：DNA提取应在生物安全二级实验室的生物安全柜里完成。
二．试剂盒组分及规格：DNA提取液（含chelex-100等）三．其它实验设备及耗材双蒸水；1.5 mL无菌离心管；0.5-10 μL、20-200 μL、100-1000 μL加样器及枪头；PCR反应管；可调14K微型离心机；漩涡振荡仪四．样本要求1．1 mL EDTA抗凝外周血，采集后轻轻混匀。
样本应尽快送检，保存运输温度为2-8 ℃。
建议2-8℃保存不超过24小时；-20 ℃保存不超过1个月；-70 ℃保存不超过2个月。
避免反复冻融（仅限1次）；如长期保存，建议提取样本DNA后-80 ℃保存。
2.样本中存在的干扰物质在一定范围内不影响检测，当干扰物质超出以下范围时不能保证检测结果的准确性：胆红素480 μmol/L，甘油三酯30 mmol/L，血红蛋白≤600 g/L，抗凝剂浓度0.1875-3 mg/mL。
五．核酸提取操作步骤：1.采集EDTA抗凝全血2.取200 μL EDTA抗凝血至1.5 mL新的无菌EP管中。
3.加入600 μL双蒸水，漩涡振荡混匀，室温放置10 min，期间漩涡振荡混匀2-3次，12000 rpm离心5 min，弃上清。
4.加入200 μL DNA提取液（使用前充分混匀，使颗粒悬浮），100 ℃水浴8 min。
5.12000 rpm离心5 min，取上清用于检测。
血片DNA提取操作规程一．生物安全要求：DNA提取在生物安全二级实验室的生物安全柜里完成。
二．试剂盒组分及规格：DNA提取液（含chelex-100等）三．其它实验设备及耗材双蒸水；1.5 mL 无菌离心管；0.5-10 μL、20-200 μL、100-1000 μL加样器及枪头；PCR反应管；可调14K微型离心机；漩涡振荡仪；打孔器四．样本要求1.每个样本至少3个血斑，且每个血斑直径大于8 mm。
2.血滴自然渗透，滤纸正反面血斑一致。
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明DNA提取是生物学、遗传学和分子生物学等领域的一项重要实验操作。
全血基因组DNA提取试剂盒是用于从全血样本中提取DNA的试剂盒，本文将详细介绍其使用说明。
一、试剂准备：1.预先将试剂盒从-20℃的冷冻器中转移到4℃的冰箱中解冻，取出所需试剂。
2.将试剂A和试剂B随机摇匀，避免沉淀的产生。
二、样本处理：1.取出需要提取DNA的全血样本，将其加入离心管中。
2.加入适量的蒸馏水和样本量相等体积的10%梳酸混匀，使血细胞溶解。
三、样本裂解：1.准备离心管和4℃的离心机。
2.加入适量的样本处理试剂（试剂A和试剂B），混匀离心管。
4.将裂解后的样本置于冰上放置10分钟。
四、DNA纯化：1.准备离心管和4℃的离心机。
2.将样本离心管中的上清转移至新的离心管中，并加入适量的试剂C，混匀并置于冰上放置5分钟。
4.弃去上清，避免悬浮细胞的干扰。
五、脱脂：1.准备脱脂离心管和4℃的离心机。
2.加入适量的试剂D，混匀离心管，置于冰上放置5分钟。
4.弃去上清，避免沉淀的干扰。
六、洗涤：1.准备洗涤离心管和4℃的离心机。
2.加入适量的试剂E和试剂F，混匀离心管，置于冰上放置5分钟。
4.弃去上清，避免沉淀的干扰。
七、DNA溶解：1.准备离心管和4℃的离心机。
2.加入适量的试剂G，混匀并置于冰上放置5分钟。
八、DNA浓缩：1.准备离心管和4℃的离心机。
2.加入适量的试剂H，混匀离心管，置于冰上放置5分钟。
4.弃去上清，避免纯化后的DNA丢失。
九、DNA溶解：1.加入适量的蒸馏水，混匀使DNA溶解。
十、质检：1.准备质检相关设备和试剂。
2.使用紫外分光光度计检测DNA纯度和浓度。
3.对提取的DNA进行PCR扩增、酶切鉴定等质检步骤。
以上就是全血基因组DNA提取试剂盒的使用说明，希望对您在实验中提取DNA有所帮助。
在操作中，请严格按照试剂盒说明书和实验室操作规范进行操作，确保实验的准确性和可重复性。
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彻底重悬才能有效裂解白细胞。
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Wizard®基因组 DNA 纯化试剂盒简明操作步骤
6．向重悬细胞溶液中加入核裂解液（300ul 血样的加 12．300ul 血样的于 13,000-16,000 x g 室温离心 1 分钟；3ml
次）裂解红细胞。2,000 x g 室温离心 10 分钟。
温异丙醇。
4. 尽可能将上清移弃干净，勿搅动白色沉淀。离心管里
