细菌检验基本技术
细菌学检验基本技术共56页
在公共卫生及预防医学领域所涉及的细菌学检验样 本种类繁多，包括来自食品、化妆品、涉水产品、 消毒及卫生用品、环境及物品（水、土壤、空气， 各种物品）、正常人体及临床等的样本。
许欣
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一、临床样本的采集与送检
（一）血及骨髓样本的采集 1. 采样时间：发热期、用药之前、 病情发展 2. 采样部位及频率：多部位、高频率 3. 样本采集的量：成人血量10ml，婴儿1ml～2ml，儿
养基或pH7.0的甘油PBS 3. 注意事项：无菌操作、可能厌氧培养
许欣
3
一、临床样本的采集与送检
（四）痰及上呼吸道样本的采集 1. 采样时间：晨痰、鼻咽拭子 2. 采样方法：自然咳痰法、支气管镜采集法、胃内采痰
法、气管穿刺法等 ；咽拭子 3. 注意事项：先漱口、结核分枝杆菌和真菌可4℃保存
许欣
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二、不染色检查
细菌的活体观察，主要用于观察动力 悬滴法——凹玻片
压滴法——平玻片
许欣
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三、染色检查
常用碱性染料（美蓝、孔雀绿、碱性复红、结晶紫、 沙黄等）
单染色法，复染色法，特殊结构染色法（鞭毛、芽孢、 荚膜等），负染色法、荧光染色法，革兰染色法（结 晶紫、碘液、95%酒精、碱性复红），抗酸染色法 （分枝杆菌、石炭酸复红、美蓝）
许欣
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第二节 细菌的形态结构检查法
了解标本中有无细菌及其大致的数量。 验证培养物是否为纯种。 形态检查结果可做初步诊断。 不染色检查法和染色检查法。 借助显微镜对形态、大小、排列、结构的直接观察。
许欣
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一、显微镜检查
1、普通光学显微镜(light microscope)：分辨率0.2μm， 用于细菌染色标本的观察。
细菌检验基本技术难培养细菌的分离
２．梅毒螺旋体分离
梅毒螺旋体在人工培养基上不易生长，可接种在兔睾丸或眼前房内繁殖。目前研究表明，梅毒螺旋体并不是严格的厌氧菌，在氧浓度为１．５％条件下，接种到含有棉尾兔上皮细胞的组织培养基上可有一定程度繁殖，其最适合培养温度为３４～３５℃。
（五）立克次体分离
立克次体是专性细胞内寄生菌，人工培养基不生长，必须通过动物及细胞分离。
细菌检验基本技术：难培养细菌的分离
在细菌分离中经常会遇到各种各样的难培养细菌，主要包括以下几种类型：
营养要求高（或培养基中需要添加特定成分）：这类细菌在一般的增菌培养基和普通平板（包括血平板）中往往不能被分离成功，如支原体的培养等。
需要特殊的温度、湿度、ｐＨ和气体条件：许多细菌（如螺杆菌属的细菌和弯曲菌属的细菌等）只能在微氧环境下生长，有些（如类杆菌属和梭杆菌属的细菌等）则只能在厌氧环境中生长，普通需氧培养条件下无法分离成功。
生长特别缓慢：在１８～２４小时内无大量细菌生长繁殖，也无法在短时间内形成肉眼可见的菌落，需要数天或数周的培养时间，在从临床样本中分离此类细菌时，培养过程中防止杂菌的污染和过度生长的难度较大。
对于这种类型的细菌，常需要特殊的分离手段。
（一）厌氧菌分离
厌氧菌的培养必须在厌氧培养箱中隔绝氧气进行，必要时充以惰性气体。必须在简陋条件下进行时，可利用烛缸：将培养基置于一个可密闭的容器内，并在容器中点燃一支蜡烛，密闭，并置培养箱中培养。燃烧的蜡烛耗尽容器中的氧，并产生二氧化碳，以满足厌氧细菌生长的条件。
（三）Ｌ型分离
Ｌ型为细胞壁缺损的细菌，许多致病细菌都能转化为Ｌ型，由于不能在普通培养基上生长而难于分离。在普通的渗透压下，细胞壁缺损的细菌会因“胀破”死亡，因而，分离Ｌ型的培养基必须具有高渗透压。通常使用琼脂浓度０．５以下的半固体培养基，加马血清及１０％蔗糖以维持渗透压。在这种培养基上，细菌的Ｌ型可生长成“油煎蛋”样的细小菌落。有些Ｌ型的细菌可以恢复，恢复后即可按正常方法培养。
现代微生物学检验基本技术
现代微生物学检验基本技术随着现代医学及相关科学技术的发展，各学科相互交叉和渗透，医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平，许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。
医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术，准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物，并对引起感染的微生物进行耐药性监测，为临床对感染性疾病诊断、治疗、流行病学调查及研究等提供科学依据。
第一节微生物形态学检查细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一，它是细菌分类和鉴定的基础，可根据其形态、结构和染色反应性等，为进一步鉴定提供参考依据。
