微生物检验培养基质量控制技术 PPT课件
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《微生物的培养基》PPT课件
收获何物？ 收获菌体？收获产物？产物成分含氮如何？
例如枯草芽孢杆菌：
一般培养：肉汤培养基或LB培养基； 自然转化：基础培养基； 观察芽孢：生孢子培养基； 产蛋白酶：以玉米粉、黄豆饼粉为主的产酶培养基；
根据不同的工作目的，微生物不同的营养需 要，运用自己丰富的生物化学和微生物学知识来 配制最佳的培养基。
凝固剂必须具有的特点：
a. 不被微生物液化、分解和利用 b. 在微生物生长的范围内保持固体 状态 c. 凝固点的温度对微生物无害 d. 不因消毒灭菌的高温处理而破坏 e. 配制方便、价格低廉
常用的凝固剂
琼脂（agar）、 明胶（gelatin）、 海藻酸钠（alginate）、
琼脂是最优良的凝固剂，自1880年代开始用 于配制微生物培养基以来，至今经久不衰。
5.鉴别培养基：
用于鉴别某种或某一类微生物的培养基。 一般通过加入某些试剂，使某种或某类微生物 的菌落发生颜色变化，便于区别。
EMB培养基 伊红 美蓝------苯胺染料，抑制G+菌 低酸下----两种染料结合 大肠杆菌分解乳糖产酸
-----菌落深紫色、菌落表面有绿色金属光泽
鉴别培养基也具有选择革兰氏阴性菌的作用。
发酵生产谷氨酸时： 碳氮比为4/1时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少； 碳氮比为3/1时，菌体繁殖受到抑制，谷氨酸产量则大量增加。
培养基的配制4个原则
3、理化适宜 （1）pH （2）渗透压与水活度 （3）氧化还原电位
（1） pH
通常培养条件： 细菌： pH 7.0~8.0
放线菌：pH 7.5~8.5 酵母菌： pH 3.8~6.0 霉菌：pH 4.0~5.8 藻类： pH 6.0~7.0 原生动物： pH 6.0~8.0
实验室一般培养：普通常用培养基； 遗传研究：成分清楚的合成培养基；
例如枯草芽孢杆菌：
一般培养：肉汤培养基或LB培养基； 自然转化：基础培养基； 观察芽孢：生孢子培养基； 产蛋白酶：以玉米粉、黄豆饼粉为主的产酶培养基；
根据不同的工作目的，微生物不同的营养需 要，运用自己丰富的生物化学和微生物学知识来 配制最佳的培养基。
凝固剂必须具有的特点：
a. 不被微生物液化、分解和利用 b. 在微生物生长的范围内保持固体 状态 c. 凝固点的温度对微生物无害 d. 不因消毒灭菌的高温处理而破坏 e. 配制方便、价格低廉
常用的凝固剂
琼脂（agar）、 明胶（gelatin）、 海藻酸钠（alginate）、
琼脂是最优良的凝固剂，自1880年代开始用 于配制微生物培养基以来，至今经久不衰。
5.鉴别培养基：
用于鉴别某种或某一类微生物的培养基。 一般通过加入某些试剂，使某种或某类微生物 的菌落发生颜色变化，便于区别。
EMB培养基 伊红 美蓝------苯胺染料，抑制G+菌 低酸下----两种染料结合 大肠杆菌分解乳糖产酸
-----菌落深紫色、菌落表面有绿色金属光泽
鉴别培养基也具有选择革兰氏阴性菌的作用。
发酵生产谷氨酸时： 碳氮比为4/1时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少； 碳氮比为3/1时，菌体繁殖受到抑制，谷氨酸产量则大量增加。
培养基的配制4个原则
3、理化适宜 （1）pH （2）渗透压与水活度 （3）氧化还原电位
（1） pH
通常培养条件： 细菌： pH 7.0~8.0
放线菌：pH 7.5~8.5 酵母菌： pH 3.8~6.0 霉菌：pH 4.0~5.8 藻类： pH 6.0~7.0 原生动物： pH 6.0~8.0
实验室一般培养：普通常用培养基； 遗传研究：成分清楚的合成培养基；
