微生物实验2
临床微生物检验_实验二
课后作业
复习今天接种细菌的各种生化反应原理与结果 预习第二天的各种生化反应原理及结果观察
第二天实验内容
试剂：苯丙、尿素、（赖氨酸、鸟氨酸、氨对）、 DNA酶、硝还、O/F 以上各种生化微量管 2支/人 O/F管 4支/人
菌种：大肠、变形、沙门、志贺、金葡、铜绿 其他：砂轮、接种针、酒精灯 观察昨天的生化反应结果并记录
③产生硫化氢 + 铁盐
FeS 黑色沉淀
应用：检测肠杆菌科细菌对乳糖、葡萄糖的分解和 产H2S能力。
克氏双糖铁试验结果示意图
未接种菌 的KIA
乳（－） 葡（＋） H2S(-)
乳（-） 葡（+）
H2S(+)
乳（+） 葡（产酸产气） H2S(-)
各种生化培养基接种的细菌
葡萄糖： 大肠埃希菌 、 沙门菌或志贺菌
砂轮接种针酒精灯?观察昨天的生化反应结果并记录mr和vp加试剂后观察无色红色vp试验甲基红试验紫红色橘黄色加试剂后观察乳葡产酸产气h2s大肠埃希菌在kia中结果乳葡h2s伤寒沙门菌在kia中结果乳葡h2s志贺菌在kia中生长结果kakakaaa?原理
广州医科大学
临床微生物学检验
实验 第二周
实验内容
指示剂
颜色改变
酸→碱
溴甲酚紫
黄→紫
溴麝香草酚蓝 黄→蓝
甲基红
红→黄
中性红
红→黄
酚红
黄红
感应0 6.8～8.0 6.8～8.4
碳水化合物代谢试验
1、糖(醇、苷)类发酵试验
原理：细菌含发酵糖(苷、醇)类的酶不同， 分解糖（苷、醇）能力不同，代谢产 物不同，指示剂呈酸性或碱性反应。
（再35℃0.5～1小时后观察）
实验二微生物的分离、纯化和接种
实验二微生物的分离、纯化和接种微生物的分离、纯化1、目的要求1.1了解微生物分离和纯化的原理1.2掌握常用的纯化分离微生物的方法2、基本原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
本实验采用平板分离法：该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化。
其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、pH值、温度和溶解氧等要求，或者加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
微生物在固体培养基生长形成的单个菌落可以是一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。
获得单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术来完成。
而纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。
本实验将在混合有几种微生物菌液中分离纯化出两种微生物来。
3、实验材料3.1培养基肉汤培养基（固体）。
3.2溶液或试剂盛4.5ml无菌水的试管，其中有一只盛有玻璃珠。
3.3仪器或其他用具无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，无菌培养皿，涂布器等。
4流程倒平板制备梯度稀释液涂布（或划线法）培养挑单菌落保存。
5、步骤5.1平板划线分离法5.1.1倒平板倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拔出，试管或瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15ml,加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后置于桌面上，待凝固后即成平板(教材p367图13-14)。
并用记号笔标明培养基名称、菌液编号和试验日期。
5.1.2划线在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取菌悬液一环在平板上划线(教材p367图13-15)。
划线的方法很多，但无论采用哪种方法，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使之形成单个菌落。
实验二微生物的分离、纯化和接种
