肝脏灌注损伤过程中TNF-α的表达
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１ 材 料 与 方 法
１１材 料 ．
行 的中央静脉 ， 中央静脉 周围是大致呈放射状排列 的肝细胞和 肝血窦 肝血窦位于肝板之 间，互相吻合 成网状管道 。血窦腔
大而不规则，血液从肝 小叶的周边经血窦流 向中央 ， 汇入中央 静脉 。 血窦壁 由内皮细胞组成 ， 窦腔 内有定居于肝 内的巨噬细 胞和大颗粒淋 巴细胞 （ １ 。实验组肝组织血管 内大量 白细胞 图 ） 粘附于血管壁 ，并可见血栓形成 ， 索紊 乱，血管周 围组织浊 肝 肿变性、可见 明显 白细胞浸润 （ ２ 。 图 ）
［ 要］探 讨肝缺血再灌注过程 中 Ｔ Ｆ 浸 润与肝损伤之 间的关 系及作用机制 。建立肝缺 血再 灌注动物模 型，用免 疫组 织 摘 Ｎ—
正常组 ，差异有显 著性 （＜ ． ） Ｐ ０ １。结论 ｎ 一 Ｏ ａ参与肝缺血再灌注损 伤过程 ，其升 高程度与肝组织损伤程度有关。
［ 关键词］ ， 肝 缺血再 灌注损 伤 肿 瘤坏死 因子 中图分类号 ：Ｒ ２ ． ３ ２４ 文献标识码 ：Ｂ ， ｖ 文 章编 号：１ ０ －４ ４２ ０ ）—０ ４０ ０ ＇ ４７ ８ （０ ８８０ ８ － ３
・
论
著 ・
２ ０ 年 ８月 第 １ 第 １ ０８ ７卷 ６期 Ｃ ｉ ｃｌｏ ｒａ ｌ ｉａ Ｊｕｎ ｌ ｎ
肝脏 注损伤过程丰 ＴＦ Ｑ Ｎ－ 的表达
荆 丽艳 韩 建 国 ２
（．山东省泰 安卫生学校 １
、～ ． ． ’
２ １０ ；２ ７０ ０ ．山东泰安 市 中心 医院
２１０） ７ ０ ０
重建血 供时 ，肝脏易受 到进 一步 的损伤使 已经 缺血 的损 伤加
剧， 这就被称为肝缺血再 灌注损伤 （ｅ ａ ｃ ｓｈ ｍｉｒｐｒ ｓ ｎ ｈｐ ｔ ｃ ｅ ａ ｅｅｆ ｉ ｉｉ ｕｏ
动 物 适 应 性 喂 养 一 周 ， 术 前 １ 时 禁 食 ， 自由饮 水 。 动 ２小
物 称重。采用 １％水合 氯醛 （． ／０ｇ体重） ０ Ｏ３ １０ ｍｌ 腹腔注射 麻醉。 兔仰 卧于术台，固定，消毒，打开腹腔 ， 暴露 门静脉和 肝动脉 ， 以显微 手术用无损伤动脉夹夹闭系膜 门静脉和肝动脉入肝处 。 无菌 生理盐水纱布覆盖切 口，旁照灯照射保暖 。１ 小时后松开 动脉夹 恢血 流， 次关闭切 口。 依 对照 组只进行 同样操作但不夹 闭门静脉和肝动 脉。正常组不手术。手术后予 以分笼饲养 。 ６小 时后处死动物 ，３组同样进行肝动脉 多聚 甲醛灌注 ， 取距肝 门 １ ． ５厘米处肝组织 １ 厘米 ，固定 ，常规石蜡包埋 ， １ Ｘ 组织切片 ，通过普通 Ｈ Ｅ染 色观 察肝组织 细胞学形态 ：用免疫 组织化学方 法染色显示肝组织细胞 Ｔ ＮＦａ的表达情况 ；并用 Ｓ ｍｐ— Ｃ ａ ｌＰ Ｉ图象 分 析 系统 进行 半 定量 分 析 。所 得数 据 利 用