一、显微镜检查由于细菌个体微小，肉眼不能看到，必须借助显微镜的放大才能看到。
一般形态和结构可用光学显微镜观察，其内部的超微结构则需用电子显微镜才能看清楚。
常用显微镜有如下几种。
1．普通光学显微镜采用自然光或灯光为光源，其波长约为0.4μm。
显微镜的分辨率为波长的二分之一，即0.2μm，而肉眼可见的最小形象为0.2mm。
故用油（浸）镜放大1 000倍，能将0.2μm的微粒放大成肉眼可见的0.2mm。
普通光学显微镜可用于细菌、放线菌和真菌等的观察。
2．暗视野显微镜常用于观察不染色微生物形态和运动。
在普通显微镜安装暗视野聚光器后，光线不能从中间直接透入，视野呈暗色，当标本接受从聚光器边缘斜射光后可发生散射，因此可在暗视野背景下观察到光亮的微生物如细菌或螺旋体等。
3．相差显微镜相差显微镜利用相差板的光珊作用，改变直射光的光位相和振幅，将光相的差异转换为光强度差。
在相差显微镜下，当光线透过不染色标本时，由于标本不同部位的密度不一致而引起光相的差异，可观察到微生物形态、内部结构和运动方式等。
4．荧光显微镜荧光显微镜与普通光学显微镜基本相同，主要区别在于光源、滤光片和聚光器。
目前大多数使用的是落射光装置，常用高压汞灯作为光源，可发出紫外光或蓝紫光。
滤光片有激发滤光片和吸收滤光片二种。
用蓝光的荧光显微镜除可用一般明视野聚光器外，也可用暗视野聚光器，以加强荧光与背景的对比。
第一章 细菌检验基本技术
第一章细菌检验基本技术一、名词解释1.培养基2.Gram stain二、选择题【A1型题】1．做细菌培养时，采集标本的最佳时间是A、应用抗菌药物之前采集标本B、应用抗菌药物之后采集标本C、一边应用抗菌药物一边采集标本D、采集标本与是否应用抗菌药物没有关系E、应用抗菌药物一天后采集标本2．采集窦道标本进行细菌学检查，应选择A、坏死组织B、窦道底部取活组织C、窦道口取标本D、窦道流出的液体E、窦道中央的脓液3．盛装细菌学检查标本的容器A、用75%酒精浸泡24小时后直接应用B、用碘酒浸泡12小时后直接应用C、高压灭菌，煮沸或干热灭菌D、用浓H2SO4处理后，直接应用E、用水洗后直接应用4．尿液做厌氧菌培养时A、取消毒中段尿B、无菌注射器从耻骨上缘行膀胱穿刺术抽取C、自然导尿D、放入无菌试管送检E、盛装尿液的容器不必将标本与空气隔绝5．怀疑肠热病患者，应如何采集标本A、发病的第一周采集血液，第二周采集尿液，第三周采集粪便B、发病的第一周采集尿液，第二周采集血液，第三周采集粪便C、发病的第一周采集尿液，第二周采集粪便，第三周采集血液D、发病的第一周采集血液，第二周采集粪便，第三周采集尿液E、发病的第一周采集粪便，第二周采集血液，第三周采集粪便6.标本不需要保温送检的病原体是A、脑膜炎柰瑟菌B、淋病C、流感嗜血杆菌D、阿米巴滋养体E、大肠埃希菌7．采用运输拭子采集标本做细菌培养可延长保存时间，但一般不超过多长时间A、1天B、2天C、3天D、4天E、5天8．细菌不用染色直接镜检主要用于检查A、细菌的动力及运动状况B、细菌的排列．C、细菌的形态D、细菌的夹膜E、细菌的鞭毛9．常用的碱性染料是A、伊红B、刚果红C、结晶紫D、瑞氏染料E、姬姆萨染料10．常用的酸性染料是A、结晶紫B、美蓝C、瑞氏染料D、姬姆萨染料E、伊红11．细菌经革兰染色，结果是A、革兰阳性菌为红色，革兰阴性菌为紫色B、革兰阳性菌为紫色，革兰阴性菌为红色C、革兰阳性菌为紫色，革兰阴性菌为兰色D、革兰阳性菌为兰色，革兰阴性菌为红色E、革兰阳性菌为兰色，革兰阴性菌为紫色12．下列不是抗酸性细菌的是A、金黄色葡萄球菌B、人结核分枝杆菌C、牛结核分枝杆菌D、非结核分枝杆菌E、异染颗粒染色13．敏感性最强的染色方法是A、革兰染色B、抗酸染色C、鞭毛染色D、荧光染色E、异染颗粒染色14．为进一步观察白喉棒状杆菌的形态，应做下列哪种染色A、革兰染色B、抗酸染色C、鞭毛染色D、荧光染色E、异染颗粒染色15．为观察细菌的运动情况，常用下列哪种方法A、悬滴法B、革兰染色法C、抗酸染色法D、鞭毛染色法E、墨汁染色法16.下列不是细菌生长所需营养物质的是A、蛋白质B、肉浸液C、牛肉膏D、琼脂E、血液17．在制备培养基时，为有利于检出病原菌而抑制非病原菌，常加入一定量的抑制剂，下列属于抑制剂的是A、维生素B、氨基酸C、胆盐D、嘌呤E、嘧啶18．血琼脂平板培养基属于A、基础培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、特殊培养基19．SS琼脂平板培养基属于A、基础培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、特殊培养基20．克氏双糖铁琼脂（KIA）属于A、基础培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、特殊培养基21．糖发酵管属于A、基础培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、特殊培养基22．巧克力琼脂平板属于A、基础培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、特殊培养基23．