显微镜油镜的使用和细菌形态的观察共20页文档
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实训4 显微镜油镜的使用及细菌形态观察
2. 杆菌 (大肠埃希菌，伤寒杆菌等）
3. 弧菌（霍乱弧菌）
葡萄球菌
链球菌
淋病奈瑟菌
大肠埃希菌
水弧菌
细菌的特殊结构
破伤风杆菌 示：芽孢
炭疽芽孢杆菌 示：芽孢
肺炎链球菌 示：荚膜
伤寒沙门菌 示：鞭毛
菌毛和鞭毛
霍 乱 弧 菌 鞭 毛
空 肠 弯 曲 菌 的 双 毛 菌 伤 寒 沙 门 菌 周 毛 菌
实验三 油镜使用和细菌形态观察
实验目的
能利用显微镜油镜观察细菌的基本形态和
特殊结构，并会进行显微镜的保养。
仪器及材料细菌
染色标本片
（一）显微镜油镜的使用
显微镜的构造
1.光学部分目镜 、 物镜 、
照明装置(聚光镜、 光圈、 虹彩 反光镜等)。它使
检视物放大,生成物象。
铜 绿 假 单 胞 菌 丛 毛 菌
讨论油镜使用注意事项。
实验报告中要画图表示结果。
画图注意事项：1、以圆圈表示视野
2、注意菌体大小比例合适 3、标出菌体颜色，显示典型排列方式 4、特殊结构标出菌体和特殊结构所在位置
杆菌（大肠杆菌，G-）
D值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰
二、显微镜及油镜使用原理
油镜，即油浸接物镜。当光线由 反光镜通过玻片与镜头之间的空 气时，由于空气与玻片的密度不 同，使光线受到曲折，发生散射， 降低了视野的照明度。若中间的 介质是一层油（其折射率与玻片 的相近），则几乎不发生折射， 增加了视野的进光量，从而使物 象更加清晰。
油，从侧面注视，用粗调节器使油镜浸在镜油中并几
乎与标本相接。然后用细调节器调节，在目镜下找到 最合适的观察点。
微生物学3 显微镜油镜的使用和细菌形态的观察
（5）媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖约1min，水洗。
（6） 脱色：用滤纸吸去载玻片上面的残水，将玻片 倾斜，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色 时为止，约20—30s，立即用水冲净酒精。
注意：革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是整个操 作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌， 脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。
倒立的虚像
图1-1-2 光学显微镜的成像原理
显微镜的放大倍数和分辨率
1.放大倍数=接物镜放大倍数× 接目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率 是表示显微 镜辨析物体（两端）两点之间距 离的能力，可用公式表示为：
D=0.61λ/n·Sinα/2
式中D：物镜分辨出物体两点间 的最短距离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折 射率。 ：镜口角（即入射角）。
2、用无菌的接种环挑少量大肠杆菌与右边水滴充 分混合成仅有大肠杆菌的区域，并将少量大肠杆 菌菌液延伸至玻片中央，与金黄色葡萄球菌混合 成含有两种细菌的混合区。
（四）、革兰氏染色的操作方法
涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 镜检
无菌操作
葡萄球菌
大肠杆菌
（1）涂片：先在载玻片上滴一滴生理盐水，再在菌平
三.显微镜油镜观察操作方法
在高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区域后，然后 将油镜转到工作位置。在待观察的样品区域滴加香柏 油，从侧面注视，用粗调节器使油镜浸在镜油中并几 乎与标本相接。然后用细调节器调节，在目镜下找到 最合适的观察点。
油镜使用毕后：上升镜筒，取下载玻片，用擦镜纸拭 去镜头上的镜油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯（香柏 油溶于二甲苯）擦去镜头上残留的油迹，最后用干净 的擦镜纸擦去残留的二甲苯。
1.涂片为何要固定？固定加热时间过长会怎样? 2.分析影响革兰氏染色结果的因素。
（6） 脱色：用滤纸吸去载玻片上面的残水，将玻片 倾斜，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色 时为止，约20—30s，立即用水冲净酒精。