微生物实验室质量管理PPT课件( 34页)
3
内容
• 实验室设施与设备 • 标准品和对照品 • 培养基 • 消毒剂 • 文件管理 • 人员培训
4
实验室设施与设备
5
基本设施
实验室设施与设备
• 洁净室及（或）无菌隔离系统
-- 净化工作台
• 辅助性设施
-- 试剂、培养基、耗材及样品等的存贮和配制 -- 环境的清洁与消毒设施 -- 办公、人员休息区域
•
15、只有在开水里，茶叶才能展开生命浓郁的香气。
•
10、山有封顶，还有彼岸，慢慢长途，终有回转，余味苦涩，终有回甘。
•
11、人生就像是一个马尔可夫链，你的未来取决于你当下正在做的事，而无关于过去做完的事。
•
12、女人，要么有美貌，要么有智慧，如果两者你都不占绝对优势，那你就选择善良。
•
13、时间，抓住了就是黄金，虚度了就是流水。理想，努力了才叫梦想，放弃了那只是妄想。努力，虽然未必会收获，但放弃，就一定一无所获。
实验室设施与设备
12
常用设备
实验室设施与设备
安装后需性能确认并且要连续监控的设备
培养箱（室）、冷藏箱、冷 冻冰箱及水浴箱等。
特点：具有控制性腔室环境 管理：建立SOP，定期校验
仪表、对关键参数进行连续 监控。
13
常用设备
需要验证和持续监控的设备
高压灭菌柜、除热原电热恒 温干燥箱、自动微生物鉴别 系统和计数系统等。
管理的重点－可追溯性 制订控制程序，规范来 源、保管、存储和领用 各环节
16
标准品和对照品
17
标准品和对照品
18
内容
• 实验室设施与设备 • 标准品和对照品 • 培养基 • 消毒剂 • 文件管理 • 人员培训
内容
• 实验室设施与设备 • 标准品和对照品 • 培养基 • 消毒剂 • 文件管理 • 人员培训
4
实验室设施与设备
5
基本设施
实验室设施与设备
• 洁净室及（或）无菌隔离系统
-- 净化工作台
• 辅助性设施
-- 试剂、培养基、耗材及样品等的存贮和配制 -- 环境的清洁与消毒设施 -- 办公、人员休息区域
•
15、只有在开水里，茶叶才能展开生命浓郁的香气。
•
10、山有封顶，还有彼岸，慢慢长途，终有回转，余味苦涩，终有回甘。
•
11、人生就像是一个马尔可夫链，你的未来取决于你当下正在做的事，而无关于过去做完的事。
•
12、女人，要么有美貌，要么有智慧，如果两者你都不占绝对优势，那你就选择善良。
•
13、时间，抓住了就是黄金，虚度了就是流水。理想，努力了才叫梦想，放弃了那只是妄想。努力，虽然未必会收获，但放弃，就一定一无所获。
实验室设施与设备
12
常用设备
实验室设施与设备
安装后需性能确认并且要连续监控的设备
培养箱（室）、冷藏箱、冷 冻冰箱及水浴箱等。
特点：具有控制性腔室环境 管理：建立SOP，定期校验
仪表、对关键参数进行连续 监控。
13
常用设备
需要验证和持续监控的设备
高压灭菌柜、除热原电热恒 温干燥箱、自动微生物鉴别 系统和计数系统等。
管理的重点－可追溯性 制订控制程序，规范来 源、保管、存储和领用 各环节
16
标准品和对照品
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标准品和对照品
18
内容
• 实验室设施与设备 • 标准品和对照品 • 培养基 • 消毒剂 • 文件管理 • 人员培训
微生物实验室的质量控制
培养基的质量控制
实验室指南 照射的培养基 照射的培养基验证 照射和无照射培养基的促生长比对试验。 贮存条件保质期的验证 应确定配的制培养基在贮存条件下的保质期。
培养基的质量控制
培养基的有效期 是指已通过适用性试验的培养基在整个有效期内均需 符合这些相应的标准。 每批培养基储存的时间将取决于一定存放条件（包括容器和密封性）的培养 基组成成分的稳定性。
培养基适用性检查