疱肉培养基属于A、基础培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、特殊培养基24．可用碱性琼脂或TCBC琼脂培养基分离的细菌是A、霍乱弧菌B、沙门菌C、志贺菌D、大肠埃希菌E、铜绿假单胞菌25．氧化-发酵试验（O/F试验）主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别，其原因是A、肠杆菌科细菌与非发酵菌均为发酵型B、肠杆菌科细菌与非发酵菌均为氧化型C、肠杆菌科细菌为发酵型，非发酵菌为氧化型或产碱型D、肠杆菌科细菌为氧化型，非发酵菌为发酵型E、肠杆菌科细菌与非发酵菌均为产碱型26．七叶苷水解试验主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别，该试验阳性的细菌是A、肺炎链球菌B、无乳链球菌C、化脓链球菌D、肠球菌E、草绿色链球菌27．硫化氢试验主要用于肠杆菌科细菌属及种的鉴别，不产生硫化氢的细菌是A、沙门菌属B、肠杆菌属C、枸橼酸杆菌属D、变形杆菌属E、亚利桑那菌属28．氧化酶试验阴性的细菌是A、奈瑟菌属B、莫拉菌属C、葡萄球菌属D、铜绿假单胞菌E、弧菌29．过氧化氢酶试验（触酶试验）主要用于革兰阳性球菌的初步分群，下列正确的是A、葡萄球菌阴性，链球菌属阳性B、微球菌阴性，链球菌属阳性C、葡萄球菌与链球菌均阴性D、葡萄球菌阳性，链球菌阴性E、葡萄球菌与链球菌均阴性30．葡萄球菌可产生两种凝固酶，一种是结合凝固酶，另一种是分泌至菌体外的游离凝固酶，下列说法正确的是A、结合凝固酶可用玻片法检出，游离凝固酶可用试管法检出B、结合凝固酶可用试管法检出，游离凝固酶可用玻片法检出C、结合凝固酶和游离凝固酶均可用玻片法检出D、结合凝固酶和游离凝固酶均可用试管法检出E、结合凝固酶和游离凝固酶不能用玻片法和试管法检出31．下列CAMP试验阳性的细菌是A、A群链球菌B、B群链球菌C、C群链球菌D、D群链球菌E、F群链球菌32．下列对杆菌肽敏感的细菌是A、A群链球菌B、B群链球菌C、C群链球菌D、D群链球菌E、F群链球菌33.下列对optochin纸片敏感的细菌是A、A群链球菌B、B群链球菌C、肺炎链球菌D、草绿色链球菌E、肠球菌34．对沙门菌属及志贺菌属进行血清分型时，一般采用的凝集反应试验是A、玻片法凝集试验B、反向间接血凝试验C、胶乳凝集试验D、协同凝集试验E、试管法凝集试验35．用分子生物学方法检测耐β-内酰胺抗生素的TEM型β-内酰胺酶基因（bla-TEM-1）时，常用的方法是A、Southern印迹B、Northern印迹C、斑点杂交D、PCRE、生物芯片技术36．下列可产生内毒素的病原体是A、革兰阳性细菌B、真菌C、抗酸性细菌D、病毒E、革兰阴性细菌37．有关细菌培养基的描述，不正确的是A、按物理状态可分为液体、固体和半固体B、血琼脂平板属于营养培养基C、SS培养基属于鉴别培养基D、疱肉培养基属于厌氧培养基E、蛋白胨水为常用的基础培养基38．细菌检查最快速的检测方法是A、电镜检查B、动物试验C、分离培养D、直接涂片镜检E、血清学试验39．用鲎试验测定的物质是A、类毒素B、肠毒素C、神经毒素D、外毒素E、内毒素40．细菌染色法中，最常用最重要的鉴别染色法是A、革兰染色B、抗酸染色C、鞭毛染色D、荚膜染色E、芽胞染色41．为鉴定肠杆菌科细菌进行IMViC试验，不属于IMViC试验项目的是A、VP试验B、甲基红试验C、硝还试验D、枸橼酸盐利用试验E、吲哚试验42．芽胞、鞭毛、荚膜及异染颗粒等的染色称为A、美兰染色B、革兰氏染色C、抗酸染色D、特殊染色E、复红染色43．革兰染色阴性的细菌颜色是A、蓝色B、紫色C、红色D、黄色E、白色44．适于用麦康凯（MacConKey）琼脂培养基培养的细菌是A、肠道菌B、分离培养鼠疫杆菌C、白喉棒状杆菌D、培养布鲁氏菌E、百日咳杆菌45．常用痰涂片抗酸染色光镜检查进行初步诊断的细菌是A、军团菌B、支原体C、流感嗜血杆菌D、肺炎链球菌E、分枝杆菌46．患者6岁，春节后突然发热、剧烈头痛、喷射状呕吐、颈项强直。
食品题 细菌检测方法
食品题细菌检测方法
食品中细菌的检测方法主要包括以下几种：
1. 培养分离法：这是最经典和最常用的细菌检测方法。
样品经过适当的处理和增菌后，在选择性培养基上进行分离培养，通过观察菌落特征、生化反应等进行鉴定。
2. 免疫学技术法：利用抗原-抗体反应的特异性进行检测，包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光技术(IFT)等。
该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。
3. 分子生物学方法：利用细菌的特异性基因序列进行检测，如聚合酶链式反应(PCR)、基因芯片等。
该方法具有快速、灵敏度高、特异性强的优点，但需要相应的设备和专业人员。
4. 电阻抗法：通过测量培养基中细菌生长时引起的电阻变化来检测细菌数量。
该方法具有快速、简便、自动化等优点，适合大规模生产中的质量控制。
5. 浊度法：通过测量培养液的浊度变化来检测细菌数量。
