临床生化诊断试剂盒的选择与评价

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In_【企业诊断】第六章临床生化诊断试剂盒的选择与评价临床生化诊断试剂盒的选择

类繁多，有液体型、粉剂型、片剂型，有单一试剂、双试剂、干试剂、多试剂等。生产厂、供应商也很多。纵观近 20 多年来的发展，临床生化体外诊断试剂盒的分类和发展历史可用下图 6-1 表示。
图 6-1 临床生化诊断试剂盒分类和发展史
一、液体型试剂和粉（片）剂型试剂
（二）粉（片）剂型试剂所谓粉剂型及片剂型试剂，即是将试剂的各组分用球磨技术粉碎成粉剂或混合后压成片剂，使用前再加入指定的溶液复溶成液体试剂。干粉试剂如果在冻干分装前是液体型的，则其各组分是相当均匀的；但如果用固体原料研磨后制成粉剂或片剂，则存在许多问题：①要使试剂各组分混合得非常均匀，技术难度很大；②分装过程中的称量误差及复溶时加水量的准确性影响试剂的瓶间差； ③水质优劣对试剂的稳定性和测定的可靠性有相当大的影响。
（一）液体型试剂无论是单试剂还是双试剂型试剂，目前乃至今后仍以液体型为主要剂型。其优点是液体型试剂的试剂组分高度均一，瓶间差异小，测定重复性好和使用方便；它也无需加入任何辅助试剂及蒸馏水，避免了外源性水质对试剂的影响，性能较稳定，测定结果较为准确。缺点是液体型试剂（尤其是酶试剂）保存时间较短，不便于运输。 1．液体单试剂所谓液体单试剂就是将某种生化检验项目所用到的试剂科学地混合在一起，组成为一种试剂。应用时，只须将标本和试剂按一定比例混合，即可进行相应的生化反应，然后用适当的方法检测结果。应用十分方便。为了简化测定操作程序，提高工作效率，一度大多数试剂厂家都生产单试剂，以满足用户的需要。如测定葡萄糖和胆固醇的酶法试剂等。这些试剂的广泛使用，
二、其它类型试剂
为了适应生化分析仪和测定方法学的进步，近年来研究了许多新型的试剂盒，主要有以下几种。（一）快速反应试剂盒快速反应试剂盒主要是为了适应生化分析的技术进步，缩短反应时间，提高工作效率。如血液葡萄糖快速测定试剂盒。其试剂成分及浓度为磷酸盐缓冲液 100mmol/ L，pH7.4±0.1，葡萄糖氧化酶 > 40u / ml，变旋酶 > 0.2u / ml，过氧化物酶 > 2.5u / ml，4-氨基安替比林 0.5 mmol/ L， 4-羟基苯甲酸 4 mmol/L，亚铁氰化钾 1mg / L，叠氮钠 0.4g / L。同一般葡萄糖氧化酶法试剂相比是明显增加了葡萄糖氧化酶及过氧化物酶用量，更主要是增加了变旋酶，可使反应加快，3～4 分钟后即生成最终颜色。再如快速胆固醇试剂盒，用的是 pH6.6±0.2，250mmol/ L 磷酸盐缓冲液，胆固醇酯酶为 250u / L，胆固醇氧化酶 250 u/L，过氧化物酶 4000u / L，4-氨基安替比林 0.3mg / L，DHBS 8mmol/ L。样品与试剂比例是 1:100。37℃反应 2 分钟即可完成反应。可以明显看出是加大胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶等效应酶用量，从而使反应加速。目前要求这种快速反应的试剂用户还不多，但它是一种发展趋势。

临床生化检验试剂盒的选择及其质量控制

断结果时应注：除标本非均匀性的影响。营排５干扰物实验通过试验观察试剂对干扰物影响的耐受程度。常取一混合通标本，中分出几份，别加入不同已知量的：物，从分ｆ扰然后测定出不同干扰物浓度下的待测物量，比较其测定结果，各自的偏差从
高临床检测质量的关键。者认为以几个方面至关重要。笔
１试剂盒包装的完整性（）装。化诊断试剂盒应有完整的牢崮的包装和详尽明确１包生的说明书。包装应完整牢固，清晰印有产品名称、产批号、外并生失效日期、存条件及生产单位名称；包装应有印刷清晰的标保内
鉴定试剂盒时，需要检查其稳定性，其是在使用中发现测定仍尤结果偏低时。剂盒的稳定性与贮存条件密切相关，试工作液的稳定性还和使用中的污染与否有关，在评估时须保持指定条件贮存并要严防污染。８性能价格的比较任确保试剂盒质量前提下，临床应选购价格低的产品，降低以
７
稳定性试验试剂盒的稳定性是指试剂盒试剂的不同状态在不同条件贮存
后所保持其测定准确性的性能。产厂家在试剂盒的研制过程生中，已做过稳定性试验，加有适当的稳定剂。用户在选择和都并但

