微生物检验技术复习课
《微生物检验基础知识》PPT
采样
根据检验目的和要求，选择适当的采 样方法和采样点，确保采集的样品具 有代表性。
计数与测定
对目标微生物进行计数和测定，得到 样品中微生物的数量和活性等指标。
01
02
样品处理
对采集的样品进行预处理，包括稀释、 均质化等，以便后续的检验操作。
03
微生物分离与纯化
通过培养基和培养条件的选择，将目 标微生物从样品中分离出来并进行纯 化，得到单一物进行快速检测和鉴定。
微生物检验技术的发展趋势
自动化与智能化
随着技术的发展，微生物检验将越来 越依赖于自动化和智能化的设备和技 术，提高检验效率和准确性。
快速检测技术
发展快速、简便的检测方法，缩短检 验时间，提高检验效率。
高通量检测技术
采用高通量技术，一次处理大量样品， 提高检测的通量和效率。
《微生物检验基础知识》
目录
• 微生物检验概述 • 微生物基本知识 • 微生物检验技术 • 微生物检验在食品安全中的应用 • 微生物检验在医疗领域的应用 • 微生物检验的注意事项与伦理规
范
01
微生物检验概述
微生物检验的定义和目的
微生物检验的定义
微生物检验是对微生物进行观察、分析和检测，以获得有关微生物种类、数量、 形态、生化特性等方面的数据，从而判断其与人类健康、环境安全等方面的关 系。
按照应用领域分类
微生物检验可以根据应用领域的不同，分为医学微生物检验、食品 微生物检验、环境微生物检验等。
微生物检验的应用领域
医学领域
食品工业
微生物检验在医学领域中有着广泛的应用 ，如诊断疾病、监测传染病、研究病原菌 的特性等。
微生物检验在食品工业中是必不可少的环 节，通过对食品中的微生物进行检测，可 以确保食品的安全性和卫生质量。
《微生物实验》复习提纲
1.显微镜的各部件的名称是什么，各有何作用？操作讲解。
2.显微镜物镜的几个镜头如何辨认？如何调节光线强弱？与哪些部件有关？边说边操作。
3.显微镜油镜的使用原理和注意事项是什么？请用显微镜找到标准片上的微生物，可能是什么菌？图示。
4.用油镜观察完细菌后显微镜应如何处理？5.细菌在染色前为何要固定？热固定有注意哪些问题？请做纯培养涂片固定。
制作细菌涂片，做美蓝染色。
6.为什么革兰氏染色后阳性菌和阴性菌呈现不同颜色？革兰氏染色法的步骤是什么？做革兰氏染色，涂片为什么不能过于浓厚？染色成败的关键一步是什么？请做革兰氏染色。
7.操作一下悬滴法制酵母美蓝染色片。
用显微镜找一下酵母菌细胞。
何以区别酵母菌的死活细胞？8.试述根霉与毛霉、青霉与曲霉的区别。
请在显微镜下找一下霉菌，图示。
请注明曲霉、青霉各部名称。
9.如何用目镜测微尺和镜台测微尺测定微生物的大小？操作。
10.用显微镜直接计数法测定酵母菌数时，应选择哪五个计数中格？若菌体位于格线上，则如何计数？若酵母菌上有芽体时，如何计数？11.比较显微镜直接计数法和平板菌落计数法的优缺点。
12.消毒灭菌的方法很多，其中（1）桌面和手如何消毒？（2）超净工作台如何灭菌？（3）接种环如何灭菌？（4）涂布棒如何灭菌？（5）空培养皿干热灭菌的条件是多少？13.适合用高压蒸汽灭菌的对象有什么？营养琼脂培养基的灭菌使用的温度和时间一般是多少？本实验用高压蒸气灭菌锅的操作注意事项有哪些？进行操作。
14.在实验中适合用干热灭菌箱来进行灭菌的对象是什么？其灭菌所需的温度和时间是多少？干热灭菌箱使用注意事项是什么？（干热灭菌温度不能超过多少？开箱取物温度有何要求？）进行操作。
15.微生物实验室常用的玻璃器皿有哪些？新玻璃器皿如何处理？16.在吸管的包装时，为什么要在其粗头端塞一小段棉花？包扎一支移液管。
17.包扎一组培养皿。
包扎三个试管。
制作一个棉塞。
18.什么叫培养基？制备培养基的一般程序有哪些？19.将配制好的牛肉膏蛋白胨培养基分装于试管和三角瓶，包扎。
微生物复习ppt课件
组 平板培养基上接种的大肠杆菌感受态细 结果（菌 别 胞 落数） 未进行操作（只接种大肠杆菌感受态细 1 0 胞） 2 导入未切割的载体 >1000 3 导入切割并连接的载体 435 导入切割后用碱性磷酸酶处理并连接的 4 25 载体 导入切割后用碱性磷酸酶处理，并与目 5 34 的基因连接的载体
2019 2
知识体系
1.微生物主要类群及特征 （形态结构、代谢类型、营养方式等） 2.微生物的培养 基本流程 分离方法 计数方法 3.微生物培养的利用 传统发酵技术 基因工程受体菌 选育特定菌种 药物抗菌性检测等 2019 4. 发酵过程中亚硝酸盐含量的测定
3
1.微生物主要类群及特征 （形态结构、代谢类型、营养方式等）
2019
-
17
3微生物培养的利用----传统发酵技术