该方法具有快速、简便、自动化等优点，但受其他因素影响较大，需要校准和控制。
以上是食品中细菌的几种主要检测方法，不同方法各有其优缺点，可以根据具体需要进行选择。
同时，为了提高检测的准确性和可靠性，建议采用多种方法进行检测，并进行交叉验证。
细菌的一般检验方法
细菌的一般检验方法
细菌是一类微小的生物体，它们存在于自然界的各个角落，有
些对人类健康有益，有些则可能引发疾病。
因此，对细菌进行检验
是非常重要的。
下面将介绍一般的细菌检验方法。
首先，最常见的细菌检验方法之一是培养法。
培养法是通过将
样本置于适当的培养基上，利用培养基中的营养物质和条件，促使
细菌在培养皿中生长和繁殖。
在适当的环境条件下，细菌会形成典
型的菌落，通过观察菌落的形态、大小、颜色等特征，可以初步判
断细菌的种类。
其次，鉴定细菌的生化试验也是一种常用的方法。
生化试验是
通过检测细菌在特定生化反应条件下的代谢产物，来判断细菌的特性。
比如，利用氧化酶试验来判断细菌是否具有氧化酶酶活性，利
用大肠杆菌培养基来区分大肠杆菌等。
除此之外，PCR法也是一种常用的细菌检验方法。
PCR法是一种
快速、高效的分子生物学技术，通过扩增细菌DNA片段，再通过电
泳等手段来检测细菌的存在。
PCR法的优点是操作简便、灵敏度高，可以快速准确地检测出细菌。
最后，抗生素敏感性试验也是细菌检验的重要环节。
抗生素敏感性试验是通过将不同抗生素涂布在培养皿上，观察细菌对不同抗生素的敏感性，从而选择出对患者病情最有利的治疗方案。
总的来说，细菌的一般检验方法包括培养法、生化试验、PCR 法和抗生素敏感性试验。
这些方法各有优势，可以相互补充，提高细菌检验的准确性和可靠性。
在实际操作中，需要根据具体情况选择合适的方法，以确保检验结果的准确性和可靠性。
希望本文介绍的细菌检验方法对您有所帮助。
细菌检验技术..
葡萄糖
甲基红试验
丙酮酸 大量混合酸
pH降至4.4以下
甲基红试剂
培养基变红
甲基红试验
（四）伏－普试验（V-P试验） • 原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮 酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中乙 酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白 胨中的精氨酸所含的胍基结合，生成红色化 合物。 • 培养基：葡萄糖蛋白胨水 • 结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+ 培养基不变色： － • 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主 要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌
三、细菌的生长现象 （一）细菌在液体培养基中的生长现象
• 混浊 • 沉淀：多见于链状排列的细菌 • 菌膜：多见于厌氧菌
细菌在液体培养基中的生长现象
（二）细菌在半固体培养基中的生长现象
• 有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外 扩散生长，穿刺线边缘模糊。 • 无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边 缘清晰。
第五章 细菌检验技术
第一节
细菌形态检验技术
一、细菌染色标本镜检
（一）染色标本检查的基本程序 1、涂片 2、干燥 3、固定 4、染色 染料种类：碱性染料、酸性染料、中性染 料， 碱性染料最常用
（1）单染法 用一种染料进行染色，可观察细菌的大小、 形态和排列，但不能用于鉴别细菌。如：亚 甲蓝染色法 （2）复染法 用两种或两种以上的染料进行染色，不仅可 以观察细菌的大小、形态和排列。还可用于 鉴别细菌，又称为鉴别染色。 • 鉴别染色—革兰染色 抗酸染色
葡萄糖
V－P试验
丙酮酸
脱酸
乙酰甲基甲醇
V-P试剂
二乙酰 培养基变红
葡萄糖
丙酮酸 脱酸 大量混合酸 乙酰甲基甲醇 V-P试剂 pH降至4.4以下 甲基红试剂 培养基变红 培养基变红 二乙酰
《微检习题集 第三章 细菌检验基本技术》
细菌检验基本技术一、学习目标1.掌握：革兰氏染色的原理、操作与结果判断，细菌接种技术与培养方法，细菌在培养基中的生长现象。
细菌生化反应的原理、方法及应用。
2.熟悉：细菌染色标本检查的基本程序，细菌培养常用培养基与器材，药敏检测的原理与应用。
3.了解：细菌不染色标本的检查方法和用途，免疫学技术、分子生物学技术、药敏检测技术以及自动化检测技术在鉴定微生物方面的运用。
