实验一、显微镜油镜的使用及简单染色

三、实验材料


奥林巴斯双筒普通光学显微镜。 吕氏美蓝染色液、石炭酸复红染色液、结晶紫染色 液、香柏油、镜头清洗液（V乙醚:V酒精＝7:3）、 无菌水。 大肠杆菌、藤黄微球菌、枯草芽孢杆菌的斜面菌种。 载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、擦镜纸、吸水 纸。
四、实验步骤
涂片
干燥
固定
染色
水洗
干燥
根据公式D=λ/2n·
sin(α/2 ) ，增大分母，使得D值
减小，分辨率增大。
显微镜保养和使用中的注意事项
1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布， 以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜， 最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用 油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻 片或损伤镜面。 4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜 座，不可单手拿，更不可倾斜拿。 5.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生 霉菌而腐蚀镜片。
2.机械部分:镜座、镜臂、镜筒、 物镜转换器、载物台、载物台 转移器、粗调节器、细调节器 等部件.它起着支持 调节 固定 等作用.
倒立的虚像
图1-1-2 光学显微镜的成像原理

显微镜的放大倍数和分辨率
1.
放大倍数：物镜放大倍数×目镜放 大倍数 2. 显微镜的分辨率:是表示显微镜辨 析两点之间距离的能力。可用公式 表示为：
D=λ/2n· sin(α/2 )
式中D：物镜分辨出物体两点间的最 短距离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 ：镜口角（即入射角）。
D值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰

油镜使用的原理
油镜，即油浸接物镜。当光 线由反光镜通过玻片与镜头 之间的空气时，由于空气与 玻片的密度不同，使光线受 到曲折，发生散射，降低了 视野的照明度。若中间的介 质是一层油（其折射率与玻 片的相近），则几乎不发生 折射，增加了视野的进光量， 从而使物象更加清晰。
二、实验原理2

细菌的单染色
细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上颜色。 利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌 体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察 到其形态和结构。
染色前必须固定细菌，其目的是： 一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上。 二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和 化学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原有的 形态。
实验一 显微镜油镜的使用及细 菌的简单染色
一、实验目的




学习并掌握普通光学显微镜的构造 和油镜的使用技术及维护的基本知 识 学习微生物涂片、单染色的基本技 术 初步认识细菌的形态特征 学习简单的无菌操作技术
二、实验原理1
显微镜的构造
1.光学部分:目镜 、 物镜 、 照 明装置(聚光镜、 虹彩光圈、 反光镜等)。它使检视物放大, 生成物象。
注意：油镜使用完毕后一定要用二甲苯擦拭镜头
五、实验结果
根据观察，绘制任意两种细菌的 形态图 叙述本实验的注意事项有哪些
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镜检
无菌操作
二、显微操作
1.低倍镜观察：粗调、细调。依次再进行中倍、高倍观察 2.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在 标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调 至看清物象为止。 3.换片：另换新片，必须从第三条开始操作。 4.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上 的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最 后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。