会剩余大约 1.4ml 液体。
注释：为避免 DNA 被蛋白污染，在含蛋白沉淀的离心管
内保留少许上清，勿吸取得过于彻底。
若是冷冻过的血样，另加 30ml 细胞裂解液，颠倒 5-6
次混匀，重复 3-4 步骤直到沉淀接近白色。从冷冻血 11. 轻轻颠倒以混匀溶液，直至白色线状 DNA 形成块状沉
上述加有细胞裂解液的离心管中。颠倒离心管 5-6 次混
II. 从全血（300ul 或 3ml）中提取基因组 DNA 的操作
匀。
步骤
经我们测试，从 EDTA、肝素及柠檬酸抗凝管保存的新 鲜全血中提取的基因组 DNA 对于随后的 DNA 操作， 包括 PCR，没有任何不利影响。抗凝血样本可在 2-8 oC 保存至多 2 个月，但保存时间越长，DNA 产量会下降 越多。
烈振荡 10-20 秒。可能有蛋白小团块出现。
III. 从全血（10ml）中提取基因组 DNA
注释：若在步骤 6 中另加了核裂解液，那么 300ul 血样
的应加 130ul 蛋白沉淀溶液；3ml 血样的应加 1.3ml 蛋 经我们测试，从 EDTA、肝素及柠檬酸抗凝管保存的新鲜全
全血基因组DNA 提取试剂盒(溶液法)
全血基因组DNA 提取试剂盒（溶液法）（Blood genomic DNA isolation Kit, Solution method ）PBZ 0206‐3 处理25 ml 血液量170.00PBZ0206‐4 处理50 ml 血液量380.00简介本试剂盒用于各种抗凝剂（如EDTA、柠檬酸和肝素）抗凝处理后的多个物种的新鲜和冷冻血液以及凝血块中基因组DNA的提取。
该试剂盒提供的方法简单易行，不需特殊设备，无需过柱，避免酚仿抽提。
所获的基因组DNA无RNA、蛋白质、膜脂、血红素等污染，并具有完整性好、产量大、纯度高和稳定性好等特点。
可以满足PCR、酶切、分子杂交和文库构建等各种分子生物学实验需要。
试剂盒组成红细胞裂解液RBL 75 ml 细胞裂解液CLB 30 ml 沉淀剂PPR 10 ml缓冲液TE 15 ml需自备的试剂无水乙醇，70％乙醇和等渗盐溶液（无菌的0.15mol/L NaCl溶液或PBS液）保存条件及有效期试剂盒保存在室温（15‐30℃）。
试剂如出现混浊或结晶，可以将试剂瓶置于55℃水浴加热，溶液变清亮后再使用。
本试剂盒有效期为12 个月。
操作步骤鸟类等含有核红细胞的血液处理取20‐50μl抗凝血于一个新的1.5ml离心管中。
直接加入600μl细胞裂解液CLB。
细胞裂解和DNA提取步骤同哺乳动物和人类等含无核红细胞的血液处理方法中的步骤。
人类和哺乳动物等含无核红细胞的血液处理（以处理0.5ml起始血量为例）1. 颠倒采血管数次使血液混合均匀，吸取0.5ml抗凝血于一个1.5ml的新的尖底离心管中，加入0.5ml红细胞裂解液RBL，颠倒离心管2‐3次使混合均匀，静止放置2分钟。
抗凝血和红细胞裂解液CLB以等体积混合。
2. 室温3,000rpm离心2分钟（以上海安亭TGL‐16G台式离心机为例），倒掉上清液。
3. 加入0.5ml红细胞裂解液RBL，用手指弹击离心管管底，重新悬浮细胞沉淀，立即离心，3,000rpm离心2 分钟，倒掉上清液，此时可以明显看到细胞沉淀，但可能还带有一些红色物质。
全血细菌DNA试剂盒操作步骤说明书
全血细菌DNA试剂盒Cat. No. 5次制备300400550次制备3004050250次制备3004250核酸纯化柱2 ml离心管溶菌酶Buffer L1Buffer L2Buffer WA（浓缩液）Buffer WB（浓缩液）Buffer TE说明书5个5个30 mg2 ml2 ml1.9 ml1.5 ml1.2 ml1份50个50个300 mg16 ml16 ml12 ml10 ml12 ml1份250个250个1.5 g80 ml80 ml60 ml50 ml60 ml1份产品储存与有效期溶菌酶请置于2~8℃贮存。
其他物品如果储存于室温（15~25℃），可在两年内保持使用性能无明显变化；如果将产品储存于2~8℃，可延长产品的有效期至两年以上。
技术支持杭州新景生物产品介绍本产品适合从350 µl新鲜的或者是冷冻贮藏的人或动物全血中快速分离纯化血液总DNA。
溶菌酶将全血中的细菌破壁后，裂解液溶解全血及血液中的细菌，再经Buffer L2沉淀去除血红蛋白，上清中的细菌DNA与细胞DNA一起吸附到纯化柱上，经Buffer WA和Buffer WB洗涤去除残留在膜上的蛋白与PCR抑制物后，DNA用Buffer TE洗脱，并可立即用于各种分子生物学实验。
