WB03 FDABAM Chapter 5 2011 沙门氏菌的检测 检样制备.

FDABAM Chapter 5 2011 沙门氏菌的检测检样制备
4.1 检样制备：一般样品取样量为25g,如果有特殊需要，可以增加样品的取样量。

注：如果取样量为375g：每批样品为15个分析单位(至少100g)，每个分析单位取出25g，混合成375g样品，则相应的增菌肉汤为3375mL。

4.1.1 干蛋，干蛋白，干蛋黄，液体牛奶（脱脂，全脂等），蛋糕，饼干和面包等
在分析前，无需解冻样品，如必须解冻以获得一定的分析单位，则在45℃的水浴中解冻15分钟，或在2～5℃下解冻18小时。

对不是粉末状的样品，称取25g样品加入225mL灭菌的LB，对粉末状的样品，则分4次加入LB，15，10，10，190mL,并用灭菌棒搅拌，使样品彻底溶解。

室温放置60分钟。

用pH试纸调节pH到6.8±0.2（灭菌的1N NaOH或1N HCl调节），调节完pH的增菌液35±1℃培养24±2h。

4.1.2 鲜蛋，蛋液，煮熟蛋（鸡，鸭及其它禽类）
1.）对鲜蛋先用灭菌的生理盐水清洗掉表面的附着物，然后在70%的碘酒溶液
中消毒表面10秒钟，然后风干，每个样品应该含有20个蛋，无菌将蛋打开，
放入无菌袋中，将蛋白和蛋黄混匀，将混匀的样品在20～24℃下放置96±2h，之后取25mL样品加入到225mL无菌的含有亚硫酸铁的TSB（35mg亚硫酸铁
加到1000mLTSB中)并搅拌，室温放置60±5分钟，调节pH到6.8±0.2，增菌
液35±1℃培养24±2h。

注：70%的碘酒的配制：700mL的无水乙醇加无菌水至1000mL或700mL的95%乙醇加无菌水至950mL，制成70%的乙醇；取100g碘化钾到300mL无菌水中，再加入50g碘，稍微加热直至碘完全溶解，往碘化钾/碘溶液中加无菌水至
1000mL，贮存于棕色瓶内，塞紧瓶盖备用；取250mL此碘化钾/碘溶液加入
到750mL70%的乙醇中，制成70%的碘酒溶液。

2.）对蛋液则称取15份25mL共计375mL，20～24℃放置96±2h ，之后加入3375mL
无菌的含有亚硫酸铁的TSB（35mg亚硫酸铁加到1000mLTSB中)并搅拌，室温放置60±5分钟，调节pH到6.8±0.2，增菌液35±1℃培养24±2h。

3.）对煮熟蛋，如果带壳，按照1.)的方法将蛋与蛋壳分离，之后将蛋白和蛋黄
粉碎成一体，无菌称取25g，加入225mLTSB并搅拌，室温放置60±5分钟，调节pH到6.8±0.2，增菌液35±1℃培养24±2h。

4.1.3 脱脂干奶粉
1.）对速溶类，称取25g样品，通过灭菌的玻璃的或纸的漏斗慢慢加入到225mL
的亮绿溶液中（每1000mL无菌水中加入2mL1％的亮绿溶液）；也可以把n 份不同的样品各取25g混合起来，倒入n×225mL的亮绿溶液中。

放置60±5分钟，不需搅拌和调节pH，稍旋开培养罐的盖子，35±1℃培养24±2h。

2.）非速溶类，同速溶类，除了不可以把n份不同的样品各取25g混合起来进行
测试。

4.1.4 全脂干奶粉
同速溶类脱脂干奶粉，除了不可以把n份不同的样品各取25g混合起来进行测试。

4.1.5 酪蛋白
1.）酸凝干酪素，称取25g样品，通过灭菌的玻璃的或纸的漏斗慢慢加入到225mL
的UPB溶液中；也可以把n份不同的样品各取25g混合起来，倒入n×225mL 的UPB溶液中。

放置60±5分钟，不需搅拌和调节pH，稍旋开培养罐的盖子，35±1℃培养24±2h。

2.）酶凝干酪素，称取25g样品，通过灭菌的玻璃的或纸的漏斗慢慢加入到225mL
的LB溶液中；也可以把n份不同的样品各取25g混合起来，倒入n×225mL
的LB溶液中。

放置60±5分钟，不需搅拌和调节pH，稍旋开培养罐的盖子，
35±1℃培养24±2h。

3.）酪蛋白酸钠，称取25g样品，加入到225mL的LB溶液中，混匀；也可以把n
份不同的样品各取25g混合起来，倒入n×225mL的LB溶液中混匀。

放置
60±5分钟，调节pH到6.8±0.2，增菌液35±1℃培养24±2h。

4.1.6 大豆粉
称取25g样品，通过灭菌的玻璃的或纸的漏斗慢慢加入到225mL的LB溶液中，放置60±5分钟，不需搅拌和调节pH，稍旋开培养罐的盖子，35±1℃培养
24±2h。

