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专题1 基因工程原理及技术PPT幻灯片
__T__4____DNA连接酶和__E_·_c_o_l_i _DNA连接酶。 (4)反转录作用的模板是__m__R__N_A_，产物是__c_D_N__A_______。
若要在体外获得大量反转录产物，常采用__P_C__R___技术。
(5)基因工程中除质粒外，动_植___物__病__毒_和噬__菌__体__也可作为运载体。 (6)若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处 理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是_未__处__理__的__大__肠__杆_。菌吸收
基考础点回探顾究
考点一 基因工程的原理及工具 [典例引领]
【典例】 (2012·课标，40)根据基因工程的有关知识，回答下 列问题。 (1)限制性核酸内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末 端类型有__平__末__端__和_黏__性__末__端_。 (2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下： AATT C……G G……CTTAA
分子杂交
抗原—抗体杂交 个体生物学水平
基考础点回探顾究
深度思考 基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便 于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是— G↓GATCC—；限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。
请据图分析： 切割目的基因时宜选择限制酶Ⅰ还是限制酶Ⅱ切割质粒呢？ 请说明理由。
基考础点回探顾究
解析 (1)基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：目的 基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细 胞、目的基因的检测与鉴定。(2)基因表达载体构建过程中， 需要用同种限制酶切割目的基因和载体，使它们产生相同的 黏性末端，再用DNA连接酶把这两个DNA片段连接起来。 (3)农杆菌转化法导入目的基因时，首先必须用Ca2＋处理土壤 农杆菌，使土壤农杆菌转变为感受态；然后将重组质粒和感 受态细胞在缓冲液中混合培养完成转化过程。
若要在体外获得大量反转录产物，常采用__P_C__R___技术。
(5)基因工程中除质粒外，动_植___物__病__毒_和噬__菌__体__也可作为运载体。 (6)若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处 理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是_未__处__理__的__大__肠__杆_。菌吸收
基考础点回探顾究
考点一 基因工程的原理及工具 [典例引领]
【典例】 (2012·课标，40)根据基因工程的有关知识，回答下 列问题。 (1)限制性核酸内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末 端类型有__平__末__端__和_黏__性__末__端_。 (2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下： AATT C……G G……CTTAA
分子杂交
抗原—抗体杂交 个体生物学水平
基考础点回探顾究
深度思考 基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便 于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是— G↓GATCC—；限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。
请据图分析： 切割目的基因时宜选择限制酶Ⅰ还是限制酶Ⅱ切割质粒呢？ 请说明理由。
基考础点回探顾究
