总结总、直接胆红素的检测方法
检验科生化直接胆红素测定的标准操作规程
直接胆红素测定的标准操作规程【目的】体外检测血清直接胆红素（DBIL）的含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理钒酸盐胆红素胆绿素PH3.0测定钒酸盐作用前后吸光度差异，可求标本中直接胆红素的浓度。
二、试剂1.试剂本科使用北京利德曼生化股份有限公司DBiL试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：2.校准要求使用去离子水与校准品两点定标，详见说明书；正常情况下，应每两周对测定进行一次校准。
三、操作测定（试剂准备液体试剂，直接使用，无需配制。
）四、计算DBIL=校准液（△A=A2-A1）×(△A标准/△A校准)五、质控程序1.建议采用朗道水平2(正常范围质控）和水平3（病理范围质控）两个水平的血清进行室内质控。
2.可接受性判断质控物的检测值应在给定质控范围，或可以通过参加卫生部室间质评对实验室的运作情况进行系统评估。
3.质控操作每日进行样本检测之前首先应进行质控操作，以考察系统的在控情况。
如果检测结果符合质控要求则进行样本操作；如果不符合质控要求，则应重复质控操作，以排除可能发生的偶然误差；如果仍不符合质控要求，则应考虑质控品的重新准备、试剂的重新校准或更新、仪器的维护等。
生化检测项目
生化检测项目肝功能#1．总胆汁酸TBA 检测方法：速率法2．前白蛋白PA 检测方法：速率法-----在生化仪上检测结果不好，正常是用特种蛋白仪检测3．腺苷脱氨酶ADA 检测方法：速率法-----在生化仪上检测结果不好，试剂非常贵，建议不做。
4．α-L-岩藻糖苷酶AFU 检测方法：速率法-----在生化仪上检测结果不好，试剂非常贵，建议不做。
5．5′-核苷酸酶5′-NT 检测方法：速率法-----在生化仪上检测结果不好，试剂非常贵，建议不做。
#6．总胆红素TBIL-----钒酸盐法试剂试剂稳定性好，但结果稳定性不好检测方法：终点法-----重氮法试剂试剂稳定性不好，但结果稳定性好检测方法：终点法#7，直接胆红素DBIL-----钒酸盐法试剂试剂稳定性好，但结果稳定性不好检测方法：终点法-----重氮法试剂试剂稳定性不好，但结果稳定性好检测方法：终点法#8。
谷丙转氨酶ALT 检测方法：速率法#9。
谷草转氨酶AST 检测方法：速率法#10。
γ-谷氨酰基转移酶GGT 检测方法：速率法#11。
碱性磷酸酶ALP 检测方法：速率法#12。
胆碱酯酶CHE 检测方法：速率法#13。
总蛋白TP 检测方法：终点法#14。
白蛋白ALB 检测方法：终点法血糖#1。
葡萄糖GLU 检测方法：终点法2。
糖化血清蛋白/果糖胺/糖化血红蛋白要用专仪器做。
生化仪做不准。
血脂#1。
甘油三酯TG 检测方法：终点法#2。
总胆固醇CHO 检测方法：终点法#3。
高密度脂蛋白胆固醇HDL 检测方法：终点法#4。
低密度脂蛋白胆固醇LDL 检测方法：终点法#5。
载脂蛋白A1 APoA1 检测方法：终点法#6。
载脂蛋白B APoB 检测方法：终点法7．脂蛋白a LP(α）检测方法：终点法-----在生化仪上检测结果不好，正常是用特种蛋白仪检测肾功能#1。
肌酐CREA------苦味酸的试剂，检测方法：固定时间法------酶法的试剂，检测方法：终点法#2。
胆红素指标的解读
胆红素指标的解读使用干化学法检测胆红素，可以提供总胆红素(TBIL)、结合胆红素(Be)、未结合胆红素(Bu)、6胆红素(DELB)、新生儿胆红素(NBIL)、直接胆红素(DBIL)等指标。
以下是对胆红素指标的解读。
TBIL：血液中总的胆红素，包含胆红素的所有组分，TBTL的升高表明黄疸的存在，但单凭TBTL不能了解黄疸的形成原因。
Bu：可认为是肝前性的胆红素，是尚未被肝细胞摄取进行葡萄糖醛酸化的胆红素，导致Bu的升高原因有肝前性(胆红素生成增多，如溶血等)和肝细胞性(肝细胞摄取Bu障碍或胆红素葡萄糖醛酸化过程受阻等)的原因。
Be：可认为是肝细胞性或肝后性胆红素，是被肝细胞摄取并完成葡萄糖醛酸化的胆红素，生理情况下，Be形成后，即通过肝胆系统排泌。
生理状态下，Be不应出现在血液中，只有在Be排泌受阻的情况下，Be才可能出现在血液中。
所以，通常情况下，Be结果为0, Be升高意味着肝细胞功能受损或胆汁排泌受阻。
6胆红素(DELB)：生理状态下，血液中不存在6胆红素，如果Be排泌受阻，导致血液中Be升高，Be浸泡在白蛋白的环境中发生酶促反应，白蛋白置换Be所结合的葡萄糖醛酸，最终生成6胆红素，其半衰期与白蛋白的半衰期相同。
5胆红素的作用在于指示梗阻的治疗效果，当梗阻排除后，Be迅速下降，TBIL也随之下降，而6胆红素浓度则在一定时间内保持不变，所以DELB与TBIL的比值表现为上升。
