AKTA-primer-onsite-training教学内容

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AKTApurifier注意事项

AKTApurifier注意事项2010-10-81、第一次使用前必须先阅读使用手册，掌握仪器工作原理；经观摩、培训、指导使用后三个阶段后，方可独立操作。

（仅本实验室研究生可以单独操作）2、开机前先登记，使用时有问题及时反映。

3、实验用的水、20%乙醇、buffer必须当天过滤，避免堵塞在线滤器。

4、层析柜温度上下限分别调到10℃和2℃。

5、使用时确保管路正确，A泵和B泵的滤头分别对应A1和B1管路，不要搞混。

6、使用前先抽泵头，每个泵有两个泵头；然后Pumpwash，可以确保系统里没有气泡。

7、用水进行Pumpwash时注意压力，压力超过0.2MPa请通知，以便换在线滤器。

8、如果只使用A泵，Pumpwash只选择A泵，不要洗B泵。

9、装柱时从上到下，注意设定报警压力，谨防气泡，流速0.5ml/min即可。

10、如果要换进样环必须在装柱之前换，并用inject模式冲洗进样环10ml，排除气泡。

不更换进样环最好也在装柱之前用inject模式冲洗10ml。

11、平衡需要经过20%乙醇—水—Buffer的顺序，不能由20%乙醇—Buffer，避免盐析出。

12、长时间平衡时请关闭紫外灯。

13、进样时保证处于load模式，避免大量气泡，少量小气泡没关系。

进样完毕拔掉注射器，并用水清洗注射器。

14、柱子使用完毕，必须保存在20%乙醇中。

（次日连续实验时可保存于水中<12小时）。

15、使用完毕倒掉废液，有积水需擦干。

16、更换新鲜硅胶，保持系统处于干燥环境。

色谱柱每只价值数千至两万多元，注意避免损坏。

尤其是压力过高可造成色谱柱报废。

固体颗粒、细菌、气泡均可严重降低柱效。

AKTA中文使用说明书

GE Healthcare
ÄKTATMexplorer 快速工艺开拓系统
使用手册
实施您 ÄKTAexplorer 的首次运行
重要用户信息所有用户必须阅读整本手册以充分理解 ÄKTAexplorer 的使用安全。 WARNING（警告）
警告标识强调必须严格遵循指令以避免人身伤害。在说明书完全弄懂和所有规定条件都具备后才能开始动手操作。
2.4
UNICORN 综述 .......................................................................................................... 12
2.5
帮助............................................................................................................................... 14
2.2
AKTAexplorer 100........................................................................................................ 10
2.3
AKTAexplorer 10.......................................................................................................... 11
4.1
系统连接....................................................................................................................... 19

AKTA层析系统

其它要求
TSK-gel XX 5pw 7.5*75
0.5 kPsi /0.6M Pa
1mL/min
TSK-gel XX 5pw 21.5*150
0.5 kPsi /0.6M Pa
6mL/min
TSK-gel G5000PW XL 7.8*300
0.1 kPsi /0.3M Pa
0.5mL/min
TSK-gel G3000SW 0.1 kPsi /0.3M
AKTA层析系统标准操作规程
在使用AKTA前，请先阅读本规程，并了解所需层析方法的原理。初次使用请在有经验
的人指导下进行。
1. 缓冲液和层析的样品的准备：
1. 溶液需用去离子水、超纯水或注射用水配制，除NaOH和乙醇外，所有用于层析的缓冲液需经0.45μm孔径的滤膜过滤，并盛装于用0.45μm孔径滤膜过滤的水至少荡洗4次的容器中。
⑶使用完仪器应在文件管理界面关闭UNICORN程序，系统将提示是否锁定界面，选否，待UNICORN完全退出后方可关闭仪器电源。使用完毕后需清理台面，并登记使用事项。
2．AKTA仪器的运行
⑴在打开流速之前，将AB管道插入缓冲液中，遵循A低盐，B高盐或者A高pH, B低pH的原则，若只用一种缓冲液，请将AB管道都插入缓冲液中，然后AB泵各走50%。在装上柱子之前应先用高流速将管道中替换成自己相应缓冲液。
20mL/min
35*40 0.5M Pa 25mL/min
20mL/min
35*60 0.5M Pa 25mL/min
20mL/min
国产柱子，A*B表示内径为A（mm），高为B（cm）
4.
4. 常压介质：
介质
压力上限

