奶牛胚胎移植关键技术及应用前景
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一尧 同期发情 同期发情是利用外源激素或其他 方法促使母畜群在一定时间内集中发 情的繁殖控制技术遥 人为调整母畜的 发情周期袁 使母畜群同期发情袁 同期 配种袁 同期受胎袁 同期分娩袁 便于组 织生产管理遥 作为胚胎移植技术的重 要环节袁 同期发情可提高胚胎移植效益遥 渊 一冤 供体牛的选择 作为乳用供体牛袁 应选择产奶量 高尧 泌乳潜力大尧 乳脂率高和遗传性 能稳定的奶牛遥 要求奶牛身体健康袁 无传染病尧 无生殖系统疾病尧 发情周 期正常袁 过去怀孕时配种不超过两次袁 无流产史尧 无遗传缺陷袁 膘情适中袁 年龄2耀7岁袁 性情温顺袁 便于操作遥 渊 二冤 受体牛的选择 受体牛应选用廉价低产的健康青 年母牛遥 受体牛的检疫及接种与供体 牛相同遥 渊 三冤 供体尧 受体同期发情 同期发情有以下两种含义院 一个
共需注射6耀8次袁 总量为350耀450单位袁 首日剂量尤其是首次剂量要大袁 以后 剂量逐日递减遥 理想的超数排卵效果 是院 卵巢如鸡蛋大小袁 每侧卵巢上排 卵3耀10个遥
三尧 胚胎采集 渊 一冤 采集准备 在供体牛发情的第13d袁 上午输精 两次 袁 下 午输 精两次 遥 发 情的 第 20 耀 21d袁 回收胚胎遥 供体母牛在回收前停 水绝食12耀24h袁 以减轻腹压和瘤胃的 压力遥 将供体母牛保定于六柱栏内袁 用2%普鲁卡因或利多卡因5ml做第一尧 二尾间隙硬膜外腔麻醉袁 使后躯和骨 盆腔器官松弛遥 用手排空直肠中的粪 便袁 检查每个卵巢上的黄体数量遥 消 毒外阴部袁 准备回收器械及冲卵液等遥 渊 二冤 采集胚胎操作方法 操作者左手在直肠内把握子宫颈袁 右手持带金属芯的冲卵管插入一侧子 宫角遥 导管前端插入子宫角前1/3后袁 由助手向后抽回一点钢芯袁 再通过收 回导管后端的送气管向导管前端的小 气囊 慢慢 送入 空气袁 送气 量一 般 15 耀 25ml遥 固定冲卵管后袁 完全抽出金属 芯遥 先灌入30耀50ml冲卵液袁 观察回流 情况遥 同时隔着直肠对子宫角轻轻按 摩遥 这样反复多次直至用完300耀500ml 冲卵液遥 当冲完一侧时袁 将金属内芯 插入冲卵管放气袁 并把冲卵管从冲卵 侧子宫角抽出袁 通过子宫体转向插入 另一侧子宫角袁 重复以上操作遥 四尧 胚胎检测 捡 卵 可 用 实 体 显 微 镜 放 大 16 倍 遥
河 南 农 业 2017 年 第 3 期渊 下冤
Copyright©博看网 . All RightsHREeNseArvNedN.O N G Y E 51
根据器具的形态从上到下尧 从左到右 或从外到里螺旋形依此移动袁 将找到 的卵用吸管吸出袁 再放入装有含10% 犊牛血清的磷酸盐缓冲溶液的小皿 中袁 然后进行卵的冲洗和质量的鉴 别遥 可先吸点含10%犊牛血清的磷酸 盐缓冲溶液吹向卵的周围袁 吹打胚 胎袁 清除胚胎周围的粘连物遥 将净化 后 的 胚 胎 置 于 新 鲜 的 含 10 % 犊 牛 血 清 的磷酸盐缓冲溶液中袁 放大40耀200倍 作形态学检查遥 正常的胚胎透明带应 是圆形袁 未受精或退化的胚胎透明带 往往是椭圆形袁 无弹性遥 凡有子宫内 膜炎或其他原因造成的不良子宫环 境袁 胚胎透明带外形常不规则遥 牛胚 胎透明带的厚度为12耀19滋m遥 按照胚 胎分级标准进行分级遥 凡是形态结构 不正常的卵子袁 未受精的尧 破裂的或 退化的卵子袁 透明带空的或快空的卵 子袁 以及与正常胚龄相比袁 发育迟2d 或 2d 以 上 的 胚 胎 均 不 能 继 续 正 常 发 育袁 应弃之不用遥