用户需自备的试剂与物品1．去离子纯水、无水乙醇2．1.5 ml离心管3．移液器吸头（为避免样品间的污染，建议选用含有滤芯的移液器吸头）4．一次性手套及防护用品和纸巾5．台式小量离心机（可配离心1.5 ml离心管和2 ml离心管的转子）6．水浴锅或干浴锅、旋涡震荡器使用前准备1.如果离心机有制冷功能，请将温度设置到25℃。
2.将水浴锅温度设置到37℃，并将Buffer TE温育至37℃。
3.根据一次提取的标本数（按每个标本需加50 µl溶菌酶溶液计算）配制适量的100 mg/ml的溶菌酶溶液：比如要提取10个标本的细菌基因组DNA，则称取55 mg溶菌酶干粉，加入550 µl去离子纯水配制成550 µl溶菌酶溶液。
大量全血基因组DNA提取试剂盒说明书-_39769
大量全血基因组DNA提取试剂盒说明书操作步骤：(以5ml血液为例)1.将10x红细胞裂解液用纯水稀释成1x红细胞裂解液，两组共用一个50ml离心管去稀释。
2. 从4度冰箱拿出血液，恢复室温，将5ml血液从抗凝管转移到新的已灭菌的50ml的大离心管中。
3.在大离心管中加入1x红细胞裂解液的量是血液原体积的3倍（若原血液体积为5ml,即加入1x红细胞裂解液的量是15ml,若原血液体积为4ml,即加入1x红细胞裂解液的量是12ml），即将1x红细胞裂解液3ml加入抗凝管冲洗抗凝管中残留血液，一并倒入盛有血液的50ml离心管里，然后再加1x红细胞裂解液12ml，上下颠倒混匀15-20min，确保充分混匀。
4. 将混好的大离心管两两同学相互配平，在大离心机上离心2min，转速为4000r/min，离心结束后将红色上清小心的倒在废液缸里，剩余部分用枪吸去（注意不要吸到管底的细胞团）留下和管底白细胞团等体积的残留上清。
（离心后在管底也有可能有一些红细胞残片和白细胞团在一起，但是如果看到的是大部分的红色细胞团，说明红细胞裂解很不充分，应再重复步骤2和3）。
5. 然后在涡旋振荡仪上涡旋震荡直到白细胞团充分重悬、分散。
（白细胞的重悬分散对下一步裂解非常重要，白细胞末打散就加入裂解液，会导致白细胞不能充分裂解，形成肉眼可见团块）。
6. 向涡旋好的离心管中加入5ml细胞核裂解液到重悬的白细胞（加入细胞核裂解液的量与血液原体积相等），在涡旋振荡仪上涡旋震荡，一定要让液体漩涡起来，时间为从漩涡起共10-20S。
7. 加入1.67ml蛋白沉淀液后（加入蛋白沉淀液的量是血液原体积的1/3），在漩涡振荡器上从漩涡起30s，混匀后可能见到一些小的蛋白团块。
8.将混好的大离心管两两同学相互配平，在大离心机上离心5min，转速为4000r/min，，这时候应该可以见到管底暗褐色的蛋白沉淀，也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。
9.离心结束后，直接将上清倒入另一个新的15ml的离心管中。
大量全血基因组DNA提取试剂盒操作方法及步骤说明书
大量全血基因组DNA提取试剂盒目录号：DN04DN0401 16次×10mlDN0402 32次×10mlDN0403 96次×10ml适用范围：适用于快速提取各种动物全血基因组DNA试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存16次×10ml 32次×10ml 96次×10ml10x红细胞裂解液室温50 ml 100 ml 300 ml细胞核裂解液室温180 ml 180×2 ml 250 m l×4蛋白沉淀液室温55 ml 110 ml 330 mlDNA溶解液室温15 ml 30 ml 90 ml 本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。
储存事项:1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。
首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞，细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA 溶解液。
产品特点：1.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全。
2.不需要使用有毒的苯酚等试剂。
3.快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。
4.结果稳定，产量高（典型的产量10ml全血可提取出150-500µg），OD260/OD280典型的比值达 1.7～1.9，长度可达50kb-150kb，可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。
