(动物传染病学)猪伪狂犬病

已能区分疫苗免疫动物与野毒感染动物。 ➢ 伪狂犬病的鉴别诊断是在使用伪狂犬病的基因
标志疫苗的前提下应用的一种诊断方法。
伪狂犬病TK-/gE-（或TK-/gG-）基因缺失弱毒疫苗 伪狂犬病gE（或gG）乳胶凝集试验鉴别诊断方法 伪狂犬病gE（或gG）ELISA鉴别诊断方法
伪狂犬病病毒的糖蛋白
伪狂犬病病毒已发现11种糖蛋白：gB、gC、gD、 gE、gG、gH、gI、gK、gL、gM和gN，除gG分泌到 细胞外，其它均定位于囊膜上。
➢ 将这种基因缺失疫苗注射动物后，机体不能产生抗缺失 蛋白的抗体。但野毒感染的机体仍可以产生该蛋白的抗 体。
➢ 因此，可通过血清学方法将自然感染野毒的血清学阳性 猪与注苗猪区分开来。
全病毒抗原 致敏乳胶
gG 基因
缺失疫苗 免疫血清
全病毒 疫苗免 疫血清
伪狂犬 病阴性
血清
gG 蛋白 致敏乳胶
伪狂犬病gG-LAT乳胶凝集试验鉴别诊断方法
病原学诊断：荧光抗体检查和PCR。
猪伪狂犬病病毒接种家兔后表现奇痒症状。
猪伪狂犬病病毒接种小鼠后表现神经症状。
上图：伪狂犬病LAT诊 断试剂盒
下图：LAT检测猪伪狂 犬病血清抗体
阳性反应
阴性反应
伪狂犬病乳胶凝集试验（LAT）
全病毒抗原 致敏乳胶
gG 基因
缺失疫苗 免疫血清
全病毒 疫苗免 疫血清
猪伪狂犬病
（Porcine pseudorabies）
王湘如
E-mail： wangxr228@mail.hzau.edu.cn 华中农业大学动物传染病教研室 农业微生物学国家重点实验室 生猪健康养殖协同创新中心
1.概述
由伪狂犬病毒引起的家畜和多种野生动物的 急性传染病。猪是其贮存宿主和传染源。
➢ 新生仔猪表现神经症状，还可侵害消化系统。 ➢ 成年猪常为隐性感染。 ➢ 妊娠母猪感染后可引起流产、死胎及呼吸系统症
猪伪狂犬病：肝脏散在白色坏死灶。
猪伪狂犬病：脾脏散在坏死结节。
猪伪狂犬病：肾出血和坏死，肾淤血、肿胀，被膜 下有大量点状出血和灰白色坏死灶。
猪伪狂犬病：肾脏散在出血斑。
猪伪狂犬病：肾上腺可见散在的坏死点。
猪伪狂犬病：肺点状、片状出血。
猪伪狂犬病：小肠出血、瘀血，呈红褐色，表面 散发灰白色坏死灶。
带 囊 膜 的 完 整 病 毒 粒 子 呈 圆 形，直径为150~180nm，无囊膜的 核衣壳呈二十面体对称，直径约 105~110nm。
囊 膜 表 面 有 呈 放 射 状 排 列 的 纤 突。
伪狂犬病病毒粒子形态
伪狂犬病毒与其它疱疹病毒类似，呈圆形或 椭圆形，直径约180nm左右。
伪狂犬病毒粒子结构模式图
gC、gE、gG、gI和gM的缺失不影响病毒在体外复 制，为病毒复制非必需基因。gE基因决定着病毒 的毒力，影响病毒的神经嗜性。
基因gG 和gE在伪狂犬病病毒PrV基因组中的位置
➢ 伪狂犬病的基因缺失疫苗—是在TK基因（主要毒力基因） 缺失的基础上，将病毒的非必需糖蛋白基因（gE或gG） 进行缺失，得到的突变株就不能产生被缺失的糖蛋白， 但又不影响病毒在细胞上的增殖与免疫原性。