临床生化检验试剂盒性能评价试验—线性范围试验方案

临床生化检验试剂盒性能评价试验—线性范围试验方案线性范围试验旨在评价试剂盒在一定的浓度范围内是否能够提供准确、可靠的测量结果。

线性范围是指试剂盒能够正常工作的浓度范围，通常以
正常生理范围为基础进行选择。

试验方案包括以下几个步骤：
1.准备样本：选择一种或多种具有不同浓度的标准物质，可以是纯品、混合物或者浓度已知的样本。

确保选取的样本覆盖到试剂盒的线性范围。

2.样本加样：按照试剂盒使用说明书中的方法，将不同浓度的样本加
入到试剂盒提供的反应池中。

同时还可以加入一定浓度的质控品作为质量
控制。

3.反应：按照试剂盒使用说明书中的方法，将试剂盒放入适当的温度
和时间条件下进行反应。

4.测量：使用相应的测量仪器对反应后的样品进行测量。

注意，为了
减小误差，每个样本应重复测量多次。

5.数据分析：根据测量结果，绘制标准曲线。

标准曲线是通过浓度与
测定值之间的关系绘制的，其中浓度为横坐标，测定值为纵坐标。

可以使
用常见的回归分析方法进行数据处理，如线性回归或非线性回归。

6.评价：通过标准曲线的拟合度来评价试剂盒的线性范围。

通常使用
相关系数（R）和决定系数（R^2）来评估标准曲线的拟合度。

相关系数越
接近于1，表明试剂盒的线性范围越好；决定系数越接近于1，表明试剂
盒的拟合度越好。

线性范围试验是评价试剂盒性能的重要指标之一、通过此试验，可以
验证试剂盒在标准浓度范围内测定结果的准确性和可靠性。

同时，线性范
围试验结果还可以用于确定测定结果的限制范围，有助于指导临床医生进行判断和诊断。

临床化学分析方法选择与评价

临床化学分析方法选择与评价本文将就临床生化检测中的试剂选择，试验方法的选择，以及实验结果的评价方法进行简单的阐述。

使大家对试验方法的各种评价指标和评价方法有充分的了解，同时能让大家充分认识到实验室的检测方法评价的重要性。

一、对试剂及试剂盒的选择（一）对试剂的要求为了保证一定质量，对生化试剂的要求，首先实验室使用的检验试剂应通过国家食品药品监督管理局 SFDA 的批准，拿到批准文号；第二，产品的名称，应参照 SFDA 颁布的“体外诊断试剂分类目录”确定产品的名称；三，规格型号，应规定可进行测试的次数，也可用包装规格表示。

（二）对试剂盒的要求对试剂盒的要求都有哪些？第一，检测原理，即方法学原理，简单扼要说明测定原理及名称；第二，试剂组份，要明确说明试剂中组份，组成成份的数量、比例及浓度，应采用国际标准或法定单位；第三，所用校准品应该符合国家食品药品监管管理局（ SFDA ）的标准和要求；第四，试剂的稳定性，应该标明试剂盒的贮存条件与有效期，同时还要注意开瓶后试剂的贮存条件与有效期。

有特殊要求时应该明确说明；第五，检测程序，包括校准和质控的程序；第六，参考区间及其参考人群的说明，实验室给临床发报告时候，必须要给出参考区间，结果的参考区间切忌不要直接使用国外人群的参考值，不能代表中国人群的实际情况。

第七，诊断性试剂的性能评估，它的准确性对临床诊治疾病非常重要。

评估包括试剂的敏感性、特异性、精密度、线性范围或可报告范围、抗干扰能力、准确性、溯源性、方法对比结果等；第八，注意事项，应该注明是体外诊断用，以及化学品危害的说明等。

二、实验方法和标准品的选择实验方法根据准确度与精密度的不同，可以分为三级，即：决定性方法（一级参考方法）、参考方法（二级参考方法）和常规方法（厂家选定方法和终用户实验室常规方法）。

（一）标准品的分级标准品可以分为一级标准品（一级参考物质）、二级标准品（二级参考物质）和校准品，前两级是国家认可的，它有标准物质证书。

临床生化检验技术本科第二章临床生物化学检测方法的选择与评价

②管回收率： 0.18(mmol/L)除以0.19(mmol/L) 等于94.7% ③管回收率： 1.15(mmol/L)除以1.19(mmol/L) 等于96.6 平均回收率
=95.7%
第二章临床生物化学检测方法的选择与评价
结果列表
测得浓度
①1.70 ②1.88 ③2.85 平均
加入浓度
― 0.19 1.19
第二章临床生物化学检测方法的选择与评价
第二节临床生物化学检测方法的评价和性能判断
一、检测系统的比对二、方法学性能评价三、质量目标设定与方法学性能判断
第二章临床生物化学检测方法的选择与评价
方法学评价
• 建立或引进一个新方法，应对其技术性能如准确度、精密度、线性等指标做出评价。
• 通过实验途径，对其性能评价指标（精密度、准确度等）进行测定，决定候选方法是否可以被接受（判断其能否满足临床使用要求）。
主要方法：溴甲酚绿法、双缩脲法、J-G法等。
应用：临床常规检验使用，常规方
法在作出评定以后，经有关学术组织认可，可以作为推荐方法（recommended method ）。
第二章临床生物化学检测方法的选择与评价
第二章临床生物化学检测方法的选择与评价
• 决定性方法
一级标准品
• 参考方法
第二章临床生物化学检测方法的选择与评价
2.精密度评价——重复性试验
试验的目的在于考察候选方法的偶然误差（也称随机误差）。（1）方法：在重复性条件下对同一样本，进行多次分析测定，各测定值间随机误差的大小，即结果的可重复程度就是精密度。一般测定次数为20 次。
反映精密度好坏的指标：标准差或变异系数。
应用：

诊断试剂盒评估报告

诊断试剂盒评估报告报告目的：本评估报告旨在对一款诊断试剂盒进行全面评估，包括性能、准确性、可靠性以及与现有市场上类似产品的比较等方面的评估，为其在医疗领域的应用提供参考。

