棉花主要真菌病害病原菌ITS—RFLP快速鉴定方法

核糖 体 Ｄ ＮＡ 中的 １ ８ Ｓ 、 ５ ． ８ Ｓ和 ２ ８ ｓ的基 因组序 列在 大 多数 生 物 中 比较 保 守 ， 在 生 物种 间变 化 小 ； 而 内转 录间隔 区 Ｉ ＴＳ １ 和Ｉ Ｔ Ｓ ２作 为非 编码 区 ， 承受 的选 择 压 力 较 小 ， 相 对 变化 较 大 ， 并 且 能 够 提供 详 尽 的系统学 分析 所需要 的可遗 传 性状 ， 既 具 有保 守 性， 又均 在 科 属 种水 平 上 有 特 异性 序 列 ， 可 以作 为 真菌 分类鉴 定 的重要 依 据之 一 。Ｉ ＴＳ ＿ Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ（ Ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ —
ｐ ｏ ｌ ｙ ｍｏ ｒ ｐ ｈ ｉ ｓ ｍ， 基于 Ｉ Ｔ Ｓ的 限 制 性 片 段 长 度 多 态 性） 鉴 定技术 在 一些大 型 真 菌上 已经 有所 应 用ｌ ＿ ７ ｊ 。
该技术 是选 用不 同 的内切 酶 ， 对 真 菌 体 内的 核糖 体
ＲＮＡ 基 因特 征 进 行 分 子 生 物 学 的进 一 步 区 分 ， 根 据产 物多态 性分 析来 鉴定 真菌种 类 。 本 研究 以棉 花主要 病原 真 菌 大丽 轮枝 菌 、 黑白 轮 枝菌 、 立枯 丝核 菌 、 串珠镰 刀 菌 、 粉红 单 端孢 和 尖 孢镰 刀 菌为 主要检 测对 象 ， 根 据对 各 自的 Ｉ Ｔ Ｓ序 列 和不 同酶切位 点 的分析 ， 制 作可 供 比对 的参 考 电子
± 塑 ： 棉花主要真菌病害病原菌 Ｉ Ｔ Ｓ － Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ快速鉴定方法 ・２ ０ １ ３ ， ４ ０ （ １ ２ ） ： １ ３ ～１ ６
棉 花 主 要 真 菌病 害病 原 菌 Ｉ ＴＳ — ＲＦ Ｌ Ｐ快 速 鉴 定 方 法
李 志芳 ， 冯 自力 ， 赵 丽红 ， 师 勇强 ， 王玲 飞 ， 朱 荷琴
ｎａ ｌ ｔ ｒ ａ ｎｓ ｃ ｒ ｉ ｂｅ ｄ ｓ ｐａ ｃ ｅ ｒ — ｒ ｅ ｓ ｔ ｒ ｉ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｆ ｒ ａ ｇ ｍｅ ｎｔ ｌ ｅ ｎｇ ｔ ｈ
生 的立枯 病 （ 病原 菌 为立枯 丝 核 菌 ） 和红 腐病 （ 病 原
菌 为 串珠镰 刀菌 ） ｒ １ ］ 。为 了更 加 科 学制 定 合 理 的 防 控措 施 ， 对 病 害 种类 的确 认 是 必要 的前 提 ； 因此 快 速 准确 鉴定 病原 菌种类 就显 得尤 为重 要 。 棉 花病 原真 菌传 统鉴定 方 法是 以形 态学 、 细胞 学、 生 理 学 和 生 态学 等 特 征 为 根据 的 ； 但 是 由 于很 多 真 菌生 物 学 性 状 复 杂 ， 因此 ， 要 求 科 研 工作 者 具 有 丰富 的实 践 经验 。而且 少 数 形 态 特 征 和生 理 生 化 指标 随着 环境 的变 化并 不稳 定 ， 在传 统 真 菌分 类 中常引起 分 类 系统 的意 见 分 歧 ［ ２ ］ 。随 着 分 子 生 物 学 的发展 ， 广 泛应用 于 真菌 的属 种 间ｒ ３ 及 部分 种 内