的阳性细胞 出现 。对照组 ：和正常组差别不大 （ ３ ） 图 、４ 。实
抗体 ， 抗兔二抗免疫组化试剂盒 ： 羊 优博士德 生物工程 有限公
司 提 供 。 主 要 仪 器 ： Ｓ ｍ ｌＰ Ｉ 图 象 分 析 系 统 ： 美 国 产 ； ａ ｐ－ Ｃ
ＯＬ ＹＭＯＵＳ Ｘ５ ，Ｐ ２ ， 日本产 。 ，Ｂ ０ Ｍ－ 主要位于肝小叶周边、肝血窦
壁（ 内皮细胞） 图 ５ ） Ｓ ｍｐ— Ｃ。 （ 、６ ａ ｌ Ｉ图像分析系统进行 免疫 Ｐ
阳 性 细 胞 半 定 量 分 析 ， 验 组 平 均 光 密 度 值 高 于 对 照 组和 正常 实
组，差异 有显著性 （＜ １ 。结果见 表 １ Ｐ ００ ） 。 表 １ Ｔ ＦＱ免疫组化染色的 Ｏ Ｔ Ｍ值结果 （±ｓ Ｎ ＰＤ ｘ ）
２ ＮＦ 免 疫 组化 染 色检 测 结 果 ．Ｔ ２
健康纯种新西兰大 白兔 ２ 只 ，雌雄不 限，随机 分为实验 １
组 、 对 照 组 和 正 常 组 ，每 组 ７ 只 。 主 要试 剂 ： 鼠抗 兔 Ｔ Ｆａ Ｎ
正 常 组 ：在 肝 小 叶 周边 、肝 血 窦 壁 有 量 少 、染 色 相对 较 浅
实验组与对照 组、正常组相 比 Ｐ ０ １ ＜． 。 ０
附 图
Ｓ Ｓ １． Ｐ Ｓ ００统计学软件进行 ｔ 检验 。
２ 结果 、 图 ｉ 对照组 Ｈ Ｅ染色 结果 Ｘ２ ０
２１ＨＥ染 色 结果 ．
对照组结果与正常组相 比差别不大 ， 肝小叶是肝 的基本结
构单位 呈 多角棱柱体 ，长约 ２ ｍ，宽约 Ｉ ｍ，成人肝约 有 ｉ ｒ ｍ
缺血再灌注损伤 （ ｃｅ ａｒｐｒ ｓ ｎｍ ｕｙ Ｒ ） ｉ ｈ ｍｉ ｅｅｆ ｉ ｊｒ ，Ｉ Ｉ是导致 ｓ ｕｏ 肝切 除后肝 功 能衰竭和肝移 植后移植物 早期非 免疫性 失活的 重要原 因， 其过程包括 多种细胞 因子和化学 因子参与 ， 多个基 因激活及肝脏微循环 的若干 改变 ，多数情况下 ，细胞 、组织损 伤和修复是共存 的。 本项研究 以免 为实验对象 ， 立肝缺血动 建 物模型 ，观察 Ｔ Ｆ Ｎ —Ｑ在 ＨＩＩ 的表达 ，并探讨作用机 制。 Ｒ中
一 瞿 化 学方法染色显示肝 组织细胞 Ｔ Ｆ 的表 达情 况 ；并用 Ｓ ｍｐ— Ｃ Ｎ－ ａ ｌＰ Ｉ图象分析 系统进行半定量分析。ｎ 一 ｄ免 疫组化 染色
检测 结果 显示 ： 实验组肝组 织细胞 可见 大量 染色阳性细胞 ，免 疫阳性 细胞 半定量分析 ，实验组平均光 密度值 高于对照组和
５ ０万～ ０ １０万个肝小叶 。小叶之 间以少量结缔组织分 隔，相邻 肝小叶常连成一片 ， 分界不清 。 肝小叶中央有一条沿其 长轴走
・８ ・ ４
２０ ０ ８年 ８月第 １ ７卷第 １ ６期
Ｃ ｉｉ￣Ｊｏｎ ｌ ｃ ｏｒ￣ ｎ
・
论
著 ・
大范 围的肝 内损伤 时，需要一段时间缺血期 （ 血流 阻断期） 在 。
１１材 料 ．