报告内容：一、产品概述该诊断试剂盒是一种用于疾病诊断的快速检测工具。

它基于xx技术原理，可以在短时间内迅速检测出其中一种特定疾病的存在与程度。

该试剂盒具有简便、快速、准确的特点，适用于临床、实验室等不同场景下的使用。

二、性能评估1.灵敏度：通过一系列浓度递减的标准物质进行实验，评估试剂盒对于低浓度目标物的检测能力。

结果显示，该试剂盒对于低至xx浓度的目标物具有较好的灵敏度。

2.特异性：为了评估试剂盒对于非目标物的特异性，我们使用多种潜在干扰物样本进行测试。

结果显示，该试剂盒对于非目标物没有明显的交叉反应，具有较好的特异性。

3.精确度：通过多次重复实验，评估试剂盒的测量结果的重复性和一致性。

结果显示，该试剂盒具有较好的重复性和一致性，其测量结果的偏差较小。

三、准确性评估为了评估试剂盒的准确性，我们与已有的黄金标准进行对比分析。

结果显示，该试剂盒与黄金标准的结果具有较好的一致性，其准确性可以得到有效保证。

四、可靠性评估1.试剂稳定性：我们对试剂盒进行了长期存储试验，并测试了存储不同时间后的试剂的性能。

结果显示，该试剂盒具有较好的稳定性，能够在常规储存条件下保持较长时间的有效性。

2.运输适应性：为了评估试剂盒在运输过程中的适应性，我们模拟了运输过程中的不同环境条件，并测试了不同环境条件下试剂盒的性能。

结果显示，试剂盒在极端温度和湿度条件下仍能保持较好的性能。

五、市场竞争分析我们对市场上类似产品进行了调研和对比分析。

结果显示，该试剂盒相对于其他产品具有更快的检测速度、更高的准确性以及更低的成本，具有较强的竞争优势。

六、结论及建议综合以上评估结果，我们认为该诊断试剂盒具有良好的性能、准确性和可靠性，适用于临床、实验室等不同场景下的使用。

建议公司加强宣传推广，提高市场认知度，并与相关机构合作，进行更大范围的临床验证，以进一步验证其应用效果。

临床检验试剂盒的选择和相关质量控制研究

［］ｍ￣Ｔ，ｔａ．ＳａｉｔｏＡＰｆｃｏａｉｌｆｔｓｏ５ａＪｅ１ｔｌｙｆＮＤＨｅｅｔｆＶ／ｌａｏｎｂｉ＊ｓｃｒｏｔｅｉｅｉｄｇａａｉ［，ｌｈｍ，９６，２：１．ｈＫｎｔｓｆｅｒｔｎＪＣｉＣｅ１８３３４ｃｏｄｏ］ｎ
试剂不能交叉使用。检验科人员要掌握检验试剂的一般性质和分类规律，
严格遵守规章制度，高实验室诊断准确率。提随着检验医学
的进步和发展，剂盒已经广泛应用到临床实验室检测中，试也成为促进实验室检测水平的重要因素，实验室检测水平的提高不仅依靠检验人员的水平和操作技能，同时要加强实验室规范化建设，规范实验室试剂的使用程序，以杜绝可劣质试剂，保证检验的质量，节约实验成本，提高诊断质量，以更好地为为临床提供诊断和治疗的依据。
和治疗提供可靠的依据。２试剂盒的质量控制２１试剂盒的系统化管理检验科试剂盒要由专人管理，．管理人员应该具有较高的思想水平可靠、责任心强、对检验
【叶应妩，４】王毓三，编．国临床检验操作规程ｆｌ主全Ｍ．第２，Ｊ版南京：东南大学出版社，９７３１３６１９：３～３，
参考文献
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浅析实验室生化诊断试剂盒的选择与质量评价

队伍,一支创新能力较强的专业人才队伍,一支具有凝聚力与创造力的高素质员工队伍。

以竞争机制激励人。

要建立与医疗市场竞争相适应的竞争机制、激励机制、绩效考核机制和分配机制,为员工实现自我价值提供平台,调动员工的积极性,充分体现竞争与分配相结合。

以持续培训塑造人。

要创建学习型医院,不断完善教育培训管理体系,医院、科室及个人要分层次制订学习培训计划,有针对性、系统性地进行素质培训工作,提高员工的专业技术能力、科技创新能力、医患沟通能力和团队协作能力,实现员工素质与医院运营绩效的同步提高。