解析 (1)基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：目的 基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细 胞、目的基因的检测与鉴定。(2)基因表达载体构建过程中， 需要用同种限制酶切割目的基因和载体，使它们产生相同的 黏性末端，再用DNA连接酶把这两个DNA片段连接起来。 (3)农杆菌转化法导入目的基因时，首先必须用Ca2＋处理土壤 农杆菌，使土壤农杆菌转变为感受态；然后将重组质粒和感 受态细胞在缓冲液中混合培养完成转化过程。
基因工程的基本技术幻灯片
1）、引物（寡聚核苷酸）
➢ 一般成对出现，长度为15-30个核苷酸；
➢ 使用浓度： 0.1-0.5uM，高达1uM；
➢ 引物设计原则：
①G+C含量45-55%； ②Tm值高于55； ③引物特异性； ④引物扩增跨度； ⑤是否形成引物二聚体 ⑥引物的3’端严防错配。
2）、模板DNA：
➢ 基因组DNA、质粒DNA、其它DNA片段； ➢ 质量要求：不高
log X0= - log(1+Ex) *Ct+ log N
Ct 值的定义 在荧光定量PCR技术中，有一个很重要的概念 ——
基因工程的基本技 术幻灯片
优选第六章基因工程的基本技术
主要内容
一．核酸提取技术 二．凝胶电泳技术 三．PCR技术 四．核酸杂交技术 五．DNA测序技术
第一节、第二节 前章节已介绍
第三节 PCR 技术
第三节 PCR技术
一． PCR 基本原理 二． 基本过程与反应体系 三． PCR引物设计的原则 四． PCR产物质量的影响因素 五． PCR的种类
（4）定量PCR
➢广义概念的定量PCR技术是指 以外参或内参为标准，通过对 PCR终产物的分析或PCR过程的 监测，进行PCR起始模板量的定 量。 ➢狭义的定量PCR技术是指用外 标法（荧光杂交探针保证特异性） 通过监测PCR过程（监测扩增效 率）达到精确定量起始模板数的 目的，同时以内对照有效排除假 阴性结果（扩增效率为零）。
Tm值由引物ATGC数决定每A、T计为2℃， G、C 计为4℃，时间一般为40秒到60秒 3）引物延伸温度与时间：
72℃最佳，30-100nt/s，也有用68 ℃如La Taq 4）循环数：25-35 cycles 之间，过多则非特异扩增 增加；平台效应。
基因工程培训课件(ppt 49页)
高抗ⅹ矮病 F1 高抗 自交 F2（高抗、矮抗、高病、矮病）。
（6）简答选择能稳定遗传的新品种的方法。
为将止F。2矮秆抗锈病品种连续自交，分离淘汰提纯到基本不分离
生物材料：A小麦的高秆（显性）抗锈病（显性）纯种，B小
麦的矮秆不抗锈病纯种，C水稻的迟熟种子
非生物材
料：根据需要自选
方案2：
（1）育种名称：单倍体育种 （2）所选择的生物材料：A、B。 （3）希望得到的结果：矮秆抗锈病。 （4）预计产生这种结果的（所需类型）的几率：1/4。 （5）写出育种的简要过程（可用图解） 高抗ⅹ矮病 F1高抗 F加1花倍药成离为体纯培合养的高抗单、倍矮体抗植、株高，病再、经矮秋病水植仙株素。处理，染色体 （6）简答选择能稳定遗传的新品种的方法。 挑选矮秆抗锈病的植株即可。
8、基因工程中常用细菌等原核生物作 受体细胞的原因不包括( D )
A.繁殖速度快 B.遗传物质相对较少 C.多为单细胞，操作简便 D.DNA为单链，变异少
9、萤火虫的荧光素基因转入烟草植物细胞，
获得了高水平的表达。这一研究成果表明
①萤火虫与烟草植物的DNA结构基本相
同 ②萤火虫与烟草植物共用一套密码子③
对应的内容，正确的组合是( C )。
供体
剪刀
针线
运载体
受体
A 质粒
限制性 核酸内 切酶
DNA连 接酶
提供目的基 大肠杆 因的生物 菌等
B
提供目的基 DNA连 因的生物 接酶
限制性 内切酶
质粒
大肠杆 菌等
C
提供目的基 因的生物
限制性 核酸内 切酶
DNA连 接酶
质粒
大肠杆 菌等
D
大肠杆菌等
DNA连 接酶
（6）简答选择能稳定遗传的新品种的方法。
为将止F。2矮秆抗锈病品种连续自交，分离淘汰提纯到基本不分离
生物材料：A小麦的高秆（显性）抗锈病（显性）纯种，B小
麦的矮秆不抗锈病纯种，C水稻的迟熟种子
非生物材
料：根据需要自选
方案2：
（1）育种名称：单倍体育种 （2）所选择的生物材料：A、B。 （3）希望得到的结果：矮秆抗锈病。 （4）预计产生这种结果的（所需类型）的几率：1/4。 （5）写出育种的简要过程（可用图解） 高抗ⅹ矮病 F1高抗 F加1花倍药成离为体纯培合养的高抗单、倍矮体抗植、株高，病再、经矮秋病水植仙株素。处理，染色体 （6）简答选择能稳定遗传的新品种的方法。 挑选矮秆抗锈病的植株即可。
8、基因工程中常用细菌等原核生物作 受体细胞的原因不包括( D )
A.繁殖速度快 B.遗传物质相对较少 C.多为单细胞，操作简便 D.DNA为单链，变异少
9、萤火虫的荧光素基因转入烟草植物细胞，
获得了高水平的表达。这一研究成果表明
①萤火虫与烟草植物的DNA结构基本相