实验二微生物的分离、纯化和接种微生物的分离、纯化1、目的要求1.1了解微生物分离和纯化的原理1.2掌握常用的纯化分离微生物的方法2、基本原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
本实验采用平板分离法：该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化。
其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、pH值、温度和溶解氧等要求，或者加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
微生物在固体培养基生长形成的单个菌落可以是一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。
获得单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术来完成。
而纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。
本实验将在混合有几种微生物菌液中分离纯化出两种微生物来。
3、实验材料3.1培养基肉汤培养基（固体）。
3.2溶液或试剂盛4.5ml无菌水的试管，其中有一只盛有玻璃珠。
3.3仪器或其他用具无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，无菌培养皿，涂布器等。
4流程倒平板制备梯度稀释液涂布（或划线法）培养挑单菌落保存。
5、步骤5.1平板划线分离法5.1.1倒平板倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拔出，试管或瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15ml,加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后置于桌面上，待凝固后即成平板(教材p367图13-14)。
并用记号笔标明培养基名称、菌液编号和试验日期。
5.1.2划线在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取菌悬液一环在平板上划线(教材p367图13-15)。
划线的方法很多，但无论采用哪种方法，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使之形成单个菌落。
医学微生物学实验二抗酸染色
实验考试
（五）实验结果
初染
石
脱色
盐 酸 酒 精
复染
碱 性 美 兰
未染色
初染后
脱色后
复染后
红色为抗酸染色阳性； 蓝色为抗酸染色阴性。 红色为抗酸染色阳性； 蓝色为抗酸染色阴性。
结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序， 结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝 状生长；背景及非抗酸性细菌呈兰色。 状生长；背景及非抗酸性细菌呈兰色。
二实验原理分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质主要是分枝菌酸它包围在肽聚糖的外面所以分枝杆菌一般不易着色要经过加热和延长染色时间来促使其着色同时分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后就很难被酸性脱色剂脱色故名抗酸染色
医学微生物学实验二
微生物学教研室： 微生物学教研室：3029130
科教科： 科教科：3029945
实验内容
1.实验一结果的观察和分析； 1.实验一结果的观察和分析； 实验一结果的观察和分析 2.细菌内毒素的检测技术； 2.细菌内毒素的检测技术； 细菌内毒素的检测技术 3.抗酸染色； 3.抗酸染色； 抗酸染色 4.实验考试。 4.实验考试。 实验考试
一、实验一结果的观察和分析
咽喉部细菌
空气中细菌
ห้องสมุดไป่ตู้三）实验材料
1.细菌： BCG）。 1.细菌：卡介苗 （BCG）。 细菌 2.抗酸染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、 2.抗酸染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱 抗酸染液 盐酸酒精 性美兰溶液。 性美兰溶液。 3.其它：接种环、酒精灯、载玻片，玻片夹等。 3.其它：接种环、酒精灯、载玻片，玻片夹等。 其它
