血清基质金属蛋白酶-2和转化生长因子β<,1>与糖尿病肾病的关系

符号说明ＭＭＰ．２Ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ一２基质金属蛋白酶一２ＴＧＦ一§１Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－０Ｉ转化生长因子１３。

ＤＭＤｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ糖尿病ＤＮＤｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ糖尿病肾病ＵＡＥＲＵｒｉｎｅａｌｂｕｍｉｎｅｘｃｒｅｔｉｏｎｒａｔｅ尿白蛋白排泄率ＣＮＴｙｐｅｆｖｃｏｌｌａｇｅｎＩＶ型胶原ＥＣＭＥｘｔｒａｅｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ细胞外基质ＥＳＲＦＥｎｄｓｔａｇｅｒｅｎａｌｆａｉｌｕｒｅ终末期肾衰ＧＦＲＧｌｏｍｅｒｕｌａｒｆｉｌｔｅｒｒａｔｅ肾小球滤过率ＧＭＣＧｌｏｍｅｒｕｌａｒｍｅｓａｎｇｉａｌｃｅｌｌ肾小球系膜细胞ＧＢＭＧｌｏｍｅｒｕｌａｒｂａｓａｌｍ锄ｂｒａｎｅ肾小球基底膜血清基质金属蛋白酶一２及转化生长因子Ｂ与糖尿病肾病的关系硕士研究生：李振作导师：东野光教授专业：老年医学内分泌专业摘要背景Ⅳ型胶原（ｃ。

）是糖尿病肾病（ＤＮ）时细胞外基质（ＥＣＭ）增殖的主要成分。

基质金属蛋白酶（删ＰＳ）在基质降解中起主要作用。

他们的共同特征是：均以无活性的酶原形式产生，需依靠其他Ｉ删ＩＰＳ或纤溶酶激活，能够降解ＥＣＭ中至少一种成分，又能被金属蛋白酶抑制因子（ＴＩ舻Ｓ）以离亲和力结合而抑制其活性。

Ⅳ型胶原酶有两种存在形式：一种为非糖化形式，分子量７２ＫＵ，由结缔组织细胞分泌，被称为）脚Ｐ－２又称明胶酶Ａ；另一种为糖化形式，分子量为９２ＫＵ，主要由中性粒细胞和巨噬细胞产生，称为ＭＭＰ－９又称明胶酶Ｂ。

其活性在多个水平上受严格调控。

其中ＭＭＰ－２是降解Ⅳ型胶原的主要ＭＭＰ。

转化生长因子８１（ＴＧＦ－Ｂ１）可通过刺激胶原ｍＲＮＡ的表达，抑制ｋＯｄＰ的合成，促进系膜细胞（眦）合成和分泌ＥＣＭ，抑制ＥＣＭ降解，加速ＤＮ的形成。

目前国内外关于ＭＭＰ－２和ＴＧＦ—ｅｌ的研究主要集中于两个方面：一方面，体外大鼠系膜细胞（№）高糖培养；另一方丽，制作糖稼病动物模型肾组织标本。

检测ＭＭＰ一２、ＴＧＦ一８１表达及其活性水平变化。

研究表明高糖使ＭＭＰ一２ｍＲＮＡ转录减少或增加，活性降低，而ＴＧＦ一１３ｌ合成分泌增加。

检测糖尿病患者血清ＭＭＰ一２、ＴＧＦ—Ｂ１水平尚较少报道，两者关系亦不甚明确。

目的观察２型糖尿病患者（Ｔ２ＤＭ）血清ＩｄＭＰ－－２、ＴＧＦ一６ｌ和ＣⅣ与尿白蛋白排泄率（ＵＡＥＲ）的关系，探讨其在ＤＮ进展中的作用。

方法２型糖尿病组：选取附属医院内分泌科２型蹦患者５７例，诊断符合１９９８年ＷＨＯ糖尿病诊断标准，除外心、肺、肝脏疾患，各种怠慢性感染性疾病、非糖尿病性肾脏疾患、胶舔性疾病及肿瘤，且在近期无糖尿病酮症酸中毒及其他急性并发症。