同 ②萤火虫与烟草植物共用一套密码子③
对应的内容，正确的组合是( C )。
供体
剪刀
针线
运载体
受体
A 质粒
限制性 核酸内 切酶
DNA连 接酶
提供目的基 大肠杆 因的生物 菌等
B
提供目的基 DNA连 因的生物 接酶
限制性 内切酶
质粒
大肠杆 菌等
C
提供目的基 因的生物
限制性 核酸内 切酶
DNA连 接酶
质粒
大肠杆 菌等
D
大肠杆菌等
DNA连 接酶
高中生物精品课件：基因技术
适应性
目的基因稳定存在且数量可扩大
可携带多个或多种外源基因 便于重组DNA的鉴定和选择
几种酶的比较
比较项目 作用底物 作用部位 作用结果
限制性核 酸内切酶
DNA连接酶 DNA聚合酶
DNA分子
DNA分子片段 脱氧核苷酸
切割磷酸二酯键 形成磷酸二酯键 形成磷酸二酯键
形成粘性末 形成重组 形成新的 端或平末端 D的序列为未知的
利用PCR技术扩增目的基因
聚合酶链式反应，在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成 技术。可以获得大量的目的基因。
载体具备的条件
条件 稳定并能复制有一个至多个 Nhomakorabea制性核酸内切酶切割位点
具有特殊的标记基因
常用的载体 ? 质粒 Λ噬菌体
2．基因工程操作过程中只有第三步没有碱基互补配对现象
第一步存在逆转录法获得DNA，第二步存在黏性末端连接现象， 第四步存在检测分子水平杂交。
217
将含有目的基因的 表达载体提纯→取 卵(受精卵)→显微 注射→受精卵发育 →获得具有新性状 的动物
Ca2＋处理细胞→感受 态细胞→重组表达载 体与感受态细胞混合 →感受态细胞吸收 DNA分子
目的基因的检测与鉴定
注意:
1.限制性核酸内切酶剪切目的基因与质粒的次数不同
获取一个目的基因需限制性核酸内切酶剪切2次，共产生4个粘性 末端或平末端，切割质粒则只需要限制性核酸内切酶剪切1次，因 为质粒是环状DNA分子，而目的基因在DNA分子链上。
DNA酶
DNA 分子
切割磷酸二酯键
形成单个 脱氧核苷酸
将目的基因导入受体细胞
生物 种类 常用 方法 受体 细胞
转化 过程
植物细胞
动物细胞
《高中生物基因技术课件》
基因探针及其应用
基因探针是一种用于检测或定位特定基因序列的工具。了解如何使用基因探 针来研究基因表达和突变。
高中生物基因技术课件
在这个课件中，我们将介绍高中生物基因技术的各个方面。从基本概念到最 新进展，让我们一起探索这个令人着迷的领域。
什么是基因技术
基因技术是一种利用生物学和化学方法来研究、操纵和利用基因的技术。它 可以帮助我们更好地理解生物的遗传特征和进化。
基因技术的历史与研究进展
1
起源
基因技术的起源可以追溯到20世纪初的遗传学研究。
表达
研究基因是如何通过转录 和翻译的过程来表达其功 能的。
基因转移技术
基因转移技术可以将外源基因转移到其他生物体中，使其具备新的性状或功能。这项技术在农业和医学 领域有着重要的应用。
基因克隆技术
基因克隆技术可以制造出与原始基因完全相同的基因拷贝。这项技术在科学 研究和医学治疗中发挥着重要作用。
基因工程生产
工业生产
了解如何利用基因工程技术来 生产重要的生物制品，如胰岛 素和人类生长激素。
发酵过程
发酵是一种常用技术还被应用于药物 研发和生产过程中。
病原体基因工程疫苗
病原体基因工程疫苗使用基因工程技术来制造安全有效的疫苗，用于预防传染病的发生和传播。
2
重大突破
20世纪后半叶，基因工程和DNA技术的发展推动了基因技术的进一步发展。
3
最新研究
如今，基因技术在各个领域都有了广泛的应用，包括医学、农业和环境保护。
DNA结构、复制和表达
结构
我们将探索DNA的双螺旋 结构以及它是如何储存遗 传信息的。
复制
了解DNA如何进行复制， 以便传递基因信息给后代。
17第十七章基因技术ok
17第十七章基因技术ok
1 基因工程的特点是
A 在分子水平上的操作，在分子水平上表达 B 在分子水平上操作，回到细胞水平上表达 C 在细胞水平上操作，在分子水平上表达 D 在细胞水平上操作，在细胞水平上表达 E 在细胞水平上操作，在整体水平上表达
1. 基因工程的特点是（B）
在分子水平对DNA进行人为 切割与重组，在细胞、整体 水平进行表达是基因工程技术的 基本特点。
16. 下列哪项不是限制性内切酶的 作用特点（E）
限制性内切酶作用的结果还可产 生平头末端。
17. 下列哪种条件不适合用于核酸的分离提取
A DNA溶液的pH是4～10 B 因所有溶液内均含有EDTA，故实验所用的器皿
和溶液不需灭菌处理 C 避免强烈高速的振荡 D 尽量简化操作步骤 E 避免将细胞突然置于低渗溶液中
4. 用来鉴定蛋白质的技术是（D）