AK蛋白纯化系统操作

A K蛋白纯化系统操作 Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。

AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。

以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍AKTA蛋白纯化系统的一般操作。

1、认识AKTA。

AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。

该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）。

它们是：FIG 1、AKTA EXPLORER主机Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。

在AKTAexplorer 100，流速范围ml/min，压力高达10 Mpa（泵名为P-901）。

在AKTA explore10，流速范围ml/min，压力高达25 Mpa（泵名为P-903）。

Monitor UV-900，同时监控190－700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器。

（针对部分AKTA PURIFIER机型，尚有UPC-900监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长，安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。

）Monitor pH/C-900，在线电导和pH 监测的组合监测器。

Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2）。

组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。

打开装阀的门可全部看到。

柱被挂在装阀的门的外侧。

分离装置由UNICORN 软件控制。

软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。

2、一般操作开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源。

AKTApurifier操作入门

AKTApurifier层析系统操作入门为使用户在较短时间内尽快了解AKTA系列层析系统的功能和基本操作，特编写此操作入门。

若需进一步了解详细内容，可参阅相应的组件、系统和软件说明书。

一系统组件及系统功能介绍1系统组件(1)泵Pump系统泵：(systempump)双泵（A、B泵），缓冲液及大体积样品输送。

(2)阀Valve三通阀：(SV-903)两个。

分别位于两个系统泵前，用于缓冲液输送管道(A1/A2,B1/B2)切换。

(3)(4)9002(1)(a)A、(b)pH(2)上样(4)收集二开机程序1开启电脑；2打开AKTApurifier电源；3启动UNICORN软件，输入用户名(Username)和密码(Password)，默认用户(default)密码为default，待AKTA自检结束后，在systemcontrol窗口中显示系统准备就绪（Instrumentsareready)。

三UUNICORN软件简介Unicorn软件启动后共有四个窗口，其主要功能分别如下：Main:1.系统关闭(QuitProgram)和退出、登陆(Logon/off)；2.系统管理的设定，如用户名、密码、文件和使用权限等设定，系统日志等；3.文件管理，如文件拷贝、移动、删除及压缩拷贝到磁盘等；4.方法组编辑(MethodQueues)，将几个方法组合在一起，依次运行。

MethodEditor:1.方法编辑；2.缓冲液配方设置（如配方修改或新增配方等）SystemControl:1.系统控制，可以手动控制(Manual)或运行方法(RunMethod)；2.系统设置，包括Alarms/Special/Monitors/Curves；3.运行监测，有四个窗口：Rundata/Curves/Flowscheme/Logbook。

Evaluation:结果处理，如积分(intergrate)、移动(shift)、计算(Subtract/Add/Multiply/Divide)、平滑(Smooth)、截取(CutCurve)、绘制(CreatCurve)、打印(Print)等在每个窗口中均有专家建议(Adviser)和帮助信息(Help)。

AKTA蛋白纯化系统操作

AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。

AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、 AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。

以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍A KTA蛋白纯化系统的一般操作。

1、认识AKTA。

AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。

该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）。

它们是：FIG 1、AKTA EXPLORER主机• Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。

在AKTAexplorer 100，流速范围0.01-100 ml/min，压力高达10 Mpa（泵名为P-901）。

在AKTA explore10，流速范围0.001-10 ml/min，压力高达25 Mpa（泵名为P-903）。

• Monitor UV-900，同时监控190－700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器。

（针对部分AKTA PURIFIER机型，尚有UPC-900监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长，安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。