如果胆红素的各组分出现上述变化，则表明梗阻治疗成功。
由于DELB=TBIL-(Bu+Bc),因此，要检测DELB,必须要先检测TBIL、Bu和Be。
NBIL：其实就是总胆红素，新生儿Bu比正常人高得多，由于无法避免的光照作用的影响，利用传统的重氮试剂法检测出的总胆红素要比实际浓度低得多，而用干化学法检测，用Bu+Bc的结果代表新生儿胆红素，则可以明显纠正上述误差。
DBIL：直接胆红素，生理情况下，DBIL与Be相当；病理情况下，DBIL为Be与6胆红素之和。
直接胆红素J检测标准操作规程
14.参考文献
14.1《全国临床检验操作规程》
14.2《试剂使用说明书》
14.3《校准品使用说明书》
14.4《临床生物化学检验质量管理与操作规程》
直接胆红素
1.目的
规范直接胆红素（D-BIL)测定的操作程序，确保直接胆红素测定结果准确。
2.检验方法
化学氧化法(终点法）
3.检验原理
直接胆红素在间胆抑制剂硫脲表面活性剂曲拉通X-100存在下，被亚硝酸钠氧化，生成胆绿素，测定450nm吸光度的减小与直接胆红素的浓度成正比。
胆红素=胆绿素
4.临床意义
11.检验结果的解释
仪器加样针、比色杯、管路等未清洗干净时可能对试验结果产生影响。
反应曲线异常时需进行确认，干扰物质超出限度时需进行确认。
高度溶血可导致结果偏高。
12.检验方法的局限
12.1干扰物质：维生素C≦30mg/dl、甘油三酯≦2000mg/dl、血红蛋白<0.2g/l时对测定无影响
12.2直接胆红素测定只是临床医师对患者进行诊断的指标之一，临床医师还要根据患者的体征、病史及其他的诊断项目、诊断手段进行综合判断。
1×5ml
8.4用途
校准品与宁波美康生物科技有限公司生产的直接胆红素检测试剂盒及全自动生化分析仪配套使用，用于上述检测系统进行这些项目的校准。
8.5主要组成成分
校准品组成成分为非人源性。
校准品中的直接胆红素活性成分浓度具有批特异性，准确浓度见随附的数值表或说明书反面。
三羟甲基氨基甲烷0.1mol/L，二硫苏糖醇0.25g/L,防腐剂1g/L
6.检测仪器
日立7180全自动生化分析仪，使用具体要求和校准程序详见《仪器操作规程》。
两种胆红素测定方法在生化分析仪上的比较
胆红 素是我 们在临 床工 作中最 常测 定的 指标之 一，其 能够较好 地反映 被检 测者 的肝功 能，对 疾病的诊 治具有 重要 的意 义。目 前，多 数检验科 室都使 用改 良 J- G 法测定 胆红 素，但 是， 该种 检测 方法 容易受 到其他 一些因素 的影响 ，从 而使 得检测 结果具 有较大的 误差， 对临 床的 诊治产 生一定 的影响。 随着科 学技 术的 不断发 展，医 疗设备也 正在快 速的 进步 和发展 ，临床 中测定血 清胆红 素方 法也 越来越 多，选 择一种更 为合适 的检 测方 法变得 越来越 重要。为 此，本 研究 用 改良 J- G法 和钒 酸盐氧 化法 分别 对血 清总 胆红素(TBI)和血清 直接胆红素 (DBI) 进行测定，现报告如下。
正 常 、 直接 胆 红 素 ＞7.0 mmol/L 50 例 ； 其中脂 血标 本在 50 例，总 胆固 醇(TC)＞ 7.76 mmol/L， 甘 油 三 酯 (TG) 正 常 者 20 例 ， TC 正 常 ， TG＞4.5 mmol/L 10 例 ， TC＞7.76 mmol/L， TG＞4.5 mmol/L 10 例，溶血标本 20例，轻度溶血标本 10 例。
方法：在日立- 7600 全自动生化分析 仪上 根 据各 试剂 要示 设 置通 道和 参数 。 用钒 酸盐法 和改 良 J- G法 进行测 定。 并 进行统计学分析。
结果 对结果 进行统 计学处 理， 回归方 程
Y=0.993χ- 0.363， 相 关系 数 γ =0.9989， 配对 t 检 验 ，t=0.602，P＞0.05，两 法 结 果差异无统计学意义，见表 1。
资料与方法 材料：①仪器：日立- 7600全自动生
化 分 析仪 。 ②试 剂 ： 改良 J- G 法 试 剂， 潍坊 3V生产。钒酸盐氧 化法试剂，上海 科华 生产。 ③标准 ：朗道校 准液， 朗道 质 控 液 ， 各 试 剂 盒 配套 标 准 液 。 ④ 对 象： 我院门 诊患者 以钒酸盐 法测定 结果 为 标 准 ， 分 为 5 组 ： 总 胆 红 素 (2.5～ 366.2 mmol/L)50 例； 总胆 红 素正 常、 直 接 胆红 素＜7.0 mmol/L 50 例 ；总 胆红 素
胆红素分类、检测办法及直接胆红素与结合胆红素区别和应用
胆红素分类、检测办法及直接胆红素与结合
胆红素区别和应用
胆红素包括直接胆红素、间接胆红素、结合胆红素、非结合胆红素、δ胆红素等等。
检测胆红素方法包括湿化学法，干化学法、其他。
比较常用是重氮反应法和干化学法。
直接胆红素：在检测中可以与重氮磺胺酸直接反应的胆红素。