二、内毒素的检测技术 鲎试验） （鲎试验）
1.内毒素检测方法 1.内毒素检测方法 家兔发热法，鲎试验。 家兔发热法，鲎试验。
实训二 微生物实验常用灭菌和消毒方法
实训二微生物实验常用灭菌和消毒方法一、实验目的1、学习微生物实验常用灭菌消毒方法；2、掌握高压蒸汽灭菌法、干热灭菌法等常用灭菌方法；3、熟悉灭菌消毒过程中的注意事项。
二、实验原理消毒是指杀灭或清除传播媒介上病原微生物，但不一定杀灭芽孢，使其达到无害化的处理。
灭菌是指杀灭或清除传播媒介上所有微生物，包括芽孢。
灭菌方法通常分为：（1）加热灭菌；（2）过滤除菌；（3）射线灭菌和消毒；（4）化学药剂灭菌和消毒。
以下介绍几种微生物实验常用灭菌消毒方法。
（一）干热灭菌干热灭菌是指利用干热空气杀灭微生物，一般在电烘箱中进行。
由于蛋白质在干燥无水的情况下不容易凝固，干热灭菌所需温度较湿热灭菌高，时间也较湿热灭菌长。
一般须在140℃左右保持恒温3-4h，方能达到灭菌的目的。
干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌，凡带有橡胶的物品和培养基，都不能进行干热灭菌。
烘箱内装入物品应留有空隙，以利于空气流动，否则箱内受热不均，部分物品灭菌不彻底。
（二）高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌是一种湿热灭菌方法，是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待锅内冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热。
由于此时水蒸气无法排出，增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌目的。
高压蒸汽是最有效的灭菌法，能迅速地达到完全彻底灭菌的效果。
一般在121℃灭菌15-30min，所有微生物包括芽孢在内都可杀死。
在同一温度下，湿热杀菌效果比干热好，因为微生物细胞蛋白质在湿热情况下更易凝固。
高压蒸汽灭菌锅有立式和卧式两种。
各种微生物的营养体在100℃温度下半小时即可被杀死，而其芽孢和孢子在这种条件下却不会失去生活力。
间歇灭菌就是根据这一原理进行的。
间歇灭菌是保持100℃，30min杀死培养基内杂菌的营养体，然后将含有芽胞和孢子的培养基在温箱内或室温放置24h，使芽孢和孢子萌发为营养体，再用100℃处理30min，再放置24h。
实验二细菌的观察
细菌一般形态染色观察一、实验目的学习了解微生物染色的基本原理与方法学习掌握细菌的简单染色和革兰氏鉴别染色技术巩固显微镜油镜的使用方法。
二、实验原理细菌的个体极微小，无色透明，必须借助于染色法，使细菌（或背景）着色，与背景（或菌体）形成明显的对比便于在显微镜下观察细菌的形态构造。
染色方法主要有：见下图简单染色法简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。
常用染料有：碱性染料：结晶紫、碱性复红、龙胆紫、番红、中性红、孔雀绿等。
酸性染料：酸性复红、刚果红、曙红等简单染色一般常用碱性染料进行染色原因：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，带正电荷，因此碱性染料很容易与细菌结合使细菌着色细菌细胞壁含有蛋白质或多肽，也就有等电点已知细菌的等电点pH为2～5。
革兰氏阳性菌为2～3，革兰氏阴性菌为4～5。
当细菌的培养液pH值大于等电点时，细菌带有负电荷；反之，带有正电荷。
一般，细菌的培养、染色、试验过程均在偏碱性（7～7.5）、中性、偏酸性（6～7）条件下，都高于细菌的等电点，故均带有负电荷革兰氏染色革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法，根据细菌对这种染色反应的不同，可分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两大类，其机理是由于细菌细胞壁的化学组成及结构不同和通透性不同的缘故。
革兰氏染色对于细菌的分类、鉴定及食品卫生检测都有重要意义。