标准培养基 为品质优良的培养基，由中国食品药品检定研究院提供用来检测培养 基的质量以及对培养基使用过程中的质量进行评估。 实验室指南 使用标准培养基的目的 用来检测培养基的性能，方法适用性的验证以及对培养基使用过程中 的性能进行评估。 当对试剂盒的性能进行确定和进行方法验证时，必须进行溯源。
培养基的制备方法
称量 为保证培养基质量的稳定可靠，在配制培养基时，按说明书的规定称 量，各称量物的重量应记录。
培养基的制备方法
配制 将准确称量的各组分加入溶剂中，完全溶解，如需要可适当加热。 但不要加热过度。 添加其它组分时，应充分混匀。
实验室指南 因加热不均匀，微波设备不能用来溶解培养基。
培养基的制备方法
培养基的质量控制
测定PH值 灭菌后测定PH值；冷却至室温（25℃）后，进行测定。 培养基的PH的范围不得超过规定的±0.2。
培养基的质量控制
一般性状 - 制成平板或分装于试管的培养基应检查；容器和盖子的破裂，装量。 - 固体培养基因水分流失而造成表面产生裂缝或涟漪。 - 其他 如溶血，可能冷藏温度下形成的结晶，大量的 汽泡，微生物污染，氧化 还原指示剂的状况，批数量和有效期的检查和记录，培养基的无菌检查等。
培养基的贮藏
配制好的培养基应在验证的条件下贮藏 保存在2～25℃避光的环境。 若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用。 若保存于密闭容器中，一般在一年内使用。
临床微生物学检验-PPT课件
（一）医院感染标本的采集和 运送的基本原则
发现医院感染应及时采集微生物标本 作病原学检查，二、三级医院微生物 标本送检率不应低于70%。 尽量在抗菌药物使用之前采集标本。 标本采集时应严格执行无菌操作，减 少或避免机体正常菌群及其他杂菌污 染。 标本采集后应立即送至实验室，床旁 接种可提高病原菌检出率。
标本送检方法 --血液与骨髓
① 通常采血部位为肘静脉。疑似细菌性心内膜炎时，以 肘动脉或股动脉采血为宜。切忌在静滴抗菌药物的静 脉处采取血标本。 ② 采血部位的局部皮肤应严格消毒。将采集的血液注入 血培养基前，应过火消毒针头，最新资料显示更换针 头容易造成新的污染。血培养瓶应在避光室温中保存， 不必置冰箱保贮。 ③ 每次采血量成人5-10ml，婴幼儿l-5ml，培养基与血 液之比以 10：1为宜，以稀释血液中的抗生素、抗体 等杀菌物质。为提高阳性率，我们一般要求成人采血 不少于8 ml，儿童不少于3 ml，婴儿1-2 ml。
三、分析前的质量控制
分析前质量控制是我国目前临床实验室 诊断质量保证中较为薄弱的环节，严重影 响临床微生物学实验室对感染样本中致病 菌的分离培养的阳性率和医院感染病原体 监控，也影响临床诊断，合理选用抗菌药 物，降低耐药菌的产生和提高感染的治愈 率，而且对预测或及时发现医院感染的暴 发流行、杜绝感染蔓延、研究医院感染的 发病机制和环节、制定有效的医院感染控 制措施等，均具有十分重要的意义。严格 实施正确的微生物标本送检和检验方法， 是做与
脓液
① 无菌生理盐水擦洗病灶表面后用棉拭子取病 灶深部的脓液和分泌物，置运送培养基内送 检。 ② 对未渍破的脓肿宜用碘酒、酒精消毒皮肤后， 以无菌注射器抽取脓液送检：也可于切开排 脓时用无菌棉拭子采样。
微生物实验室培养基质量控制课件-PPT
回收率测定法（定量和定性）
➢例1：XLD培养基
回收率测定法
选取适宜的3-4个连续稀释度接种于9mL待检测培养基中，每个稀释度3管，35℃-37 ℃培养3d。
➢ 例2：沙门氏菌显色培养基 分类：物理状态、功能和制备工艺
养基质量控制应该形成的记录 C：斜面变碱/大量H2S/气体+
• 沙门氏菌：紫红色菌落 定义：按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需要的各种营养物质，由人工配置的营养基质，专供微生物培养及分离鉴别、研究和保
菌种鉴定记录
菌毒株入库登记表
菌毒株使用记录
食品检测记录