间接胆红素：需要加入加速剂（苯丙酸钠、甲醇、安息香酸钠）等破坏其氢键再与重氮磺胺酸反应的胆红素。
结合胆红素：是指胆红素经肝脏极性转化后与葡萄糖醛酸结合的水溶性胆红素（Bc）。
Bc又分为单葡萄糖醛酸结合胆红素（mBc）和双葡萄糖醛酸结合胆红素（dBc）。
非结合胆红素（Bu）：是以白蛋白为载体的脂溶性游离胆红素。
δ胆红素（DELB）：δ胆红素是一种与白蛋白以酰胺键共价结合不可分解的胆红素，具有良好稳定性，半衰期在17-23天。
直接胆红素可以溶于水的胆红素，但少量游离胆红素也可以参加直接反应，少量游离胆红素的氢键被破坏也会参加重氮反应。
重氮反应中：直接胆红素=结合胆红素（Bc）+大部分δ胆红素（DELB）+少量非结合胆红素（Bu）
结合胆红素（Bc）=mBc+dBc
间接胆红素=非结合胆红素。
检测胆红素的方法
检测胆红素的方法
检测胆红素的方法有多种，常见的方法包括：
1. 血清总胆红素测定：通过检测血液中的总胆红素含量来评估胆红素水平。
此方法常用于评估黄疸的严重程度。
2. 血清直接胆红素测定：血液中的直接胆红素主要来自于肝脏的代谢作用，直接胆红素测定可以评估肝脏功能。
3. 尿液胆红素测定：尿液中的胆红素通常与黄疸有关，通过检测尿液中胆红素的浓度可以评估肝脏或胆道系统的功能。
4. 新生儿血清胆红素测定：用于评估新生儿黄疸的程度，通常通过脚底或掌心的皮肤颜色变化来评估。
5. 胆红素结合能力测定：通过检测血液中胆红素的结合能力来评估肝脏功能和胆红素代谢能力。
以上方法常用于临床胆红素的检测，具体使用哪种方法需要根据患者情况和医生的判断来决定。
胆红素测定
胆红素的分类
（2）结合胆红素(Bc) ：与葡萄糖醛酸基结合， 具亲水性，与重氮试剂直接反应，又称直接 胆红素。占总胆红素的1/5。
黄疸分类
根据总胆红素的浓度 隐性黄疸:总胆红素17.1~34.2µmol/L。 显性黄疸:总胆红素大于34.2µmol/L。
注：TB 17.1µmol/L(2mg/dL)
解。 （2）约10%~20%来自于组织中非Hb的血红素，如肝中
释放的的血红素等。 （3）极少部分是由于骨髓造血过程中，生成的Hb或血红
素，以及少量未成熟RBC的分解（无效造血）产生的 血红素。
胆红素的分类
（1）未结合胆红素(Bu)：未与葡萄糖醛酸基结 合，具亲脂性，须加入加速剂破坏分子内部的 氢键后才能与重氮试剂反应，又称间接胆红素。 占总胆红素的4/5。
实验八
胆红素测定 ( 改 良 J – G 法)
实验目的
掌握总胆红素和直接胆红素 (改良J-G法)的测定原理，参考值范 围，注意事项。
胆红素测定作用
反 映 肝 脏 的 分 泌 与 排 泄 功 能。
胆红素的来源
Hb分解释放的血红素为胆红素的直接来源。 （1）约70%~80%是由衰老的RBC破坏、释放出的Hb分
DBil测定原理(改良J-G法)
血清中的DBi在强酸环境中，与重氮对氨基苯磺 酸反应,生成有色偶氮胆红素, 通过测定550nm处吸 光度值的变化，即可计算出样本中DBi的浓度。
TB测定原理(改良J-G法)
血清中的结合胆红素在强酸环境中与重氮 对氨基苯磺酸反应,生成有色偶氮胆红素,非 结合胆红素在表面活性剂的作用下,也能进行 这样的反应,通过550nm比色,计算其含量。
试剂组成 试剂A
试剂B
试剂
总胆红素和直接胆红素间接胆红素标准值
总胆红素和直接胆红素间接胆红素标准值总胆红素和直接胆红素是体内代谢产物，通过血液检查可以了解肝功能和胆道系统的健康情况。
在临床中，总胆红素和直接胆红素的标准值对于诊断和治疗胆道疾病具有重要意义。
本文将从总胆红素和直接胆红素的定义、功能、正常值范围以及异常水平等方面进行全面评估，以便您能够深刻理解它们的意义。
1. 总胆红素和直接胆红素的定义和功能总胆红素（Total Bilirubin）是红细胞分解产物，在脾脏被巨噬细胞摄取并分解，生成黄疸胆红素。
黄疸胆红素经过肝脏的代谢和转运过程，一部分转化为直接胆红素（Conjugated Bilirubin），与胆汁一起经过胆管排泄到肠道，从而完成体内胆红素的代谢循环。
总胆红素和直接胆红素的检测可以评估肝脏功能、胆道系统状况和溶血等方面的问题。
肝脏是体内胆红素的主要代谢器官，正常的肝功能可以使总胆红素在体内正常代谢、转运和排泄。
而胆道系统的阻塞、疾病或损伤会导致直接胆红素增加。
2. 总胆红素和直接胆红素的正常值范围在正常情况下，总胆红素的正常值范围是3.4~20.5μmol/L，而直接胆红素的正常值范围是0~4.3μmol/L。
这些数值可能会因不同的实验室和测量方法而有所不同，因此请参考您所在实验室提供的标准值范围。
3. 总胆红素和直接胆红素异常水平的意义当总胆红素或直接胆红素的水平超出正常范围时，可能存在一些健康问题。
以下是一些常见的异常情况及其可能的原因：- 高总胆红素和高直接胆红素：这可能是肝炎、肝硬化、胆道结石、胆管梗阻或胆道癌等疾病的征兆。