是受体和供体之间的发情同期化袁 即 要求胚胎的日龄和受体牛发情周期的 天数必须一致袁 因为子宫环境只允许 同步胚胎发育袁 对不同步胚胎具有毒 害作用曰 另一个是受体牛群的发情同 期化遥 一头供体牛正常超数排卵可以 收集到6耀8枚胚胎袁 准备的受体牛也要 有6耀8头袁 故这些受体母牛需要同期化 处理袁 使其发情周期趋于一致袁 特别 是鲜胚移植袁 其差异不得超过12h遥 同 期发情的一般方法有院 孕激素阴道栓 法曰 前列腺素二次注射法曰 孕酮阴道 栓-前列腺素法遥
目前袁 河南省乃至全国大部分地 区奶牛个体产乳量低尧 奶品质量不高袁 不能满足人们日益增长的消费需求遥 因此袁 快速增加高产奶牛的数量已成 当务之急袁 而应用胚胎移植技术是快 速扩繁高产奶牛的最佳途径和手段遥 奶牛的胚胎移植关键技术可分为以下 几个环节院 同期发情-超数排卵-胚胎 采集-胚胎检测-胚胎保存-胚胎移植遥 每个环节都有严格的技术要求袁 只有 把握各个操作环节技术要领袁 才能获 得满意的结果遥
奶牛胚胎移植关键技术及应用前景
河南农业职业学院 张书汁 周 敏 河南省肉牛工程技术研究中心有限公司 牛 辉
摘 要院 奶牛胚胎移植是快速扩繁高产奶牛的最佳途径遥 介绍了牛胚胎移植的最新发展关键技术袁 并分析了牛的同期发情尧 胚胎冷冻保 存等技术在动物育种上的应用前景遥
关键词院 奶牛曰 胚胎移植曰 繁殖技术 曰 应用前景
二尧 超数排卵 渊 一冤 超数排卵使用的药物 供体超数排卵所用的主要生殖激 素有促性腺激素尧 孕激素及前列腺素 三类遥 促性腺激素包括促卵泡素 渊 FSH冤 尧 孕 马 血 清 促 性 腺 激 素 渊 PMSG冤 尧 促黄体激素 渊 LH冤 尧 人绒毛 膜 促 性 腺 激 素 渊 HCG冤 和 促 排 卵 3 号 渊 LRH要A3冤 遥 渊 二冤 超数排卵方法 超数排卵处理前袁 供体牛至少应 有连续两个正常发情周期遥 对周期正 常的供体牛袁 还要作一次生殖器官检 查袁 确保生殖器官正常时袁 才可进行 超排处理遥 在母牛发情周期的9耀13d袁 肌内注射孕马血清促性腺激素或促卵 泡素袁 以刺激卵巢产生较多的卵泡遥 处理后袁 待供体牛再次发情时静脉注 射促黄体素或人毛膜促性腺激素袁 以诱导卵泡排卵遥 促卵泡素在牛体内 的半衰期为110min袁 每天需注射两次袁