二、主要内容三、习题（一）名词解释1.培养基2.平板划线法3.细菌的生化反应4.药敏试验（二）单项选择题A1型题1．革兰染色所用染液的顺序是A.稀释复红一碘液一酒精一结晶紫B.结晶紫一酒精一碘液一稀释复红C.稀释复红一结晶紫一碘液一酒精D.结晶紫一碘液一酒精一稀释复红E.稀释复红一酒精一结晶紫一碘液2．细菌染色多采用的染料是A.酸性染料B.中性染料C.碱性染料D.复合染料E.单纯染料3．不属于细菌形态学观察的是A.平板分区划线观察单个菌落B.革兰染色观察细菌染色性C.鞭毛染色观察细菌的动力D.光镜观察细菌形态E.暗视野显微镜观察细菌动力4．细菌染色过程中固定的作用主要是A.使其易与染料结合B.使其失去抗原性C.杀死细菌D.利于保存E.破坏细菌结构5. 下列哪些方法动力与检测细菌动力无关A.压滴法B.鞭毛染色C.细菌半固体培养基接种D.细菌革兰染色E.暗视野显微镜观察活菌6.下列培养基与其分类的组合中不正确的是A.蛋白胨水—基础培养基B.克氏双糖铁琼脂—鉴别培养基C.胆盐肉汤管——营养培养基D.SS培养基——选择培养基E.高渗培养基——特殊培养基7.从有正常菌群存在的部位所采取的标本应接种在哪种培养基中分离培养病原体A.基础培养基B.营养培养基C.增菌培养基D.选择鉴别培养基E.特殊培养基8.不能作为培养基指示剂的是A.溴酚蓝B.孔雀绿C.溴甲酚紫D.酚红E.甲基红9.下列培养基中不属于营养培养基的是A.血琼脂培养基B.巧克力琼脂培养基C.吕氏血清培养基D.卵黄双抗培养基E.鸡蛋斜面培养基10.培养基的保存，叙述错误的是A.制备好的培养基应保存于低温环境中B.温度越低，保存时间越长C.不同性质的培养基，保存期限不同 E.保存培养基应避免强光照射D.放在塑料袋中密封，可延长保存时间11．制备培养基所必须的步骤不包括A.调配成分B.成分溶解C.灭菌D.调ph值至中性E.质量检查12.平板划线主要目的是A.利于细菌生长B.利于观察菌落形态C.利于获得足够的单个菌落D.利于大量增殖细菌E.用于标本的细菌计数13.有关接种环的灭菌方法，错误的是A.接种环常用火焰灭菌，也可用消毒B.接种环使用前必须先灭菌C.火焰灭菌后，须待环冷却方可取菌(标本)D.染菌的接种环先于内焰加热、烤干，再移至外焰灭菌E.接种环用完后，应立即搁置于架上，勿随手弃置14.制备普通琼脂培养基，灭菌宜采用A.煮沸法B.巴氏消毒法C.高压蒸气灭菌法D.流通蒸气灭菌法E.间歇灭菌法15.关于穿刺接种法，错误的是A.可以是固体培养基，也可以是半固体培养基B.用接种针或接种环接种C.半固体培养基多用于观察细菌动力D.若细菌在半固体培养基中只沿穿刺线生长，则无动力E.若细菌有动力，穿刺线周围的半固体培养基会变混浊16.不属于细菌菌落特征的是A.湿润B.扁平C.完全溶血D.致密E.透明17.关于吲哚试验，不正确的是A.培养基为蛋白胨水B.培养基中不含葡萄糖C.加入的吲哚试剂为对四甲基对苯二胺D.阳性的细菌含有色氨酸酶E.有红色的玫瑰吲哚形成为阳性18.VP试验阳性呈红色是由于生成的双乙酰与下列物质结合A.巯基B.醛基C.羟基D.胍基E.羧基19.关于尿素酶试验，叙述错误的是A.是一种氨基酸代谢试验B.分解底物是尿素C.阳性时培养基变酸性D.常用尿素培养基E.是肠道杆菌科细菌鉴定时常用试验20.关于氧化酶试验，叙述错误的是A.氧化酶又称为细胞色素氧化酶B.氧化酶试剂常用盐酸四甲基对苯二胺C.氧化酶与氧化酶试剂接触产生颜色反应D.试验时接触含铁物质会出现假阳性E.革兰阴性杆菌均应进行氧化酶试验21.大肠埃希菌的靛基质试验阳性，请问靛基质是细菌分解什么物质产生的A.葡萄糖B.尿素C.色氨酸D.半胱氨酸E.枸橼酸盐22．甲基红试验中培养基的pH需降至多少，指示剂才指示阳性结果A.2.5B.5.OC.4.5D.6.5E.7.423．七叶苷水解试验中，七叶素与下列哪种离子反应使培养基变黑A.Cu2+B.Mn2＋C.Ag＋D.NH4＋E.Fe2＋24.细菌代谢过程中，糖类物质在酶的作用下经过一种或多种途径转变为一个共同通用的中间产物，这个产物是A.甲酸B.丙酮酸C.乙酸D.脂肪酸E.尿酸25. 利用细菌生化反应鉴定细菌是根据A.细菌酶活性差异B.细菌毒素活性差异C.细菌酶含量的差异D.细菌分解代谢产物的差异E.细菌毒素种类的差异B1型题（1~5题共用备选答案）A. 选择培养基B. 营养培养基C.特殊培养基D. 鉴别培养基E.基础培养基1.蛋白胨水是（）2.克氏双糖铁琼脂是（）3. 胆盐肉汤管是（）4.高渗培养基是（）5.巧克力琼脂培养基是（）（6~11题共用备选答案）A.指示剂为甲基红，红色为阳性B. 发酵菌为2管均为黄色C.指示剂为酚红，幽门螺旋杆菌为阳性D.阳性出现玫瑰色（蛋白胨水中）E.二乙酰与培养基内的含胍基的肌酸或肌酐产生红色化合物6. O/F试验生化反应的原理或结果为（）7. MR试验生化反应的原理或结果为（）8. VP试验生化反应的原理或结果（）9.脲酶试验生化反应的原理或结果（）10.靛基质试验生化反应的原理或结果（）C1型题将某种细菌接种到KIA斜面培养基中，置35℃恒温箱中培养18-24h后，培养基斜面仍为红色，底层黄色。
细菌学检验基本技术课件
液体培养法等。
倾注法是将样品与液体培养
04
基混合，然后倒入培养皿中，
使细菌在培养基上生长繁殖。
液体培养法是将样品与液体
06
培养基混合，然后在液体培
养基中培养细菌。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ菌培养技术
01
02 培养基的选择：根据细菌种类和生长
培养温度和时间：根据细菌种类和生
需求选择合适的培养基
长需求选择合适的培养温度和时间
C
代谢组学：研究细菌的代 谢途径和调控机制
D
系统生物学：研究细菌的 生物学系统及其相互作用