酵母菌
用途 酿制果酒
醋酸菌
酿制果醋
生物类型 真菌（真核生物） 细菌(原核生物)
需氧情况
适宜温度 生殖类型
2019
兼性厌氧型
18~25℃
需氧型
30~35℃
出芽生殖
-
分裂生殖
18
无菌技术
消毒： 煮沸消毒 巴氏消毒 化学药剂消毒 紫外线消毒 灭菌： 灼烧灭菌 干热灭菌 高压蒸汽灭菌
《生物技术与实践》复习
微生物的培养与利用
2019
-
1
考试说明要求
生物技术与实践 • 光学显微镜操作技术 • 生物体内物质的分离、鉴定技术 • 微生物培养与利用 （1）微生物的培养和分离 （2）某种微生物数量的测定 （3）培养基对微生物的选择作用 （4）利用微生物进行发酵来生产特定的产物 （5）发酵过程中亚硝酸盐含量的测定 • 调查 • 生物学研究中的科学思想和一般方法
临床微生物检验技术复习要点
复习一、重要专业名词1.SPA：葡萄球菌蛋白A。
是金黄色葡萄球菌细胞壁上的表面蛋白，能够及人类IgG的Fc段结合，而不影响Fab段及相应抗原的特异性结合，常用于协同凝集试验。
2.OT试验：是应用结核菌素,进行皮肤试验来测定机体对结核分支杆菌能否引起迟发型超敏反应的一种实验。
3.异染颗粒：胞质颗粒中有一种主要成分为RNA和多偏磷酸盐的颗粒，嗜碱性强，用亚甲蓝染色时着色较深呈紫色，称为异染颗粒。
4.包涵体：某些受病毒感染的细胞内，用普通光镜可看到及正常细胞结构和着色不同的圆形或椭圆形斑块，称为包涵体。
5.鞭毛：许多细菌，包括所有的弧菌和螺菌，约半数的杆菌和个别球菌，在菌体上附有细长并呈波状弯曲的丝状物，这种丝状物称为鞭毛，是细菌的运动器官。
6.Vi抗原：表面抗原。
是一种不耐热的酸性多糖的聚合体,存在于菌体的最表面,有抗吞噬和保护细菌免受相应O抗体凝集和补体的溶菌作用。
7.二相性真菌：有些真菌可因营养、温度、氧气等环境条件的改变，而两种形态发生互变，称为二相性，这类真菌称为二相性真菌。
8.肥达反应：肥达反应是用已知伤寒菌的H(鞭毛)和O(菌体)以及甲型(A)及乙型(B)副伤寒沙门氏菌的标准液及病人血清做凝集试验，用于伤寒副伤寒的辅助诊断或用于流行病学调查的免疫凝集实验9.回归热：体温急剧上升至39℃或以上，持续数天后又骤然下降至正常水平。
高热期及无热期各持续若干天后规律性交替一次。
见于回归热疏螺旋体感染、霍奇金病等。
10.荚膜：包绕于细菌细胞壁外的一层黏液性物质，主要成分为糖和多肽，是细菌的特殊结构。
11.菌落：由单个细菌分裂繁殖而来的一堆肉眼可见的细菌集团。
12.抗酸杆菌：细菌细胞壁含有大量类脂，一般不容易着色，但经加温或延长染色时间着色后，能抵抗盐酸乙醇的脱色，故称为抗酸杆菌。
13.灭菌：杀灭物体上所有微生物，包括病原体、非病原体，繁殖体和芽胞的方法。
14.内毒素：是革兰阴性菌细胞壁中的脂多糖成分，只有菌体裂解后才释放出来。
29微生物检验技术基础知识word资料17页
一、以下每一道考题下面有A、B、C、D、E五个备选答案。
请从中选择一个最佳答案，并在答题卡上将相应题号的相应字母所属的方框涂黑。
1机体抵抗病原微生物的屏障结构包括A皮肤与黏膜B血脑脊液屏障C胎盘屏障D免疫系统E B和C2有关内毒素的描述哪一项是错误的A均由革兰阴性菌产生B其化学成分为脂多糖C160℃，2～4小时才被破坏D毒害效应具有组织器官选择性E毒性作用较弱3下列描述哪一项是错误的A病原菌致病力的强弱程度称为毒力B毒力主要由侵袭力和毒素所决定C破伤风毒素属于内毒素D侵袭力是指病原菌突破宿主机体的防御功能，并能在体内定居、繁殖和扩散的能力E以上均不是4下列哪种成分不属于外毒素A脂多糖B痉挛毒素C肉毒毒素D表皮剥脱毒素E霍乱肠毒素5下列哪种成分不属于外毒素A金黄色葡萄球菌肠毒素B产毒性大肠杆菌肠毒素C白喉毒素D表皮剥脱毒素E类脂A6内毒素的毒性作用包括A发热反应B白细胞反应C内毒素血症与内毒素休克D以上都是E A和C7慢性志贺菌感染的病程一般在多少以上A2周B1个月C2个月D6周E7周8志贺菌随饮食进入体内，导致人体发病，其潜伏期一般为A1天之内B1～3天C5～7天D7～8天E8天以后9下列关于结核分枝杆菌描述正确的是A类脂质为胞壁中含量最多的成分B产生外毒素C产生内毒素D耐药性低E一般采用革兰染色10我国的卫生标准中，每升饮用水中不得超过多少个大肠杆菌A1个B3个C5个D7个E8个11大肠杆菌指数测定时，37℃培养24小时，能发酵乳糖并具有下列何种特征者为阳性A产酸B产酸产气C产酸不产气D产气不产酸E以上都不产生12下列何种细菌为革兰阴性菌A脑膜炎奈瑟菌B结核分枝杆菌C铜绿假单细胞D枯草芽胞杆菌E白喉棒状杆菌13下列何种细菌为革兰阳性杆菌A大肠杆菌B铜绿假单细胞C产气肠杆菌D结核分枝杆菌E肺炎克雷伯杆菌14下列何种细菌为革兰阴性球菌A乙型溶血性链球菌B肺炎链球菌C铜绿假单细胞D脑膜炎奈瑟菌E肺炎克雷伯菌15下列何种细菌革兰染色阴性A乙型溶血性链球菌B军团菌C肺炎链球菌D金黄色葡萄球菌E结核分枝杆菌16下列何种微生物培养时会产生β溶血环现象A肺炎链球菌B军团菌C乙型溶血性链球菌D肺炎支原体E肺炎衣原体17肠炎型沙门菌感染的潜伏期一般为A6小时以内B6～24小时C24～28小时D48～72小时E72小时18人类感染沙门菌，最常见的是A伤寒和副伤寒B肠炎型C败血症型D慢性携带者E以上都不是19以下细菌感染，可以出现玫瑰疹的是A