全血基因组DNA的提取
实验2 全血基因组DNA的提取原理：由于血液各组成成分颗粒大小及比重的不同，利用明胶的吸附作用，使红细胞沉降在管底，从而与白细胞分离。
通过SDS的破膜（细胞膜和核膜）作用，使白细胞释放出DNA，然后利用酚和氯仿抽提纯化，分离除去蛋白质，最后用乙醇沉淀析出DNA。
材料：方法：1.提取WBC（1）取1ml全血（EDTA抗凝），加入等体积（1ml ）3%的明胶，盖紧后颠倒混匀，37℃水浴静置5-10分钟。
明胶是高分子的聚合物，可与红细胞粘合并使其凝聚成串钱状而加速红细胞快速沉降，使之与白细胞分离。
（2）取上清液至另一干净离心管，4000转离心5分钟。
（3）弃上清液，留沉淀。
2.破碎WBC在留有沉淀的离心管中加TES 2ml，溶解沉淀（滴管或加样器抽吸，一定要充分吹散沉淀以利于破膜）后加10% SDS 10滴，抽吸混匀，破膜。
以后的操作要小心轻柔，以免机械剪切力破坏核酸的完整性（核酸已释出）3.抽提DNA（1）加入2 ml pH 7.8的饱和酚（在通风橱中操作，吸取下层。
苯酚有毒，注意安全），颠倒混匀（一定要充分混匀）。
4000转离心5-10分钟。
（2）取上层水相至另一离心管，加入等体积的氯仿：异戊醇（24：1）（在通风橱中操作，有毒，注意安全），颠倒混匀，4000转离心5分钟。
4.沉淀DNA将上层水相移至一小玻璃试管中，小心沿试管壁加入2.5倍体积的无水乙醇，用滴管吸上层乙醇沿管壁缓慢冲洗下层溶液（小心，不要把DNA吹散），看到DNA絮状沉淀完全析出为止。
5.溶解DNA沉淀用吸管吸出絮状沉淀至另一1.5ml小离心管，稍离心后加入70%乙醇洗涤1次（去除共沉淀的盐），离心后将乙醇去除干净，挥干5-10分钟。
将上述挥干的DNA加入200-300μl TE（或者双蒸水），轻轻震荡，使之溶解，冰箱保存备用。
结果：获得基因组DNA讨论：小组10人，个人分别为一组，有的同学的DNA成形状不明显，到实验步骤的最后没有肉眼看见DNA絮状沉淀析出，难以判断基因组DNA是否提取成功。
试剂盒DNA提取详细操作步骤
试剂盒DNA提取详细操作步骤一、试剂盒打开后需要准备的工作1、Proteinase K（蛋白酶K）的溶解①取4.5ml双蒸水加入蛋白酶K粉中使其充分溶解②将溶解好的蛋白酶K溶液分装进小离心管，每管100u l～200ul③将分装好的Proteinase K放入-20℃冰箱中保存，使用期限为12个月2、组织抑制剂（Inhibitor Removal buffer）的调配加入20ml无水乙醇（absolute ethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩3、洗液（wash buffer）的调配加入80ml无水乙醇（absolute ethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩二、组织DNA提取（试剂盒）1、组织样品处理与消化①将采集来的样品剪碎（≤0.1cm）洗净保存液。
②加入组织破解液Tissue-lysis 200ul 蛋白酶K 40ul然后放入55℃水浴锅内3个小时使其充分消化。
2、DNA提取①在消化好的组织样品中加入结合液binding buffer 200ul 然后放入70°水浴锅中10分钟。
②再加异丙醇100ul 混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g一分钟。
③倒掉底液，加500ul组织抑制剂Inhibitor Removal 然后离心倒掉底液④加洗液washing buffer500ul离心（洗液加两次）⑤在70℃预热Elution Buffer，然后将洗好的柱体下部分丢掉，换新的离心管加入Elution Buffer200ul溶解10分钟离心保留底液放-20℃保存。
三、细胞DNA的提取（试剂盒）1、组织样品处理与消化①将带有培养基的样品用PBS清洗干净8000rpm/1min离心，倒掉上清②加PBS200ul振荡摇匀使之样品成为单个细胞的悬浊液③加200ul Binding Buffer，40ul蛋白酶K 混合均匀放入70℃水浴锅内消化10分钟。
2、DNA提取①加异丙醇100ul 混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g一分钟。
新型大量植物DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