谢谢
03
04 培养方法：采用平板培养、液体培养、
细菌鉴定：通过观察细菌形态、生长
半固体培养等方法
特性、生化反应等方法进行细菌鉴定
细菌鉴定技术
01
形态学鉴定：通过显微镜观察 细菌的形态、大小、颜色等特 征进行鉴定
03
血清学鉴定：利用细菌的抗原 与抗体反应进行鉴定
05
生物信息学鉴定：利用生物信 息学方法，如基因序列比对、 系统发育分析等，进行鉴定
3
细菌学检验在医学、食品、环境等 领域具有广泛的应用
4
细菌学检验可以帮助诊断疾病、评 估食品安全、监测环境污染等
细菌学检验的重要性
01
细菌学检验是医学检 验的重要组成部分， 对疾病的诊断、治疗 和预防具有重要意义。
04
细菌学检验可以指导 抗生素的合理使用， 减少抗生素滥用和耐
药菌株的产生。
02
细菌学检验可以帮助 医生确定病原体，为 治疗提供依据。
快速检测技术的发展
01
免疫学检测：利用抗体和抗原
的特异性结合，快速检测细菌
细菌检测方法
细菌检测方法细菌是一类微生物，它们存在于自然界的各个角落，有些对人类有益，有些则可能对人体健康造成威胁。
因此，对细菌的检测就显得尤为重要。
本文将介绍几种常见的细菌检测方法，希望能够为相关领域的研究人员和实验人员提供一些参考。
首先，常见的细菌检测方法之一是培养法。
这是一种传统的方法，通过将样品放置在适当的培养基上，利用适当的温度、湿度和气氛条件，使细菌在培养基上繁殖生长，然后观察和鉴定细菌的种类和数量。
培养法的优点是可以对细菌进行鉴定和分离，但缺点是需要较长的时间，且对于一些难以培养的细菌可能无法检测出来。
其次，PCR法也是一种常用的细菌检测方法。
PCR法利用聚合酶链式反应技术，通过扩增细菌DNA片段来检测细菌的存在和种类。
PCR法具有高灵敏度和特异性，能够快速准确地检测出细菌的存在，但需要特定的实验条件和设备，并且对样品的处理和提取要求较高。
另外，免疫学方法也是一种常见的细菌检测方法。
免疫学方法利用抗体与特定细菌抗原的结合来检测细菌的存在和种类。
这种方法具有高度的特异性和灵敏度，可以快速准确地检测出细菌的存在，但需要具备一定的实验技术和专业知识。
最后，质谱法也是一种先进的细菌检测方法。
质谱法利用质谱仪对样品中的细菌进行分析和鉴定，能够快速准确地检测出细菌的种类和数量，具有高度的特异性和灵敏度，但需要较高的设备和技术要求。
综上所述，针对不同的实验目的和要求，可以选择不同的细菌检测方法。
在实际应用中，可以根据实验条件、样品特性和实验目的综合考虑，选择合适的方法进行细菌检测。
希望本文介绍的内容能够对相关领域的研究人员和实验人员提供一些帮助和参考，促进细菌检测技术的发展和进步。
临床微生物检验基本技术标准-2023年5月1日实施
目次范围 (1) 1规范性引用文件 (1) 2术语和定义 (1) 3无菌操作及消毒灭菌技术要求 (2) 4标本处理及制片技术要求 (3) 5染色技术要求 (4) 6显微镜检查技术要求 (4) 7接种技术要求 (5) 8培养技术要求 (7) 9鉴定技术要求 (8) 10分子检测技术要求 (11) 11免疫学检测技术要求 (12) 12质量保证 (12) 13临床微生物检验基本技术标准1 范围本标准规定了医学实验室在临床微生物检验领域的基本技术要求。
本标准适用于开展临床微生物检验的医学实验室。
2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
GB 19489 实验室生物安全通用要求WS/T 442 临床实验室生物安全指南WS/T 639 抗菌药物敏感性试验的技术要求WS/T 497 侵袭性真菌病临床实验室诊断操作指南3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
3.1消毒 disinfection杀灭或清除物体上活的病原微生物的方法。
3.2灭菌 sterilization杀灭物体上所有微生物（包括细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物）的方法。
3.3无菌 asepsis指不存在活菌。
3.4无菌操作 aseptic operation防止微生物进入人体或无菌物品、无菌区域的操作。
3.5接种 inoculation将目标微生物转移至适于生长繁殖的人工培养基或活的生物体内的方法。
3.6荧光淬灭 fluorescence quenching指由于荧光分子与其他分子发生作用而出现的光度降低、发光时间缩短乃至停止发光的现象。
3.7一套血培养 a set of blood culture从同一个穿刺点采集的血液，通常分别注入一个需氧血培养瓶和一个厌氧血培养瓶进行血培养。
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组成和作用
---营养物质：蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、 鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类
---水 ---凝固剂：琼脂、明胶 ---抑制剂 ---指示剂