革兰氏染色原理影响革兰氏染色结果的因素菌龄培养基pH值染色技术：涂片质量、染色时间、脱色时间、染色脱色均匀度等三、实验器材1. 器材：显微镜，擦镜纸，二甲苯，香柏油，载玻片，接种环，酒精灯,火柴，吸水纸，无菌牙签。
2. 染色液及试剂：石碳酸复红染液、碱性美蓝染液、结晶紫染色液，路戈氏碘液，95％的酒精，蕃红染色液，黑色素水溶液，蒸馏水。
3. 菌种：白葡萄球菌、大肠杆菌的新鲜斜面菌种各1支。
四、操作步骤（一）简单染色涂片火焰固定染色水洗干燥镜检（二）革兰氏染色涂片→干燥→火焰固定结晶紫染色→水洗碘液媒染95%酒精脱色→水洗蕃红复染→水洗干燥镜检（三）口腔中微生物观察负染色五、实验报告1、实验结果绘图2、思考题（1）细菌制片过程应注意哪些？（2）试分析菌龄、培养pH、染色技术对革兰氏染色结果的影响。
2.1 微生物的实验室培养(2)
B.在皿底上标记日期等方便
C.正着放臵容易破碎
D.防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染
解析 平板倒臵主要是防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。
是平板划线法和稀释涂布
平板法。下列有关这两种方法的叙述错误的是( B )
1
2
3
4
A.均将大肠杆菌接种在固体培养基的表面
孢子繁殖形成，这种菌落才符合要求。
解析答案
1
2
3
4
4.右表是从土壤中分离纯化土壤细菌的培养基配方。请回答下面的问题。
(1) 培养基的类型很多，但培养基中一
般都含有水、碳源、 氮源 和无机盐。
上述培养基配方中能充当碳源的成分
试剂
用量
试剂
用量
牛肉膏/g
蛋白胨/g
5
10
琼脂/g —
20 —
是 牛肉膏和蛋白胨 。培养基配制完成
答案
应用示例
2.右图中甲是稀释涂布平板法中的部分操作，乙是平板划线法操作结果。 下列叙述中，错误的是( 后才能取菌液 )
A.甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却 B.对于浓度较高的菌液，如果甲中的
稀释倍数仅为102，则所得的菌落不
是由单一的细胞或孢子繁殖而成
C.乙中培养皿中所得的菌落都符合要求
D.乙中的连续划线的起点是上一次划线的末端
环境微生物学-实验二 微生物的染色
实验二微生物染色一、实验目的1、进一步熟悉和掌握显微镜的操作方法；2、学习用压滴法制作标本片；3、学习微生物染色的原理；4、学习微生物涂片、染色的基本技术。
二、实验仪器和材料显微镜、香柏油（或液体石蜡）、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、接种环、载玻片、酒精灯；美蓝染液，草酸铵结晶紫染液、革氏碘液、95%乙醇、蕃红染液；酵母菌、大肠杆菌、枯草杆菌。
三、染色原理微生物（尤其是细菌）的机体小且是无色透明的，在活体细菌内又含有大量的水分。
因此，对光线的吸收和反射与水溶液相差不大。
当把细菌悬浮在水滴内，放在显微镜下观察时，由于与周围背景没有明显的明暗差，难以看清它们的形状，更谈不上识别其细微结构。
通常用染料将菌体染上颜色以增加反差，在显微镜下观察。
微生物细胞是由蛋白质、核酸等两性电解质及其它化合物组成的，所以微生物细胞表现出两性电解质的性质。
两性电解质兼有碱性基和酸性基，在酸性溶液中离解出碱性基呈碱性，带正电；在碱性溶液中离解出酸性基呈酸性，带负电。
经测定，细菌的等电点pI在pH=2~5之间，故细菌在中性（pH=7）、碱性（pH > 7）或偏酸性（pH=6~7）溶液中，细菌等电点均低于上述溶液的pH值，所以细菌带负电荷，容易与带正电荷的碱性染料结合，故用碱性染料染色的居多。
碱性染料并不是碱而是一种盐，电解时染料离子带正电，易与带负电荷的细菌结合，而使细菌着色。
碱性染料有美蓝、甲基紫、结晶紫、龙胆紫、碱性品红、中性红、孔雀绿和蕃红（沙黄）等。
微生物体内各结构与染料结合力不同，故可用各种染料分别染微生物的各结构以便观察。
四、染色方法1、简单染色法简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
此法操作简便，适用于菌体一般形态的观察。
常用的简单染色染料有美蓝、结晶紫、碱性复红、番红（沙黄）等。
2、革兰氏染色法革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。