依据２４ｈ尿白蛋白排泄率（ＵＡＥＲ）将ＤＭ患者分为３组：（１）Ａ组（正常白蛋白尿组）．ＵＡＥＲ＜２０ＩＸｇ／ｍｉｎ，２７例（男１４例，女１３例）。

（２）Ｂ组（微曩自蛋白尿组），ＩＵＡＥＲ２０、２００ｐｇ／ｍｉｎ。

１８例（男ｌＯ例，女８例）。

（３）Ｃ组（大量白蛋白尿组），ＵＡＥＲ＞２００扯ｇ／ｍｉｎ，１２例（男７例，女５例）。

正常对照组：选取门诊健康查体者１８例（男９蜘，女９例），无ＤＭ、心脑血管病、肝肾疾病，无ＤＭ家族史。

空腹及铤后２小时血糖均在正常范围内。

分别应用酶联免疫分析法（ＥＬＩＳＡ）检测各组血清删Ｐ一２、ＴＧＦ—Ｂ１、Ｃ。

，以免疫比浊法检测ＵＡＥＲ。

统计学处理所有数据以均数±标准差（－Ｘ＋Ｓ）表示，应用ＳＰＳＳＩＯ．０软件进行数据处理。

组间差异采用方差分析，变量之间相互关系用相关分析，一个因变量与多个自变量之间的线性依存关系分析用多元逐步回归分析。

非正态分布变量经对数变换后分析。

结果血清涮Ｐ一２在Ａ组、Ｂ组和ｃ组较Ｎｃ组显著降低（Ｐ＜０．００１），Ｃ组较Ａ组降低明显（Ｐ＜Ｏ．０１）。

血清ＴＧＦ一８ｌ浓度Ａ组、Ｂ缎及ｃ组均较Ｎｃ组显著升高（Ｐ＜Ｏ．００１），Ｃ组较Ａ组升高明显（Ｐ＜Ｏ．００１）。

血清Ｃｗ浓度Ｂ、Ｃ组明显高于其他两组（Ｐ＜Ｏ．００１），ｃ缎又较Ｂ组升离显著（Ｐ＜Ｏ．０１）。

结论血清删Ｐ一２、ｌＧ卜Ｂ１可能参与ＤＮ的发生发展。

关键词基质金属蛋白酶一２：转化生长因子１３ｌ；Ｉ＼，型胶原；糖尿瘸肾病２Ｃｌｉｎｉｃａｌｓｔｕｄｙｏｆｓｅｒｕｍｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ一９ａｎｄｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－１３１ｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｉｃｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙＬＩＺｈｅｎ－ＺＵＯ．ＴａｉｓｈａｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｔａｉａｎ，Ｃｈｉｎａ２７１０００ＡＢＳＴＲＡＣＴＯｂｊｅｃｔｉＶＯＴｏｓｔｕｄｙｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｏｆｓｅｒｕｍｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ・９，ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－ｔ３１，ｔｙｐｅＩＶｃｏｌｌａｇｅｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓａｎｄｕｒｉｎｅａｌｂｕｍｉｎｅｘｃｒｅｔｉｏｎｒａｔｅｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ５７ｃａｓｅｓｗｉｍｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｕｒｉｎｅａｌｂｕｍｉｎｅｘｃｒｅｔｉｏｎｒａｔｅ：Ａｇｒｏｕｐ（ｎｏｒｍｏａｌｂｕｍｉｎｕｒｉａ）’Ｂｇｒｏｕｐ（ｍｉｃｒｏａｌｂｕｍｉｎｕｒｉａ）ａｎｄＣｇｒｏｕｐ（ｍａｃｒｏａｌｂｕｍｉｎｕｄａ）．ＳｅｒｕｍＭＭＰ－２，ＴＧＦ－１３１ａｎｄＣⅣｌｅｖｅｌＷｅｒｅＤｌｅａｓｉｌｒｅｄｉｎａｌｌｅａｓｅｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＳｅｒｕｍＭｌｖｌＰ－２ｉｎＡ。

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与发达国家相比，我国糖尿病发病率虽不算高，但由于人口众多，糖尿病患者的绝对数以居世界前列。