但不可以把n份不同的样品各取25g混合起来进行测试。

4.1.7 蛋制品（面条、鸡蛋卷、通心粉和意大利式细面条），奶酪，面团，各式
沙拉，新鲜的、冷冻的或脱水的水果和蔬菜，坚果肉，甲壳类（虾、螃蟹、
小龙虾、海螯虾和龙虾）和鱼类
分析前不要解冻样品如必须解冻以获得一定的分析单位，则在45℃的水浴
中解冻少于15分钟，或在2～5℃下解冻18小时。

无菌称取25g样品到225mL LB中，均质2分钟，盖子盖紧室温放置60±5分钟，如果需要，调节pH到
6.8±0.2，稍旋开培养罐的盖子，35±1℃培养24±2h。

4.1.8 干酵母
无菌称取25g样品到225mLTSB中，混合均匀，如果需要，调节pH到6.8±0.2，
稍旋开培养罐的盖子，35±1℃培养24±2h。

4.1.9 霜状白糖和糕点上的装饰配料
称取25g样品到225mL到NB中，盖子盖紧室温放置60±5分钟，如果需要，
调节pH到6.8±0.2，稍旋开培养罐的盖子，35±1℃培养24±2h。

4.1.10 调料
1.）黑胡椒，白胡椒，芹菜种子或芹菜片，辣椒粉，孜然，欧芹，迷迭香，芝麻，百里香和蔬菜片
无菌称取25g样品到225mL到TSB中，混匀，盖子盖紧室温放置60±5分钟，
如果需要，调节pH到6.8±0.2，稍旋开培养罐的盖子，35±1℃培养
24±2h。

2.）洋葱片，洋葱粉，大蒜片
无菌称取25g样品到225mL到含0.5%亚硫酸钾的TSB（灭菌前添加亚硫酸钾），其余同上。

3.）甜胡椒，肉桂，丁香和牛至
对甜胡椒，肉桂，丁香样品与LB的比率为1：100；牛至为1：1000，对叶状
的调味品其样品与LB的比率要大于1：10。

其余同上。

4.1.11 糖果与糖果纸（包括巧克力）
无菌称取25g样品到225mL灭菌的脱脂牛奶中，均质2分钟，室温放置60±5
分钟，如果需要，调节pH到6.8±0.2，加入0.45mL1％亮绿溶液，搅拌均匀，
稍旋开培养罐的盖子，35±1℃培养24±2h。

4.1.12 椰子
无菌称取25g样品到225mL LB中，混匀，室温放置60±5分钟，如果需要，
调节pH到6.8±0.2，加入2.25mL已事先蒸过15min的Triton x-100，稍旋开培
养罐的盖子，35±1℃培养24±2h。

4.1.13 食品级染料及颜料添加剂
对pH6.0及以上的染料（10％溶液）采用干蛋品的处理方法。

对pH低于6.0
的样品，无菌称取25g样品到225mL无亮绿的TT中，搅拌均匀，盖子盖紧
室温放置60±5分钟，如果需要，调节pH到6.8±0.2，加入2.25mL0.1％的
亮绿溶液，稍旋开培养罐的盖子，35±1℃培养24±2h。

4.1.14 凝胶
无菌称取25g样品到225mL乳糖肉汤中，加入5mL5％木瓜蛋白酶，混匀，
盖子盖紧35℃放置60±5分钟，如果需要，调节pH到6.8±0.2，稍旋开培养
罐的盖子，35±1℃培养24±2h。

4.1.15 肉，肉的代替品，肉制品，动物替代品，动物腺体及餐品（鱼，肉，骨头）
无菌称取25g样品到225mL LB中，均质2分钟，盖子盖紧室温放置60±5分
钟，如果需要，调节pH到6.8±0.2，加入2.25mL已事先蒸过15min的Triton X-100 ，稍旋开培养罐的盖子，35±1℃培养24±2h。

4.1.16 青蛙腿
无菌取15双腿至大的无菌袋中，如果一条腿有25g左右，可以只测试一条腿，加入9倍样品重量的无菌LB，混匀，室温放置60±5分钟，如果需要，调节pH到6.8±0.2，35±1℃培养24±2h。

4.1.17 兔子骨架
无菌取3副兔子骨架至无菌袋中，加入9倍样品重量的无菌LB，混匀，室
温放置60±5分钟，如果需要，调节pH到6.8±0.2，35±1℃培养24±2h。