）• Monitor pH/C-900，在线电导和pH 监测的组合监测器。

Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2）。

组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。

打开装阀的门可全部看到。

柱被挂在装阀的门的外侧。

分离装置由UNICORN 软件控制。

软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。

2、一般操作2.1 开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源。

待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。

AKTA纯化系统培训指南

IN-LINE one-way valve
High pressure Piston seal
Buffer OUT
Ball outlet check valve
Piston
20% Ethanol : Water
Backwash pump diaphragm
Wash IN
Ball inlet check valve
B1
Manual
Flowpath
A1 or A2
BufferValveA B1 or B2
BufferValveB
Open
Draw Bouuftfeorf
Air Line
PUMP P-900 Back - Wash Lines
Pump Back-Wash Lines
Syringe fitting Wash OUT
PEEK Valve Body Injection Needle Port
Valve Seal
Ferrule
Needle
NeedleTube
Needle Adapter
INV-907 Injection Valve - Luer Adapter
PPEEEEKKInInjejecctitoionnVVaalvlveeBBooddyy PPEEEEKKInInjejecctitoionnLLuueerrAAddaapptotorr
345
Fraction collector Frac-950
1 2
8
7 6
345
Outlet valve (V4)
UV 3 Wavelength
detector
Cond Conductivity

AKTA-Primer-层析系统在天然产物分离中-实验PPT课件

17
.
AKTA Primer
PrimeView——软件系统-数据采集
18
.
运行曲线图谱（Curve）：
记录系统采集到的全部数据，系统开始运行后，自动开始记录，结束后，自动保存。
运行日志（Logbook）：
记录系统收到的所有指令
19
.
AKTA Primer
20
.
AKTA Primer
PrimeView——数据采集
9
.
面板操作按钮及简要操作命令
10
.
面板操作按钮
11
.
面板操作按钮
按OK进入子菜单；按ESC退到上级菜单；按上下箭头，可选择菜单命令、调整参数等。
12
.
面板操作按钮
分布收集器前进一管
停止程序或方法运行
梯度运行过程中，按此键，系统将保持当前浓度运行，而流速和分步收集继续，再按一下，继续梯度运行
25
.
4
.
AKTA Primer
AKTA Primer 系统组成
AKTA Prime + PrimeView
5
.
AKTA Primer
AKTA Prime 主机
组分收集器
控制面板
系统泵
6
.
AKTA Primer
AKTA Prime 主机
7
.
AKTA Primer
AKTA Prime 流程图
8
.
AKTA Prime 流程图
选择浏览曲线及设定曲线颜色
设定X，Y轴的坐标范围
21
.
实验的基本内容
实验题目——蛋白质脱盐
实验目的 1.了解层系技术的理念，基本操作和应用 2.掌握分子筛层析的原理，了解其用途； 3.熟悉AKTA Prime 的操作。实验原理

AKTA蛋白纯化系统操作教学提纲

A K T A蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。

AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。

以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍AKTA蛋白纯化系统的一般操作。

1、认识AKTA。

AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。

该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）。

它们是：FIG 1、AKTA EXPLORER主机• Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。

在AKTAexplorer 100，流速范围0.01-100 ml/min，压力高达10 Mpa（泵名为P-901）。

在AKTA explore10，流速范围0.001-10 ml/min，压力高达25 Mpa（泵名为P-903）。

• Monitor UV-900，同时监控190－700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器。

（针对部分AKTA PURIFIER机型，尚有UPC-900监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长，安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。

）• Monitor pH/C-900，在线电导和pH 监测的组合监测器。

Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2）。

组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。

打开装阀的门可全部看到。

柱被挂在装阀的门的外侧。

分离装置由UNICORN 软件控制。

软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。

2、一般操作2.1 开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源。

AKTApure_onsite_training

3.1 缓冲液准备.................................................................................................................... 6 3.2 泵头抽气 ........................................................................................................................ 6 3.3 泵冲洗............................................................................................................................. 7 3.4 安装柱子 ........................................................................................................................ 8 4. 采用手动命令进行层析实验操作 ........................................................................... 10 4.1 平衡 ...............................................................................................................................10 4.2 上样 ...............................................................................................................................12 4.3 洗脱 ...............................................................................................................................14 4.4 收集 ...............................................................................................................................14 5. 方法编辑.........................................................................................................................16 6. 层析柱的再生与保存 .................................................................................................. 29 7. 结果处理与分析 ........................................................................................................... 30 6.1 打开结果 ......................................................................................................................30 6.2 层析结果的显示设置................................................................................................32 6.3 结果积分处理 .............................................................................................................33 6.4 生成层析报告 .............................................................................................................36 6.5 色谱曲线叠加比对 ....................................................................................................37 8. 退出程序并关机 ........................................................................................................... 39 Ⅲ. Demo 实验：使用脱盐柱进行蛋白缓冲液的置换 .............................................. 39 1. 实验目的.........................................................................................................................39