溶血性贫血和药物性肝损伤等情况也可能导致总胆红素和直接胆红素的升高。
- 高总胆红素和正常直接胆红素：这可能是非胆汁淤积性黄疸的表现，如Gilbert综合征，一种常见的遗传性疾病。
- 高总胆红素和低直接胆红素：这可能是溶血性贫血或药物性肝损伤等原因导致的结果。
- 正常总胆红素和高直接胆红素：这可能是胆囊炎、胆管炎或其他胆道系统问题的征兆。
硝酸氧化法测定血清总胆红素和直接胆红素
６１ ８
Ｍ０ ｅＴ Ｐ ａ ｔ ａ ｄ ｃ ｎ 。Ｎｏ ｅ ｅ ０ ２，Ｖｏ ． ４，Ｎｏ １ ｄ １ｌ ｒ ｃ ｉ ｌＭｅ ｉｉ ｅ ｃ ｖ ｍｂ ｒ２ ０ １１ ． １
・
检验技术 ・
硝 酸 氧化 法 测 定 血清 总胆 红 素 和 直 接 胆 红素
的试 剂 的稳 定 性 不够 ， 红 素氧 化 胆
２ ２ 测定方 法 ．
． ． 试 法的酶试 剂 成 本 昂 贵 ， 钒 酸氧 化 法 ２ ２ １ 测 定 总 胆 红素 的生 化 分析 仪 之 间的 ６种 浓度 ， 剂其 它浓 度 不变 。 而 中的钒酸 （ 强氧化剂 ） 对仪 器存在潜 在 程序参数 终 点法 ， 波长 为 ４ ５ 主） 在测定 直接 胆红素 时 ， Ｅ Ｔ － ａ ４（ ／ 当 Ｄ Ａ Ｎ ｚ低
４（ 反应 温 度为 ３ ￣ 标本 ８ ， 浓度 时一 部 分 游 离胆 红 素 也 被 氧化 ， ７Ｃ， 的携带 污 染 。我 们 发 展 的硝 酸 氧 化 ５ ８ 次）， ４ 试 ０ 第 ． ｍｏ ／ 法 ， 优 点 是 硝 酸钠 终浓 度 仅 为 ｌ － 试剂 Ｉ２０ ， 剂 Ⅱ ６ ， 一 试 剂 在 ０ ５～２ｍ ｌＬ反应的灵敏度一致 ， 其 ｍ ０ｓ第 ｍｏ ／ ￣ ｍ ｌＬ， ｏ ／ 对仪 器 的携 带 污染 甚 微 ， 剂 反应时 间 为 ３ ０ ， 二试 剂 反 应 时 间 ＞２ｍ ｌＬ浓 度时试 剂在 ４Ｃ保存 时 试 ０ ｓ单 ｐｎ ｌＬ 双 Ｄ Ａ Ｎ ２析 因此选 择应 用试 剂 中 稳定性 好 ， 合 各 种类 型 的 自动 分 析 的 ３ ０ ， 位 ： ａｏ／ ， 试剂 容 量 校 Ｅ Ｔ － ａ 出 ， 适 仪 。现报 告如下 。
３ 实 验 结 果
直接胆红素操作程序
直接胆红素操作程序1.目的规范直接胆红素（DBIL）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2．范围本操作规程适用于生化室工作人员、实习人员、进修人员的操作前培训。
3.术语4．测定原理4．1测定方法：重氮法4．2 测定原理：对氨基苯磺酸+HCl+NaNO2→氯化重氮苯磺酸+NaCl直接胆红素+氯化重氮苯磺酸→偶氮胆红素（红紫色）其在546nm处的吸光度与血清直接胆红素的生成量成正比。
5．标本5．1标本种类：新鲜无溶血血清。
5．2标本采集：见生化标本采集程序。
6．试剂6．1试剂来源：和光试剂。
6．1．1组成包装规格：R1 540ml×4 R2 135ml×46．1．2试剂准备试剂为液体双试剂，无需配制,开瓶即可使用，用后及时置于2～8℃避光保存。
6．1．3试剂稳定性新打开原装试剂在2～8℃避光保存，稳定期12 个月。
试剂开瓶载机2～8℃稳定30天。
7.仪器参数设定AU2700参数设定：和光试剂仪器参数设定参见试剂厂家提供的试剂参数说明书。
8．校准8．校准：具体参见临床生化校准程序8.1 校准条件：8.1.1仪器光路系统经过光路保养或更换光源等重要部件后。
8.1.2仪器经过大保养后。
8.1.3挪动仪器的安装地点。
8.1.4更换试剂批号。
8.1.5室内质控失控。
8．2 AU2700和光试剂系统的校准：8.2.1 准备：和光配套胆红素校准物.8.2.2 保存和稳定性：原校准品在2～8℃保存至有效期，1ml蒸馏水复溶，复溶后在2～8℃可保存7天。
8.2.3保存位置：低温冰箱-20℃。
8.2.4操作步骤：蓝色样本架的1号位置放蒸馏水；黄色样本架的9号位置放和光配套胆红素定标液→仪器主画面[USER] →[Calibration] →[选择校准项目]→[START]→[YES]。
9．室内质控及失控纠正：见临床生化室内质控程序9．1质控物来源：柏乐液体质控（批号:45612/45613）。
9．2质控物储存条件及准备：-15～-20℃保存至有效期，从低温冰箱取出后室温平衡30分钟。
胆红素测定方法
胆红素测定方法胆红素是人体内一种重要的生化物质，它是红细胞分解代谢产物，对于人体健康具有重要的生理功能。
因此，准确测定胆红素水平对于临床诊断和治疗具有重要意义。
下面将介绍几种常见的胆红素测定方法。
一、直接胆红素测定法。
直接胆红素测定法是通过直接测定血清中的胆红素水平来判断胆红素代谢情况的一种方法。
该方法操作简单，结果准确可靠，是临床常用的一种测定方法。
二、间接胆红素测定法。