据统计我国糖尿病患病率已超过总人口的２．５％。

糖尿病肾病（ＤＮ）是常见的糖尿病慢性微血管并发症，是导致慢性肾功能不全的常见原因之一。

ＤＮ引发的终末期肾功能衰竭（ｅｎｄ—ｓｔａｇｅｒｅｎａｌｆａｉｌｕｒｅ，ＥＳＲＦ）正在成为威胁糖尿病患者生命的主要原因。

据美国２０００年统计，每年ＥＳＲＤ患者中幽ＤＮ引发的已近５０％。

近几年在我国经济较发达地区统计资料发现ＤＮ所致ＥＳＲＤ的比例达１５％左右。

因此有效控制ＤＮ的发病率和疾病进展是当前临床治疗学上重要的课题“１。

其主要病理改变是肾小球毛细血管基底膜增厚和以肾小球系膜区为主的细胞外基质积聚，最终导致弥漫性或结节性肾小球硬化。

Ｉｖ型胶原（ｃ。

）是糖尿瘸肾病（ＤＮ）时细胞外基质（ＥＣＭ）增殖的主要部分。

金属蛋白酶（删Ｐｓ）在基质降解中起主要作用。

ＭＭＰ一２是降解Ⅳ型胶原的主要删Ｐ。

转化生长因子６１（ＴＧＦ－Ｂ１）可通过刺激胶原ｍＲＮＡ的表达，抑制Ｍ归的合成，促进系膜细胞（Ｍｃ）合成和分泌ＥＣＭ，抑制ＥＣＭ降解，加速ＤＮ的形成。

目前国内外关于ＭＭＰ－２和ＴＧＦ—Ｂｌ的研究主要集中于两个方面：一方面，体外大鼠系膜细胞（№）高糖培养；另一方面，制作糖尿病动物模型肾组织标本。

检测ＭＭＰ一２、ＴＧＦ－Ｂｌ表达及其活性水平变化。

研究表明高糖使搬Ｐ一２ｍＲＮＡ转录减少或增加，活性降低，而ＴＧＦ—Ｂ１合成分泌增加。

国内检测糖尿病患者血清ＭＭＰ一２水平尚未见报道，检测ＴＧＦ～Ｂｌ的报道亦较少。

本研究根据２４小时尿自蛋白排泄率对糖尿病肾瘸进行分期，探讨血清删Ｐ一２、ｃ。

和ＴＧＦ一８Ｉ与尿自蛋白排泄率的关系。

’材料与方法、研究对象２型糖尿病组：选取附属医院内分泌科２型ＤＭ患者５７例，诊断符合１９９８年ＷＨＯ糖尿病诊断标准，除外心、肺、肝脏疾患，各种急慢性感染性疾病、非糖尿病性肾脏疾患、胶原性疾病及肿瘤，且在近期无糖尿病酮症酸中毒及其他急性并发症。

依据２４ｈ尿白蛋白排泄率将ＤＭ患者分为３组：（１）Ａ组（正常白蛋白尿组），ＵＡＥＲ＜２０Ｐ－ｇ／ｍｉｎ，２７例（男１４例，女１３例）。

（２）Ｂ组（微量自蛋白尿组），ＵＡＥＲ２０“２００９９／ｍｉｎ，１８例（男ｌＯ例，女８例）。

（３）Ｃ组（大量白蛋白尿组），ＵＡＥＲ＞２００ｐｇ／ｍｉｎ，１２例（男７例，女５例）。

正常对照组：选取门诊健康查体者１８例（男９例，女９例），无ＤＭ、心脑姐管病、肝肾疾病，无ＤＭ家族史。

空腹及餐后２小时血糖均在正常范围内。

二、主要试剂、仪器设备（一）主要试剂糯Ｐ一２酶联免疫试剂盒，购自上海森雄生物公司Ⅳ型胶原酶联免疫试剂盒，购自上海森雄生物公司ＴＧＦ—Ｂ１酶联免疫试剂盒，购自北京晶美生物工程有限公司（二）主要仪器设备美国ＭＯＤＥＬ５５０酶标仪日立７０６０全自动生化分析仪挪威ＮｙｃｏＣａｒｄＲｅａｄｅｒＩＩ多功能全定量金标枪测仪三、研究方法（一）标本采集所有受试者准确留取２４小时尿．免疫比浊法检溯尿自蛋白排泄率。

于空腹抽肘静脉血４ｍｌ，离心，分离血清，立即测血糖、甘油三酯、胆固醇、高密度脂蛋白、肌酐，备份血清放置于一２０＂Ｃ冰箱中保存，以备酶联免疫法检测ＭＭＰ一２，ＴＧＦ一８１，ｃ。

（二）检测方法１、尿白蛋白排泄率的检测：全自动生化分析仪免疫比浊法２、空腹、餐后２ｈ血糖检测：美国强生ＯｎｅＴｏｕｃｈＩＩ型血糖仪测定３、Ｈｂｈｌｃ采用挪威ＮｙｅｏＣａｒｄＲｅａｄｅｒＩＩ多功能全定量金标检测仪检测４、甘油三酯、胆固醇、高密度脂蛋阻肌酐、尿素氮检测：采用全自动生化分驴析仪５、血清ＭＭＰ一２，Ｃｌｖ检测：ＥＬＩＳＡ法（１）建立标准曲线：设标准孔八孔，每孔中各加入样品稀释液１００ｐ１，第’“ｉＬ）ＪＨ标准品１００ｐ－１，混匀后用加样器吸出１００ｖ－ｉ，移至第－－：孑Ｌ。