ETECB EPECC志贺菌D伤寒沙门菌E假结核耶尔森菌20以下关于伤寒沙门菌感染后，人体免疫情况的描述中，错误的是A病愈后，有牢固的免疫力B主要是细胞免疫C血流中的特异性抗体对胞内菌作用很大D胃肠炎的恢复与局部生成的分泌型ＩgA有关E可形成健康携带者21狂犬病毒街毒经过系列传代适应特定宿主后可称之为A固定毒B野毒株或街毒C病毒原型D减毒株E强毒株22近年来随着分子病毒学研究的不断深入，相继研究出了多种用基因工程的方法构建的疫苗，这些疫苗不包括下列哪一种A亚单位疫苗B基因工程疫苗C活载体疫苗D减毒活疫苗E分子疫苗23第二次抗原刺激时，由于下列哪一个原因使得ＩgG量显著增高A自身保护免疫B强化免疫C免疫回忆D免疫持久性E免疫应答24以下哪种说法是错误的A细菌分离培养法包括平板划线法B细菌分离培养法包括倾注平板法C细菌分离培养法包括液体培养基接种法D纯种细菌接种法包括斜面培养基接种法E纯种细菌接种法包括穿刺接种法25细菌诊断中标本采集和运送的原则包括A标本必须新鲜，采集后尽快送检B在送检过程中，对脑膜炎球菌标本要进行保温C在检验容器上要贴好标签D尽可能采集病变明显部位的材料E以上都是26下列哪项属于内毒素的特征A主要由革兰阴性菌产生B为蛋白质C60℃～80℃，30分钟被破坏D毒害效应具有组织器官选择性E毒性作用强27下列哪一项不属于外毒素的特征A来源于革兰阳性菌和部分革兰阴性菌B甲醛液处理不形成类毒素C60℃～80℃，30分钟被破坏D毒作用效应具有组织器官选择性E毒性作用强28恙虫病在国外最早首先描述本病A于1610年B于1710年C于1810年D于1910年E于1920年29恙虫病在国外最早首先描述本病A美国人B加拿大C法国人D日本人E英国30我国首次分离出恙虫病立克次体是A在上海B在北京C在天津D在广州E在重庆31我国首次分离出恙虫病立克次体是A1928年B1938年C1948年D1958年E1968年32纽扣热主要分布在A美洲B亚洲C非洲D欧洲E澳洲33在对微生物进行灭菌时，根据不同的微生物种类采用不同的灭菌方法和时间是很重要的，以下哪种说法错误的是A高压蒸汽灭菌法是一种最有效的灭菌方法B煮沸法5分钟可杀灭细菌的芽胞C在煮沸法灭菌时，水中加1%～2%的碳酸氢钠可提高沸点D在煮沸法灭菌时，水中加入1%～2%的碳酸氢钠可防止金属器皿生锈E间歇灭菌法适合于不耐100℃物质的消毒34加利福尼亚鼠型斑疹伤寒主要分布在A美洲B亚洲C非洲D欧洲E澳洲35传染性单核细胞增多症是由下列哪一种立克次体引起的A查菲埃立克体B杆菌样巴立克体C腺热埃立克体D汉赛巴通体E人粒细胞埃立克体36某实验室在进行肠道菌鉴别诊断时,进行了大量生化鉴定,有关VP试验,哪种说法是错误A主要鉴别大肠杆菌和产气杆菌B VP试验阳性时，产生黄色化合物C大肠杆菌VP试验阴性D产气杆菌VP试验阳性E大肠杆菌和产气杆菌均能分解葡萄糖产生丙酮酸37有关细菌学检验的描述哪一项是错误A原则上所有标本均应作病原分离培养B需3～4周才长菌落C结核杆菌需4～8周才长成菌落D分离培养的阳性率一般比直接涂片镜检的阳性率为低E布鲁司杆菌初次培养时需5%～10%的CO238以下哪种说法是错误的A霍乱红试验阳性为霍乱弧菌所特有反应B尿素试验阳性时呈红色C变形杆菌等尿素酶试验阳性D霍乱弧菌能液化明胶E沙门菌硫化氢试验为阳性39以下哪种说法是错误的A硫化氢试验常用于区别肠道杆菌的种类B志贺菌硫化氢试验阴性C产气杆菌硫化氢试验阴性D大肠杆菌硫化氢试验阳性E沙门菌硫化氢试验阳性40以下哪种说法是错误的A在甲基红试验中，呈现红色为阳性B甲基红试验阳性时，培养物酸碱度在pH45或更低C大肠杆菌的枸橼酸盐利用试验为阳性D产气杆菌VP试验阳性E枸橼酸利用试验阳性反应时呈深蓝色41以下哪种说法是错误的A在甲基红试验中，呈现红色为阳性B甲基红试验阳性时，培养物的酸碱度在pH45或更低C大肠杆菌甲基红试验阴性D产气杆菌VP试验阳性E大肠杆菌和产气杆菌均能分解葡萄糖产生丙酮酸42以下哪种说法是不正确的A微生物数量越大，消毒越困难B一般是温度越高，消毒灭菌效果越好C洗必泰在碱性时杀菌作用减弱D硫代硫酸钠可中和氯或氯化物E以上均是43哪种消毒剂的效果受蛋白质等有机物的影响较小A季铵盐类B乙醇C次氯酸盐D戊二醛E以上均是44某乡镇卫生院大夫，在采集到可疑流脑病人细菌培养用标本后，因缺少培养条件，需送上级医院进行进一步病原培养，所遵循的如下标本采集和运送原则中哪一项是错误的A注意无菌操作。