间接胆红素测定法是通过间接测定血清中的胆红素水平来判断胆红素代谢情况的一种方法。
该方法操作简单，结果准确可靠，是临床常用的一种测定方法。
三、总胆红素测定法。
总胆红素测定法是通过测定血清中的总胆红素水平来判断胆红素代谢情况的一种方法。
该方法操作简单，结果准确可靠，是临床常用的一种测定方法。
四、高效液相色谱法。
高效液相色谱法是通过高效液相色谱仪来测定血清中的胆红素水平的一种方法。
该方法操作简单，结果准确可靠，是临床常用的一种测定方法。
五、光度法。
光度法是通过光度计来测定血清中的胆红素水平的一种方法。
该方法操作简单，结果准确可靠，是临床常用的一种测定方法。
六、比色法。
比色法是通过比色计来测定血清中的胆红素水平的一种方法。
该方法操作简单，结果准确可靠，是临床常用的一种测定方法。
七、电化学法。
电化学法是通过电化学分析仪来测定血清中的胆红素水平的一种方法。
该方法操作简单，结果准确可靠，是临床常用的一种测定方法。
总结。
以上所述即为胆红素测定的几种常见方法，每种方法都有其特点和适用范围，临床医生可根据具体情况选择合适的方法进行胆红素测定。
希望本文所述内容能对相关工作者有所帮助。
直接胆红素测定的标准操作程序
直接胆红素（DBIL）测定的标准操作程序【应用范围】体外检测血清、血浆DBIL浓度测定。
【适用仪器】Olympus AU-27全自动生化分析仪。
【程序改变】严格遵循仪器、试剂说明书及校准品使用说明。
【方法学原理】在PH2.9环境中，表面活性剂和偏钒酸盐与直接胆红素作用形成胆绿素，胆红素的减少引起在波长450nm处吸光度的下降，吸光度的变化与直接胆红素的含量成正比。
【试剂】溶液A（R1）：酒石酸缓冲液PH 2. 90.1 mmol/L表面活性剂稳定剂70mmol/L溶液B（R2）:偏钒酸盐4mmol/L磷酸盐缓冲液PH7.010mmol/L稳定剂2.校准品：DiaSys TruCal U。
3.质控品：Randox Assayed Multiseral Level 1 and Level 2.【标本收集与准备】1.血清或血浆标本根据实验室标准采集程序采集标本，适用标本为血清或肝素抗凝血浆（肝素钠抗凝结果高0.5mmol/l）,不可从正在静脉滴注手臂上采血，上机标本不能有凝块，样品采集后2天内离心标本，分离血清，血清或血浆标本室温保存4天，冷藏7天，冷冻保存6个月。
【操作步骤】1. 仪器测定参数设置2. 试剂准备：将准备好的试剂置仪器试剂盘中（8C ）。
3. 校准校准物的准备：将校准物从冰箱取出，冻干校准物按说明书加入蒸馏水复溶，轻轻颠倒混匀3次，不可用力震摇，室温放置30分钟至完全溶解；液体校准物从冰箱取出，室温放置15分钟以平衡至室温。
校准物的选择尽可能选择配套仪器厂家校准品。
亦可将校准液复溶后分装保存于-20C 冰箱中，每周校准一次或更换试剂批次后进行校准。
上机校准程序：[1] 选择用户菜单USERCalibrationStart Entry 进入输入界面。
[2] 用光标键选欲校准项目，。
确认后按叵互。
⑶将校准品按屏幕显示放入绿色校准架相应位置，将校准架置入进样轨道，按▲开始。
【参考范围】血清/血浆DBIL ： 1.7-6.8 mol/L 【临床意义】D.Bil 临床上多用于黄疸的诊断和黄疸性质的鉴别。
钒酸氧化法和重氮法检测胆红素的方法学评价
钒酸氧化法和重氮法检测胆红素的方法学评价目的:寻找一种精密、准确、使用方便且特异的检测血清总(直接)胆红素的方法。
方法:对钒酸氧化法和重氮法进行方法学评价,包括精密度、线性范围、准确度、方法比较和干扰因素。
结果:两种方法检测总(直接)胆红素的精密度和准确度均符合要求,两种方法检测结果有良好的相关性(TBIL:r=0.997,DBIL:r=0.987,均符合r≥0.975)同时有极显著性差异(P＜0.01),钒酸氧化法检测直接胆红素的线性范围略窄于重氮法,但是它的精密度和准确度略优于重氮法,而且抗血红蛋白和三酰甘油干扰的能力明显强于重氮法。
结论:钒酸氧化法是一种精密、准确使用方便且特异的、值得推广的、适用于血清总胆红素和直接胆红素日常测定的方法。
标签：钒酸氧化法;重氮法;胆红素;方法学评价血清胆红素作为肝胆疾患等诊断的重要指标已广泛应用于临床[1-3],但长期以来,标本溶血对测定的干扰影响一直未能得到很好解决[4]。
目前,测定血清总胆红素(TBIL)和直接胆红素(DBIL)的方法包括重氮试剂法(如改良J-G法和M-E法等),胆红素氧化酶法和化学氧化法(如钒酸氧化法)。
重氮试剂法存在反应不专一、易受溶血和脂血干扰的弊端,使检测结果出现偏差,有时甚至出现直接胆红素高于总胆红素的错误结果,而且这种方法存在工作液不够稳定的缺点[5]。
胆红素氧化酶法由于酶试剂成本昂贵,需要有高效热稳定的酶及其促进剂﹑抑制剂,影响了其在实际工作中的应用[6]。
1993年日本学者Tokuda[7]建立了钒酸氧化法测定血清胆红素。
