椰子SSR-PCR反应体系的优化

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ＡｃｔａＡｇｒｉｃｕｈｕｒａｅＪｉａｎｇｘｉ
椰子ＳＳＲ－ＰＣＲ反应体系的优化
周丽霞
（中国热带农业科学院椰子研究所／海南省热带油料作物生物学重点实验室，海南文昌５７１３３９）
摘
要：为进一步开发利用椰子种质资源和开展 Baidu Nhomakorabea子标记辅助幼苗早期筛选及遗传育种工作，采用Ｌ。（３）正交试验
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｆｕｒｔｈｅｒｕｔｉｌｉｚｅｃｏｃｏｎｕｔ（Ｃｏｃｏｓｎ眦ｉｆｅｒａ）ｇｅｒｍｐｌａｓｍｒｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄｔｏｄｅｖｅｌｏｐｍａｒｋｅｒ — ａｓｓｉｓｔｅｄｓｅｅｄｌｉｎｇｓｃｒｅｅｎｉｎｇａｈｄ￣ｅｎｅｔｉｃ。ｂｒｅｅｄｉｎｇ，ｗｅｅｘｐｌｏｒｅｄｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍＳＳＲ— ＰＣＲｒｅａｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｆｏｒｃｏｃｏｎｕｔｂｙａｄｏｐｔｉｎｇＬｑ（３）ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ
ｍｍｏｌ／Ｌ，ｄＮＴＰ２５０ｉｘｍｏｌ／Ｌ，Ｔａｑｅｎｚｙｍｅ０．５Ｉｘｍｏｌ，ｐｉｍｅｒｒ０．５￣ｍｏｌ／Ｌ，ａｎｄａｎｎｅａｌｉｎｇｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ５８ ℃ ．Ｕｎｄｅｒｔｈｅ
ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｔｈｉｓｓｙｓｔｅｍ，ｔｈｅｂａｎｄｓｏｆＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｗｅｒｅｔｈｅｃｌｅａｒｅｓｔ．Ｔｈｕｓ，ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｉｓｓｔｕｄｙｌａｉｄｔｈｅｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｒｆｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｅｓａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆｃｏｃｏｎｕｔｇｒｏｕｐｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｇｅｒｍｐｌａｓｍｒｅｓｏｕｒｃｅａｂｕｎｄａｎｃｅ，ｇｅｎｅｍａｐｐｉｎｇａｎｄｇｅｎｅｔｉｃｂｒｅｅｄｉｎｇ
关键词：椰子；正交设计；ＳＳＲ — ＰＣＲ；体系优化中图分类号：￥６６７．４文献标志码：Ａ文章编号：１００１ — ８５８１（２０１７）０４－００３６ — ０４
ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＳＳＲ— ＰＣＲＲｅａｃｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍｆｏｒＣｏｃｏｎｕｔ（Ｃｏｃｏｓｎｕｃｉｆｅｒａ）
ＺＨＯＵＬｉ－ｘｉａ
（ＣｏｃｏｎｕｔＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＴｒｏｐｉｃａｌＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ／ＨａｉｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＴｒｏｐｉｃａｌＯｉｌＣｒｏｐＢｉｏｌｏｇｙ，Ｗｅｎｃｈａｎｇ５７１３３９，Ｃｈｉｎａ）
江西农业学报
２０１７，２９（４）：３６～３９
ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｘｎｙｘｂ．ｃｏｍ
ＤＯＩ：１０．１９３８６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｘｎｙｘｂ．２０１７．０４．０８
０．５ｔｘｍｏｌｆＬ、退火温度５８，在该体系条件下，ＰＣＲ扩增条带最为清晰，该反应体系的优化，为今后应用ＳＳＲ标记技术为
椰子群体结构分析、种质资源丰富度、基因定位和遗传育种等研究奠定工作基础。
设计，探索了椰子ＳＳＲ．ＰｃＲ的最佳反应体系。通过对模板ＤＮＡ、Ｍｇ、ｄＮＴＰｓ、Ｔａｑ酶、引物、退火温度的筛选优化，建立
了椰子ＳＳＲ— ＰＣＲ最佳反应体系（１０）为：模板ＤＮＡ６０ｎｇ、Ｍｇ２．５ｍｍｏｌ／Ｌ、ｄＮＴＰ２５０ｔｚｍｏＬ／Ｌ、Ｔａｑ酶０．５Ｉｘｍｏｌ、引物
ｔｕｒｅ，ｔｈｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄＳＳＲ— ＰＣＲｒｅａｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ（１０ｔｘＬ）ｆｏｒｃｏｃｏｎｕｔｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄａｓｆｏｌｌｏｗｓ：ｔｅｍｐｌａｔｅＤＮＡ６０ｎｇ，Ｍｇ “２．５
ｔｅｓｔｄｅｓｉｇｎ．ＴｈｒｏｕｇｈｔｈｅｓｃｒｅｅｎｉｎｇａｎｄｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｅｍｐｌａｔｅＤＮＡ，Ｍｇ，ｄＮＴＰｓ，Ｔａｑｅｎｚｙｍｅ，ｐｒｉｍｅｒａｎｄａｎｎｅａｌｉｎｇｔｅｍｐｅｒａ —