DNA的粗提取与鉴定 (2)

专题五ＤＮＡ和蛋白质技术
课题一ＤＮＡ的粗提取与鉴定
出题人：冯铁焕审核：高三生物备课组时间:2015.11.5
实验原理与补充
1. DNA在NaCl溶液中的溶解度是随NaCl的浓度变化而改变的。

DNA在
0．14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低，据此可使溶解于NaCl溶液中
的DNA析出。

2.DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些物质可以溶于酒精溶液，据此可提取
杂质较少的DNA。

3.预冷的乙醇溶液具有以下优点。

一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；
二是降低分子运动，易于形成沉淀析出；三是低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。

??蓝色（用于DNA的鉴定） 4.DNA＋二苯胺??
5.提取DNA还可以利用DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理。

利用该原理时，应选用怎样的酶和怎样的温度值？
蛋白酶，因为酶具有专一性，蛋白酶只水解蛋白质而不会对DNA产生影响。

温度值为60～80℃，因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。

6.洗涤剂在提取DNA中有何作用？
洗涤剂作用于细胞膜上的蛋白质，从而瓦解细胞膜。

7.当鉴定提取出的物质是否是DNA时，需要使用什么指示剂进行鉴定？
在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈现蓝色。

原理总结：通过利用不同浓度NaCl溶液溶解或析出DNA，可以从细胞中提取和提纯DNA；再利用酒精进一步将DNA与蛋白质分离开来，达到提纯的目的；最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是DNA。

实验材料的选取
在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。

本实验用鸡血细胞做实验材料有两个原因。

一是因为鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。

鸡血细胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，所以在提取过程中为了减少DNA的损失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液。

实验步骤
1．材料制备
0.1G/ml柠檬酸钠烧杯→玻璃棒搅拌→1000r/min离心2min→吸去上清液→
活鸡血即得鸡血细胞液（也可将上述烧杯置于冰箱中，静置一天使鸡血
细胞自行沉淀）沸水浴。