建立一个新的分析方法,或引进新的方法、试剂和仪器,都应对它们的技术性能如精密度、方法比较、线性范围,以及干扰等作出评价[8]。
为了寻找一种精密、准确、使用方便且特异的检测血清总(直接)胆红素的方法,本文对钒酸氧化法和重氮法进行了方法学评价,现总结如下:1 材料与方法1.1 仪器日本日立公司HITACHI 7060型全自动生化分析仪,日本东亚公司Sysmex KX-21型全自动血细胞分析仪。
【2017年整理】06血清总胆红素和直接胆红素测定
一、目的胆红素是血红蛋白的代谢产物，来源有三：（1）人体内胆红素的3/4源于循环血液中衰老红细胞崩解后所释放出的血红蛋白辅基血红素降解而产生；（2）骨髓中的红细胞原位溶血所释放的血红蛋白；（3）含卟啉的血色蛋白如肌红蛋白和其他非血红蛋白性的正铁血红素分解后产生极少量胆红素。
血红蛋白被单核-巨噬细胞系统破坏后分解成胆绿素，再还原成胆红素进入血与血浆白蛋白结合而被运转，称为非结合胆红素或间接胆红素；间接胆红素难溶于水，不能由肾脏排出而进入肝脏，受肝内葡萄糖醛酸基转移酶的作用与葡萄糖醛酸结合，形成葡萄糖醛酸酯，称为结合胆红素或直接胆红素。
结合胆红素由肝随胆汁排至肠道，被还原成粪胆原（尿胆原）再经氧化变成粪胆素（尿胆素），大部分随粪便排出体外；小部分经门脉吸收回肝，复经肝肠循环，其中一小部分进入血循环，经肾排出，称尿胆原。
当肝细胞损伤，胆管阻塞，红细胞破坏增加或寿命缩短时，胆红素代谢发生异常，临床上即出现黄疸。
二、测定方法改良J-G法三、原理血清与醋酸钠-咖啡因-苯甲酸钠试剂混合后，加入偶氮苯磺酸，生成紫色的偶氮胆红素。
其中醋酸缓冲液用以保持偶氮反应的PH，咖啡因、苯甲酸钠加速偶氮苯磺酸的偶联反应。
抗坏血酸破坏剩余偶氮试剂，终止偶氮反应。
最后加入强碱性酒石酸溶液使紫色偶氮胆红素变成蓝色偶氮胆红素，在600nm波长下比色,测定蓝色偶氮胆红素的生成量。
四、标本1、静脉抽取病人空腹血，置于洁净干燥试管或含促凝剂的真空管内。
2、采血后应立即送到检验科生化室。
3、样品收到后立即分离血清，不能及时测定的血清应于2—8℃保存。
4、溶血或脂血的标本不能测定。
五、设备及试剂1、希迈全自动生化仪。
2、上海复星长征公司胆红素试剂。
3、胆红素试剂应于2—8℃冰箱保存。
六、操作步骤1、样本的准备：将编好号的样品离心，取血清加入样品杯放到样品盘的规定位置，再把样品盘放到仪器中相应位置。
2、试剂的检查：每天测定前先检查各种试剂的数量、效期、定标等情况，确认无误后方可进行测定。
直接胆红素测定(d-bil)
1. 溶血性黄疸（肝前性黄疸பைடு நூலகம் 由于各 种原因使红细胞大量破坏，以致未结合胆红 素明显增加，超过肝脏的转化能力，但结合 胆红素正常。新生儿血脑屏障发育不全，游 离胆红素易进入脑组织，与脑部基底核的脂 类结合，将神经核染成黄色，称为核黄疸 （胆红素脑病）。
2. 阻塞性黄疸（肝后性黄疸） 由于 胆道阻塞，胆汁不能排出而淤积在胆管内， 使上端胆管内压力不断升高，最后使小胆 管和毛细胆管扩张，通透性增加，甚至破 裂，使胆汁返流入血，血中结合胆红素增 加。
3. 肝细胞性黄疸（肝源性黄疸） 由于 肝细胞病变，肝功能减退，使肝脏对胆红 素的摄取、转化和排泄作用发生障碍。一 方面肝脏不能将未结合胆红素转化成结合 胆红素，使血中未结合胆红素增加；另一 方面，病变区压迫毛细胆管，使结合胆红 素返流入血，血中结合胆红素也增加。
-——
1.5
混匀，置37 ℃水浴3min，比色（λ=578nm）读
取各管A值。
直接吸入*：吸入的量即为半自动生化分析仪设 定的吸入量，在分光光度计测定时则为此反应 的总体积量。
计算结果与临床意义
计 算：
血清直胆（μmol/l）=AU/AS×20
结果报告：略
实验参考值： 2~8μmol/l
临床意义： 血清胆红素测定对诊断黄疸和黄疸的鉴 别诊断有非常重要的意义。 溶血性黄疸 结合胆红素占总胆红素的20%以下。
肝细胞性黄疸 结合胆红素占总胆红素的35%以上。
阻塞性黄疸 结合胆红素占总胆红素的50%以上。
注意事项
样品的活性超出可测线性范围上限时，需 进行生理盐水稀释，测定结果乘以稀释倍 数。 叠氮钠能破坏偶氮试剂，终止偶氮反应， 凡用叠氮钠作为防腐剂的质控血清，可引 起重氮反应不完全，甚至不呈色。
临床常用生化检验项目参考区间 第4部分
临床常用生化检验项目参考区间第4部分（原创实用版）目录一、范围与规范性引用文件二、血清总胆红素、直接胆红素参考区间三、临床意义与应用四、检验方法与注意事项五、结论正文一、范围与规范性引用文件本文主要介绍了临床常用生化检验项目参考区间的第四部分，即血清总胆红素、直接胆红素参考区间。
本标准规定了中国成人血清总胆红素、直接胆红素的参考区间及其应用，适用于医疗卫生机构临床实验室总胆红素、直接胆红素检验结果的报告和解释。
有关体外诊断产品生产厂商也可参照使用。