微生物期末复习(大学期末复习课件)
环境因素调节
通过调节温度、pH、氧气浓度 等环境因素，影响微生物代谢 和发酵过程。
基因工程与代谢工程
通过基因敲除、过表达等技术 手段，对微生物代谢途径进行 改造和优化，提高发酵产物的
产量和质量。
04
微生物的致病性与免疫
微生物的致病机制
微生物的毒力因子
微生物致病的关键因素，包括毒素、 酶、菌毛等，能够破坏人体细胞或影 响生理功能。
耐药性监测与控制
耐药性可经基因水平转移、垂直传递等方 式传播给其他细菌。
通过监测耐药性发展趋势、加强抗菌药物 管理、推广合理用药等措施，控制耐药性 的传播和蔓延。
06
微生物的实际应用
微生物在农业上的应用
微生物肥料
利用有益微生物改善土壤结构，提高土壤肥力，促进 作物生长。
生物农药
利用微生物及其代谢产物防治植物病虫害，减少化学 农药的使用。
分子生物学检测法
基于核酸的分子生物学技术，如PCR、 基因测序等，可快速、准确地检测和 鉴定微生物。
微生物的鉴定依据与流程
01
02
03
04
形态学特征
根据微生物的形态、大小、排 列、染色反应等特征进行初步
鉴定。
生理生化特征
通过测定微生物对营养物质的 需求、代谢产物、酶活性等生
理生化指标，进行鉴定。
抗原和抗体特征
控制传染病疫情。
05
微生物的检测与鉴定
微生物的检测方法与技术
显微镜检测法
通过显微镜观察微生物的形态、大小、 排列等特征，初步判断微生物种类。
培养基培养法
将微生物接种至培养基中，观察其生 长情况、菌落特征等，进行微生物鉴 定。
免疫学检测法
利用抗原-抗体反应原理，通过免疫 学方法检测微生物抗原或抗体，具有 高特异性和灵敏度。
微生物检验复习提纲.doc
微生物复习提纲一、常用培养基的制备、消毒1、培养基的分类P902、培养基配制P211（1）计算根据配方计算出实验中各种药品所需要的量，然后再分别称量。
（2）称量准确称取各种成分。
一些不易称量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放称量纸（或小烧杯）称量。
（3）溶解向烧杯内加入合适的水量，将牛肉膏、蛋白腺、氯化钠等用水洗下后加热搅拌至全溶后，再加入琼脂进行溶解，最后补足水量。
（4）调pH值用酸度计或精密pH试纸测定其pH值，并用NaOH或HC1标准溶液调至所需pH值，必要时用滤纸或脱脂棉过滤。
一般比要求的pH 高出0.2,因为高压蒸汽灭菌后，pH常降低。
（5）分装根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内。
注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。
如液体培养基，应装试管高度的1/4左右；固体培养基装试管高度的1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。
（6）包扎试管扎成捆。
试管和三角瓶的棉塞外用硫酸纸或牛皮纸包扎，纸上标明培养基的名称、配制日期等。
（7）灭菌培养基用0.1Mpa（121摄氏度）高压蒸汽灭菌15〜20min。
3、消毒（高压蒸汽灭菌锅使用）灭菌方法：1、加水于灭菌器内到规定的水平面。
2、需灭菌的物品（分装在试管、三角烧瓶中的固、液体培养基），棉塞、硅胶泡沫塞等用防潮纸包好（防止锅内水汽把棉塞淋湿），放入灭菌锅内的套筒中。
摆放要疏松，不可太挤，否则阻碍蒸汽流通，影响灭菌效果。
3、将灭菌锅盖旋转，使锅盖向下紧压锅体，切勿漏气。
4、设定灭菌温度和时间:121摄氏度，20分钟；5、打开放气阀，加热，热蒸汽上升，以排除锅内冷空气，当温度到达100摄氏丿芟左右，关闭放气阀。
6、关闭放气阀后，整个灭菌锅成为密闭状态，而蒸汽又不断增多，这时压力和温度都上升，直至压力表指针达到所需压力时，温度达到121摄氏度，灭菌开始计时，通过调节热源，维持此压力到所需时间。
7、灭菌完毕，待压力自然降至0时，打开放气阀，注意不能打开过早，否则突然降压致使培养基冲腾，使棉塞、硅胶泡沫塞沾污，甚至冲出容器以外。
《微生物学检验》课件——第四章 细菌检验技术