【精品】AKTA-Primer-层析系统在天然产物分离中-实验教学课件精品课件

面板(miàn bǎn)操作按钮
分布(fēnbù)收集器前进一管
停止(tíngzhǐ)程序或方法运行梯度运行过程中，按此键，系统将保持当前浓度运行，而流速和分步收集继续，再按一下，继续梯度运行
按此键，系统暂停运行，包括泵和收集，再按一下，继续
第十三页，共26页。
操作命令简介(jiǎn jiè) 主菜单(cài dān)
第十四页，共26页。
预编好的方法(fāngfǎ) 模板
运行保存(bǎocún)的方法
手动运行(yùnxíng)
编辑方法将方法拷入电脑或拷回
设定系统参数
检操作命令简介(jiǎn jiè)
子菜单(cài dān)
以Manual Run为例：
第十六页，共26页。
单位(dānwèi) ml、min
第十八页，共26页。
运行曲线(qūxiàn)图谱（Curve）：记录系统采集到的全部数据，系统开始运行后，自动开始记录，结束后，自动保存。
运行日志（Logbook）：记录系统(xìtǒng)收到的所有指令
第十九页，共26页。
AKTA Primer
第二十页，共26页。
AKTA Primer
min梯度运行过程中按此键系统将保持当前浓度运行而流速和分步收集继续再按一下继续梯度运行按此键系统暂停运行包括泵和收集再按一下继续第十三页共26页
第一页，共26页。
基本知识
现代柱层析技术(jìshù)的原理
Principles of Operation for Chromatography Techniques
PrimeView——数据(shùjù)采集
选择浏览曲线 (qūxiàn)及设定曲线(qūxiàn)颜色

生物化学实验课件-AKTA_prime

柱子泵
注射器
样品环
缓冲液：泵－7－5－
17
三、面板操作按钮
18
1、进入菜单
按上下箭头，可选择菜单命令、调整参数等。按OK进入子菜单；按ESC退到上级菜单；
19
2、快捷键
分布收集器前进一管
停止程序或方法运行梯度运行过程中，按此键，系统将保持当前浓度运行，而流速和分步收集继续，再按一下，继续梯度运行按此键，系统暂停运行，包括泵和收集，再按一下，继续
1. 凝胶柱，凝胶颗粒
2.加样
3.样品和缓冲液进入凝胶柱， 4.大分子蛋白首先流出，
分子扩散。
根据分子量大小依次流出。
4
2.离子交换层析 (IEX)
平衡
加样和冲洗
洗脱
阴离子交换柱
再生
电导率
根据电荷差异进行分离
5
二、AKTA Prime 配置
AKTA Prime + Prime View
AKTA Prime + Recorder
运行日志（Logbook）：记录系统收到的所有指令
27
28
Prime View——数据采集
选择浏览曲线及设定曲线颜色
设定X，Y轴的坐标范围
29
2）Prime View——数据处理
30
31
32
输出报告内容
可按自己的要求编辑报告格式
33
34
积分结果——图谱及积分表
35
36
浏览属性
有机溶剂； -清洗管路时关闭 UV -高压报警检查压力限制
40
38
延迟体积
39
六、AKTA PRIME PLUS日常保养
-所有样品、试剂必须过膜（0.45u）； -缓冲液温度平衡 -染菌缓冲液必须倒掉； -保证泵、柱前没有气泡； -密闭冲洗：每周更换 20% EtOH （5 ml/min，1h）； -系统总是保存在 20% EtOH中，不是缓冲液、盐溶液、

【膜分离】AKTApure操作培训教程

3. 实验操作 ......................................................................................................................79
3.1 使用脱盐柱进行蛋白缓冲液的置换 .................................................................................................................... 79 3.2 离子交换层析实验.................................................................................................................................................... 86 3.3 应用亲和层析纯化 His 标签蛋白 ......................................................................................................................... 98
目录
1. 新装 Unicorn 软件的基本设置.......................................................................................1
1.1 系统设置.........................................................................................................................................................................1 1.2 新建用户及权限设置 ..................................................................................................................................................3 1.3 系统默认参数设置.......................................................................................................................................................4 1.4 校正..................................................................................................................................................................................5