Western 印迹杂交是利用抗原与 抗体特异性结合反应而对蛋白质进行鉴 定的技术。
5. F因子从一个细胞转移到另一个细胞 的基因转移过程称为
A 转化 B 转导 C 转染 D 转座 E 接合
5. F因子从一个细胞转移到另一个细胞的 基因转移过程称为(E）
较大的F 可识别并切割特异ＤＮＡ序列的称为 （B）限制性核酸内切酶的特点是识别、 切割DNA分子内部的特异序列。是细菌 体内存在的保护性酶类，已被人类进行改 造， 成为基因工程技术中常用的工具酶。
16 .下列哪项不是限制性内切酶的作用特点
A 特异性很高 B 常由４～６个核苷酸组成 C 限制性内切酶识别的位点一般具有回文结构 D 少数内切酶的识别位点中的碱基可以有规律地替换 E 限制性内切酶的切口均为黏性末端
2 实验室常用的连接外源性ＤＮＡ 和载体ＤＮＡ的酶是
1 基因工程的特点是
A 在分子水平上的操作，在分子水平上表达 B 在分子水平上操作，回到细胞水平上表达 C 在细胞水平上操作，在分子水平上表达 D 在细胞水平上操作，在细胞水平上表达 E 在细胞水平上操作，在整体水平上表达
1. 基因工程的特点是（B）
在分子水平对DNA进行人为 切割与重组，在细胞、整体 水平进行表达是基因工程技术的 基本特点。
16. 下列哪项不是限制性内切酶的 作用特点（E）
限制性内切酶作用的结果还可产 生平头末端。
17. 下列哪种条件不适合用于核酸的分离提取
A DNA溶液的pH是4～10 B 因所有溶液内均含有EDTA，故实验所用的器皿
和溶液不需灭菌处理 C 避免强烈高速的振荡 D 尽量简化操作步骤 E 避免将细胞突然置于低渗溶液中
4. 用来鉴定蛋白质的技术是（D）
Western 印迹杂交是利用抗原与 抗体特异性结合反应而对蛋白质进行鉴 定的技术。
5. F因子从一个细胞转移到另一个细胞 的基因转移过程称为
A 转化 B 转导 C 转染 D 转座 E 接合
5. F因子从一个细胞转移到另一个细胞的 基因转移过程称为(E）
较大的F 可识别并切割特异ＤＮＡ序列的称为 （B）限制性核酸内切酶的特点是识别、 切割DNA分子内部的特异序列。是细菌 体内存在的保护性酶类，已被人类进行改 造， 成为基因工程技术中常用的工具酶。
16 .下列哪项不是限制性内切酶的作用特点
A 特异性很高 B 常由４～６个核苷酸组成 C 限制性内切酶识别的位点一般具有回文结构 D 少数内切酶的识别位点中的碱基可以有规律地替换 E 限制性内切酶的切口均为黏性末端
2 实验室常用的连接外源性ＤＮＡ 和载体ＤＮＡ的酶是
基因技术介绍ppt模版
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.
29
15. 可识别并切割特异ＤＮＡ序列的称为
A 限制性核酸外切酶 B 限制性核酸内切酶 C DNA酶 D 非限制性核酸外切酶 E 非限制性核酸内切酶
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30
15. 可识别并切割特异ＤＮＡ序列的称为 （B）限制性核酸内切酶的特点是识别、 切割DNA分子内部的特异序列。是细菌 体内存在的保护性酶类，已被人类进行改 造， 成为基因工程技术中常用的工具酶。
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5
3 不能用作克隆载体的ＤＮＡ是
A 质粒ＤＮＡ B 噬菌体DNA C 细菌基因组DNA D 腺病毒ＤＮＡ E 逆转录病毒ＤＮＡ
.
6
3. 不能用作克隆载体的ＤＮＡ是（C）
细菌基因组DNA不具备载体DNA可 进出细胞、并进行外源DNA连接、克 隆等特性。
.
7
4 用来鉴定蛋白质的技术是
A 亲和层析 B Southern 印迹杂交 C Northern印迹杂交 D Western 印迹杂交 E 离子交换层析
.
27
14. 重组ＤＮＡ的连接方式不包括
A 黏性末端连接 B 平头末端连接 C 黏性末端与平头末端连接 D DNA连接子技术 E DNA适配子技术
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28
14. 重组ＤＮＡ的连接方式不 包括（C）
重组DNA技术中常用的连接方 式是黏性末端连接、平头末端连接。 适配子、人工接头连接也不进行黏 性末端与平头末端的连接。
.
8
4. 用来鉴定蛋白质的技术是（D）
Western 印迹杂交是利用抗原与 抗体特异性结合反应而对蛋白质进行鉴 定的技术。
.
9
5. F因子从一个细胞转移到另一个细胞 的基因转移过程称为
A 转化 B 转导 C 转染 D 转座 E 接合
.
10
5. F因子从一个细胞转移到另一个细胞的 基因转移过程称为(E）
.