感染猪在发热期，其鼻液、唾液、奶、阴道等分泌物 以及血液、实质器官中都含有病毒。
PRV只有一种血清型，但不同毒株在毒力和生物学特征 方面存在着差异。
PRV具有泛嗜性特点，在多种组织细胞培养物可以增 殖，并能产生核内包涵体。
PRV毒力由多种基因控制，其中TK基因是最主要的毒力 基因。糖蛋白gE，gC，gD等也参与病毒的感染。
免疫sABC阳性 病毒抗原位于神经细胞，免疫sABC呈暗棕黄色强 阳性反应（免疫sABC x400）
1 2 3 4 56 7 8 9
2000 1000 250 100
1.Takara DL-2000 Marker； 2. 扁桃体； 3. 胸腺； 4. 颈部淋巴结；5. 腹股沟淋巴结 6. 大脑； 7. 小脑；8. 嗅球；9. 脊髓
伪狂犬 病阴性
血清
gG 蛋白 致敏乳胶
伪狂犬病gG-LAT乳胶凝集试验鉴别诊断方法
伪狂犬病gE鉴别酶联免疫诊断试剂盒
伪狂犬病gG鉴别酶联免疫诊断试剂盒
A：正常RK细胞（兔肾细胞）； B：PRV在RK细胞上形成病变
血清中和试验（SNT）
荧光抗体检测 扁桃体隐窝上皮冰冻切片呈现伪狂犬病病毒阳性。
➢ 垂直传播：妊娠母猪感染后通过胎盘传给胎儿致胎 儿死亡；此外，仔猪可通过吸吮急性感染期母猪的 乳汁而感染。
易感动物：
➢ 猪是贮存宿主，其它动物如牛、羊、犬、猫、家兔、小白 鼠、水貂、狐等多种家畜和野生动物也可感染。
➢ 在猪呈暴发流行，但猪的易感性与日龄有关，症状也有不 同的特点。其中以哺乳仔猪最易感，且死亡率极高，成年 猪多隐性感染，可长期排毒。
猪伪狂犬病：病猪精神萎靡，背毛粗糙，生长不良 及消瘦，严重者有明显呼吸症状。
种猪
➢ 妊娠母猪：咳嗽，发热，精神不振，常发生流产， 产木乃伊胎、死胎和弱仔，以产死胎为主。流产、 死产的胎儿大小相差不显著，无畸形胎，死产胎儿 有不同程度的软化，甚至娩出的胎儿全部木乃伊 化。寒冷季节即冬末初春多发。
➢ 种母猪：屡配不孕、返情率高达90%。
➢ 3~4周龄仔猪：主要临诊症状同上，病程略长，多便秘，病死率可达 40~60%。
➢ 断奶仔猪：主要表现为神经症状，震颤，共济失调，拉稀，呕吐等。发 病率20~40%，死亡率10~20%。
猪伪狂犬病：后躯麻痹，有间歇性肌 肉痉挛，卧地不起，不能运动
猪伪狂犬病：癫痫样发作，病猪肌肉 痉挛，倒地呈现游泳状姿势。
➢ 公猪：睾丸肿胀、萎缩，种用性能降低或丧失。
猪伪狂犬病：在分娩预定期前产出的死 胎（左）和木乃伊胎（右）
木乃伊胎，母猪超过分娩期后产出的胎 儿全部为黑褐色的木乃伊胎。
猪伪狂犬病：死胎和木乃伊胎。
猪伪狂犬病：死胎和木乃伊胎。
猪伪狂犬病：死胎和木乃伊胎。
猪伪狂犬病：死胎和木乃伊胎。
垂直感染的新生乳猪全身震颤，肌肉痉挛，运动障碍。
状，无奇痒。 ➢ 公猪表现为繁殖障碍和呼吸系统症状。
牛、羊、猫、犬、许多野生动物、肉食动物及 野生啮齿类等动物发病后通常具有发热、奇痒 及脑脊髓炎等典型症状，均为致死性感染，但 呈散发形式。