2.3强化知识管理,提高创新力医院作为知识密集型组织,提高知识管理和技术创新能力是应对竞争的最佳选择。

首先,加强对内部知识的管理,加强对现有人才特别是知名专家的管理,发现、培养内部的人才,打造特色专科,发展优势技术,促进科技成果的推广转化和临床应用。

其次,加强对外部知识的管理,密切关注行业管理、技术、人才发展动态,采取请进来和走出去的方法,大胆引进新技术、新项目,抢占医学科技制高点。

2.4注重细节,提高执行力执行是一套系统化的流程,它包括对方法和目标的严密讨论、质疑、坚持不懈的跟进以及责任的具体落实。

一是执行速度。

在医疗市场竞争中,谁赢得时间,谁就在竞争中占据了主动性。

二是持久性。

要把医院管理和服务中的每件事都持之以恒地做到细节,做到完美,并随时随地体现在医院管理和服务的每个细节,让每个患者都满意。

三是灵活性。

在执行过程中,没有一成不变的,要建立灵活的内部运行机制,注重权变管理。

四是建立执行反馈机制。

对执行过程中遇到的问题及时反馈,提高执行效率,促进工作目标的完成。

2.5实施品牌战略,拓展传播力品牌是医院的无形资产,是医院核心竞争力的重要支撑。

优秀的品牌体现了医院的文化、管理、质量、服务、效率等要素,是医院核心竞争力和医院精神在医疗实践中的凝结与体现。

一是发现品牌。

在全体员工共同遵循的核心价值观基础上,确立医疗服务的模式,即医院品牌,使品牌既代表医院的综合实力,又具有鲜明的个性特征。

临床生化检验方法的选择和评价

零线
比较方法结果
差异分析图
比较方法结果
对比分析图
2．回收试验所谓回收即分析方法正确测定加入常规分析样品中的纯分析物的能力。目的是测定比例系统误差，以衡量候选方法的准确度。（1）方法：将被分析的纯品标准液加入样品中，成为分析样品，原样品加入同量的无分析物的溶液作基础样品，然后用实验方法分析，两者测定结果的差值为回收量。
结果分析 10/3/2019
(1)作图分析齐齐哈尔医学1院生)化差教研异室分析 2)对比分析
–– 差异图:
Y轴:试验方法与比较方法之差 X轴:比较方法的测定值 –– 对比图:
Y轴:试验方法测定值 X轴:比较方法的测定值
测定方法结果差异（试验－比较）
10/3/2019
齐齐哈尔医学院生化教研室
一级参考物用途：发展和评价参考方法，校正决定性方法和参考方法，产生二级参考物
参考方法
用途：为二级参考物及控制物定值，评价常规方法（标准化、偏差、干扰因素）
二级参考物
用途：常规方法的工作标准及为控制物定值
各级实验方法与参考物的相互关系
二常规方法选择的原则
（一）适用性
微量快速方法简便安全可靠成本低廉
2．二级标准品（次级参考物， secondary reference material ）包括用于常规分析的标准液。这类标准品可由实验室自已配制或为商品，它的示值必须用一级标准品和参考方法并由训练有素的，能熟练掌握参考方法的操作者确定；主要用于常规方法的评价或为控制物定值和常规测定的结果计算。
（三）线性评价
1．目的要求线性范围是分析方法的一个重要技术指标，它能判断对某一分析方法测得的浓度或活性值与设定的浓度或活性值之间的比例关系的范围。常规方法应具有较宽的分析范围，一般应覆盖临床可能出现的高值。

临床生化检验方法与试剂盒评价

对
第第181页8页
第二节临床生化检验方法的性能评价
一方法学的性能指标二方法学性能评价的内容三方法学评价试验四临床生物化学方法学性能判断
第19页
可靠性
一方法学性能指标
准确度精密度
实用性
方便性安全性可测范围
经济性简单快速
第20页
准确`度
准确度（accuracy）的传统定义是指测定值与“真值”的接近程度。是指一次测定的结果与被测物真值的接近程度。
①制订分析质量目标 ②仪器性能评价 ③确定对比检测系统
④初步评价检测系统
⑤比对
步内
骤容
可接受性判断
第16页
允许不精密度、允许偏倚和允许总误差
准确度和精密度
参考系统或公认的测定系统
性能指标
40-100例
测定系统的关键要素
方法学
试剂配方和来源
操作程序
测定系统
仪器
第17页
校准品
全球性可比性战略实施
第9页
图21-1 各级参考物质和校准品的关系及其量值传递过程
第10页
三量值溯源
溯源性
溯源性(traceability）是指通过一条具有规定不确定度（uncertainty）的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准（通常是国家或国际测量标准）联系起来的特性，称为溯源性。其不间断的比较链称为溯源链。
常规校` 准品
校准（calibration）指的是对由仪器、方法和试剂所组成的检测系统的校准过程。电解质、酶类、其他生化指标应合理选择校准品
第7页
标准品校准品质控品
一级标准品用高纯化学物质（纯度>99.98%）直接通过称重配制的溶液，是唯一值。一般由国家标准计量局出具证书。二级标准品某种成分的浓度可用公认的参考方法测定。由参考实验室或权威学术组织出具证书，如SRM、BCR、IFCC。