行 的中央静脉 ， 中央静脉 周围是大致呈放射状排列 的肝细胞和 肝血窦 肝血窦位于肝板之 间，互相吻合 成网状管道 。血窦腔
大而不规则，血液从肝 小叶的周边经血窦流 向中央 ， 汇入中央 静脉 。 血窦壁 由内皮细胞组成 ， 窦腔 内有定居于肝 内的巨噬细 胞和大颗粒淋 巴细胞 （ １ 。实验组肝组织血管 内大量 白细胞 图 ） 粘附于血管壁 ，并可见血栓形成 ， 索紊 乱，血管周 围组织浊 肝 肿变性、可见 明显 白细胞浸润 （ ２ 。 图 ）
［ 要］探 讨肝缺血再灌注过程 中 Ｔ Ｆ 浸 润与肝损伤之 间的关 系及作用机制 。建立肝缺 血再 灌注动物模 型，用免 疫组 织 摘 Ｎ—
正常组 ，差异有显 著性 （＜ ． ） Ｐ ０ １。结论 ｎ 一 Ｏ ａ参与肝缺血再灌注损 伤过程 ，其升 高程度与肝组织损伤程度有关。
［ 关键词］ ， 肝 缺血再 灌注损 伤 肿 瘤坏死 因子 中图分类号 ：Ｒ ２ ． ３ ２４ 文献标识码 ：Ｂ ， ｖ 文 章编 号：１ ０ －４ ４２ ０ ）—０ ４０ ０ ＇ ４７ ８ （０ ８８０ ８ － ３
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论
著 ・
２ ０ 年 ８月 第 １ 第 １ ０８ ７卷 ６期 Ｃ ｉ ｃｌｏ ｒａ ｌ ｉａ Ｊｕｎ ｌ ｎ
肝脏 注损伤过程丰 ＴＦ Ｑ Ｎ－ 的表达
荆 丽艳 韩 建 国 ２
（．山东省泰 安卫生学校 １
、～ ． ． ’
２ １０ ；２ ７０ ０ ．山东泰安 市 中心 医院
２１０） ７ ０ ０
重建血 供时 ，肝脏易受 到进 一步 的损伤使 已经 缺血 的损 伤加
剧， 这就被称为肝缺血再 灌注损伤 （ｅ ａ ｃ ｓｈ ｍｉｒｐｒ ｓ ｎ ｈｐ ｔ ｃ ｅ ａ ｅｅｆ ｉ ｉｉ ｕｏ
动 物 适 应 性 喂 养 一 周 ， 术 前 １ 时 禁 食 ， 自由饮 水 。 动 ２小
物 称重。采用 １％水合 氯醛 （． ／０ｇ体重） ０ Ｏ３ １０ ｍｌ 腹腔注射 麻醉。 兔仰 卧于术台，固定，消毒，打开腹腔 ， 暴露 门静脉和 肝动脉 ， 以显微 手术用无损伤动脉夹夹闭系膜 门静脉和肝动脉入肝处 。 无菌 生理盐水纱布覆盖切 口，旁照灯照射保暖 。１ 小时后松开 动脉夹 恢血 流， 次关闭切 口。 依 对照 组只进行 同样操作但不夹 闭门静脉和肝动 脉。正常组不手术。手术后予 以分笼饲养 。 ６小 时后处死动物 ，３组同样进行肝动脉 多聚 甲醛灌注 ， 取距肝 门 １ ． ５厘米处肝组织 １ 厘米 ，固定 ，常规石蜡包埋 ， １ Ｘ 组织切片 ，通过普通 Ｈ Ｅ染 色观 察肝组织 细胞学形态 ：用免疫 组织化学方 法染色显示肝组织细胞 Ｔ ＮＦａ的表达情况 ；并用 Ｓ ｍｐ— Ｃ ａ ｌＰ Ｉ图象 分 析 系统 进行 半 定量 分 析 。所 得数 据 利 用
的阳性细胞 出现 。对照组 ：和正常组差别不大 （ ３ ） 图 、４ 。实
抗体 ， 抗兔二抗免疫组化试剂盒 ： 羊 优博士德 生物工程 有限公