新型大量植物DNA快速提取试剂盒目录号：DN38适用范围：适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存10次（DN3801）RNase A(10mg/ml) -20℃500 μl缓冲液AP1 室温50 ml缓冲液AP2 室温20 ml缓冲液AP3/E 室温40 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温25ml x2第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温20 ml吸附柱AC 室温10个收集管（50ml）室温10个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解（AP3/E加入乙醇前可加热，加入乙醇后不可加热），恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。
可在1小时左右完成一个或多个1g新鲜或200mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。
提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
新鲜或干燥的植物组织（细胞）磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
Qiagen全血基因组DNA提取标准步骤(51185)
全血基因组DNA提取
试剂盒名称：
QIAamp DNA Blood Midi Kit（100）
Qiagen全血基因组DNA提取试剂盒
试剂盒货号：
51185
前期准备：
1.5mL EP管、水浴锅、水平转子离心机、震荡器等设备耗材准备，试剂盒提供的蛋白酶溶解、AW1和AW2使用前加入相应体积的无水乙醇。
注：所需设备耗材由新华医院分子诊断实验室提供。
实验步骤：
1、往15mL离心管管底加入100微升Qiagen蛋白酶。
2、加入1mL全血。
注：全血体积不足1mL时，PBS补齐1mL。
3、加入1.2mL AL缓冲液，充分混匀，震荡器上斡旋震荡至少一分钟，使溶液成为均相溶液。
4、70℃水浴锅温育10分钟。
5、加入1mL无水乙醇，充分震荡。
6、转移液体至吸附柱中，3000rpm离心3分钟，拿出吸附柱，倾倒滤液，将吸附柱重新放回15mL离心管中。
7、小心加入AW1缓冲液至吸附柱中，盖上盖子，5000rpm离心
1分钟。
8、加入2mL AW2缓冲液至吸附柱中，盖上盖子，5000rpm离心15分钟。
9、将吸附柱转移至一新的15mL离心管中，弃去装有滤液的收集管。
10、加入200微升AE洗脱液，室温静置5分钟，5000rpm离心2分钟。
11、将获得的基因组DNA进行浓度及质量测定。
血液基因组DNA的提取2
二、操作步骤
1. 处理血液材料 ⑴当血液样品体积小于200ul时，可加缓冲液GS补 足体积至200ul，再进行下一步实验 ⑵当血液样品体积达200 µ l ，需用细胞裂解液CL 处理，具体步骤如下： 在样品中加入1-2.5（2.5倍）倍体积的细胞裂解 CL，颠倒混匀，10,000rpm(～11,500g)离心1分 钟，吸去上清液，留下细胞核沉淀（如果裂解不 彻底，可重复以上步骤一次），向离心收集到的 细胞核沉淀中加200 µ l缓冲液GS，振荡至彻底混 匀。 2. 加入20 µ l蛋白酶K溶液，混匀。 3. 加200 µ l缓冲液GB，充分颠倒混匀，56℃放置10
谢谢！
材料中残余的漂洗液。（此步骤是将吸附柱中 的漂洗液去除 10. 将吸附柱CB3转入1.5ml离心管中，向吸附膜 中间位置悬空滴加50-200ul洗脱缓冲液TB，室 温放置2-5分钟，12，000 rpm（13,400×g） 离心2分钟，将溶液收集到离心管中（注：洗脱 缓冲液体积不应少于50ul，体积过小影响回收 率。洗脱液的pH对于洗脱效率有很大影响。pH 保持在7.0-8.5范围内最佳，DNA产物应保存在20℃。）。
分钟，其间颠倒混匀数次，溶液应变清亮（如溶 液未彻底变清亮，请延长裂解时间至溶液清亮为 止）。
注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般37℃放置时会消失，不会影 响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量 少和提取出的DNA不纯。当血液体积≦200ul且没有采用红细胞裂解处理，或 是样本储存条件不佳，水浴后颜色可能为深褐色，注意溶液中没有团块等沉 淀。