临床生物化学检验试剂盒的性能评价

临床生物化学检验试剂盒的性能评价第三节一临床生物化学检验试剂盒的性能评价临床生化检验试剂盒是用化学和生物化学反应的原理二用于完成一个特定体外诊断检验,而包装在一起的一组组分三试剂盒组分可包括抗体二酶二缓冲液二稀释液二校准物二控制物或其他物品和材料,用于体外测定人体体液中的化学和生物化学组分来获取临床诊断信息三它是体外诊断试剂(i nv i t r od i a g n o s i s r e g e n g t s)中的一大类,根据我国国家食品药品监督管理局(S F D A)的‘医疗器械分类目录“,归为临床检验分析仪器类,按医疗器械管理三体外诊断试剂按风险级别进行分类分级管理,Ⅲ二Ⅱ二Ⅰ类产品分别由国家二省级二市级药品监管部门审批,临床生化检验试剂盒多属Ⅱ类产品三一二临床生物化学试剂盒的质量标准2006年制订了‘临床化学体外诊断试剂(盒)通用技术要求“,规定了临床化学体外诊断试剂(盒)质量检验的通用技术要求,包括术语和定义二分类和命名二要求二试验方法二标签和使用说明二包装二运输和贮存三适用于医学实验室进行临床化学项目定量检验所使用的体外诊断试剂(盒)三该标准是目前临床化学体外诊断试剂(盒)注册审批的标准三二二临床生物化学检验试剂盒的分类根据其物理性状,可以分为干试剂和液体(湿)试剂,干试剂根据制备工艺不同分为干粉二冻干二片剂二干试剂条等三干试剂的优点是运输方便二保存期长,其缺点是组分均一性较差,瓶间差较大,分装过程中的称量误差和复溶时加入水量的误差,都导致瓶间的不均一性,水质的优劣对试剂的稳定性和测定结果的可靠性有相当大的影响三除干试剂条应用于干式生化仪外,其他干试剂已经逐渐被淘汰三液体试剂因组分高度均一二瓶间差小二测定重复性好二不需复溶直接使用等优点,是目前使用最广泛的剂型三液体试剂主要分为单液体型和双液体型三(一)单液体型单液体型特别适用于半自动生化分析仪和小型自动生化分析仪三半自动生化分析仪和小型自动生化分析仪因缺试剂瓶位置或试剂瓶位置少,而适用单试剂三从技术角度讲,要保证足够的试剂盒稳定性,在所有剂型中,单液体型试剂盒对稳定技术的要求最高,尤其是酶法分析试剂盒,将酶二辅酶二色原等组合为单一试剂,稳定技术更高三但抗干扰能力无法与双液体试剂比拟三(二)双试剂液体型大多数中二大型生化分析仪有两根试剂针,使用双试剂不会影响分析效率三有时为了稳定性的需要,试剂盒内含有三个试剂,临用前将某两个试剂混合,再按双试剂使用三因具备优点多,是目前主流剂型三1.稳定性能好一与单一液体试剂相比,可以分拆为两个试剂,可采用不同的缓冲体系(离子强度和p H都不同),混合后为最适p H;其稳定技术容易得多,比如,可以将酶和辅酶与色原分开,也可把辅助酶与指示酶分开三2.可消除样品自身空白一可设计成第一试剂与样品不发生化学和生物化学反应,两者混合后读取第一个吸光度,在两点平衡法中可扣除该吸光度,相当于做了一个空白对照三所以,原来传统用单一试剂的方法,如双缩脲法测定总蛋白二溴甲酚绿法测定清蛋白等,都特地分拆成两个试剂,第一试剂的作用等同于蒸馏水,第二试剂经过浓缩,混合后各组分含量同传统的单一试剂,起到消除样品空白的作用三3.提高抗干扰能力一①消除内源性和外源性干扰:首先让试剂Ⅰ与样品中的干扰物质反应,一定时间后再用试剂Ⅱ启动真正的测试反应,最大程度地消除内源性和外源性干扰三如消除甘油对T G二丙酮酸对A L T/A S T二N H4+对尿素的干扰等三②消除杂酶的干扰:如G L D H对待测脱氢酶的干扰三③消除T r i n d e r s反应负干扰,在试剂Ⅰ中的氧化剂与样品中胆红素二维生素C 氧化酶与样品中的维生素C进行预反应三4.预反应一试剂Ⅰ与样品预反应,有足够的时间让辅基或辅酶对酶进行复活,免疫抑制法中使抗体对某一抗原的抑制更彻底三(三)其他剂型多项同测组合试剂是指两个相似的项目在同一反应杯中进行先后测定,其最大的优点可以减少试剂仓位三如直接胆红素和总胆红素二胆固醇和T G的组合试剂等三浓缩试剂则在测定之前,自动生化分析仪先稀释,优点是在工作量繁重时可以减少添加试剂的次数三三、临床生物化学试剂盒的性能指标及评价临床生化试剂盒的性能指标包含了所有方法学的性能指标,并增加了稳定性能的指标三一般来讲,采用化学反应原理的试剂盒稳定性较好,而酶二辅酶二底物二抗体等多不稳定,增加了对试剂盒稳定性的难度三根据‘临床化学体外诊断试剂(盒)通用技术要求“,参考‘临床化学体外诊断试剂(盒)产品技术审评规范“(2011版),试剂盒的性能指标及评价方法如下:(一)试剂空白吸光度用蒸馏水做空白,用指定的空白液加入试剂作为样品测试,是判定试剂质量的一个有效指标三对以N A D H做底物的负反应试剂盒,因N A D H在中性缓冲体系不够稳定,规定其空白吸光度需>1.0,目的是保证足够量的底物N A D H,保证足够的线性范围,避免底物耗尽三以色素原底物的试剂盒,其不稳定因素主要来自于底物三因色素原底物容易自身水解,因此也需要规定其空白吸光度不能超出一定范围,以防止底物不足三对以T r i n d e r s反应原理的试剂盒,防止发色基团的氧化,规定空白吸光度需<0.05;因较高的空白吸光度会导致线性范围变窄,重复性变差三(二)试剂空白吸光度变化速率对于速率法试剂盒,用指定的空白液加入试剂作为样品测试时,测定试剂空白吸光度变化(ΔA/m i n),用来检查试剂在工作状态下的稳定性三但事实上,试剂空白吸光度变化速率无法反映试剂盒的稳定性,因为试剂盒的稳定期一般要求一年以上三若每分钟有明显的吸光度变化,按0.001/m i n计算,37?孵育一天,其总的吸光度变化达到1.44,说明试剂早已失效三试剂空白吸光度变化速率主要反映干扰程度和仪器的稳定性,如反应杯的洁净程度及分析仪的交叉污染严重程度三但若某个试剂中有杂酶,若两个试剂混合后会造成试剂空白吸光度变化速率过高,所以也是评价试剂盒质量性能的指标三(三)分析灵敏度用吸光度差值(ΔA)或吸光度变化(ΔA/m i n)来表示单位浓度的被测物反应所引起的信号变化,其含义类似摩尔吸收系数三分析灵敏度不是越高越好,以适合待测物检测范围为原则三如胆固醇二葡萄糖二尿酸二肌酐的测定方法都用T r i n d e r s反应,血液中这些物质的含量相差数倍甚至几十倍,应使用不同灵敏度的发色剂三对酶法分析试剂盒而言,酶试剂不稳定,可导致灵敏度下降;对免疫比浊法而言,抗体效价下降也会造成灵敏度下降三分析灵敏度一般用于批间比较,较能反映制造商的配方二原料的一致性三(四)线性范围取高浓度样品和低浓度样品按不同比例混合成5个浓度做线性试验三试剂(盒)的线性范围越宽,临床复测几率越小,但与样品/试剂比例成反比三国家对线性范围的要求较低,但要求线性相关系数r应?0.990,同时对线性偏差也作出规定三(五)重复性用质量控制血清3?3(3个批号,每个批号取3瓶)测试批间差,较能反映制造商的配方二原料的一致性三干粉或冻干试剂还需测定批内瓶间差,测定同一批号的试剂20瓶,用变异系数(C V)来表示三(六)准确度1.相对偏差一直接用试剂盒测定参考物质(平行3次),评价测定均值与靶值的偏离程度三如无参考物质,可用由参考方法定值的高二中二低三个浓度的人混合血清,用试剂盒平行测定3次,计算均值与定值的相对偏差三2.