它是1884年由丹麦医师Gram创立的。
革兰氏染色法不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：革兰氏阴性细菌（G－）和革兰氏阳性细菌（G+）。
实验二 细菌抹片的制备及染色
实验二细菌抹片的制备及染色一、提前十分钟进入实验室，抄写板述。
上课，点名入座。
板述内容：一）、目的要求1、掌握细菌抹片的制备方法2、掌握细菌的革兰氏染色法二）、实验内容1、每人做一张葡萄球菌的固体抹片，用美兰染色。
2、每人做一张大肠杆菌与葡萄球菌的混合抹片，并用革兰氏法染色。
3、油镜观察自制的玻片及真菌标本片，（烟曲霉、黄曲霉、酵母菌）4、组织抹片，并用瑞氏染色液染色（示教）三）作业1、叙述细菌抹片的制备方法2、叙述革兰氏染色的方法3、绘出细菌形态图并注明染色方法二、总结上次实验作业，有两个突出问题。
1、多数同学画的是书上的细菌图，细胞臂、荚膜清晰可见，而镜检时只能看到细菌的大致形态，如大肠杆菌是一个两端钝圆的杆状轮廓，另外，镜检时菌毛和鞭毛是不能观察到的，除非用特殊的染色方法。
2、有的同学没有用圆规画图，图片绘制得过大或过小。
三、实验第一部分：抹片的制备1、实验的目的和意义细菌细胞微小，无色而半透明，原样直接在普通光学显微镜下观察，只能大致见到其外貌，制成抹片和染色之后，则能较清楚地显示其形态和特殊构造，也可以根据不同的染色反应，作为鉴别细菌的一种依据。
2、细菌抹片的制备进行细菌染色之前，须先作好细菌抹片，其方法如下：（1）玻片准备载玻片应清晰透明、洁净而无油渍，滴上水后，能均匀展开，附着性好。
如有油渍，可按下列方法处理：A、滴上95%酒精2-3滴，用洁净纱布揩擦，然后在酒精灯火焰上轻轻拖过几次。
B、若上法仍未能去除油渍，可再滴上1-2滴冰醋酸，用纱布擦净，再在酒精灯火焰上轻轻通过。
（2）抹片所用材料情况不同，抹片方法亦有差异。
A、液体材料（如液体培养物、血液、渗出液、乳汁等）可直接用灭菌接种环取一环材料，于玻片的中央均匀地涂布成适当大小的薄层。
B、非液体材料（如菌落、脓、粪便等）则应先用灭菌接种环取少量生理盐水或蒸馏水，置于玻片中央，然后再用灭菌接种环取少量材料，在液滴中混合，均匀涂布成适当大小的薄层。
实验二空气微生物的检验
革兰染色 观察溶血 杆菌肽敏感试验 链激酶
报告
α型溶血（草绿色链球菌）：
空气微生物的检验
β 溶血平板观察
空气微生物的检验
生化 鉴定
1、革兰氏染色，阳性，G+链状排列，符合者可做生 化鉴定。 2、生化鉴定
（1）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验） 吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水， 混匀，再加入链球菌18-24h36±1℃肉浸液肉汤培养物 0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL，混匀，置于36±1℃水 浴10min,血浆混合物自行凝固，观察凝块重新完全溶 解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不溶解即为阴 性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已知的链激酶 阳性的菌株做阳性对照。
2）血琼脂平板、匹克肉汤、灭菌生理 盐水、革兰染色液、杆菌肽纸片。
空气微生物的检验
三、实验步骤
1、样品的采集 5个采样点，离地面高度为1.5米，东、西、南、北、
中各放置一个平皿，揭开盖子暴露15min,扣好盖子。
2、培养观察 36±1℃培养24h。
3、菌落形态观察及镜检 血平板：圆形突起，针尖状，灰白色半透明/不透明，
清洁 空气
＜1 500
＜16
＜4 500
＜36
污染 空气
＞2 500
＞36
＞7 000
＞124
空气微生物的检验
空气微生物的卫生标准
室内空气质量标准（GB/T 18883-2002） 对微生物指标的规定： 菌落总数≤2500 cfu/m3
分析实验结果是否满足相应的空气标准。
空气微生物的检验
溶血性链球菌的的检验
空气微生物的检验
（2）杆菌肽敏感试验（药敏试验）
医学微生物实验二(新)
实验要求
实验前认真预习实验内容， 了解实验目的、原理和方 法。
按照实验步骤进行操作， 认真观察实验现象，记录 实验数据。