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微生物实验室质量控制培训课件
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设备/仪器要求总则
满足开展相关检测项目的要求。 制定相关设备/仪器的作业指导书。 设备/仪器的检定校准，特别室新购仪器的检定。
设备/仪器分别以送检、送校、自检、自校表示 其所检定的状态。。 设备/仪器的运行检查计划。 设备/仪器的运行状况及适用记录 维修后设备/仪器的再校准或检查，并具有完整 的检查记录。
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设备控制和程序
微生物检验常用需监控的设备和仪器 1培养箱（生化培养箱或CO2培养箱等）、
干燥箱、高压灭菌锅、净化工作台、pH 计、 冰箱，（低温冰箱或冷柜）温度计、 紫外灯、显微镜、离心机、天平、。 2小计量容器 3微生物测定仪器、微生物检定仪器、空 气采样器、酶标仪专用等。
生物指示菌法是一种高压灭菌锅的效果显示法。 高压灭菌锅由专人按作业指导书操作，并做好
每一次的作业记录。 高压灭菌锅使用时，内置物品不能太多，单位
体积内的内容物（每瓶内的培养基）不能太多。 同时应注意内容物不同耐受温度。总的暴露时 间最好不要超过45min。
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温度监控方法：可将工作温度计置甘油中，放 入待测箱体内，观察工作温度计的温度，最好 1-2次/天监控记录，
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高压灭菌锅的温度控制（一）
高压灭菌锅；生物指示菌法（常用）、化学变 色纸片及高压灭菌锅温度计等方法进行检测。
干燥灭菌箱温度控制
干燥灭菌箱日常工作记录中应包括以下信息： 开始的时间、到达灭菌温度时的时间、取出的 时间（或关闭时间）。
微生物限度检验培养基质量控制2讲课文档
培养 基 1 2 3 4 5 6
对照
pH值、色泽、硬度、透明度、沉淀物结果
理化指标
pH值
色泽
硬度
透明度
7.10 正常（橙红） 适宜、划线不破 透明、无不溶物
6.70
偏红
适宜、划线不破 透明、无不溶物
6.90
偏红
适宜、划线不破 透明、无不溶物
7.20 正常（橙红） 适宜、划线不破 透明、无不溶物
6.80
生长率试验对照琼脂为：哥伦比亚琼脂， 由法国生物-梅里埃公司提供，
有效期至20100404
第二十九页，共54页。
质控采用菌株
生长率试验：O1群霍乱弧菌小川型、O1群霍乱弧 菌稻叶型、O139群霍乱弧菌
杂菌抑制试验：大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌、 金黄色葡萄球菌。
第三十页，共54页。
培养基质控参数
第三页，共54页。
分类
主要用于增菌
用于检测动力及保存菌种 用于分离鉴定细菌
第四页，共54页。
分类
普通琼脂培养基 血液琼脂培养基 双糖铁培养基 SS培养基 庖肉培养基
第五页，共54页。
概念
由于不同批次的蛋白胨、浸膏（粉）、琼 脂、胆盐等成分的质量及酸碱度不同等， 影响了培养基质量的稳定性 。
适宜的培养基制备方法、储存条件和质量 控制是提高优质培养基的保证
应选择产品市场信誉度高、有质量保证能力和服务保证能 力的企业；
要求生产企业提供：培养基成分名称及产品编号、批号、使 用前的pH、储藏信息和有效期、性能评价和所用测试菌株、 技术数据清单、质控证书以及必要的安全/危害数据等材料。
第九页，共54页。
验收
购买的培养基到货后，应有专人做好接受和验收工作， 应仔细核对生产企业提供的资料、培养基名称、规格 数量、外观特征、批号、保质期是否符合要求。