回收试验一测定试剂盒若有标准品,也可用回收率衡量比例系统误差三3.比对试验一既无参考物质二参考血清,也无标准品,也可用比对试验来验证准确度三参照E P9A2的方法,用不少于40个在检测浓度范围内不同浓度的人血清样品,以公认的分析系统作为比对方法,用线性回归方法计算两组结果的相关系数三(七)稳定性1.效期稳定性一取已到效期的试剂盒按以上评价方法对试剂盒性能指标进行评价三可作为审批的依据,但对该批次的试剂盒的稳定性意义不大三2.热稳定性试验一对同批次试剂盒稳定性目前没有很好的评价方法三生化试剂盒一般置2~8?保存,为了快速有效地评价试剂盒的稳定性,可以用加速试验来估计三即将试剂盒置于37?孵育箱,每天按以上评价方法对试剂盒性能指标进行评价三根据蛋白质在不同温度下稳定性换算公式估算,37?孵育一天相当于2~8?一个月三但因为试剂盒成分复杂,各种酶的耐热性有很大差别,所以只能对该批次试剂盒的稳定性做大概估计三3.开瓶稳定性一也称在仓稳定性,是指试剂盒置分析仪试剂仓在使用过程中的稳定性三试剂曝露于空气会影响缓冲体系的p H等,仪器的交叉污染也会影响使用中的稳定性三在临床实际工作中,更关注开瓶稳定性三评价方法是每天记录空白二校准和质控品的吸光度,以及绘制质控图,按质控规则判断三(八)临床试验完成以上试剂盒的性能指标评价后,还需按照‘体外诊断试剂注册管理办法“(试行)及‘体外诊断试剂临床研究技术指导原则“进行临床试验三1.临床试验文本一要有临床机构伦理委员会确认的文件;有两家省级医疗卫生单位完成临床研究的研究报告三2.临床样本比较试验一新诊断试剂(盒)应与该诊断疾病的金标准针对临床样本进行盲法同步比较; 已有同种批准上市的试剂(盒)应与已批准上市产品针对临床样本进行比对试验三3.临床样本的要求一综合不同地区人种二流行病学背景二病原微生物的特性等因素选择研究单位,症状典型和非典型的,一般临床研究的总样本数至少为200例,新诊断试剂(盒)1000例三四、临床生物化学试剂盒的发展趋势我国使用临床生化试剂盒的历史只有20多年,分析仪的普及和试剂盒的使用是临床生化实验室的一大革命,基本满足了临床生化检测数量日益增长的需求,更重要的是检验结果的质量得到了大幅度的提升三因生化试剂盒相对于免疫试剂盒技术要求低二研发周期短二研发成本低,已基本实现了国产化,国产试剂盒的质量也与先进国家相媲美三但原材料(酶二抗体)和核心技术都还依赖进口,自主研发能力较为薄弱三有必要对临床生化试剂盒的发展趋势进行简单总结三(一)适应生化分析仪的要求生化分析仪为了追求分析效率,操作步骤简单,分立式分析仪无法完成离心二煮沸步骤,反应时间短(多不超过10m i n)三因此,针对分析仪的这些特点,对常规方法进行了修改三原来采用无蛋白血滤液的测定方法,通过使用表面活性剂二减少样品/试剂比例二提高灵敏度等措施来防止蛋白质的干扰,以达到不需样品预处理的目的三但是,有些简化步骤或改变条件是以牺牲方法学性能为代价,如:①缩短反应时间三如为了缩短反应时间,双缩脲法测定总蛋白不得不修改试剂配方;葡萄糖氧化酶测定血糖的试剂盒添加了变旋酶三②统一测定温度在37?三为此,I F C C修改了酶活性参考方法的温度三③简化步骤三高(低)密度脂蛋白胆固醇的均相法不经离心直接测定,但原理不够严密二特异性不够高;又如对改良J G法作了进一步修改,虽不需要终止反应,但导致直接胆红素的结果不够准确三④样品/试剂比例受限制三B C G法测定清蛋白,原推荐方法中,样品/试剂比=1?500,而多数分析仪最大样品/试剂比例不足1?250,导致线性范围变窄三(二)酶法分析的应用酶的高度特异性使酶法分析可以不需样品预处理而直接测定待测物三正因为酶法分析的操作简便二条件温和二安全,才使生化试剂盒产业蓬勃发展三酶法分析是试剂盒发展的方向,研发者千方百计使用酶法来取代化学法三在不断涌现商品酶的同时,生化检验试剂盒随之日新月异,试剂酶的生产与试剂盒的研发已经形成良性循环的局面三面对越来越多的商品酶,应从纯度二价格二催化效率二稳定性二耐热性等方面综合考虑,遵循实用二可靠的原则,选择使用三(三)免疫比浊法的应用近20年来,医学检验的飞速发展离不开杂交瘤抗体生产技术三吸收光度法受灵敏度的制约,很难检测微量物质三免疫比浊法很好地结合了免疫技术,使很多微量蛋白质等的生化测定成为可能三但浊度法的检测波长不是特异光吸收,受到样品自身空白和其他浊度的干扰,抗体的效价二与抗原(游离或复合物)反应性的差异二校准品的选择二校准曲线的拟合二质量控制二抗原过剩等问题都还需要标准化三(四)高灵敏度试剂盒的应用酶法和免疫比浊法是临床生化试剂盒研发的两大方向三围绕这两种原理,通过提高灵敏度,开发了一系列新的生化项目三1.胶乳凝集免疫比浊一高敏C反应蛋白二肌钙蛋白二肌红蛋白二胱抑素C二糖化血红蛋白二脂蛋白(a)等借助于胶乳凝集免疫比浊技术,提高了灵敏度,应用于自动生化分析仪三可以预见,目前只能用散射比浊或化学发光检测的特定蛋白二激素二肿瘤标志物二病原抗原等,不久也会有胶乳凝集免疫比浊法试剂盒推出和应用三2.酶循环法一像胆汁酸二氨二同型半胱氨酸等在体内含量甚微,甚至只有不足10μm o l/L,传统的生化方法无法测定三利用酶循环法的原理使不可能成为可能,酶循环法的应用将会越来越广泛三3.发色剂的合成一自然界氧化酶种类繁多,但因酚类色原灵敏度和稳定性的限制,T r i n d e r s 反应的应用目前只停留在10-1~102m m o l/L水平,像乙醇目前还无法直接测定三可以预见,随着新色原的发现,将会有更多的试剂盒使用T r i n d e r s反应的原理三4.人工合成底物一人工合成底物是医学检验与化工二生物合成等领域结合的产物,因方法简单,特别适合于水解酶类和转移酶类的测定,人工合成底物不限制在色素原底物,将会有更多的选择空间三(五)提高方法特异性的措施试剂盒的临床应用除了方便,还应有准确度和稳定性保证三试剂盒的准确度主要取决于方法学的特异性,但通过合理的配方二合理的组合可以提高方法的特异性:①液体双试剂能有效的消除干扰三②指示通路的合理选择,如T G的酶法不下5种,除考虑酶的来源和价格因素外,提高方法特异性是首先应考虑的问题;酶活性测定的正二逆反应的选择,测底物还是测产物的选择,都应首先考虑方法的特异性三③抑制剂的使用,试剂中的杂酶二样品中的干扰酶可以采用加入抑制剂(高浓度的杂酶产物),干扰物可以通过引进一个副反应来解决三(六)提高试剂盒稳定性的措施生化检验的推荐方法和参考方法,其主要成分的配方都是公开的三生化试剂盒研发的关键是稳定技术三近几年酶稳定剂的发展使酶法试剂盒的质量得到了很大的提高三试剂盒的稳定性主要取决于酶或辅酶的稳定和底物的稳定三酶的本质是蛋白质,要使酶稳定首先能稳定蛋白质,一个适合的缓冲体系至关重要三再从活性中心出发,设法保护催化基团和结合基团三稳定的措施包括使用防腐剂(抑制细菌生长)二蛋白稳定剂(防止水化二聚合)二蛋白酶抑制剂(防止蛋白酶的水解)二巯基酶保护剂(防止巯基氧化),以及隔绝空气(对氧化酶)等;稳定底物的措施有含水量的控制和缓冲体系的选择等三(沈财成)。