严格遵守实验室规章制度， 保持实验室卫生和安全。
实验结束后，整理实验器 材和试剂，撰写实验报告。
02
实验原理
微生物的形态与结构
微生物培养
将采集的样本接种在适宜的培养基 上，控制温度和湿度等培养条件， 观察微生物的生长情况。
显微镜检查
使用显微镜观察微生物的形态、染色 反应等特征，进行初步的微生物鉴定 。
生化实验
进行必要的生化实验，如糖发酵实 验、酶活性测定等，进一步确定微 生物的种类。
结果记录与分析
详细记录实验结果，包括微生物的 形态特征、生化反应等，进行分析 和总结。
微生物的繁殖方式
微生物的繁殖方式有分裂繁殖、孢子 繁殖、出芽繁殖等。了解其繁殖方式 有助于理解微生物种群的增长和变化 规律。
03
实验材料与试剂
实验材料
培养基
用于微生物培养的基质，提供微生物所需的营养物质。
显微镜
观察微生物形态和结构的工具。
实验试剂
01
02
03
04
染色剂
用于给微生物染色，以便更好 地观察其形态和结构。
实验方法
细菌分离培养
采用适当的培养基和培养条件 ，分离纯化样本中的细菌，获
得单一菌落。
染色与镜检
对细菌进行染色处理，通过显 微镜观察其形态、染色反应等 特征，初步鉴定细菌种类。
生化鉴定
利用生化实验方法，对细菌进 行进一步的鉴定和分类。
血清学试验
通过血清学试验方法，检测细 菌的抗原或抗体，以确定细菌
实验二 微生物培养基的配制和灭菌
培养基成分 牛肉膏 0.3g;蛋白胨 1g;氯化钠 0.5g;琼脂 2g;蒸馏水
100mL;pH 7.0～7.2;灭菌 1.05kg/cm2，20-25min
用量：
100-150mL/行；制备8-10个平板；2个/组（涂布/划线）
制作斜面（只需1个组制备）：无需抗生素
化学药剂消毒灭菌： 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高锰酸钾、酒 精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液， 它们有的是杀菌剂，有的是抑菌剂。
培养基和玻璃器材的 灭菌方法
培养基配制的原则
配制培养基的配方，及方法 培养基蒸汽灭菌原理，方法
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
自养细菌能利用铵盐、硝酸盐作为机体生长的氮源与能源， 某些厌氧细菌在厌氧与糖类物质缺乏的条件下，也可以利用 氨基酸作为能源物质。 无机氮源：碳酸铵、硝酸盐、硫酸铵、尿素 有机氮：蛋白胨、牛肉膏、酵母膏等。
生产上常用的氮源有硝酸盐、铵盐、尿素、氨以及蛋白含 量较高的鱼粉、蚕蛹粉、黄豆饼粉、花生饼份、玉米浆等。
培养基的配制原则
一、营养成分 二、PH值 三、渗透压 四、氧化还原电位
培养基的配制原则
一、营养成分 总体原则
1. 根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基， 如自养型微生物：由简单的无机物质组成
异养做生物：至少需要含有一种有机物质。
按微生物的主要类群来说，又有细菌、放线菌、酵母
菌和霉菌之分。它们所需要的培养基成分也不同，分别
实验程序2:分离培养微生物常用器皿的准备
清洗一些玻璃仪器：如三角烧瓶、试管、培养皿、吸管等。 棉塞的制作
包装培养皿和吸管等。
湿热灭菌法原理
实验二重要功能微生物的筛选及生物学特性
实验二重要功能微生物的筛选及生物学特性微生物的筛选是实验室中非常重要的功能。
在微生物学研究中，研究者常常需要从自然环境中筛选出具有特定特性的微生物菌株，用于进一步的研究和应用。
例如，筛选具有抗生素产生能力、产酶能力、耐高温、耐酸碱等特点的微生物菌株，可以用于制备抗生素、酶等生物制剂。
因此，微生物筛选是微生物学研究和应用的基础之一微生物的筛选过程通常包括以下几个步骤：1.样品采集和处理：从自然环境中采集样品，如土壤、水体、植物等。
样品收集后，需要进行处理，如稀释、均匀悬浮等，以获得更好的筛选效果。
2.筛选培养基的选择：筛选培养基的选择是微生物筛选的基础。
不同微生物对营养物质的需求有所不同，因此需要根据所需筛选的微生物特性选择不同的培养基。
常用的培养基包括菜单琼脂培养基、富含碳源和氮源的培养基等。
3.筛选机制的设计：根据所需筛选的微生物特性，设计相应的筛选机制。
例如，如果需要筛选产生抗生素的微生物菌株，可以使用抗生素敏感的指示菌做为筛选基础，通过抑制灵敏菌生长的菌落进行筛选。