（ 棉 花 生物 学 国家 重 点实验 室／ 中 国农 业科 学院棉 花研 究所 ， 河南 安阳 ４ ５ ５ ０ ０ ０ ）
Ｔ ｈ ｅ Ｒ ａ ｐ ｉ ｄ Ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｏ ｆ Ｃ ｏ ｔ ｔ ｏ ｎ Ｍａ ｊ ｏ ｒ Ｆ ｕ ｎ ｇ ａ ｌ Ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｇ ｅ ｎ ｓ Ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ Ｉ Ｔ Ｓ － Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ
关键 词 ： 棉花 ； 真菌； 分 子鉴 定
中 图分类 号 ： ￥ ４ ３ ５ ． ６ ２ １ 文献标 志码 ： Ａ 文章编 号 ： １ ０ ０ ０ — ６ ３ ２ Ｘ（ ２ ｏ １ ３ ） １ ２ — ０ ０ １ ３ — ０ ４ 因和 基 因 间 隔 序 列 （Ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｇ ｅ ｎ ｉ ｃ ｓ ｐ ａ ｃ ｅ ｒ ，Ｉ ＧＳ ） Ｅ ６ ］ 。
ＬＩ Ｚｈｉ － ｆ ａ ｎ ｇ， ＦＥＮ Ｇ Ｚｉ ‘ Ｉ ｉ ，ＺＨＡＯ Ｌｉ － ｈｏ ｎｇ，Ｓ ＨＩ Ｙｏ ｎｇ － ｑ ｉ ａ ｎｇ，Ｗ ＡＮＧ Ｌｉ ｎｇ － ｆ ｅ ｌ ， ＺＨ Ｕ Ｈｅ － ｑｉ ｎ
摘要 ： 本研 究 旨在建 立 大丽轮枝 菌、 黑 白轮 枝 菌 、 立枯 丝核 菌 、 串珠镰 刀菌 、 粉 红 单 端 孢和 尖 孢 镰 刀 菌 ６种
长期 以来 ， 棉花 病 害的普 遍 发生 始 终是 制 约 棉
花高 产 的瓶 颈 ， 其 中最 为 严 重 的 当属 黄 萎 病 （ 病 原
菌为 大丽 轮枝 菌 和 黑 白轮 枝 菌 ） 和枯 萎 病 （ 病 原 菌 为尖孢 镰 刀 菌 ） ， 其 次为铃病 和苗病 ， 多 为 真 菌 病 害； 比如导 致棉 铃红 粉病 的粉 红 单端 孢 以及 苗 期 发
棉 花 主要病 原 真菌 的 Ｉ Ｔ Ｓ － Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ快速 鉴定 方 法。通 过 Ｉ Ｔ Ｓ序 列 特 征分 析 ， 得 到 了 ４种 可 以成 功 鉴 别 ６种
病 原 菌 的 限制 性 内切 酶 ， 并 制作 了标 准 对 比 图谱 。不 同病原 真 菌 的 Ｉ Ｔ Ｓ － Ｒ Ｆ Ｉ Ｐ 的产 物 大 小各 异 ， 多态性 高， 参考 标准 电子 图谱 可 以准确 鉴定 其种 类 。
组群水 平 Ｌ ４ 的 系统学研 究 的 核糖 体 内部 转 录间 隔
区（ Ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｎ ａ ｌ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｃ ｒ ｉ ｂ ｅ ｄ ｓ ｐ ａ ｃ ｅ ｒ ， Ｉ ＴＳ ） 克 隆测 序 ， 大
大提 高 了病原 真菌 鉴定 的准 确 性 ， 但 仍 存 在实 验 周 期较 长 、 成 本较 高 的 问题 。