4
培养基的种类（按用途分类）
基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普通平板。 营养培养基：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板。 鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克
液体培养基接种法 半固体穿刺接种法 :用于观察细菌动力 斜面接种法 倾注培养法:用于细菌计数 涂布法
分区划线法
第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
其他接种方法
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细菌培养法
一般培养（需氧培养）
---培养温度：35℃（采用恒温培养箱） ---培养时间：18～24h
二氧化碳培养法：二氧化碳培养箱、烛缸法、化学法 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养
2017-10-11
细菌内毒素的检测
目的： 主要用于诊断病人是否发生革兰阴性细菌感染。 用于检测注射用液和生物制品有无内毒素污染。
检测方法： 家兔发热法 鲎试验
细菌外毒素的测定
体内毒力试验：细菌外毒素对机体的毒性作用，可被
相应抗毒素中和，若先给动物注射抗毒素，然后再注射外 毒素，则动物不产生中毒症状。
有动力 现象
无动力 现象
细菌的生物化学鉴定技术
3
6
细菌的代谢产物检测与鉴定
碳水化合物的代谢试验 蛋白质和氨基酸的代谢试验 碳源和氮源利用试验 酶类试验 抑菌试验
碳水化合物的代谢试验
糖类发酵试验 氧化－发酵试验 β－半乳糖苷酶试验（ONPG） 七叶苷水解试验 甲基红试验 VP试验
细菌非培养检验技术
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7
PCT 的临床价值
早期诊断在感染发生2-3h血浆PCT 浓度就会升高 病情监测：在脓毒血症和休克时PCT 含量最高, 随着感染的恢复PCT 也随着下降 预后判断：动物实验证明，PCT 是一个潜在的致 死因子，本身不会启动脓毒性反应但可放大并加 重脓毒性的病理反应，当PCT 含量升高时死亡率 也升高。
染色方法：
结晶紫 1分钟 卢戈碘液 1分钟 95％乙醇 30S～1min 稀释复红
初染
媒染
脱色
复染
影响革兰染色的关键步骤是脱色
革兰染色意义
★有助于鉴别细菌 ★有助于选择用药 ★有助于了解细菌的致病性
革兰染色结果
紫色－－革兰阳性菌 红色－－革兰阴性菌
革兰阳性菌
革兰阴性菌
抗酸染色法(acid fast stain)
细菌检验自动化设备
分析前自动化 微生物标本前处理系统
分析中自动化 自动染色系统 自动血液培养系统 自动化细菌鉴定药敏系统
分析后自动化 微生物医院内感染分析系统
细菌检验的自动化
3
临床微生物鉴定方法学的演化
Pow e r
oI n si i ng
Va c u um
Ne g a ti v e
质谱分析
分子测序
细菌接种的基本程序
灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本 沾取标本 接种 灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境
细菌接种法
平板划线分离接种法： 目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个
菌落，以便获得纯菌。
---分区划线法：适用于含菌量较多的标本 ---连续划线法：适用于含菌量较少的标本
染液组成：石碳酸复红、3%盐酸酒精、美蓝 染色结果：抗酸菌呈红色，非抗酸菌和细胞呈蓝色 应用
多用于抗酸菌的染色， 如结核分枝杆菌的染色等。
3
负染色法
用细菌不能结合的材料进行 染色,如酸性染料、墨汁 在黑背景下可看到透光的细 菌,主要用于真菌的检查
其他特殊染色法
异染颗粒染色法 荚膜染色法 芽孢染色法
细菌检验基本技术
《临床微生物学和微生物学检验》 主编 刘云德 楼永良 第二章 P5-P26
温州医科大学检验医学 生命科学学院 温州医科大学附属第一医院 周铁丽
•1
本节目的要求
掌握 标本的采集和处理原则 细菌的形态学检查 细菌的分离培养和鉴定 细菌的非培养检测方法
了解 细菌检验的自动化
•2
感染性疾病诊断的实验室手段
细菌的培养和分离技术
3
无菌技术
是指在执行细菌学检验的过程中，防止一 切非目的微生物侵入培养基和保持无菌物品及 无菌区域不被污染的操作技术和管理方法。
接种工具
接种环接种针 接种罩 无菌工作台 无菌室 生物安全柜
培养基（culture medium）
定义：是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的
形态学检查 病原菌分离培养和药敏试验 非培养的感染指标的检测 分子生物学检测 ……
细菌检验标本采集的基本原则
病程早期采集标本 抗菌药物使用前采集标本 无菌操作 安全采集 根据目的菌的特性用不同的方法采集 选择合适的采集时机和标本种类 采集适当标本量