4.筛选条件的优化：筛选条件的优化是确保筛选效果的关键。
温度、PH值、培养时间等条件都会对微生物的生长和代谢产生影响。
通过调整这些条件，可以使目标微生物菌株获得更好的生长和表达特性，提高筛选的成功率。
5.筛选和鉴定：筛选出具有所需特性的微生物菌株后，需要进行鉴定确认。
常用的鉴定方法包括形态学观察、生理生化特性检测、分子生物学技术等，以确保获得的菌株符合预期要求。
除了筛选微生物菌株，还可以进行微生物的生物学特性研究。
微生物的生物学特性包括生长和代谢规律、营养需求、形态结构等方面。
了解微生物的生物学特性，有助于理解其生态角色、生活习性以及应用潜力。
在微生物的生物学特性研究中，常常使用不同的技术手段进行研究。
例如，通过测定微生物生长曲线，可以了解其生长速率、繁殖方式等信息。
通过测定微生物在不同营养条件下的生长情况，可以了解其所需营养物质以及对环境的适应能力。
实验二环境中的微生物
实验室环境和人体表面微生物的检查
一、实验目的
1. 证明实验室环境和人体表面存在微生物； 2. 比较来自不同场所与不同条件下细菌的数
量与类型； 3. 观察不同类群微生物的菌落形态特征； 4. 体会无菌操作的重要性。
二 、实验原理
• 什么叫菌落？
菌落的形态结构、大小、色泽、透明度、黏稠度、色素及边缘情况等，因各种细菌而异。 ②移去皿盖，将未洗过的手指在琼脂平板表面轻轻地来回划线，盖上皿盖。
（三） 细菌的培养
• 将所有的琼脂平板翻转，使 皿底朝上，放入28℃培养箱 培养1～2d。
（四） 结果记录
• 1.菌落计数 划线的平板数最后1/2面积的菌落数； 非划线平板直接数1/4面积的菌落数。 • 2.特征描述 观察菌落的特点时要选择分离很开的单个菌落。 特征明显的菌落可初步判断属于哪种微生物。
3. 手指上细菌的检查
①用记号笔在平板底部画线，将其平均分成 两部分，标明洗手前与洗手后及姓名、日 期；
②移去皿盖，将未洗过的手指在琼脂平板表 面轻轻地来回划线，盖上皿盖。
③用肥皂将手清洗干净，自然干燥后，在平 板的另外一部分同样划线。
4. 头发上细菌的检查
• 在揭开皿盖的平板上方，用手将头 发拨动数次，使细菌降落到平板表 面，然后盖上皿盖。
细胞的群落 ,称为菌落。 ③先在无菌平板的一个区域内试划几下；
5h后盖上皿盖，倒置于28℃培养箱培养。
• 每一种菌落都有它自己 的特征（如大小、形状 、边缘、表面、质地、 颜色等） ，是衡量菌种 纯度、辨认和鉴定菌种 的重要依据。可通过平 板培养来检查环境中细 菌的数量和类型。
• 菌落的形态结构、大小、色泽、透明度、 黏稠度、色素及边缘情况等，因各种细菌 而异。每一种细菌保持有一定的菌落特征 ，这些菌落特征的区别点都可作为鉴别细 菌的依据之一。
微生物细胞数的计数-实验二
实验二《微生物细胞数的计数》标准实验报告适用专业：环境工程江苏科技大学生物与化工学院环境工程系2012年8 月一、实验目的1.了解血球计数板的结构；2.掌握利用血球计数板计微生物细胞数的原理和方法二、实验要求1．遵守实验室安全制度，听从指导教师安排；2．认真听讲，不懂就问；3．完成实验报告三、实验仪器和材料显微镜、血球计数板、移液管、盖玻片、吸耳球、酵母菌液（或其他微生物材料）等四、血球计数板的结构血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。
方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。
这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板；大方格的长和宽各2mm，深度为0.1mm，其容积为0.4mm3，即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板。
在血球计数板上，刻有一些符号和数字，其含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。
计数室通常也有两种规格：一种是16×25型，即大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是25×16型，即大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。