AKTA仪器培训和仪器维护管理计划PPT教案

维护－每天：
系统（System）：
• 检查系统是否渗漏. • 如果数天不使用仪器，须用水将系统冲洗干净，并将层析柱和pH计拆下，之后用20%乙醇清洗系统，并用20％的乙醇保存所有的流路。
系统泵（Pump P-900）:
•检查系统泵是否渗漏，如果发现泵头发生渗漏，或是流量不准确，则需更换泵头密封圈。更换缓冲液时，需排尽泵头里的残存气泡，否则会影响流速的准确性。
如果系统仍将使用之前一天的相同缓冲液，则可以用10％的使用流速，用缓冲液冲洗泵如果将在第二天更换缓冲液，则需用水用PumpWash功能将泵冲洗干净
几天停用仪器（Leaving for a few days）
先用水PumpWash冲洗之后，再用20%的乙醇将系统冲洗干净，包括所有的进口管路和出口管路都用20％的乙醇保存好
Mixer M-925
•检查混合仪及接头是否松动
维护－每年
Valve INV-907, IV-908 and PV-908
• 检查阀是否渗漏，如果渗漏则需更换阀头
维护－每两年 Mixer M-925
• 更换混合池
系统清洗（Cleaning the system）
每天工作结束后(At the end of the day)
AKTA仪器培训和仪器维护管理计划
会计学
1
AKTA仪器
AKTA分类：AKTA Purifier 几大层析技术：
柱子信息
AKTA purifier
流路图
Inlet
Pump
压力感应器
混合器在线滤器
进样阀
色谱柱
紫外检测器
电导检测器
PH计
收集器
仪器系统补充
系统软件：与360、卡巴斯基对仪器系统稳定性有影响。可以用金山词霸或诺顿

AKTA蛋白纯化系统操作之欧阳引擎创编

AKTA蛋白纯化系统操作欧阳引擎（2021.01.01）AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。

AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。

以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍AKTA 蛋白纯化系统的一般操作。

1、认识AKTA。

AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。

该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）。

它们是：FIG 1、AKTA EXPLORER主机• Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。

在AKTAexplorer 100，流速范围0.01-100 ml/min，压力高达10 Mpa（泵名为P-901）。

在AKTA explore10，流速范围0.001-10 ml/min，压力高达25 Mpa（泵名为P-903）。

• Monitor UV-900，同时监控190－700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器。

（针对部分AKTA PURIFIER机型，尚有UPC-900监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长，安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。

）• Monitor pH/C-900，在线电导和pH 监测的组合监测器。

Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2）。

组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。

打开装阀的门可全部看到。

柱被挂在装阀的门的外侧。

分离装置由UNICORN 软件控制。

软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。

2、一般操作2.1 开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源。

完整word版蛋白纯化AKTA操作说明

AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤：1. 开机：打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。

2. 打开系统：打开电脑：双击Unicorn 7.0打开系统，进入log on 界面，用户名默认为Default，输入密码：default，点ok键，出现提示对话框，继续点确定，进入系统。

注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control界面，Evaluation界面和Administration界面。

其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual---Execute Manual instructions---......；Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。

3. 洗泵：把A1泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗，放入分子筛缓冲液中，在SystemControl界面下，点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet，选择A1---Excuse。

4. 设置系统参数：设柱压：Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute；设流速：Pumps---System flow ---设置system flow（1mL/min）---Execute。

注意：流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。

5. 装柱子(先上后下)：接柱子的上面：拧下连接进样阀和检测器之间的线，等进样阀出口有液体流出时，拧开柱上面线头的螺帽，将它连到进样阀出口；接柱子的下面：去掉柱下端连接的注射器，连上接头，连上一段线，待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里，滴满，将接头连到检测器的连接口里。