4. 加200 µ l无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能 会出现絮状沉淀。 5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附 柱CB3中（吸附柱CB3放入收集管中）， 12,000rpm(～13,400×g)离心30秒，倒掉收集 管中的废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
全血DNA
丢弃有血凝块的标本，重新用 EDTA, 肝素，柠檬酸抗凝管收集血液。
处理前先把血液标本回复到室温。 可延长裂解时间至 15 分钟以上。 裂解过程中可以更多次颠倒混匀，或
者轻弹管壁帮助裂解。 增加起始血液处理量
血液标本存放时间太 存放在 4℃的血液标本超过 5 天的产 Nhomakorabea长
量可能大大降低，因此不要存放太久。
10． 所得 DNA 溶液放置在-20℃保存。
六、疑难解答（Trouble shooting）
出现的问题
可能的原因
建议解决方法
标本中含有血凝 块
红细胞裂解不完 全
不恰当的存放标本，未 充分混匀，未使用合适
的抗凝收集管 血液标本裂解前没有
回复到室温 裂解时间不够 裂解过程中没有多次
混匀 血液标本中本身含有
DNA 下游酶切不能 切开或者酶切不
完全
忘记做步骤 8，乙醇抑 制了酶切反应
一些硅基质膜成分一 起洗脱下来，抑制了酶
切反应
做步骤 8，然后空气中晾几分钟，让残 留乙醇挥发。
将洗脱的基因组 DNA 溶液 13，000rpm 再离心一分钟，小心取上清使用。
DNA长度小于15kb
A260吸光值异常 偏高
血液样品太老或者不 正确的存放，造成 DNA
7． 加入500μl漂洗液PW，12000rpm离心30秒，弃掉废液。
8． 将吸附柱放回收集管中，12000rpm离心2分钟。 9． 吸附柱转入一干净的离心管中，向硅胶膜中间部位加入50-200 μl 洗脱缓冲液EB，70°C放置5
分钟，12000 rpm离心1分钟。 洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要 DNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体 积不应少于 50μl，体积过小降低 DNA 洗脱效率，减少 DNA 产量。
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大量全血基因组DNA提取试剂盒
目录号：DN04
DN0401 16次×10ml
DN0402 32次×10ml
DN0403 96次×10ml
适用范围：
适用于快速提取各种动物全血基因组DNA
试剂盒组成、储存、稳定性：
试剂盒组成保存16次×10ml 32次×10ml 96次×10ml
10x红细胞裂解液室温50 ml 100 ml 300 ml
细胞核裂解液室温180 ml 180×2 ml 250 m l×4
蛋白沉淀液室温55 ml 110 ml 330 ml
DNA溶解液室温15 ml 30 ml 90 ml 本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。
储存事项:
1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在
37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不
能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时
盖紧盖子。
产品介绍：
本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。
首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞，细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA 溶解液。
产品特点：
1.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全。
2.不需要使用有毒的苯酚等试剂。
3.快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。
4.结果稳定，产量高（典型的产量10ml全血可提取出150-500µg），OD260/OD280