（2）水分：不含杂质的蒸馏水和离子交换水。 （3）凝固物质：1、琼脂 2、明胶 （4）指示剂：用于细菌快速培养和鉴定 （5）抑制剂：抑制非目的菌生长
（2）按培养基的物理性状分类：
11）液体培养基（infusion media） 用于增菌培养，观察细菌生长现象。
22）半固体培养基（semi－solid media） 加入0.2％－0.5％的琼脂。观察细菌的动力，保存菌种。
35
一、基本条件
（三）培养箱 ￫ 电热恒温箱：（隔水式、气套式） ￫ 二氧化碳培养箱 ￫ 厌氧培养箱
36
二氧化碳培养法 CO2培养箱法 烛缸法 化学法
厌氧培养法 厌氧培养箱法 厌氧罐法
一、培养基
培养基(culture media)：是 指用人工方法，将细菌等微生 物生长繁殖所需要的营养物质 按比例混合，调节pH值，高 压灭菌而成的营养基质。
第四章 细菌检验技术
ห้องสมุดไป่ตู้
目录
细菌形态检验 细菌接种与培养技术 细菌生化鉴定技术 细菌的非培养检测技术 细菌检验自动化技术
PART 01
细菌形态检验
细菌的显微镜检查
显微镜：光学显微镜 所用放大倍数：10×100＝1000 所用镜头：油镜头 镜油：香柏油或石蜡油 香柏油折光率（n＝1.515）与玻片折光率（n＝1.52）接近 显微镜使用完毕须擦拭镜头。
3、培养基的制备
11、调配
22、溶化
33、矫正pH
44、过滤澄清
基础培养基、琼脂平板
55、分装 半固体培养基
66、灭菌
一、染色标本的检查
1、染色方法的种类
单染法:采用一种染料染色 复染法（鉴别染色）:采用两种或两种以上的不同染料
食品微生物检验期末复习资料
食品微生物检验复习资料回答题一菌落总数的检测方法答：菌落总数的检测方法主要是平板菌落计数法。
1检样，取25g(ml)样品置于225ml无菌生理盐水中制成1：10的样品匀液，固体或半固体样品放入盛有225ml稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1-2min。
2 10倍系列稀释，用1ml无菌吸管吸取1：10样品均液1ml，沿管壁缓慢注入盛有9ml稀释液的无菌试管，振摇试管使其混匀，制成1：100的样品均液。
3选择2-3个适宜稀释度的样品匀液，每个稀释度分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平皿内。
同时分别取1mL稀释液加入2个无菌平皿作空白对照每个培养皿加入15-20ml平板计数琼脂（PCA）培养基，混匀4培养，琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃，培养48h±2h5菌落计数，可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。
选取菌落数在30cfu～300cfu之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。
6结果报告，称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/ml为单位报告二大肠菌群的检测方法答大肠菌群的检测老方法是30-3步法，新方法是大肠菌群MPN计数法老方法30-3步法1检样，取25g(ml)样品置于225ml无菌生理盐水中制成1：10的样品匀液，固体或半固体样品放入盛有225ml稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1-2min。
2 10倍系列稀释，用1ml无菌吸管吸取1：10样品均液1ml，沿管壁缓慢注入盛有9ml稀释液的无菌试管，振摇试管使其混匀，制成1：100的样品均液。
3初发酵，选择适宜3个连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种3管乳糖胆盐发酵培养基，双料管，取10ml/管1：10的稀释液，单料管，取1ml/管1：10的稀释液和取1ml/管1：100的稀释液，置于36℃±1℃培养箱，培养24h±2h，观察倒管内是否产气，都未产气者，则报告大肠菌群阴性，如产气，则进行下一步实验4分离培养，将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置于36℃±1℃培养箱，培养18h-24h，观察菌落形态，并作革兰氏染色和证实试验，5在上述平板上，调取可疑菌落1-2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36℃±1℃培养箱，培24±2h，观察产气情况，凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告为大肠菌群阳性6根据证实为大肠菌群阳性管数，查MPN检索表，报告每100ml(g)大肠菌群的MPN值。