五尧 胚胎的保存 渊 一冤 快速冷冻法 用程序化胚胎冷冻仪进行常规快 速冷冻胚胎遥 胚胎在冷冻保护液中平 衡10min袁 然后装入细管遥 将细管放入 程控胚胎冷冻仪的冷冻室内袁 在液氮 熏蒸作用下袁 温度下降至原7益袁 然后 植冰袁 把冷冻仪上的开关从AS状态调 节到PS状态遥 这时温度将会每分钟下 降0.3益袁 待下降至原30益后袁 将冷冻室 全部浸入液氮内袁 盖子不要打开袁 待 温度下降至原100益后打开盖子袁 细管 将全部浸入液氮中袁 冷冻过程完成遥 渊 二冤 玻璃化冷冻法 将胚胎在适当的冷冻保护剂混合 液中作短暂处理后袁 直接投入液氮遥 冷冻保护剂在急剧降温到很低温度时 能被浓缩而不结晶袁 而且液体的粘性 增强袁 由液态变为透明的固态袁 形成 玻璃化遥 用这种方法冷冻袁 无需冻前 分步添加抗冻剂和冻后分步脱除抗冻 剂的繁琐步骤袁 简化了冷冻过程袁 是 一种快速尧 简便尧 有效的冷冻方法袁 不需要冷冻仪器遥
共需注射6耀8次袁 总量为350耀450单位袁 首日剂量尤其是首次剂量要大袁 以后 剂量逐日递减遥 理想的超数排卵效果 是院 卵巢如鸡蛋大小袁 每侧卵巢上排 卵3耀10个遥
三尧 胚胎采集 渊 一冤 采集准备 在供体牛发情的第13d袁 上午输精 两次 袁 下 午输 精两次 遥 发 情的 第 20 耀 21d袁 回收胚胎遥 供体母牛在回收前停 水绝食12耀24h袁 以减轻腹压和瘤胃的 压力遥 将供体母牛保定于六柱栏内袁 用2%普鲁卡因或利多卡因5ml做第一尧 二尾间隙硬膜外腔麻醉袁 使后躯和骨 盆腔器官松弛遥 用手排空直肠中的粪 便袁 检查每个卵巢上的黄体数量遥 消 毒外阴部袁 准备回收器械及冲卵液等遥 渊 二冤 采集胚胎操作方法 操作者左手在直肠内把握子宫颈袁 右手持带金属芯的冲卵管插入一侧子 宫角遥 导管前端插入子宫角前1/3后袁 由助手向后抽回一点钢芯袁 再通过收 回导管后端的送气管向导管前端的小 气囊 慢慢 送入 空气袁 送气 量一 般 15 耀 25ml遥 固定冲卵管后袁 完全抽出金属 芯遥 先灌入30耀50ml冲卵液袁 观察回流 情况遥 同时隔着直肠对子宫角轻轻按 摩遥 这样反复多次直至用完300耀500ml 冲卵液遥 当冲完一侧时袁 将金属内芯 插入冲卵管放气袁 并把冲卵管从冲卵 侧子宫角抽出袁 通过子宫体转向插入 另一侧子宫角袁 重复以上操作遥 四尧 胚胎检测 捡 卵 可 用 实 体 显 微 镜 放 大 16 倍 遥
河 南 农 业 2017 年 第 3 期渊 下冤
Copyright©博看网 . All RightsHREeNseArvNedN.O N G Y E 51
根据器具的形态从上到下尧 从左到右 或从外到里螺旋形依此移动袁 将找到 的卵用吸管吸出袁 再放入装有含10% 犊牛血清的磷酸盐缓冲溶液的小皿 中袁 然后进行卵的冲洗和质量的鉴 别遥 可先吸点含10%犊牛血清的磷酸 盐缓冲溶液吹向卵的周围袁 吹打胚 胎袁 清除胚胎周围的粘连物遥 将净化 后 的 胚 胎 置 于 新 鲜 的 含 10 % 犊 牛 血 清 的磷酸盐缓冲溶液中袁 放大40耀200倍 作形态学检查遥 正常的胚胎透明带应 是圆形袁 未受精或退化的胚胎透明带 往往是椭圆形袁 无弹性遥 凡有子宫内 膜炎或其他原因造成的不良子宫环 境袁 胚胎透明带外形常不规则遥 牛胚 胎透明带的厚度为12耀19滋m遥 按照胚 胎分级标准进行分级遥 凡是形态结构 不正常的卵子袁 未受精的尧 破裂的或 退化的卵子袁 透明带空的或快空的卵 子袁 以及与正常胚龄相比袁 发育迟2d 或 2d 以 上 的 胚 胎 均 不 能 继 续 正 常 发 育袁 应弃之不用遥