试剂盒性能评价尿素测定OPA法试剂盒评价试验

11.性能指标：实验的途径客观评价试剂盒分析性能
测定的线性范围 (Linear range) 精密度 (precision) 准确度 (accuracy) 干扰 (interference) 稳定性 (stability) 方法比较(comparison of methods) 化学反应时间曲线 (Time curve)
试剂盒性能评价尿素测定(OPA法)试剂盒评价试验
临床生物化学检验设计性实验
临床生化检验试剂盒性能评价
——是通过实验的途径客观评价试剂分析性能的重要手段。
外包装内包装说明书的内容要求
观察阅读试验
鉴定试剂盒的分析性能指标
一、外包装：应完整牢固，并印有产品名称、生产批号、失效日期、保存条件及生产单位名称。印刷应清晰。二、内包装：应配备齐全。应有印刷清晰的标签，牢固贴于容器表面，标签内容包括：品名、批号、失效日期。
【总的目的要求】
1. 掌握实验设计原理和基本方法； 2. 运用统计学方法评价分析试剂盒的各项性能指标； 3. 各项性能指标的评价标准、允许误差； 4. 熟悉操作注意事项和出现性能指标异常的原因； 5. 客观评价OPA法测尿素试剂盒各项性能指标的优劣（接受或拒绝的依据）。
一、线性范围试验
【原理】
试验内容
检测线性范围→→ 检测最高上限(Max)、下限(Min) 精密度→→ 准确度→→ 干扰→→ 方法比较→→ 稳定性→→ 反应时间曲线→→ 重复性-随机误差(Random error)--CV值真值性-比例系统误差-回收率
(Proportional system error)
特异性、抗干扰能力-恒定系统误差-Bias
(constant systematic error ) a、b ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱP值

临床生化实验方法的选择和评价

比例误差：相对于被测物浓度有相同的百分比误差，误差的绝对值与被测物浓度成正比。
引起原因：
方法误差：最严重、最难避免的误差，是方法的分析性能所固有的缺陷所致。可通过方法的选择和评价来减少。
仪器和试剂误差：常见仪器波长未校准，量器不准，试剂质量差等。
2）随机误差（random error，RE）：
试验形式与方法 (1)批内重复性试验：用同一份标本在短时间内用候选方法作多次(一般20次)重复测定。 (2)日内重复性试验：在一天内对一个或数个标本作数批重复测定。 ( 3)日间重复性试验：将同一标本分成数份，按方法每
3）灵敏度：化学反应中能检出的最小量。
4）特异性：分析测定中只对某一成分起反应，其他物质对反应毫无影响或基本无影响。
5）线性范围：实验方法所能检测标本中某物质的浓度范围。
（二）方法评价实验 1、重复性实验：实验的目的是检测候选方法的随机误差。方法是对同一材料(标准液、质控液、标本等)分成数份试验标本进行多次分析测定
2、实验误差实验误差：测定值与真值之差 1）系统误差（systematic error， SE）：一系列分析测定的结果对真值或靶值存在有同一倾向的偏差。一般由恒定因素引起，重复测定，重复出现，消除系统误差可提高测定的准确度。分为：
恒定误差：由干扰物引起的使测定值与真值存在的误差，与干扰物浓度相关，与被测物浓度无关。
火焰光度法火焰光度法免疫化学法双缩脲法离子交换层析法尿素酶法尿酸酶法（紫外法）重氮反应法己糖激酶法
Abell-Kendall法，胆固醇氧化酶法
酶法 MDH-NADH法 LDH-NADH法连续监测产物生成法 NAD+偶联法
2、标准品的分级