微生物检验技术基础知识课件
0＜100Fra bibliotek5—
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0
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四、微生物限度检查法
5.4.2薄膜过滤法
滤膜孔径不大0于.45μm，直径一般5为0mm，若需要用冲洗 液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量1不00超m，过l 总冲洗量 不得超过1000m。l
?贴膜 菌面朝上于相应的琼脂培养基平板上培养，每 基至少制备一张滤膜。 ?阴性对照试（验不得有菌生长） ?菌落报告规则每张滤膜上的菌落数应不1超00过cf，u 若滤 膜上无菌生长，以1乘＜以稀释倍数的值报告菌数。
? 供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果 不再复试；
? 供试品的细菌数、霉菌及酵母菌数其中任何一项不符 种项下的规定，应从同一批样品中随，机独抽立样复试两次 ，以3次结果的平均值报告菌数；
? 若供试品的细菌数、霉菌及酵母菌数、控制菌三项检 均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定，反之 品不符合规定。
四、微生物限度检查法
5.5控制菌检查
供试品的控制菌检查应按已验证的方法进行，增菌培 实际用量同控制菌检查方法的验证。
?阳性对照试验加：菌量为10～100cf，u 阳性对照试验应检 出相应的控制菌。 ?阴性对照试验取：稀释液10m代l 替供试液，阴性对照应无 菌生长。 ?按照不同的给药途径，必检的控制菌不同。
造成过度灭菌； ? 培养基保存前应标上名称和制备日期（或到期日期） ? 琼脂培养基不得0℃在或0℃以下存放； ? 琼脂平板最好现配现用，如置冰箱保存，不超过一周
二、培养基
4、培养的再融化方式 ? 水浴加热 ? 微波炉
微生物检验技术培训PPT课件
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二、无菌检查
2. 直接接种法
• 直接接种法适用于无法用薄膜过滤法进行无菌检查的供试 品，即取规定量供试品分别等量接种至硫乙醇酸盐流体培 养基和胰酪大豆胨液体培养基中。
• 除生物制品外，一般样品无菌检查时两种培养基接种的支 /瓶数相等；生物制品无菌检查时硫乙醇酸盐流体培养基 和胰酪大豆胨液体培养基接种的支/瓶数为2：1。
• 除另有规定外，每个容器中培养基的用量应符合接种的供 试品体积不得大于培养基体积的10%，同时，硫乙醇酸盐 流体培养基每管装量不少于15ml，胰酪大豆胨液体培养 基每管装量不少于10ml。供试品检查时，培养基的用量 和高度同方法适用性试验。
24h~48
【10版：改良马丁（琼脂）培养 20~25℃
基】
h 【10版：
上制黑述成曲培每霉养1m物l含用菌pH数7.小0于沙或版无1氏：用菌00葡改适氯c萄良宜化fu糖马方钠的琼丁法-菌蛋脂琼制悬白斜脂成液胨面斜孢。缓培面子冲养 培悬液基养液或基【0】1.90%无2℃菌3 】-氯2化8钠5溶d~液7d
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二、无菌检查
4.供试品的无菌检查
•结果判断
• 阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生 长。否则，试验无效。
• 若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生 长，判供试品符合规定；若供试品管中任何一管 显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定， 除非能充分证明试验结果无效，即生长的微生物 非供试品所含。
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浮游菌 cfu/m3
沉降菌 （）
微生物检验ppt课件(2024)
将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