但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。
1．16×25型的计数板将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数。
将每一中格放大，可见25个小格。
实验2微生物培养基的配制和灭菌
计算----称量及溶化----定容----加琼脂
分装：各称取2%琼脂加入2个三角瓶中，再将培
养基平均分装在2个三角瓶中，加塞，包扎。
（二）无菌水的制备
★ 取7支小试管各加生理盐水4.5ml, 包扎灭菌。
★ 取1只三角瓶加90ml蒸馏水及10~15 粒玻璃球，包扎灭菌。
（三）高压蒸汽灭菌
2）将剩余的300ml培养基中加入2%琼脂，加热溶化，分装大试管 （装量为试管长度的1/4～1/5），加塞，包扎。
2、霉菌培养基（察氏培养基）300ml/组
配方：
K2HPO4 0.1% KCL 0.05%
NaNO3 0.2% 琼脂2.0％
配制：
MgSO4.7H2O 0.05% FeSO4 0.001% （加2滴即可） 蔗糖 3%
1.打开锅盖，将包扎好的物品放入灭菌器内，盖紧锅盖。 2.接通电源，打开加水阀，加水至高水位，调节至所需温度
（1210C）和时间（20min ），进行加热。 3.排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大量蒸
汽3-5min后关闭排气阀；
4.升温至 1210C后，自动控制并保持恒温 20min 。（对热不
培养基的种类
从培养基的组成成分可分为: 1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：一部分纯化学物质和一部分天然物质配制而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。 从培养基的物理状态可分为:
1.液体培养基：不加凝固剂。 2.固体培养基：加入2%左右的凝固剂。 3.半固体培养基：加入0.2—0.5%凝固剂。 从培养基的用途可分为: 1.选择培养基：加入目的菌特别需要的或抑制非目的菌生长的 物质。 2.鉴别培养基：加入能够和目的菌的代谢产物发生可见反应的 物质。
2.实验二 微生物细胞计数与显微测量
实验二微生物细胞计数与显微测量一、实验目的与要求1、了解血球计数板结构，掌握血球计数板计数微生物数量的技术。
2、了解目镜测微尺和物镜测微尺，掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术。
二、微生物细胞计数1、血球计数板的结构：4条竖槽和1条横槽；计数室（即正中间的大方格）大小为1mm×1mm×0.1mm；计数室共有400个小格，划分有两种可能：16中格×25小格或25中格×16小格。
菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，因血球计数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。
2、血球计数板的使用（1）低倍镜下观察空白的血球计数板，找到计数室，注意应用调光旋钮、聚光镜和光圈调节视野亮度，建议将调光旋钮调到较亮的位置、聚光镜上升、光圈调到较小的位置。
（2）滴加稀释至适宜浓度的样品，盖上特制的盖玻片，静置5-10min. 也可以先盖上盖玻片，再沿槽滴加样品。
以酵母菌为例，以小格内含4-5个酵母菌为宜。
（3）在低倍镜下寻找大方格，将正中间的大方格（即计数室）移至视野正中央，再根据需要换上高倍镜计数。
3、血球计数板的计数方法（1）计数室含25个中格时，取4个角的中格及中间1个中格计数；计数室含16个中格时，取4个角的中格计数。
当样品中的细胞数较少时，应计算所有中格中的细胞。
每个样品须重复计数2-3次。
（实验室现有的血球计数板均为25中格的格式。
）（2）计数时需调节细准焦螺旋，以看到计数室内不同深度的微生物细胞（3）压线的细胞的计数方法：计压左线和上线的细胞或压右线和下线的细胞。
4、计算方法：样品细胞数（个/mL）=每小格的细胞数×400×10000×稀释倍数三、草履虫大小（长*宽）的显微测量1. 目尺和物尺的形态、安装及用途。
注意物尺每一小格代表的实际长度。
2. 标定：两尺平行--记录两尺重合线之间的刻度数--计算标定结果（即某一放大倍数下，目尺一小格代表的实际长度）。