人对伪狂犬病毒无易感性。
3.病原学
伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus, PRV）属于疱疹 病毒科,α-疱疹病毒亚科,猪疱疹病毒I型。基因组为线 状双股DNA。
4.流行病学
传染源： ➢ 病猪、带毒猪以及带毒鼠类为重要传染源。可通
过流产胎儿、阴道分泌物和胎盘传染。 ➢ 野毒感染猪、弱毒疫苗免疫猪都会导致潜伏感
染。百度文库特定条件的刺激或环境压力下如贩运、分 娩等，可导致潜伏状态的病毒复活、扩散。
传播途径：
➢ 水平传播：健康猪与病猪、带毒猪直接接触可感 染。亦可经消化道，皮肤伤口传染。配种时可传 染。可经空气传播，但具体传播距离尚不清楚。
扁桃体内的核内包含体（HEx400）
伪狂犬病的包涵体一 般为无定形、均质的 凝块，不规则而轻度 嗜酸性，以明晕或泡 状晕与核膜分离。注
意观察鉴别！
7.诊断
根据病猪的发病特点，临床症状和病理变化，特别是广泛 性非化脓性脑炎及嗜酸性包涵体的检出而作出初步诊断。
确诊需要借助于实验室检查。
病毒分离鉴定：
左
1日龄
右
3日龄
猪伪狂犬病：新生仔猪死亡。
猪伪狂犬病：病猪横卧于地，作“划船”动作。
猪伪狂犬病：病猪呈抽搐症状，角弓反张。
患猪眼部明显水肿，头部皮肤常有斑疹和结痂。
成年猪
➢ 2月龄以上猪，临诊症状轻微或隐性感染，表现 一过性发热，咳嗽，便秘，有的病猪呕吐，多在 3~4d恢复。
➢ 如出现体温继续升高，病猪又出现神经症状，震 颤、共济失调，头向上抬，背拱起，倒地后四肢 痉挛，间歇性发作。偶尔也可引起死亡。
组织学病变
➢ 组织学变化主要见中枢神经系统呈现弥漫性非化脓性脑膜炎， 有明显血管套和胶质细胞坏死。
➢ 脑神经细胞、鼻咽黏膜、脾和淋巴结内有核内嗜酸性包涵体。
➢ 有坏死灶的扁桃体中，隐窝上皮细胞核内常有大量嗜酸性核内 包涵体。
大脑的核内包涵体，大脑的神经细 胞中有不规则的嗜酸性核内包含体 （HEx400）
伪狂犬病的PCR诊断方法
伪狂犬病病毒不同毒株感染动物
家兔接种野毒后表现奇痒，死亡。 家兔接种gG缺失株后表现搔痒，但不死亡。 家兔接种gE缺失株后不表现搔痒，也不死亡。 犬接种gE单缺失株后死亡。 天然弱毒株Bartha株对犬安全。
野毒自然感染与疫苗免疫动物的鉴别诊断 ➢ 随着伪狂犬病基因缺失疫苗的应用，在临床上
引起繁殖障碍
➢ 细小病毒感染 ➢ 乙型脑炎 ➢ 伪狂犬病 ➢ 蓝耳病 ➢ 猪瘟 ➢ 链球菌病 ➢ 布鲁菌病 ➢ 附红细胞体。。。
8.防制
免疫预防： ✓ 基因缺失疫苗免疫程序： ➢ 仔猪、乳猪及育肥猪：首免日龄根据母源抗体水
平而定，可1日龄滴鼻免疫或断奶时免疫或70~80 日龄免疫，一个月后加强免疫一次。 ➢ 种猪：根据当地疫情和实际情况每年免疫2~4次。
综合防制措施：
严格控制犬、猫、鸟、鼠类和其它禽类进入猪 场，严格控制人员来往，消毒措施及血清学监 测。
伪狂犬病根除计划：