细菌检验标本运送的基本原则
标本采集后立即送至实验室
采集后最好在2h之内送到实验 不能及时送检者多数应4℃冷藏，一般不超过6h 脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌应保温送检，床旁接种
体外毒力试验：免疫学测定
---双向琼脂扩散 ---琼脂扩散
动物实验
常用动物：小鼠、豚鼠、家兔 接种途径：皮内、皮下、腹腔、静脉、脑 主要用途：分离和鉴定病原微生物
测定细菌的毒力 制备免疫血清 建立致病动物模型 动物的血液用于配制细菌培养基 用于生物制品或一些药物的评价
血清学鉴定
试剂（诊断血清）：含抗体 检测对象：特异性抗原 方法：直接凝集试验（玻片法）、荚膜肿胀试验
自动化鉴定系统
商品化手工鉴定条 快速测试(血清 , 免疫） 传统的生化反应测试管 形态学
9
重点掌握
细菌检验标本运送和处理的基本原则 革兰染色的染液组成、原理、方法、结果、意义
抗酸染色的染液组成和结果判断 培养基的定义、成份和分类 细菌分离培养的目的 细菌生长情况描述 主要生化反应的原理和应用（特异性） 非感染标志物的应用
核酸杂交 核酸扩增技术
主要应用
菌种鉴定 细菌耐药基因检测 菌株同源性分析
基因芯片（microarray chip）
细菌分子生物学检测技术的评价
优点： 检测简便，时间短，灵敏度高，早期诊断
结果解释：
微生物培养阳性清楚地的表示活的微生物的存在 ◦ 特异微生物的抗体的滴度上升表示感染后的反应
耐药基因检测和耐药的关系 ……
氏双糖培养基（KIA）。
选择培养基：具有选择性抑制作用，用于选择性的培养目
的菌，如SS平板。
特殊培养基：用于特殊培养要求的细菌,如厌氧培养基。
培养基的种类（按物理性状分类）
液体培养基：不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。 半固体培养基：含0.3％～0.5％琼脂，用于观察细菌的动力。 固体培养基：含2％～2.5％琼脂，多用于细菌的分离培养。
降钙素元是正常人血清中存在的含116个氨基的糖蛋 白，最初由甲状腺C细胞产生，血清水平很低。 在非感染或病毒性感染疾病时保持非常低的血清水平 ，在细菌性感染时含量升高，并与感染程度和预后呈 正相关。 PCT含量的变化稳定，并出现在疾病的早期（3-4h） ，半衰期短（24h）。 国外把PCT作为最敏感的感染标志。 正常血清水平100-150 pg/ml。
容器须经灭菌处理，不得使用消毒剂 注意安全防护，防止标本外溢和流出
烈性传染病标本必须按规定包装，由专人运送
厌氧性标本应隔绝氧气
专门的运送瓶、试管、注射器运送
细菌形态学检查
3
1
细菌形态学检查的意义
迅速了解临床标本中有无细菌及大致的数量， 根据其形态、结构和染色性大致决定其种属。 可为细菌进一步鉴定提供依据 验证培养物是否纯种 界定标本中的细菌为感染/污染、定植 有少数细菌可根据形态学的检查得出初步诊断 血培养的快速报告
3
常用的非培养感染标志物
广泛的感染标志物
白细胞计数与分类 血沉 C-反应蛋白（CRP） 白介素-6 ……
相对特异的感染标志物
临床常见细菌感染的标志物 真菌感染的标志物 ……
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Wenen LIU
临床常见细菌感染标志物
降钙素原检测
毒素检测
Wenen LIU
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降钙素元（Procalcitomin PCT）
菌落的特征和类型
★菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明
度、湿润度、黏度、溶血性
★菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）
细菌在液体培养基中的生长现象
混浊 沉淀 菌膜
细菌在半固体培养基中的生长现象
有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿
刺线边缘模糊。
无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。
碱性染料：电离后带正电荷，一般情况下细菌都带负电荷，
故细菌着色。最常用。 如结晶紫、美蓝和碱性复红等常用于细菌染色
复合染料: 姬姆萨染料
2
常用细菌染色方法
革兰染色法（Gram stain） 抗酸染色法（acid-fast stain） 荧光染色
革兰染色法（Gram染色）
染液组成：
结晶紫染液、卢戈碘液、95％乙醇、稀释石碳酸复红
法、硫乙醇酸盐法等
细菌在固体培养基中生长情况
纯培养－－挑取一个菌落，移种到另一培养基中，生长出来的
细菌均为纯种，称为纯培养（pure culture）。
菌落－－经过一定的时间（约18～24小时）培养后，单个细菌
分裂繁殖成一堆肉眼可见的细菌集团，称为菌落（colony）。
菌苔－－菌落生长过分密集而形成片状，称为菌苔（mossy）。
形态学检查（II）---染色标本检查法