注意：革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是整个操 作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌， 脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。
倒立的虚像
图1-1-2 光学显微镜的成像原理
显微镜的放大倍数和分辨率
1.放大倍数=接物镜放大倍数× 接目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率 是表示显微 镜辨析物体（两端）两点之间距 离的能力，可用公式表示为：
D=0.61λ/n·Sinα/2
式中D：物镜分辨出物体两点间 的最短距离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折 射率。 ：镜口角（即入射角）。
2、用无菌的接种环挑少量大肠杆菌与右边水滴充 分混合成仅有大肠杆菌的区域，并将少量大肠杆 菌菌液延伸至玻片中央，与金黄色葡萄球菌混合 成含有两种细菌的混合区。
（四）、革兰氏染色的操作方法
涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 镜检
无菌操作
葡萄球菌
大肠杆菌
（1）涂片：先在载玻片上滴一滴生理盐水，再在菌平
三.显微镜油镜观察操作方法
在高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区域后，然后 将油镜转到工作位置。在待观察的样品区域滴加香柏 油，从侧面注视，用粗调节器使油镜浸在镜油中并几 乎与标本相接。然后用细调节器调节，在目镜下找到 最合适的观察点。
油镜使用毕后：上升镜筒，取下载玻片，用擦镜纸拭 去镜头上的镜油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯（香柏 油溶于二甲苯）擦去镜头上残留的油迹，最后用干净 的擦镜纸擦去残留的二甲苯。
1.涂片为何要固定？固定加热时间过长会怎样? 2.分析影响革兰氏染色结果的因素。
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61、奢侈是舒适的，否则就不是奢侈 。——CocoCha nel 62、少而好学，如日出之阳；壮而好学 ，如日 中之光 ；志而 好学， 如炳烛 之光。 ——刘 向 63、三军可夺帅也，匹夫不可夺志也。 ——孔 丘 64、人生就是学校。在那里，与其说好 的教师 是幸福 ，不如 说好的 教师是 不幸。 ——海 贝尔 65、接受挑战，就可以享受胜利的喜悦 。——杰纳勒 尔·乔治·S·巴顿
显微镜油镜的使用和细菌形 态的观察
26、机遇对于有准备的头脑有特别的 亲和力 。 27、自信是人格的核心。
28、目标的坚定是性格中最必要的力 量泉源 之一， 也是成 功的利 器之一 。没有 它，天 才也会 在矛盾 无定的 迷径中 ，徒劳 无功。- -查士 德斐尔 爵士。 29、困难就是机遇。--温斯顿．丘吉 尔。 30、我奋斗，所以我快乐
2实验二显微镜油镜的使用、细胞形态的观察及革兰氏染色
（1）涂片：先在载玻片左右端各滴一滴生理盐水，分别挑
取大肠杆菌和白色葡萄球菌菌体于生理盐水中涂片（采用 三区涂片法：分别将上述2种菌液延伸至玻片中央，混匀 并涂成薄膜），把菌液充分涂开，使其分布均匀。
注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多， 涂片要均匀，不可过于浓厚。
三区涂片法
菌体
载玻片
1.放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数
2. 显微镜的分辨率：是表示显微 镜辨析物体（两端）两点之间距 离的能力，可用公式表示为：
D（R）=0.61λ/n· Sinα/2
式中D：物镜分辨出物体两点间 的最短距离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折 射率。 ：镜口角（即入射角）。
菌和真菌都呈革兰氏阳性反应；
弧菌、螺旋体和大多数致病性的无芽孢杆菌都
呈现阴性反应。
（四）、革兰氏染色原理
根据革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌之间细胞壁的
结构差异来达到染色的目的的。
先用结晶紫初染，所有的细菌都被染成初染料的
蓝紫色；
然后用碘媒染，它与结晶紫结合成结晶紫—碘复
合物，从而增强了染料与细菌的结合力。
D值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰
镜口率 N.A=n· Sinα/2
油镜(OI,HI,100X)，即油浸 接物镜。当光线由反光镜通 过玻片与镜头之间的空气时， 由于空气与玻片的密度不同， 使光线受到曲折，发生散射， 降低了视野的照明度。若中 间的介质是一层油（其折射 率与玻片的相近），则几乎 不发生折射，增加了视野的 进光量，从而使物象更加清 晰。