伪狂犬病的根除计划是通过使用基因缺失疫苗与 相应的鉴别诊断来进行的，通过逐步隔离和淘汰 自然感染的野毒血清学阳性猪，建立和扩大健康 猪群，从而达到根除伪狂犬病的目的。
伪狂犬病TK-/gE-基因缺失弱毒疫苗 伪狂犬病TK-/gG-基因缺失弱毒疫苗
✓ 灭活疫苗免疫程序： ➢ 种猪：第1次注射后，间隔4~6周后加强免疫1次。
以后每6个月注射1次，产前1个月加强免疫1次。 ➢ 留作种用的断奶仔猪：断奶时注射1次，间隔4~6
周后加强免疫1次，以后按种猪免疫程序进行。 ➢ 育肥用断奶仔猪：断奶时注射1次，直到出栏。
脑膜水肿，病猪的脑膜血管扩张充血、 瘀血和水肿，脑脊液增多
猪伪狂犬病：病猪脑出血。
猪伪狂犬病：扁桃体化脓，牙龈出血，糜烂。
猪伪狂犬病：重病猪扁桃体及咽喉头明显坏死。
扁桃体坏死，内有坏死灶，舌根及咽喉黏膜 被覆厚层黄白色假膜。
猪伪狂犬病：肝坏死，瘀血、肿大，肝被膜下有 大量针尖大灰白色坏死灶
流行季节：
具有一定季节性，多发生在寒冷季节，但其它季节也有发生。
5.临床症状
潜伏期一般为3-6天。感染猪的临床症状随着年龄不同 和感染毒株的毒力不同有很大的差异。
仔猪
➢ 新生仔猪：病情最重，症状最明显，多以中枢神经系统发生障碍为主 征。大量死亡，15日龄以内仔猪病死率为100%。表现高热、食欲废绝、 呼吸困难、呕吐腹泻、抑郁震颤，共济失调，抽搐，划水，昏迷以至衰 竭死亡。
➢ 猪、牛、兔、犬、猫、猴、驹和雪貂的肾细胞。 ➢ 牛的睾丸细胞。 ➢ 鸡胚成纤维细胞。 ➢ 猪的PK-15、IBRS-2细胞，猴的Vero细胞。 ➢ 仓鼠的BHK-21细胞。
动物接种：病料直接接种家兔、小鼠作诊断。
注射部位皮肤发生奇痒，局部脱毛，破损出血，发炎。
血清学诊断：通过酶联免吸附试验、乳胶凝集 试验、血清中和试验或琼脂扩散试验判定感染 状态。
6.病理变化
一般无特征性病变，有时可见以下病变： ➢ 脑膜明显充血、出血和水肿，脑脊液增多。 ➢ 肝和脾均有散在白色坏死点。 ➢ 肾脏有针尖状出血点。 ➢ 肺水肿、有小叶性间质性肺炎。 ➢ 胃黏膜有卡他性炎症、胃底黏膜出血。
猪伪狂犬病：脑实质出现针尖大小出血点。
猪伪狂犬病：病猪软脑膜充血，脑沟内积有 出血性水肿液。
猪伪狂犬病：仔猪神经症状。
猪伪狂犬病：仔猪表现神经症状，四肢呈划水状。
猪伪狂犬病：病猪神经紧张，眼发直。
猪伪狂犬病：仔猪神经症状，顶撞墙壁。
猪伪狂犬病：仔猪的瘙痒。
病猪皮肤感觉异常、瘙痒，用后蹄蹬扒发痒的部位。
猪伪狂犬病：仔猪圆圈运动。
猪伪狂犬病：新生仔猪大量死亡。
某大型养猪场发生猪伪狂犬病，大批乳猪相继死亡。
伪狂犬病gE鉴别酶联免疫诊断试剂盒
伪狂犬病gG鉴别酶联免疫诊断试剂盒
鉴别诊断
✓ 猪伪狂犬病从致病本质上来说属于繁殖障碍性疾病
✓ 从临床表现看又呈现明显的神经症状
因此，本病应注意与能引起猪神经症状和繁殖障碍 的疾病加以区别。
引起神经症状
➢ 狂犬病 ➢ 伪狂犬病 ➢ 乙型脑炎 ➢ 传染性脑脊髓炎 ➢ 李氏杆菌病 ➢ 水肿病 ➢ 链球菌病 ➢ 猪丹毒 ➢ 弓形虫。。。