AKTA蛋白纯化系统操作

AKTA卵白纯化系统把持之马矢奏春创作AKTA卵白纯化系统是以后卵白纯化工作经经常使用到的一组设备,自动化水平很高.AKTA系统依据分歧的配置,可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备.以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍AKTA卵白纯化系统的一般把持.1、认识AKTA.AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统.该色谱系统的分离装置有三个主要组件,在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）.它们是：FIG 1、AKTA EXPLORER主机• Pump-900 为双通道高效梯度泵系列.在AKTAexplorer 100,流速范围0.01-100 ml/min,压力高达10 Mpa（泵名为P-901）.在AKTA explore10,流速范围0.001-10 ml/min,压力高达25 Mpa （泵名为P-903）.• Monitor UV-900,同时监控190－700 nm 范围内高达 3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器.（针对部份AKTA PURIFIER机型,尚有UPC-900监测器可供选择,光源为汞灯光源,一次可以监控一个波长,装置滤光片后,可以在选择的波长范围内进行切换.）• Monitor pH/C-900,在线电导和pH 监测的组合监测器.Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图暗示（Fig 2）.组成部件,如混合器、柱及分歧的阀装置在右边部份.翻开装阀的门可全部看到.柱被挂在装阀的门的外侧.分离装置由UNICORN 软件控制.软件装置于一自力的电脑主机之中,在电脑与色谱系统之间的通信由数据收集装置CU950进行控制.2、一般把持2.1 开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮,翻开色谱系统,然后翻开电脑电源.待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮其实不闪烁）.双击桌面上UNICORN图标,进入把持界面.UNICORN的把持界面分为四个窗口（Fig 3）Fig 3、Unicorn的把持界面2.2准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必需经过0.45µm的滤膜过滤,样品也可高速离心后取上清备用.当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇）,需在使用前用低频超声脱气10min.2.3清洗及管道准备首先将A泵的进液管道（A1）放入缓冲液或平衡液中,将B 泵的进液管道(B1)放入高盐溶液中,在system control窗口点击工具栏内的manual,选择pump→pump wash explorer,选中A1,B1管道为ON, execute.泵清洗将自动结束.(Fig 4)Fig 4、AKTA Explorer的泵清洗把持在manual里选择pump→flow rate,输入一定的低流速（Fig 5）,insert；选择Alarm&mon→alarm p ressure,设置high alarm（输入填料或层析柱的耐受压力,以较低者为设置值,具体可在填料说明书或层析柱说明书中查到）,insert,execute（Fig 6）.待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头,稍微拧紧后将柱下真个堵头卸失落接入管道连上紫外流动池.Fig 5、AKTA Explorer的流速设定把持Fig 6、AKTA Explorer的限压设定把持2.5开始纯化：1）在柱子平衡好之后（电导,pH的数值和变动趋势稳定）即开始上样了.此时应将紫外调零（Fig 7）,选择Alarm&mon→autozero,exectue.Fig 7、AKTA Explorer的紫外调零把持2）具体上样方式：AKTA系统的上样方式比力灵活,可以根据具体样品的条件进行上样,包括用样品环上样、用系统泵上样、用样品泵上样等,这里以用系统泵上样为例简单介绍上样过程.点击pause,将A1放入样品中,点击countine,待样品上完后,再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子.3）洗脱：上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线.