食品安全现代生物检测技术-优秀PPT文档

• 5.PCR-单链构想多态性分析
• 6.mRNA差异显示技术
• 7.随机引物扩增DNA多态性（RAPD）
• 8.以微卫星DNA介导的PCR技术
• 9.基因间重复性回文片段（REP）和基因内重复性一致序列（ERIC）的
扩增
• 10.扩增片段长度多态性分析（AFLP）
• 11.限制性长度多态性分析（RFLP）
或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。这一方法的基本原理如
下。
• （1）使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，井保持其免
疫活性；
• （2）使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种
酶标抗原或抗体既保留其免疫活性．又保留酶的活性。
• （二）ELISA的类型
•
ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。用于临床检验
测定中）；结合物及标本的稀释液；洗涤液；酶反应 终止液。
• 1 免疫吸附剂
• 2 结合物
• 3 酶的底物
• 4 洗涤液
• 5 酶反应终止液
• 6 阳性对照品和阴性对照品
• 7 参考标准品
• 三、磺胺二甲嘧啶的间接竞争ELISA检测
• （一）人工完全抗原的合成
• （二）合成抗原的鉴定
• （三）抗体的制备与纯化 • （四）标准竞争抑制曲线的制作 对各种候选待检基因序列或蛋白的逐一筛查几乎是不可能的。
例如，一般700mg的玉米粉可提取lμg DNA。 1 双抗体夹心法测抗原
• （五）畜产品中SM2残留的ELISA检测 标记酶能与抗原或抗体结合并同样 保持各自生物活性。
（四）标准竞争抑制曲线的制作 下面介绍PCR反应中的一些具体参数。
• （六）方法评价 应用该方法可使极微量的特定DNA片段在几小时内迅速扩增至百万倍，因而一经问世便在短短的数年内就得到了迅速发晨和实际应用
• （一）ELISA技术与转基因食品检测
• l.ELISA基本原理
• 建立在抗体抗原免疫学反应的基础上。
• ELISA分析法必须具备待检测的固定相抗原
或抗体、酶标记的抗原或抗体、酶作用的底物三 种试剂，且满足两个前提条件：
• 待检测的抗原或抗体能够结合到不溶性载体
表面并保持活性；
• 标记酶能与抗原或抗体结合并同样 保持各
，并在原有基础上结合各种生化分子生物学技术衍生出了许多改良技术。 PCR是依据DNA模板的特性，模仿体内的复制过程，在体外合适的条件下以单链DNA为模板，以人工设计和合成的寡核苷酸为引物，利
• 1 特异性 用热稳定的DNA聚合酶延5’-3’方向掺人单核苷酸来特异性的扩增DNA片段的技术。
待检测的抗原或抗体能够结合到不溶性载体表面并保持活性； 这些技术显示出了巨大的潜力，发挥着越来越大的作用，也正因为如此它们被誉为20世纪80年代分子生物学革命和生物技术的飞跃。
自生物活性。
•
ELISA分析基本步骤如下：①将抗原（Ag）或
抗体Ab结合到固相载体平板的孔里；②待测溶液的
特殊抗原或抗体结合到敏化载体表面；③加入酶标抗
• （三）PCR反应参数
•
在PCR反应中每轮循环的各步反应时间不应过长，以免降低TaqDNA
聚合2.退火
• 3.延伸
• 4.循环次数
• （四）常见的PCR种类
• 1.热启动PCR
• 2.一步单管PCR
• 3.多重PCR
• 4.依赖PCR的DNA指纹图谱技术
• （2）转基因动物食品 如转基因的鱼、鸡、牛、羊等。目的主要
通过导入外源基因或对自身基因加以修饰来使受体动物降低结缔 组织交联度、改善肉质．或使受体生物个体肥大，或生产营养价 值高的蛋、肉、乳等。
• （3）转基因微生物食品 如转基因微生物发酵而制得的葡萄酒、
啤酒、酱油等，此类食品是利用转基因微生物（如转基因酵母和 酶）的作用而生产出来的食品。后两类转基因食品目前在市场上 还很少。
• （5）DNA序列分析
• 第三节 转基因食品的检测技术
• 一、概述
•
转基因食品又称遗传修饰食品（genetically modified food），
简称GMF或GM食品。转基因食品大体上分为如下三类。
• （1）转基因植物食品 由转基因植物如转基因的玉米、大豆、水
稻、马铃薯、番茄、香蕉、苹果、菠菜等生产加工而成。
• 目前最常用的免疫学检测技术如下： • （1）放射免疫测定技术 • （2）酶免疫测定技术 • （3）荧光免疫测定技术 • （4）发光免疫测定技术 • （5）胶体金免疫测定技术
• 二、酶联免疫吸附试验(ELISA)
• （一）ELISA的基本原理
•
ELISA(Enzyme-Linked immunosorbent assay)的基础是抗原
• 12.用于RNA病毒检测的核酸扩增技术
• （五）PCR技术用于检测的主要步骤
• （1）运用化学手段对目标DNA进行提取。
• （2）设计并合成引物，引物设计或合成的好坏直接决定PCR
扩增的成效。
• （3）进行PCR扩增。
• （4）克隆并筛选鉴定PCR产物，将扩增产物进行电泳、染色，
在紫外光照射下可见扩增特异区段的DNA带．根据该带的不同 即可鉴定不同的DNA。
• 2 灵敏度
• 3 准确度
• 4 精确度
• 第二节PCR检测技术
• 一、概述
• PCR又称聚合酶链式反应(Polymerase
chain reaction)，是1985年由 的Kary Mullis 首创并由 Cetus公司开发的一项体外扩增 DNA的方法。应用该方法可使极微量的特定 DNA片段在几小时内迅速扩增至百万倍，因 而一经问世便在短短的数年内就得到了迅速 发晨和实际应用，并在原有基础上结合各种 生化分子生物学技术衍生出了许多改良技术。 这些技术显示出了巨大的潜力，发挥着越来 越大的作用，也正因为如此它们被誉为20世 纪80年代分子生物学革命和生物技术的飞跃。
的ELISA主要有以下几种类型。
• 1 双抗体夹心法测抗原
• 2 双抗原夹心法测抗体
• 3 间接法测抗体
• 4 竞争法测抗体
• 5 竞争法测抗原
• （三）ELISA的材料与试剂
•
完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：已包被抗
原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；酶标记的抗原
或抗体（结合物）；酶的底物；阴性对照品和阳性对 照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量