3
2 实验室常用的连接外源性ＤＮＡ 和载体ＤＮＡ的酶是
A Taq酶 B T4 DNA连接酶 C DNA聚合酶I D DNA聚合酶II E DNA聚合酶III
.
4
2. 实验室常用的连接外源性ＤＮＡ和载体 ＤＮＡ的酶是（B） T4 DNA连接酶连接的效率高，而且即可以 连接黏性末端，也可以连接平末端。
基本重组也称同源重组，不需 插入序列，只发生在序列同源的 DNA片段之间。
.
25
13. 下列哪种染料不是核酸电泳的染色剂
A 溴乙锭 B 银试剂 C 考马亮蓝 D 丫啶橙 E 亚甲蓝
.
26
13. 下列哪种染料不是核酸电泳的 染色剂 （C）
考马斯亮蓝，三苯基甲烷，分 子中含偏酸性基团与蛋白质碱性基 团结合，可作为蛋白质染料，一般 不做核酸电泳的染色剂。
4个单选 1个多选
.
1
1 基因工程的特点是
A 在分子水平上的操作，在分子水平上表达 B 在分子水平上操作，回到细胞水平上表达 C 在细胞水平上操作，在分子水平上表达 D 在细胞水平上操作，在细胞水平上表达 E 在细胞水平上操作，在整体水平上表达
.
2
1. 基因工程的特点是（B）
在分子水平对DNA进行人为 切割与重组，在细胞、整体 水平进行表达是基因工程技术的 基本特点。
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16
8 .关于基因工程的叙述 错误的是（D）
T4 DNA连接酶可以连接黏性 DNA末端，也可以连接平头DNA 末端，是基因工程技术中常用的 DNA连接酶。
.
17
9 下列哪项不是限制性内切酶的特点？
A 仅存在原核细胞中 B 是一种水解酶 C 能识别双链ＤＮＡ中的特定碱基顺序 D 具有一定外切酶的活性 E 酶切辨认的碱基顺序一般具有回文结构
较大的F质粒通过结合作用进行细胞间 的转移过程。
.
11
6 用来鉴定RNA的技术是
A Northern印迹杂交 B Southern印迹杂交 C Western 印迹杂交 D 离子交换层析 E 亲和层析
.
12
6. 用来鉴定RNA的技术是（A）
Northern blotting 技术是将 RNA分子转移到固相支持物上进 行探针检测的技术。常用于基因 表达的特异性分析和定量分析。
.
33
17. 下列哪种条件不适合用于核酸的分离提取
A DNA溶液的pH是4～10 B 因所有溶液内均含有EDTA，故实验所用的器皿
10.由整合酶催化、在两个ＤＮＡ序列的特异位 点间发生的整合称
（A）
位点特异性重组是一种基因重组作用，其 遗传物质的交换发生在参与交换的一条链或二条 链的DNA片段上特异部位，有酶的参与。
.
21子 C cDNA D RNA E 寡核苷酸
.
13
7 有插入序列和转座子介导的基因转移或重排称为
A 转化 B 转座 C 转染 D 转导 E 接合
.
14
7. 有插入序列和转座子介导的基因 转移或重排称为（B)
转座是指基因的易位或重组，需要 9～41bp构成的插入序列和转座酶参 与。
.
15
8 关于基因工程的叙述错误的是
A 根据实验目的选择目的基因 B 选择一个合适的载体 C 将目的基因和载体分别用限制性内切酶切 D T4连接酶只用于连接目的基因和载体黏性末端 E 将重组体转限制性内切酶的作用特点
A 特异性很高 B 常由４～６个核苷酸组成 C 限制性内切酶识别的位点一般具有回文结构 D 少数内切酶的识别位点中的碱基可以有规律地替换 E 限制性内切酶的切口均为黏性末端
.
32
16. 下列哪项不是限制性内切酶的 作用特点（E）
限制性内切酶作用的结果还可产 生平头末端。
.
18
9. 下列哪项不是限制性内切酶的 特点？（D）
限制性核酸内切酶是识别DNA 分子中特异性位点、并进行切割磷酸二 酯键的酶，不具外切酶的活性。
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19
10. 由整合酶催化、在两个ＤＮＡ序列的 特异位点间发生的整合称
A 位点特异性重组 B 同源重组 C 基本重组 D 随机重组 E 人工重组
.
20
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22NA经逆转得到 的互补DNA， 已经切除了内含子，用内含子做成的探 针是不能进行检测的。
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23
12 发生在同源序列间的重组称为
A 基本重组 B 位点特异性重组 C 非位点特异性重组 D 人工重组 E 随机重组
.
24
12 .发生在同源序列间的重组称 为（A)