在manual里选择pump→gradient,依照自己的工艺选择targetB （100％）和length（10CV）（Fig 8）.Fig 8、AKTA Explorer的洗脱条件设定把持4）设定收集：选择Frac→fractionation_900,输入每管收集体积,exectue（Fig 9）.结束固定体积收集选择Frac→fractionation_stop_900,exectue（Fig 10）.Fig 9、AKTA Explorer的组分收集设定把持Fig 10、AKTA Explorer的组分收集停止设定把持5）清洗泵及卸下层析柱：将A1和B1入口放入纯水中,启动pump wash purifier功能冲刷A泵和B泵及整个管路.然后再将A1和B1入口放入20％乙醇中,同样把持将乙醇冲满整个管路保管.再给柱子一个慢流速,设置系统呵护压力,然后先拆柱子的下端,正在滴水的时候将堵头拧上,再拆柱子的上端,最后拧上上真个堵头.整个过程中应防止气泡进入.6）关闭电源：从软件控制系统的第一个窗口unicorn manager点击退出,其他窗口不能独自关闭.然后关闭AKTA主机电源,关闭电脑电源.3、法式设定把持在method editor窗口点击工具栏内的method wizard,弹出窗口界面如Fig 11所示,可以分别在main selection、column以及column position三个下拉菜单中选择所要用到的层析方法、所用到的层析柱的参数以及所装置的层析柱在柱位选择阀的位置,选好之后,点击next按钮进入下一步波长和溶液进口的设定（Fig 12）,在此可以设定检测的波长,针对AKTA EXPLORER可以一次选择三个波长共同进行监控,并在此设定A泵和B泵的溶液进口,设定好之后,点击next,呈现如Fig 13所示窗口,可以在此设定对层析柱进行平衡的条件.Fig 11 Fig 12Fig 13 Fig 14完成之后,点击next呈现Fig 14的窗口,在此可以设定上样的条件,可选择的条件包括上样的方式,如上样环上样以及样品泵上样,对上样的体积也要进行设定.如果利用系统泵上样,在此无法进行设置,不外可以利用A泵和B泵的两个进口在后面的步伐中进行设置.在上步设置完成之后,点击NEXT呈现如Fig 15所示窗口,这里是针对流穿组分收集所进行一些设置,针对装置的分歧的收集器,具体内容可能有些不同,这里显示的界面是在装置了Frac-950收集器之后所呈现的界面,设置完成点击NEXT呈现如Fig 16所示的窗口,设置目标组分收集的一些参数,点击NEXT,呈现如Fig 17所示的窗口,针对具体的洗脱条件可以进行设置.当全部设置完成之后,点击finish,弹出Fig 18所示的窗口,可以再一次对所进行的设置进行进一步的修改,完成之后点击按钮,完成法式存盘把持.至此完成洗脱法式的设定工作,在应用自动洗脱法式时,可在SYSTEM CONTROL窗口点击文件菜单栏中的FILE→Run,在弹出的对话框中选择目标洗脱法式所在的位置并执行,之后会依次弹出一些对话框,主要是再次确认法式的设置条件,并选择洗脱结果文件的保管位置,全部设置完之后,洗脱将自动进行,结果将自动的保管在设定的文件夹中.Fig 15 Fig 16Fig 17 Fig 184、结果的浏览与简单处置在纯化完成后,Unicorn软件会自动的依照预先的设置保管结果文件,如果没有指定,那么结果文件会保管于一个文件名以manual N开头的文件中,N为系统依次生成的一个1-10之间的数字.对结果的浏览应在evaluation窗口（Fig 19）中进行,翻开文件及对文件进行普通编纂的菜单如Fig 20所示.Fig 19 Evaluation窗口Fig 20 纯化结果普通编纂菜单这里已经选择了一个纯化文件,翻开后,在结果浏览窗口点击鼠标右键,选择properties,可以弹出如Fig 21所示的把持菜单,可以分别对结果进行编纂,如改变曲线的颜色,设定横轴或纵轴的显示区间,进行文本文件的编纂等等.Fig 214、AKTA卵白纯化系统的日常维护4.1 每天,当实验完成系统使用结束后,应尽可能防止保管于缓冲液中过夜,尤以高盐浓度洗脱缓冲液为甚！假如,不能防止,则紧记第二天尽早用 System Wash Method完成以蒸馏水将系统完全清洗,再予以保管或再更新使用其它缓冲液,再次投入使用进行实验把持.用蒸馏水将余下的缓冲液完全冲刷出系统,这步伐至关重要.此举不单可以防止缓冲液对系统造成腐蚀机会,甚或因使用高盐浓度缓冲液保管过久造成盐结晶等的梗塞,对系统构成不需要的损害和损耗.4.2每周更换润洗缓冲液（20%乙醇）.若发现储液瓶液体增多,就说明泵内部有漏液,需要更换泵密封圈.若发现液体减少,需要检查润洗管接头,如果没有漏液,则泵膜或密封圈需要更换.4.3一定要坚持实验环境的清洁,以免灰尘造或泄漏的液体等造成仪器光学及电子元件的损坏.4.4 在长时间不应用系统进行试验的时候,应将系统管路布满20%的乙醇,并关闭紫外检测器,清洗PH探头,并保管于适当的缓冲液中.。