典型的比值达 1.7～1.9，长度可达50kb-150kb，可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。
注意事项
1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到2,500 x g，并配备容纳50ml心
管转头的传统台式离心机。
2.用户需自备异丙醇和70％乙醇。
3.典型的产量10ml全血可提取出150-500µg基因组DNA（不同样品尤其疾病样品中
中白细胞数量差异可能非常大，因此产量的个体差异也可能非常大）。
4.本试剂盒为溶液型，可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量
（20µl-10ml），请联系我们索取其它处理量的操作手册。
5.本试剂盒可运用于多种抗凝剂的全血，如EDTA、柠檬酸、肝素抗凝血。
其中由
于肝素抗凝血的白细胞沉淀团很难打散重悬，影响裂解效果，建议选用非肝素的抗凝剂收集血液标本。
6.为了最佳效果，最好使用新鲜血液标本或者4℃存放小于3天的标本，不要使用反
复冻融超过3次的标本，否则会严重降低产量。
操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
1.吸取30ml 1x红细胞裂解液到一个50ml离心管。
使用前应该用去离子水将10x红细胞裂解液稀释10倍到1x。
2.将抗凝全血（使用前回复到室温）颠倒混匀后，吸取10ml加到上步装有红细胞
裂解液离心管中，颠倒6-8次，并倒置轻弹管壁，确保充分混匀。
3.室温放置10分钟（期间应该颠倒轻弹混匀数次帮助裂解红细胞）。
4.2,500 x g离心2分钟，倒弃红色上清，并小心的尽可能多的吸弃上清（注意不要
吸到管底的细胞团），留下完整的管底白细胞团和大约100μl的残留上清。
离心后在管底应该见到白色的白细胞团，也可能有一些红细胞残片和白细胞团在一起，但是如果看到的是大部分的红色细胞团，说明红细胞裂解很不充分，应该再加入适量红细胞裂解液重悬细胞团后重复步骤3，4。
5.涡旋振荡直到白细胞团充分重悬、分散。
白细胞的重悬分散对下一步裂解非常重要，白细胞未打散就加入裂解液，会导致白细胞不能充分裂解，形成肉眼可见团块。
6.加入10ml细胞核裂解液到重悬的白细胞，上下吹打裂解白细胞，或者剧烈涡旋
10秒帮助裂解白细胞。
7.可选步骤: 在裂解物中加入RNase A（10mg/ml）至终浓度30μg/ml，颠倒25次混
匀，37℃温育15分钟去除残留RNA，然后冷却回室温。
8.加入3.33ml蛋白沉淀液后，在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀25秒。
混匀后可
能见到一些小的蛋白团块。
9.2,500 x g(可根据需要调整加大离心力)离心5分钟。
这时候应该可以见到管底暗褐
色的蛋白沉淀，也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。
10.小心吸取上清（大约10ml）到一个新的50ml离心管中。
吸取上清时，注意不要吸到管底的和漂浮在液体表面的蛋白沉淀。
如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中，可再次离心2分钟后取上清。
11.加入等体积的室温异丙醇（约10ml），轻柔颠倒30次混匀或者直到出现棉絮状（丝
状）白色DNA沉淀。
12.2,000 x g离心3分钟，在管底可以见到白色的DNA沉淀块，倒弃上清。
13.加入10ml 70％乙醇，颠倒几次漂洗DNA沉淀，2,000 x g离心1分钟, 倒去上清
（沉淀很松，注意不要把DNA沉淀倒掉了），倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇，还可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙醇，空气晾干沉淀几分钟。
注意不要干燥过头，否则DNA极其难溶；也不能残留太多乙醇，否则乙醇可能抑制下游如酶切反应。
14.加入600μlDNA溶解液（如果需要浓度高，可根据需要减少DNA溶解液用量）
重新水化溶解DNA沉淀，轻弹管壁混匀，可以放置在65℃温育30-60分钟（不要超过一小时），也可以在室温或者4℃放置过夜来重新水化DNA，中间不时的轻弹管壁帮助重新水化DNA。
15.DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放，可以放置在－20℃。
问题与解决方法。