是受体和供体之间的发情同期化袁 即 要求胚胎的日龄和受体牛发情周期的 天数必须一致袁 因为子宫环境只允许 同步胚胎发育袁 对不同步胚胎具有毒 害作用曰 另一个是受体牛群的发情同 期化遥 一头供体牛正常超数排卵可以 收集到6耀8枚胚胎袁 准备的受体牛也要 有6耀8头袁 故这些受体母牛需要同期化 处理袁 使其发情周期趋于一致袁 特别 是鲜胚移植袁 其差异不得超过12h遥 同 期发情的一般方法有院 孕激素阴道栓 法曰 前列腺素二次注射法曰 孕酮阴道 栓-前列腺素法遥
目前袁 河南省乃至全国大部分地 区奶牛个体产乳量低尧 奶品质量不高袁 不能满足人们日益增长的消费需求遥 因此袁 快速增加高产奶牛的数量已成 当务之急袁 而应用胚胎移植技术是快 速扩繁高产奶牛的最佳途径和手段遥 奶牛的胚胎移植关键技术可分为以下 几个环节院 同期发情-超数排卵-胚胎 采集-胚胎检测-胚胎保存-胚胎移植遥 每个环节都有严格的技术要求袁 只有 把握各个操作环节技术要领袁 才能获 得满意的结果遥
奶牛胚胎移植关键技术及应用前景
河南农业职业学院 张书汁 周 敏 河南省肉牛工程技术研究中心有限公司 牛 辉
摘 要院 奶牛胚胎移植是快速扩繁高产奶牛的最佳途径遥 介绍了牛胚胎移植的最新发展关键技术袁 并分析了牛的同期发情尧 胚胎冷冻保 存等技术在动物育种上的应用前景遥
关键词院 奶牛曰 胚胎移植曰 繁殖技术 曰 应用前景
二尧 超数排卵 渊 一冤 超数排卵使用的药物 供体超数排卵所用的主要生殖激 素有促性腺激素尧 孕激素及前列腺素 三类遥 促性腺激素包括促卵泡素 渊 FSH冤 尧 孕 马 血 清 促 性 腺 激 素 渊 PMSG冤 尧 促黄体激素 渊 LH冤 尧 人绒毛 膜 促 性 腺 激 素 渊 HCG冤 和 促 排 卵 3 号 渊 LRH要A3冤 遥 渊 二冤 超数排卵方法 超数排卵处理前袁 供体牛至少应 有连续两个正常发情周期遥 对周期正 常的供体牛袁 还要作一次生殖器官检 查袁 确保生殖器官正常时袁 才可进行 超排处理遥 在母牛发情周期的9耀13d袁 肌内注射孕马血清促性腺激素或促卵 泡素袁 以刺激卵巢产生较多的卵泡遥 处理后袁 待供体牛再次发情时静脉注 射促黄体素或人毛膜促性腺激素袁 以诱导卵泡排卵遥 促卵泡素在牛体内 的半衰期为110min袁 每天需注射两次袁
五尧 胚胎的保存 渊 一冤 快速冷冻法 用程序化胚胎冷冻仪进行常规快 速冷冻胚胎遥 胚胎在冷冻保护液中平 衡10min袁 然后装入细管遥 将细管放入 程控胚胎冷冻仪的冷冻室内袁 在液氮 熏蒸作用下袁 温度下降至原7益袁 然后 植冰袁 把冷冻仪上的开关从AS状态调 节到PS状态遥 这时温度将会每分钟下 降0.3益袁 待下降至原30益后袁 将冷冻室 全部浸入液氮内袁 盖子不要打开袁 待 温度下降至原100益后打开盖子袁 细管 将全部浸入液氮中袁 冷冻过程完成遥 渊 二冤 玻璃化冷冻法 将胚胎在适当的冷冻保护剂混合 液中作短暂处理后袁 直接投入液氮遥 冷冻保护剂在急剧降温到很低温度时 能被浓缩而不结晶袁 而且液体的粘性 增强袁 由液态变为透明的固态袁 形成 玻璃化遥 用这种方法冷冻袁 无需冻前 分步添加抗冻剂和冻后分步脱除抗冻 剂的繁琐步骤袁 简化了冷冻过程袁 是 一种快速尧 简便尧 有效的冷冻方法袁 不需要冷冻仪器遥