初染
媒染
脱色
复染
（三）革兰氏染色的操作方法
取大肠杆菌和白色葡萄球菌菌体于生理盐水中涂片（采用 三区涂片法：分别将上述2种菌液延伸至玻片中央，混匀 并涂成薄膜），把菌液充分涂开，使其分布均匀。
注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多， 涂片要均匀，不可过于浓厚。
三区涂片法
菌体
载玻片
1.放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数
2. 显微镜的分辨率：是表示显微 镜辨析物体（两端）两点之间距 离的能力，可用公式表示为：
D（R）=0.61λ/n· Sinα/2
式中D：物镜分辨出物体两点间 的最短距离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折 射率。 ：镜口角（即入射角）。
菌和真菌都呈革兰氏阳性反应；
弧菌、螺旋体和大多数致病性的无芽孢杆菌都
呈现阴性反应。
（四）、革兰氏染色原理
根据革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌之间细胞壁的
结构差异来达到染色的目的的。
先用结晶紫初染，所有的细菌都被染成初染料的
蓝紫色；
然后用碘媒染，它与结晶紫结合成结晶紫—碘复
合物，从而增强了染料与细菌的结合力。
D值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰
镜口率 N.A=n· Sinα/2
油镜(OI,HI,100X)，即油浸 接物镜。当光线由反光镜通 过玻片与镜头之间的空气时， 由于空气与玻片的密度不同， 使光线受到曲折，发生散射， 降低了视野的照明度。若中 间的介质是一层油（其折射 率与玻片的相近），则几乎 不发生折射，增加了视野的 进光量，从而使物象更加清 晰。
初染
媒染
脱色
复染
（三）革兰氏染色的操作方法
实验一 显微镜油镜的使用和细菌形态的观察
实验一显微镜油镜的使用和细菌形态的观察本次实验主要介绍了显微镜油镜的使用以及细菌形态的观察。
显微镜是生物科学中最基本最必要的仪器，也被称为生命科学研究的窗口。
而观察细菌形态则是微生物学重要的研究内容之一，对于深入了解微生物的特性和分类十分关键。
一、显微镜油镜的使用1、准备工作在使用显微镜前，需要对仪器做一些准备工作，具体如下：（1）检查显微镜是否清洁干净。
使用棉花棒和无水酒精擦拭镜头和接口。
（2）插入镜片，拧紧螺丝。
注意，平光镜的凹面朝上。
（3）透镜的高度应调整至最高点，油镜周围涂上润滑油。
（4）在准备好玻片后，使用无菌针将样本划到玻片上。
2、操作步骤（1）将玻片插入载置物台。
调整光源，使其在镜片下方成圆形状。
（2）使用低倍放大的物镜，在载置物台下调整样本位置，然后转动焦点，调整到最清晰的位置。
（3）切换到高倍物镜。
在不移动载置物台的情况下，调整焦距直至视野内的细胞详细可见。
（4）将油镜轻轻接触载置物台上的镜片，调节光源以得到最佳观察效果。
（5）旋转调节管，使细胞从上到下等比例进入视野，观察细菌的形态、大小、数量等。
二、细菌形态的观察1、细菌分类根据细菌的细胞形态、大小、结构和移动方式等特征，可以将细菌分为不同的分类。
细菌形态既包含单细胞长条状物、圆球体等基本形态，又包括复杂的细胞、菌株组成的群体等。
常见的细菌形态有以下几种：（1）球菌（cocci）：球形或椭圆形的细胞。
（2）杆菌（bacilli）：棒状或柱状的细胞。
在实验过程中，使用显微镜观察样本，发现细菌形态上虽然存在一定的差异，但一般表现为以下情况：（1）球菌或细圆菌：呈球形，直径一般在0.5-2μm之间。
（3）螺旋菌：呈螺旋形，长度几乎无限制，直径0.5-1μm左右。
然而，即使细菌大小、形态有所不同，它们的细微结构也存在着明显的相似性，这种结构相似性在分类学上具有相当的意义。
细菌形态的观察是微生物学中非常重要的基础工作，通过观察细菌的形态、大小、数量等，能够更好地了解微生物的生长繁殖规律，对于深入研究微生物的特性、分类以及对环境的影响等方面具有非常重要的价值。
实验一 显微镜油镜的使用和细菌形态的观察
实验程序III
细菌三种基本形态的观察：
菌落形态观察和个体形态观察，这里主要指 个体形态的观察。 1. 结合油镜的使用，观察三张细菌染色片（球 状菌、杆状菌、和螺旋状菌），边观察边绘图。 2. 看示范镜：观察双球菌、四联球菌，并绘图。
实验程序Ⅲ
细菌运动性的观察（示范）： 一般采用水浸片法、悬滴法、 半固体培养法，常用水浸法 和悬滴法来观察细菌的运动 性。 1. 水浸片法
实验程序Ⅰ（显微镜的使用）
主要是油镜的使用