本部分参考区间的规定主要依据《临床常用生化检验项目参考区间》（WS/T 404）和《卫生行业标准》（WS）。
二、血清总胆红素、直接胆红素参考区间1.血清总胆红素参考区间- 男性：5.1～21.0 μmol/L（0.3～1.2 mg/dL）- 女性：5.1～19.5 μmol/L（0.3～1.1 mg/dL）- 儿童：参考成人值，但需考虑年龄、性别、生理状态等因素2.直接胆红素参考区间- 男性：0.6～6.8 μmol/L（0.04～0.4 mg/dL）- 女性：0.6～6.8 μmol/L（0.04～0.4 mg/dL）- 儿童：参考成人值，但需考虑年龄、性别、生理状态等因素三、临床意义与应用血清总胆红素、直接胆红素是评估肝功能和黄疸程度的重要指标。
总胆红素升高可能提示肝脏损害、胆道梗阻、溶血性疾病等；直接胆红素升高可能提示肝细胞损害、胆道梗阻等。
临床实验室应按照本标准规定的参考区间进行检测和报告，并结合患者临床表现和病史进行综合分析，为临床诊断和治疗提供依据。
四、检验方法与注意事项1.检验方法：采用酶联免疫法、化学发光法、比色法等方法进行检测。
2.注意事项：- 检测前应充分了解患者的病史、临床表现和相关实验室检查结果。
- 采集血清样本时，应尽量减少红细胞破裂，避免溶血。
- 检测过程中应严格控制实验条件，避免温度、湿度等因素对结果的影响。
- 检测结果应结合其他相关实验室检查结果进行综合分析。
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医学检验·各论 直接胆红素与总胆红素
比值 内容课件模板
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简介： 计算直接胆红素与总胆红素之比值，
有助于鉴别黄疸的类型。
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临床意义： ＜0.20，见于溶血性黄疸、先天性黄
疸；0.20～0.60，见于肝细胞性黄疸和混 合性黄疸；＞0.60，常见于阻塞性黄疸。
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正常值： 0.20左右。
医学检验·各论：直接胆红素与总胆红素ERCP）、肝、胆、 脾CT检查、胆囊超声波检查、术后经T形 管胆道造影、静脉胆囊、胆道造影、逆行 胰胆管造影（ERCP）。
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血清总胆红素和直接（结合）胆红素测定
目前测定血清胆红素的方法主要有重氮试剂法（包括改良J-G法、二甲亚砜法、二氯苯重氮盐法和2，5二氯苯重氮四氟硼酸盐法等）、胆红素氧化酶法、钒酸盐氧化法、高效液相色谱法、导数分光光度法、经皮胆红素测定法以及直接分光光度法等。
改良咖啡因（J-G）法：
一、实验原理
血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，生成紫色的偶氮胆红素；在同样条件下，未结合胆红素须有加速剂破坏胆红素氢键后才能与重氮试剂反应。
咖啡因、苯甲酸钠作为加速剂，醋酸钠缓冲液可维持反应的PH值同时兼有加速作用。
叠氮钠破坏剩余重氮试剂，终止结合胆红素测定管的偶氮反应。
最后加入碱性酒石酸钠，在碱性条件下，紫色偶氮胆红素转变为蓝色偶氮胆红素，使最大吸光度由530nm转移到598nm，此时，非胆红素的黄色色素及其它红色与棕色色素产生的吸光度可忽略不计，使测定的灵敏度和特异性增加。
最后形成的绿色是由蓝色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的黄色色素混合而成。
二、实验方法
（一）器材
试管，刻度吸管，分光光度计，37℃水浴箱。
（二）试剂
1．咖啡因-苯甲酸钠试剂无水醋酸钠41g，苯甲酸钠37.5g，乙二胺四乙酸二钠EDTANa2 0.5g，溶于约500mL 的蒸馏水中，再加入咖啡因25g，搅拌至完全溶解(不可加热)，然后加蒸馏水稀释至1000mL，混匀，过滤后放置棕色试剂瓶中，室温保存可稳定6个月。
2. 5g/L 亚硝酸钠溶液：亚硝酸钠5.0g，加蒸馏水溶解并稀释至100mL，若发现溶液呈淡黄色时，应丢弃重配。
3. 5g/L 对氨基苯磺酸溶液：对氨基苯磺酸（NH2C6H4SO3H·H20）5.0g，加于约800mL 蒸馏水中，加浓盐酸15mL，待完全溶解后，加蒸馏水至1000mL。
4. 重氮试剂临用前，取5g/L 亚硝酸钠溶液（试剂2）0.5mL 与5g/L 对氨基苯磺酸溶液（试剂3）20mL 混合。
5. 5g/L 叠氮钠溶液：叠氮钠0.5g，用蒸馏水溶解并稀释至100mL。
6. 碱性酒石酸钠溶液：氢氧化钠75g，酒石酸钠(Na2C4H4O6·2H2O)263g，加蒸馏水溶解并稀释至1000mL，混匀，置塑料瓶中，室温保存可稳定6个月。
