微生物检验技术复习课

• 首先取决于菌株，其次依赖于外界环境，如基质、温度和湿度。
• 基质对霉菌的生长和产毒有一定的影响。一般而言，真菌产毒菌 株主要在食物、粮食、饲草等植物上生长产毒，在乳、蛋等动物 源基质上产毒能力较低。
• 霉菌的生长繁殖与温度有密切关系，大多数最适温度为25~30℃， 低于l0℃或高于40℃生长减弱，产毒素能力也会受到影响。
*4、评价病毒在培养细胞中增殖的指标有哪些？ • CPE效应及现象、红细胞吸附、干扰现象、细胞代谢改变、包涵体
*5、病毒数量和感染性（毒价）的测定指标和方法 指标：PFU/mL、LD50 、 ID50、 ELD50、 EID50、 TCID50 方法：有空斑试验、终点稀释法、荧光-斑点试验、转化试验，动物 接种实验、鸡胚接种实验 *6、病毒如何进行分离鉴定？P35-40 (禽流感病毒为例) 7、如何检测病毒颗粒？ 方法：电镜技术、血凝试验、病毒酶活性测定、绿色荧光蛋白标记
第五章 真菌及真菌毒素的检验
1、了解真菌的定义、分类、培养条件和方法、菌落 形态
2、霉菌的鉴定步骤，真菌产毒特征 3、真菌毒素的种类、毒性作用和检测方法： • (一)化学检验法； • (二)免疫学检验法； • (三)生物学检验法
中毒性
肝脏毒 肾脏毒 神经毒 造血组织毒
真菌毒素的种类
• 肝脏毒 主要致肝细胞变性、坏死，或引起肝硬化、肝 癌，如黄曲霉毒素等。
• 肾脏毒 主要引致急性或慢性肾脏病变，可使肾功能完 全丧失，如橘青霉素等。
• 神经毒 主要造成大脑和中枢神经系统的损害，引起严 重的出血和神经组织变性，如黄绿霉素。
• 造血组织毒 主要损害造血系统，发生造血组织坏死或 造血机能障碍、白血球减少症等，如某些镰刀菌毒素。
致畸、致癌、致突变
中毒性
毒素的产生
• （3）两性兼有：曲霉的微生物学特征及产生毒素的种类和性质
• 黄曲霉的微生物学特性和毒素特征？
第六章 病毒的检验
1、了解病毒的大小、形状、性质 *2、病毒的培养方法及优缺点（实验动物、鸡胚、细胞培养法） • 动物接种 和鸡胚接种的部位和适用范围 *3、细胞培养的类型、方法和适用范围 • 类型：原代细胞 、二倍体细胞株、传代细胞系 • 方法：静置培养、 旋转培养、 悬浮培养、 微载体培养
2、食品微生物检验的指标?（4个）
3、微生物检验常规操作技术
4、微生物培养及实验基本操作技术包括哪些？（6个方面，其中具体 内容）
• 例如：培养基的类型和用途?
微生物接种方法包括哪些？
5、检验操作过程的无菌操作要求包括哪些内容？
6、革兰氏染色方法：负染色方法
7、细菌、真菌、病毒如何分离纯化？
第一节 微生物检验的基本程序
底面黄色，并产生
CO2
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5、毒性酶类试验
溶血试验 链激酶试验 卵磷脂酶试验 血浆凝固酶试验
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甲型（α-）溶血
乙型（β-）溶血
丙型（γ-）溶血
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第四章 细菌常规检验 各论
• 细菌：20种 • 显微形态及染色特征 • 培养特性 • 生化特性 • 检验方法
• 大肠埃希氏菌、沙门氏菌 • 金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌 • 副溶血弧菌 • 蜡样芽孢杆菌 • 产气荚膜梭菌 • 单核增生李斯特菌 • 布氏杆菌 • 椰毒假单胞菌酵米面亚种 • 空肠弯曲菌 • 结核分枝杆菌
一． 检验前的准备 二． 样品的采集 三． 样品的送检 四． 样品的处理方法 五． 致病菌检验参考菌群的选择 六． 样品的检验 七． 检验结果的报告
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实例：
食品微生物检测
微生物检测
常规微生物检测 致病微生物检测
常规微生物项目：细菌总数、大肠菌群、酵母总数、霉菌总数，此 类细菌不致病，但会严重影响食品的外观及风味。目前常用微生物 培养法来计数菌落，允许有该类菌落，但菌落总数不能超标。
致病微生物项目：沙门氏菌、李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆 菌O157：H7、弯曲杆菌、致病弧菌、副溶血弧菌、志贺氏菌、假 单胞菌等。致病微生物在食品中是绝对不允许存在的，所以快速检 测食品中是否存在有致病微生物，是食品安全检验的重中之重。 5
食品微生物检验的一般步骤
样
检 验 前 的 准 备
样 品 采 集
品 预 处 理
与
送 检
选 择
菌落总数
大肠菌群 检验过程 分离培养
结果报告 染色镜检
参 考 菌 群
致 病 菌
增菌
纯 化 分离培养
生化试验 血清学试验
动物试验 6
*第三章 细菌生化试验和血清学试验
• 细菌生化实验定义、方法（原理）、注意事项 • 细菌鉴定的生化实验原理及现象
1、糖（醇）类代谢试验 2、氨基酸和蛋白质代谢试验 3、有机酸盐和铵盐的利用试验 4、呼吸酶类试验 5、毒性酶类试验
• ELISA法操作简便，并具有安全快速高效、费用低， 适用于大批量标本的筛选。
4、真菌的常规实验室检验法（镜检、培养） 5、真菌的主要生化反应实验（7个） 6、病原真菌的分类和特征 • （1）感染性：新生隐球菌、荚膜组织胞浆菌、白色念珠菌的微生 物学检验（典型例子） • （2）中毒性：重点在掌握毒素 • 黄绿青霉、桔青霉、岛青霉产生的毒素及特征 • 镰刀菌属产生的毒素种类及其理化性质
• 基质的水分、空气的湿度与真菌的生长繁殖和产毒素能力密切相 关，基质含水量在17%~18%时为真菌产毒素的最适条件。
中毒性
毒素的检验 实例
• 检测真菌毒素有许多方法，如检测黄曲霉毒素有生物 学方法和ELISA法等。
• 生物学方法主要用于检测真菌毒素的毒性，如用鸡胚、 小白鼠作毒性试验，观察动物中毒死亡或出现肿瘤。
1、糖醇类代谢试验
（一）糖醇类发酵试验 （二）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验 （三）V-P试验 （四）甲基红（Methyl Red）试验 MR （五）七叶苷水解试验 （六）甘油品红试验
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制备好的培养 基对照管
斜面红色， 底面黄色
培养基全黄色
斜面黄色、底部黑色， 并产生H2S
培养基不变色 非发酵菌
斜面红色，底部黑色，产生 H2S
微生物检验技术复习课
第一章 绪论
• 了解微生物污染产品的来源（6个） • 理解微生物检验涵义及意义（3点） • 了解微生物检验的任务（5点）、范围（4点）和对象（7个）
了解为什么要学这门专业课
*第二章 细菌检验常规技术
1、微生物检验的基本程序?（食品微生物检验的一般程序）
ห้องสมุดไป่ตู้
（7步，其中每步的具体内容）