1.用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。 2.调节光亮度 3.低倍镜观察：粗调、细调 4.依次再进行中倍、高倍观察 5.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光 镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏 油中，细调至看清物象为止。 6.换片：另换新片，必须从第三条开始操作。 7.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去 镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残 留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体 全部复原。
2. 悬滴法
欧林巴斯（OLYMPUS）生物显微镜Ⅰ
OLYMPUS生物显微镜是由日Байду номын сангаас进口 的一种双筒光学显微镜，它使用方便， 分辨率高，并且有立体感。是目前研 究微生物的良好工具。
显微镜的结构
录像演示
欧林巴斯（OLYMPUS）生物显微镜Ⅱ
（显微镜的使用方法 ）
1. 接通电源。 2. 打开主开关。 3. 移动电压调整旋，使亮度 适中。
相差显微镜的装置
1. 环状光圈 2. 相差物镜（具有环状 相板） 3. 定中心望远镜（亦称 辅助目镜） 4. 辅助固定扳手 5. 绿色滤光片
欧林巴斯（OLYMPUS）相差显微镜Ⅱ
相差显微镜的使用方法
实验二 显微镜油镜的使用、细菌形态观察及大小测定
的刻度平行，移动推动器，使两尺重叠，再使两尺的“0”刻度完全重合， 定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度，计数两重合刻度之间目镜 测微尺的格数和镜台测微尺的格数。因为镜台测微尺的刻度每格长l0μm， 所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。 例如目镜测微尺5小格正好与镜台测微尺5小格重叠，已知镜台测微尺每 小格为l0μm，则目镜测微尺上每小格长度为=5×10μm/5＝10μm
大肠杆菌：大肠杆菌 （Escherichia coli，E.coli） 革兰氏阴性短杆菌，大小0.5×1～ 3微米。周身鞭毛，能运动，无芽 孢。
大肠杆菌（E. coli）为埃希氏菌
属(Escherichia)代表菌。一般多 不致病，为人和动物肠道中的常居 菌，在一定条件下可引起肠道外感 染。某些血清型菌株的致病性强， 引起腹泻，统称致病性大肠杆菌。
芽孢
破伤风梭菌
枯草芽孢杆菌
枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种。单个细胞 0.7～0.8×2～3微米， 着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后
菌体不膨大。广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖， 故名。
思考题
1.
2.
为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜 时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微 尺进行校正？ 在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不 同放大倍数的物镜来测定同一细菌的大 小，其测定结果是否相同？为什么？
2.2 微生物大小测定原理 3 实验器材 显微镜、擦镜纸、细菌教学片、目镜测微尺、镜台测微尺 4、操作步骤 4.1 细菌的形态观察 4.1.1 观察前的准备
（1）显微镜的安置
（2）光源的调节 （3）调节双筒显微镜的目镜
（4）聚光器数值孔径值的调节
大肠杆菌：大肠杆菌 （Escherichia coli，E.coli） 革兰氏阴性短杆菌，大小0.5×1～ 3微米。周身鞭毛，能运动，无芽 孢。
大肠杆菌（E. coli）为埃希氏菌
属(Escherichia)代表菌。一般多 不致病，为人和动物肠道中的常居 菌，在一定条件下可引起肠道外感 染。某些血清型菌株的致病性强， 引起腹泻，统称致病性大肠杆菌。
芽孢
破伤风梭菌
枯草芽孢杆菌
枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种。单个细胞 0.7～0.8×2～3微米， 着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后
菌体不膨大。广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖， 故名。
思考题
1.