7.胆红素标准液可购买，也可按以下方法配制：
（1）稀释血清：收集不溶血、无黄疽、清晰的血清过滤作为混合血清稀释剂。
取过滤血清1.0ml，加生理盐水24ml，混匀。
在分光光度计中，以比色杯光径1cm，波长414nm，用生理盐水调零，读取的吸光度应小于0.100，波长460nm 处读取的吸光度应小于0.040。
（2）171umol/L胆红素标准液：称取符合标准的胆红素（MW:584.68）10mg，加入二甲基亚砜1ml，玻棒搅匀，加入0.05mol/LNa2CO3溶液2ml，使胆红素完全溶解。
移入100ml 容量瓶，用稀释血清洗涤数次并移入容量瓶中，缓慢加入0.1mol/LHCl溶液2ml（边加边缓慢摇动，切勿产生气泡），最后用稀释血清稀释至100ml。
避光，4℃保存，三天内有效，最好当天绘制标准曲线。
（三）步骤
1. 取试管3支，标明总胆红素管、结合胆红素管和空白管，然后按下表操作：
试剂(ml) 总胆红素管结合胆红素管空白管
血清0.2 0.2 0.2
咖啡因-苯甲酸钠试剂 1.6 - 1.6
氨基苯磺酸溶液- - 0.4
重氮试剂0.4 0.4 -
混匀，总胆红素管置室温10min，结合胆红素管置37℃水浴准确放置1min，按下表继续操作：
叠氮钠溶液- 0.05 -
咖啡因-苯甲酸钠试剂- 1.55 -
碱性酒石酸钠溶液 1.2 1.2 1.2
充分混匀后，用空白管调零，于波长600nm，读取总胆红素管和结合胆红素管吸光度，在标准曲线上查出相应的胆红素浓度。
胆红素氧化酶法
一、实验原理
胆红素呈黄色，在450nm附近有最大吸收峰。
胆红素氧化酶(BOD)催化胆红素氧化，随着胆红素被氧化，A450nm下降，下降程度与胆红素被氧化的量相关。
在pH8.0条件下，未结合胆红素及结合胆红素均被氧化，因而检测450nm吸光度的下降值可反映总胆红素含量；加入SDS及胆酸钠等阴离子表面活性剂可促进其氧化。
在pH3.7～4.5缓冲液中，BOD催化单葡萄糖醛酸胆红素(mBc)、双葡萄糖醛酸胆红素(dBc)及大部分δ胆红素氧化，非结合胆红素(Bu)在此pH条件下不被氧化。
用配制于人血清中的二牛磺酸胆红素(ditaurobilirubin，DTB)作标准品，检测此条件下450nm吸光度的下降值可反映结合胆红素的含量。
二、实验方法
1．0.1mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.2) 称取三羟甲基氨基甲烷(Tris)1.211g，胆酸钠172.3mg,十二烷基硫酸钠(SDS)432.6mg，溶于去离子水90ml中，在室温(25～30℃)用1mol/L盐酸调节pH至8.2(约用6ml)，再加蒸馏水至100ml，置冰箱保存，此液含4mmol/L胆酸钠、15mmol/L SDS。
2．0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH4.5)。
3．BOD溶液如系冻干品，按说明书要求复溶，但复溶后冰箱保存不宜过长(约可保存1周)，如系液体(可能含有甘油)，置4℃冰箱可保存较长时间，BOD贮存溶液的酶活性一般在数千至1万～2万U/L，BOD工作液酶活性可按反应液中BOD终浓度达0.3～1.0U/ml计算。
4．总胆红素标准液(342μmol/L) 按胆红素测定J-G法中方法配制，或市售合乎要求的标准液。
5．结合胆红素标准液将DTB配于胆红素浓度可忽略不计的人血清中，或用冻干品按说明书要求重建。
配制后分装于聚丙烯管内，－70℃保存，可稳定6个月。
冻干品未重建前置低温中，至少稳定1年。
加入BOD工作液后立即混匀，置37C水浴5min，用分光光度计，在450nm波长，去离子水调零，读取各管吸光度(A)。
用于对照管的比色杯与非对照管的比色杯不得混用。
钒酸盐氧化法(试剂盒)
一、原理
在PH=3左右，有表面活性剂和间接反应胆红素抑制剂的条件下，样品中的直接胆红素被氧化剂钒酸钠氧化为胆绿素。
胆红素的黄色特异性吸光度下降，通过测定钒酸盐氧化前后吸光度的变化，计算样品中直接胆红素的含量。
二、实验方法
试剂：柠檬酸缓冲液100mM
表面活性剂2mmol/L
磷酸缓冲液10mM
偏钒酸钠4mmol/L
适用于半/全自动生化分析仪，两周内用完。
样本/标准/水sample volume μ114
试剂1（R1）Reagent 1 μl280
样本+R1 在37℃保温60秒，记录吸光度值A1
试剂2（R2）Reagent 2 μl70
在加入R2 保温300 秒后，记录吸光度值A2。
主波长main wavelength nm 450
副波长sub wavelength nm 546
反应类型reaction type 两点终点法反应方向reaction direction 降反应(-)。