4.1.18 口香糖、泡泡糖
往225mL LB中加入2.25mL的1％纤维素酶溶液，在对其进行磁力搅拌过程
中，无菌称取25g样品到此混合液中。

室温放置60±5分钟,且无需调节pH，35±2℃培养24±2h。

4.1.19 橙汁（巴氏杀菌或者未杀菌处理），苹果酒（巴氏杀菌或者未杀菌处理），
苹果汁（巴氏杀菌处理过）
无菌取25mL样品到225mL UPB中，混匀，室温放置60±5分钟，且无需调节pH，35±1℃培养24±2h。

4.1.20 猪耳朵和其它类型的狗咬胶
取1个样品（如果样品比较小，可以取2～3个）到无菌袋中，按照样品和肉汤比为1：9的比例加入LB以覆盖样品，充分振荡，室温下放置60±5分钟，如果需要，调节pH到6.8±0.2，加入已事先蒸过15min的Triton X-100使其浓度达到1%，例如，225mL的乳糖肉汤中加入2.25mL。

稍旋开培养罐的盖子，35±1℃培养24±2h。

4.1.21 哈密瓜
通常在分析前不需解冻。

如果是冷冻的样品，必须在低于45℃的温度下15分钟以内解冻已得到检样。

或者在2～5℃解冻18h。

对于粉末或切片水果，无菌取25g样品到225mL UPB中，均质2分钟，室温放置60±5分钟，且无
需调节pH，35±1℃培养24±2h。

对于整只哈密瓜，不要对其进行冲洗，直接将其放入无菌袋中，加入1.5
倍重量的UPB，如果需要可以加入更多量的UPB，将哈密瓜和UPB一起放入5L的烧杯或大的无菌袋中，然后将袋子口折叠卷起，室温放置60±5分钟，且无需调节pH，35±1℃培养24±2h。

4.1.22 芒果
通常在分析前不需解冻。

如果是冷冻的样品，必须在低于45℃的温度下15
分钟以内解冻已得到检样。

或者在2～5℃解冻18h。

对于粉末或切片水果，
无菌取25g样品到225mL BPW中，均质2分钟，室温放置60±5分钟，如果
需要，调节pH到6.8±0.2，35±1℃培养24±2h。

对于整只芒果，不要对其进行冲洗，直接将其放入无菌袋中，加入1倍重
量的BPW，如果需要可以加入更多量的BPW，将芒果和BPW一起放入5L
的烧杯或大的无菌袋中，然后将袋子口折叠卷起，室温放置60±5分钟，
如果需要，调节pH到6.8±0.2，35±1℃培养24±2h。

4.1.23 西红柿
对于粉末或切片水果，无菌取25g样品到225mL BPW中，均质2分钟，室温
放置60±5分钟，如果需要，调节pH到6.8±0.2，35±1℃培养24±2h。

对于整只西红柿，不要对其进行冲洗，直接将其放入无菌袋中或无菌铝箔
覆盖的烧杯中，加入1倍重量的UPB，如果需要可以加入更多量的UPB，
将西红柿和UPB一起放入合适的烧杯中或大的无菌袋中，然后将袋子口折
叠卷起，室温放置1小时，不需要调节pH，35±1℃培养24±2h。

4.1.24 环境样品
用无菌涂抹棒或涂抹海绵对样品表面进行涂抹，然后放着Whirl-pak袋子中，里面含有DE肉汤。

如果样品不是立即测试，可在4±2℃中保存48±2h。

向样品中加入225mL的LB，室温放置60±5分钟，如果需要，调节pH到
6.8±0.2，35±1℃培养24±2h。

4.1.25紫花苜蓿种子、绿豆
无菌称取25g样品到500mL三角瓶中，然后加入225mL LB，室温放置60±5
分钟，如果需要，调节pH到6.8±0.2，35±1℃培养24±2h。

4.1.26 蔓密苹果果肉
通常在分析前不需解冻。

如果是冷冻的样品，必须在低于45℃的温度下15分钟以内解冻已得到检样。

或者在2～5℃解冻18h。

如果怀疑含有伤寒沙门氏菌，无菌称取25g样品到500mL三角瓶中，加入225mL不含柠檬酸铁铵的UPB，充分振荡，室温放置60±5分钟，不需要调节pH，35±1℃培养24±2h。

如果怀疑不含有伤寒沙门氏菌，无菌称取25g样品到500mL三角瓶中，加入225mLUPB，充分振荡，室温放置60±5分钟，不需要调节pH，35±1℃培养24±2h。

4.1.27 绿叶蔬菜和草本植物
绿叶蔬菜和草本植物（嫩菠菜，长叶莴苣，芫荽，卷叶欧芹，意大利欧芹，刺芹，卷心菜，罗勒）无菌称取25g样品到225mL LB中，均质2分钟，盖子盖紧室温放置60±5分钟，如果需要，调节pH到6.8±0.2，稍旋开培养罐的盖子，35±1℃培养24±2h。