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革兰氏染色技术
初染
涂片固定后，滴加结晶 紫染色液覆盖涂片，染 色1分钟，然后水洗。
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媒染
脱色
复染
滴加卢戈氏碘液覆盖涂 片，媒染1分钟，然后水
洗。
用95%乙醇脱色30秒至 1分钟，然后水洗。
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定期对实验室环境和设 备进行清洁、消毒和维 护，确保其功能正常
实验人员的素质与技能要求
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具备微生物学、医学、检验学 等相关专业的背景和知识
熟悉微生物检验的基本原理、 方法和技术
掌握实验室安全知识和操作技 能，如生物安全防护、废弃物
处理等
具备良好的职业道德和团队协 作精神，能够认真负责地完成
及时向上级主管部门或相关方报告实验结果，并提供必 要的技术支持和建议
对实验结果进行客观、准确的评价和解释，避免主观臆 断和误导
对实验过程中出现的问题和异常情况进行及时汇报和处 理，确保实验质量和安全
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微生物检验的挑战与发展趋势
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微生物检验面临的挑战与问题
微生物多样性
微生物种类繁多，形态各异，对检验技术的要求极高。
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检验灵敏度与特异性
传统微生物检验方法灵敏度低，特异性差，难以满足临床和科研 需求。
耐药性问题
随着抗生素的广泛使用，耐药微生物逐渐增多，对检验技术提出 了更高的要求。
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新技术在微生物检验中的应用与展望
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• 神经毒 主要造成大脑和中枢神经系统的损害，引起严 重的出血和神经组织变性，如黄绿霉素。
• 造血组织毒 主要损害造血系统，发生造血组织坏死或 造血机能障碍、白血球减少症等，如某些镰刀菌毒素。
致畸、致癌、致突变
中毒性
毒素的产生
1、糖醇类代谢试验
（一）糖醇类发酵试验 （二）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验 （三）V-P试验 （四）甲基红（Methyl Red）试验 MR （五）七叶苷水解试验 （六）甘油品红试验
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制备好的培养 基对照管
斜面红色， 底面黄色
培养基全黄色
斜面黄色、底部黑色， 并产生H2S
培养基不变色 非发酵菌
斜面红色，底部黑色，产生 H2S
*4、评价病毒在培养细胞中增殖的指标有哪些？ • CPE效应及现象、红细胞吸附、干扰现象、细胞代谢改变、包涵体
*5、病毒数量和感染性（毒价）的测定指标和方法 指标：PFU/mL、LD50 、 ID50、 ELD50、 EID50、 TCID50 方法：有空斑试验、终点稀释法、荧光-斑点试验、转化试验，动物 接种实验、鸡胚接种实验 *6、病毒如何进行分离鉴定？P35-40 (禽流感病毒为例) 7、如何检测病毒颗粒？ 方法：电镜技术、血凝试验、病毒酶活性测定、绿色荧光蛋白标记
微生物检验技术复习课
第一章 绪论
• 了解微生物污染产品的来源（6个） • 理解微生物检验涵义及意义（3点） • 了解微生物检验的任务（5点）、范围（4点）和对象（7个）
了解为什么要学这门专业课
*第二章 细菌检验常规技术
1、微生物检验的基本程序?（食品微生物检验的一般程序）
（7步，其中每步的具体内容）
一． 检验前的准备 二． 样品的采集 三． 样品的送检 四． 样品的处理方法 五． 致病菌检验参考菌群的选择 六． 样品的检验 七． 检验结果的报告
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实例：
食品微生物检测
微生物检测
常规微生物检测 致病微生物检测