司 提 供 。 主 要 仪 器 ： Ｓ ｍ ｌＰ Ｉ 图 象 分 析 系 统 ： 美 国 产 ； ａ ｐ－ Ｃ
ＯＬ ＹＭＯＵＳ Ｘ５ ，Ｐ ２ ， 日本产 。 ，Ｂ ０ Ｍ－ 主要位于肝小叶周边、肝血窦
壁（ 内皮细胞） 图 ５ ） Ｓ ｍｐ— Ｃ。 （ 、６ ａ ｌ Ｉ图像分析系统进行 免疫 Ｐ
阳 性 细 胞 半 定 量 分 析 ， 验 组 平 均 光 密 度 值 高 于 对 照 组和 正常 实
组，差异 有显著性 （＜ １ 。结果见 表 １ Ｐ ００ ） 。 表 １ Ｔ ＦＱ免疫组化染色的 Ｏ Ｔ Ｍ值结果 （±ｓ Ｎ ＰＤ ｘ ）
２ ＮＦ 免 疫 组化 染 色检 测 结 果 ．Ｔ ２
健康纯种新西兰大 白兔 ２ 只 ，雌雄不 限，随机 分为实验 １
组 、 对 照 组 和 正 常 组 ，每 组 ７ 只 。 主 要试 剂 ： 鼠抗 兔 Ｔ Ｆａ Ｎ
正 常 组 ：在 肝 小 叶 周边 、肝 血 窦 壁 有 量 少 、染 色 相对 较 浅
实验组与对照 组、正常组相 比 Ｐ ０ １ ＜． 。 ０
附 图
Ｓ Ｓ １． Ｐ Ｓ ００统计学软件进行 ｔ 检验 。
２ 结果 、 图 ｉ 对照组 Ｈ Ｅ染色 结果 Ｘ２ ０
２１ＨＥ染 色 结果 ．
对照组结果与正常组相 比差别不大 ， 肝小叶是肝 的基本结
构单位 呈 多角棱柱体 ，长约 ２ ｍ，宽约 Ｉ ｍ，成人肝约 有 ｉ ｒ ｍ
缺血再灌注损伤 （ ｃｅ ａｒｐｒ ｓ ｎｍ ｕｙ Ｒ ） ｉ ｈ ｍｉ ｅｅｆ ｉ ｊｒ ，Ｉ Ｉ是导致 ｓ ｕｏ 肝切 除后肝 功 能衰竭和肝移 植后移植物 早期非 免疫性 失活的 重要原 因， 其过程包括 多种细胞 因子和化学 因子参与 ， 多个基 因激活及肝脏微循环 的若干 改变 ，多数情况下 ，细胞 、组织损 伤和修复是共存 的。 本项研究 以免 为实验对象 ， 立肝缺血动 建 物模型 ，观察 Ｔ Ｆ Ｎ —Ｑ在 ＨＩＩ 的表达 ，并探讨作用机 制。 Ｒ中
一 瞿 化 学方法染色显示肝 组织细胞 Ｔ Ｆ 的表 达情 况 ；并用 Ｓ ｍｐ— Ｃ Ｎ－ ａ ｌＰ Ｉ图象分析 系统进行半定量分析。ｎ 一 ｄ免 疫组化 染色
检测 结果 显示 ： 实验组肝组 织细胞 可见 大量 染色阳性细胞 ，免 疫阳性 细胞 半定量分析 ，实验组平均光 密度值 高于对照组和
５ ０万～ ０ １０万个肝小叶 。小叶之 间以少量结缔组织分 隔，相邻 肝小叶常连成一片 ， 分界不清 。 肝小叶中央有一条沿其 长轴走
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２０ ０ ８年 ８月第 １ ７卷第 １ ６期
Ｃ ｉｉ￣Ｊｏｎ ｌ ｃ ｏｒ￣ ｎ
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大范 围的肝 内损伤 时，需要一段时间缺血期 （ 血流 阻断期） 在 。