2.
为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜 时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微 尺进行校正？ 在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不 同放大倍数的物镜来测定同一细菌的大 小，其测定结果是否相同？为什么？
2.2 微生物大小测定原理 3 实验器材 显微镜、擦镜纸、细菌教学片、目镜测微尺、镜台测微尺 4、操作步骤 4.1 细菌的形态观察 4.1.1 观察前的准备
（1）显微镜的安置
（2）光源的调节 （3）调节双筒显微镜的目镜
（4）聚光器数值孔径值的调节
微生物学显微镜油镜的使用和细菌形态的观察讲课文档
（二）、 革兰氏染色的工作原理
• 革兰氏染色法是细菌学中重要的鉴别染色法。有芽 孢的杆菌和绝大多数球菌以及所有的放线菌和真菌 都呈革兰氏阳性反应；弧菌，螺旋体和大多数致病 性的无芽孢杆菌都呈现阴性反应。
第十四页，共25页。
• 根据革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌之间细胞壁的结构 差异来达到染色的目的的。
• 先用结晶紫初染，所有的细菌都被染成初染料的蓝紫色 ；
• 然后用碘媒染，它与结晶紫结合成结晶紫—碘复合物 ，从而增强了染料与细菌的结合力。
• 然后再用乙醇脱色处理
第十五页，共25页。
经典法，四步法 （p.30-32）
第十六页，共25页。
• 由于革兰氏阳性菌细胞壁主要由肽聚糖形成网状结构、 壁厚、类脂质含量低，脱色时网孔收缩，结晶紫—碘不
第四页，共25页。
显微镜的放大倍数和分辨率
1.放大倍数=接物镜放大倍数×接目 镜放大倍数
2. 显微镜的分辨率 是表示显微镜辨
析物体（两端）两点之间距离的能 力，可用公式表示为：
D=0.61λ/n·Sinα/2
式中D：物镜分辨出物体两点间的 最短距离。
：可见光的波长（平均0.55m)
n: 物镜和被检标本间介质的折射
注意：革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是整个操 作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌， 脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。
染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应甩去细胞上 的残水，以免染色液被稀释。
第二十四页，共25页。
（7）复染：用番红液染1—2min,水洗。
（8）镜检：干燥后（室温下晾干），置油镜观察（先在低倍镜 ，然后在油镜下观察菌体细胞的形态）。革兰氏阴性菌呈红 色，革兰氏阳性菌呈紫色。
（1）涂片：先在载玻片上滴一滴生理盐水，再在菌平板上取一
显微镜油镜的使用和细菌形态的观察PPT共20页
•
29、在一切能够接受法律支配的人类 的状态 中，哪 里没有 法律， 那里就 没有自 由。— —洛克
•
30、风俗可以造就法律，也可以废除 法律。 ——塞·约翰逊
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间，才能认识自 己。——德国
显微镜油镜的使用和细菌形态的观察
•
26、我们像鹰一样，生来就是自由的 ，但是 为了生 存，我 们不得 不为自 己编织 一个笼 子，然 后把自 己关在 里面。 ——博 莱索
•
27、法律如果不讲道理，即使延续时 间再长 ，也还 是没有 制约力 的。— —爱·科 克
•
28、好法律是由坏风俗创造出来的。 ——马 克罗维 乌斯
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人Байду номын сангаас说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
《微生物实验》1显微镜油镜的使用和细菌形态的观察共20页文档
39、没有不老的誓言，没有不变的承 诺，踏 上旅途 ，义无 反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识 的人， 决不会 坚韧勤 勉。
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地—赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
《微生物实验》1显微镜油镜的使用 和细菌形态的观察
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
Thank you
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地—赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
《微生物实验》1显微镜油镜的使用 和细菌形态的观察
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
Thank you
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