常规微生物项目：细菌总数、大肠菌群、酵母总数、霉菌总数，此 类细菌不致病，但会严重影响食品的外观及风味。目前常用微生物 培养法来计数菌落，允许有该类菌落，但菌落总数不能超标。
• 基质的水分、空气的湿度与真菌的生长繁殖和产毒素能力密切相 关，基质含水量在17%~18%时为真菌产毒素的最适条件。
中毒性
毒素的检验 实例
• 检测真菌毒素有许多方法，如检测黄曲霉毒素有生物 学方法和ELISA法等。
• 生物学方法主要用于检测真菌毒素的毒性，如用鸡胚、 小白鼠作毒性试验，观察动物中毒死亡或出现肿瘤。
底面黄色，并产生
CO2
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5、毒性酶类试验
溶血试验 链激酶试验 卵磷脂酶试验 血浆凝固酶试验
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甲型（α-）溶血
乙型（β-）溶血
丙型（γ-）溶血
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第四章 细菌常规检验 各论
• 细菌：20种 • 显微形态及染色特征 • 培养特性 • 生化特性 • 检验方法
• 大肠埃希氏菌、沙门氏菌 • 金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌 • 副溶血弧菌 • 蜡样芽孢杆菌 • 产气荚膜梭菌 • 单核增生李斯特菌 • 布氏杆菌 • 椰毒假单胞菌酵米面亚种 • 空肠弯曲菌 • 结核分枝杆菌
第五章 真菌及真菌毒素的检验
1、了解真菌的定义、分类、培养条件和方法、菌落 形态
2、霉菌的鉴定步骤，真菌产毒特征 3、真菌毒素的种类、毒性作用和检测方法： • (一)化学检验法； • (二)免疫学检验法； • (三)生物学检验法
中毒性
肝脏毒 肾脏毒 神经毒 造血组织毒
真菌毒素的种类
• 肝脏毒 主要致肝细胞变性、坏死，或引起肝硬化、肝 癌，如黄曲霉毒素等。
• ELISA法操作简便，并具有安全快速高效、费用低， 适用于大批量标本的筛选。
4、真菌的常规实验室检验法（镜检、培养） 5、真菌的主要生化反应实验（7个） 6、病原真菌的分类和特征 • （1）感染性：新生隐球菌、荚膜组织胞浆菌、白色念珠菌的微生 物学检验（典型例子） • （2）中毒性：重点在掌握毒素 • 黄绿青霉、桔青霉、岛青霉产生的毒素及特征 • 镰刀菌属产生的毒素种类及其理化性质
2、食品微生物检验的指标?（4个）
3、微生物检验常规操作技术
4、微生物培养及实验基本操作技术包括哪些？（6个方面，其中具体 内容）
• 例如：培养基的类型和用途?
微生物接种方法包括哪些？
5、检验操作过程的无菌操作要求包括哪些内容？
6、革兰氏染色方法：负染色方法
7、细菌、真菌、病毒如何分离纯化？
第一节 微生物检验的基本程序
品 预 处 理
与
送 检
选 择
菌落总数
大肠菌群 检验过程 分离培养
结果报告 染色镜检
参 考 菌 群
致 病 菌
增菌
纯 化 分离培养
生化试验 血清学试验
动物试验 6
*第三章 细菌生化试验和血清学试验
• 细菌生化实验定义、方法（原理）、注意事项 • 细菌鉴定的生化实验原理及现象
1、糖（醇）类代谢试验 2、氨基酸和蛋白质代谢试验 3、有机酸盐和铵盐的利用试验 4、呼吸酶类试验 5、毒性酶类试验
致病微生物项目：沙门氏菌、李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆 菌O157：H7、弯曲杆菌、致病弧菌、副溶血弧菌、志贺氏菌、假 单胞菌等。致病微生物在食品中是绝对不允许存在的，所以快速检 测食品中是否存在有致病微生物，是食品安全检验的重中之重。 5
食品微生物检验的一般步骤
样
检 验 前 的 准 备
样 品 采 集
• （3）两性兼有：曲霉的微生物学特征及产生毒素的种类和性质
• 黄曲霉的微生物学特性和毒素特征？
第六章 病毒的检验
1、了解病毒的大小、形状、性质 *2、病毒的培养方法及优缺点（实验动物、鸡胚、细胞培养法） • 动物接种 和鸡胚接种的部位和适用范围 *3、细胞培养的类型、方法和适用范围 • 类型：原代细胞 、二倍体细胞株、传代细胞系 • 方法：静置培养、 旋转培养、 悬浮培养、 微载体培养
• 首先取决于菌株，其次依赖于外界环境，如基质、温度和湿度。
• 基质对霉菌的生长和产毒有一定的影响。一般而言，真菌产毒菌 株主要在食物、粮食、饲草等植物上生长产毒，在乳、蛋等动物 源基质上产毒能力较低。
• 霉菌的生长繁殖与温度有密切关系，大多数最适温度为25~30℃， 低于l0℃或高于40℃生长减弱，产毒素能力也会受到影响。