五种血型不规则抗体检测方法的比较

五种血型不规则抗体检测方法的比较
目的：对各种不规则抗体检测方法的敏感性进行比较，避免因不规则抗体漏检而导致红细胞输注无效。

方法：采用五种不同的血清学方法对已知低效价抗体进行不规则抗体筛选及效价的测定，对不同方法抗体检出特异性和敏感性进行判定。

结果：盐水法只能检出IgM类不规则抗体；聚凝胺法检测结果不宜判定；木瓜酶法的敏感性较低，改良聚凝胺法和抗人球蛋白法敏感性最好；五种方法不规则抗体检出特异性无差异。

结论：改良聚凝胺法与抗球蛋白法联合检测可以提高抗体检出敏感性，避免输血患者因低效价不规则抗体漏检而导致无效输注。

标签：不规则抗体；木瓜蛋白酶；聚凝胺；微柱凝胶；抗球蛋白试验
红细胞制品的应用，大大提高了临床疗效，救治了很多生命垂危的患者。

然而随着临床输血的不断深入，人们发现某些情况下存在血液输注无效现象，有研究表明红细胞血型不规则抗体是输血输注无效及溶血性输血不良反应的主要原因[1]。

目前应用于临床的方法主要是盐水法、聚凝胺法、抗人球蛋白法等，由于各种方法的实验原理、操作方法及影响因素不同，致使因不规则抗体漏检而引起的输血不良反应时有发生[2]。

为此，我们同时采用5种不同的方法并加以优化对已知抗体样本进行检测，现将结果报告如下。

1 材料和方法
1.1 仪器和试剂
多抗试剂（抗IgG和C3d）、筛选细胞、谱细胞由上海市血液生物医药公司生产提供；聚凝胺试剂由珠海贝索生物制品公司生产；木瓜酶液自制；日本久保田离心机（KA-2200）；37℃水浴箱。

1.2 样本来源
2012—2015年我院遇到的不规则抗体阳性标本，鉴定其抗体特异性和效价，选取效价较高的抗-D、-E、-Ec、-C、-Ce、-M各一例，对这几种抗体分别进行相应倍数的稀释，调整后每个抗体分别制成含有1∶1、1∶2、1∶4相应效价的样本。

总计18例样本。

1.3 方法
1.3.1 盐水法、经聚凝胺法以及抗人球蛋白法严格参照《输血免疫血液学实验技术》[3]标准操作。

1.3.2 酶处理法
称取1.0g木瓜酶，用pH5.5的PBS定容至100ml，用力震荡15min，使大
部分溶解，离心收集上清液，分装密封，放-20℃以下冰箱备用。

盐水法加样，观察结果，然后加入1%木瓜蛋白酶溶液2滴，混匀置37℃水浴30min，离心和观察结果。

1.3.3 改良聚凝胺法[4]
1.3.3.1 阳性对照试剂我们平常用的聚凝胺阳性对照试剂效价为1∶32，效价较高，如果患者血样中存在效价较低的不规则抗体，判定结果时，阳性对照管凝集较强，而试验管较弱，很容易把低效价的抗体漏检。

现将阳性对照试剂进行32倍稀释（稀释后效价为1∶1），其聚凝胺试验结果凝集强度刚好为1+。

在改良聚凝胺试验时，用经过稀释的阳性对照试剂作为对照，试验管结果≥阳性对照管的凝集强度的判定为阳性。

1.3.3.2 操作步骤按盐水法加样后加入10滴Lim溶液，室温孵育1min，再加入2滴Polybrene试剂，立即以1000g离心1min，弃去试管中液体，摇动试管，肉眼判断红细胞凝集情况。

如果有凝集出现则继续操作，加入1滴重悬液，轻摇试管，肉眼观察结果。

1.3.4 结果判定
红细胞凝集程度参照《全国临床检验操作规程》（第3版）[5]，以4+、3+、2+、1+、±表示，无凝集反应为阴性。

2 结果
盐水法只能检出IgM类的抗体，木瓜酶法和聚凝胺法在检测IgG抗体时敏感性较低，甚至存在对弱抗体的漏检；改良聚凝胺法和抗人球法敏感性最好，结果见表1。

3 讨论
血型不规则抗体是ABO血型抗体以外的所有抗体，多为IgG型，最常见的是Rh系统抗体，其次为MNS系统等，主要经妊娠、输血等免疫刺激产生。

虽然在国内正常人群中不规则抗体阳性检出率仅为0.3%～2%[6]，但却是引起红细胞输注无效、溶血性输血反应的主要原因之一。

随着输血技术的发展，抗体筛查新方法不断涌现，应用于临床的方法主要是盐水法、聚凝胺法、酶法、抗人球蛋白法等，由于各种方法的试验原理、操作方法及影响因素不同，因不规则抗体漏检导致的红细胞输注无效时有发生。

本研究主要采用5种不同的方法对含有相应效价的已知抗体进行平行试验，对比不同方法在检测弱抗体时的敏感度和特异性，为选择合理的方法提供理论依据。

本次结果显示，盐水法只能检测出IgM类的不规则抗体，聚凝胺法容易漏检弱抗体，木瓜酶法和聚凝胺法敏感性略低，改良聚凝胺法和抗人球蛋白法检测结果凝集强度接近，敏感性最好。

目前，检出IgG不规则抗体的方法有木瓜酶法、聚凝胺法、抗人球法等技术，它们各有优缺点。

酶法通过改变红细胞的结构使隐蔽的抗原得以暴露，对Rh和Kidd等系统抗体敏感，但它同时可以破坏红细胞膜上的MNS等系统抗原构型，破坏其抗原性，酶试剂易失活，使之应用受限；聚凝胺法对大多数血型系统抗体都比较敏感，尤其对Rh系统抗体特别敏感，且操作简便，目前已作为临床常规的筛选试验，但聚凝胺法的应用也有一定的局限性，如必须严格按照规定时间判定结果，对有些低效价抗体易漏检，敏感性较低；改良聚凝胺法延续了聚凝胺技术快速，简便，灵敏的特点，同时在加入低效价的阳性对照试剂做对照时，既避免了必须在1min内判读结果，同时避免了大部分弱抗体的漏检，值得我们推广应用；抗人球蛋白法是世界公认的检测IgG类血型抗体最可靠的方法，但操作繁琐，适合择期输血患者的不规则抗体筛选和配血。

在临床工作中，我们需要根据各种方法自身的特点，选择一种快速、敏感的方法进行不规则抗体的检测，以确保输血安全。

对于有输血史、妊娠史或多次输血的患者，我们建议在首先用盐水法检测IgM类抗体后，可选用改良聚凝胺法联合抗人球法进行IgG类不规则抗体的检测。

参考文献
[1]李金，何燕，李秀红，等.红细胞血型不规则抗体筛选在临床输血中的意义[J].宁夏医科大学报，2011，33（11）：1077-1079.
[2]张晨光，贺志安，赵庆伟，等.Rh血型系统不规则抗体与新生儿溶血病的相关性[J].现代预防医学，2007，34（11）：2036-2038.
[3]兰炯采，吕运来，负中桥.红细胞无效输注的相关实验[M].输血免疫学实验技术，北京：人民卫生出版社，2011：187-188.
[4]陈和平，向东，朱俊，等.改良聚凝胺方法对4份弱抗体特异性的检测[J].中国输血杂志，2001（3）：158-159.
[5]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京：东南大学出版社，2006：246-247.
[6]杨成民，李家增，季阳.基础输血学[M].北京：中国科学技术出版社，2001：447-450.。