生化试剂盒评价

试验记录
时间（min）
吸光度
1
2
3
4
5
6
7
8
9 10
试剂空白待测样本
时间反应曲线试验—试剂空白
试剂盒性能指标
• 试剂空白吸光度：在480nm处（光径 1cm），试剂空白吸光度应≤0.50。 • 效期稳定性：原包装试剂在2~8℃避光贮存，有效期为12个月。 • 试剂开盖稳定性：试剂开盖后在2~8℃ 避光保存，稳定期为15天。
生化检测试剂盒的评价
华中科技大学同济医学院附属同济医院李辉军熊志刚
2011.06
评价内容
• • • • 重复性试验回收试验线性试验比对试验
• 时间反应曲线试验 • ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ定性试验
时间反应曲线试验—目的
• 掌握终点法和连续监测法测定时间反应曲线试验的方法、原理和意义。
• 熟悉时间反应曲线的绘制方法和注意事项。
• 了解终点法和连续监测法测定的参数及其性能评价方法。
时间反应曲线试验—原理
• 终点法测定的是化学反应达到平衡时的产物生成量，这样才能较可靠的反映待测物的量。 • 用稍高于参考值上限的标准液或定值血清，用已知质量可靠的试剂盒，并按试剂盒说明书的要求进行测定，以观察反应达到平衡期的时间以及反应持续和终止的时间，即可分析该试剂盒测定的性能。
氯测定试剂盒（硫氰酸汞比色法）检验原理
• 血清中的氯离子与试剂中的硫氰酸汞反应生成极难解离的氯化汞，同时产生硫氰根。 • 硫氰根进一步与三价铁离子结合形成红褐色Fe(SCN)3。 • 在480nm测量吸光度，吸光度增加与氯离子的浓度成正相关。
试验步骤
试剂空白蒸馏水样本试剂 15ul ---3ml 待测样本 ---15ul 3ml

诊断试剂性能评价生化检验

全国高等医药院校医学检验专业规划教材
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临床生物化学检验（第二版）
第三章临床生物化学诊断试验的性能基础与评价
三、在临床应用中应注意的问题
参考范围的使用有一定的范围，仅适合于符合参考个体要求的参考人群。参考范围仅覆盖研究人群的95%，因此，参考值范围不能盲目地作为正常与疾病的分界点。综合评估。注意年龄、性别、饮食、药物、个人习惯和体力锻炼等因素的影响。检测方法与参考范围或参考值的关系。
有三个DL：20g/L、35g/L、52g/L。 20g/L表示肝病患者的预后严重； 35g/L为检查低清蛋白血症的界值； 52g/L则稍高于参考范围上限，可排除许多假阳性。
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临床生物化学检验（第二版）
第三章临床生物化学诊断试验的性能基础与评价
医学决定水平的临床应用举例
❖ 6．参考值区间——包含95％的参考总体的参考值范围。
双侧正态（均数法）：x±1.96s，即（ x－1.96s）～
（x＋1.96s）；双侧偏态（百分位数法）：2.5％位数（P2.5）的参考限～97.5％位数（P2.5）的参考限。
单侧正态：x －1.65s以下或 x＋1.65s以上；单侧偏态：
P5的参考以下或P95的参考限以上。 ——参考范围
全国高等医药院校医学检验专业规划教材
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临床生物化学检验（第二版）
第三章临床生物化学诊断试验的性能基础与评价
（一）诊断试验的准确性评价指标
1 . 灵敏度与漏诊率 2 . 特异度与误诊率 3 . 准确度
4．正确指数又称尤登指数（youden index，YI）＝Se＋Sp－1＝1－α－β
5．Kappa指数又称为总一致性指数，公式为：

临床生化检验试剂盒性能评价试验线性范围试验

临床生化检验试剂盒性能评价试验线性范围试验
要有较为深入的临床分析
一、概述
临床生化检验试剂盒是临床检验中常用的分析诊断手段，它在患者的
血液、尿液等检测过程中起着重要的作用，是确诊疾病的重要依据。

临床
生化检验试剂盒性能评价试验是用来衡量检测试剂性能的一种测试，它既
能反映检测精度，又能反映检测灵敏度，而线性范围试验则是衡量检测范
围的一种测试，它是评价试剂性能评价试验中的重要环节。

二、线性范围试验基本内容
线性范围试验是测试临床生化检验试剂盒的灵敏度和准确性，以及观
察检测结果在一定范围内是否保持线性关系。

它要求用3-5个有代表性的
试剂浓度，在同一样本上进行测定，以比较其特定测定检验参数的灵敏度、准确性和线性关系参数，以及信度和敏感度。

线性范围试验的具体过程如下：
1）确定线性范围。

试验开始前，应该先完成样本应用的说明书，在
说明书中确定临床标准曲线的线性范围及其参数等内容；
2）测量样本。

根据所选定的标准曲线及其参数，用一种专门的试剂
盒测量3-5个不同浓度的样本，并观察检测结果是否符合线性范围试验的
要求；。

试剂盒的种类和使用

试剂盒所采用的测定方法特异性好、灵敏度、准确度、精密度符合卫生部临床检验中心、IFCC、WHO等推荐的指标。准确度：测定值与真值的相符合程度,常表示为真值与测定结果之差,单位与结果单位试剂盒的储存期至少为1年。一致,或为真值的百分比,常以“不准确度” 水溶性、低粘度、无腐蚀、无毒害、不爆炸、不易燃、表示,目前使用标准差SD来评价不污染环境。所用标准品或标准参考物符合卫生部临床检验中心、 IFCC、WHO推荐的标准和要求。
按试剂组成分类
单试剂优缺点
优点：操作简便适用于各类生化分析仪，节约试剂位缺点：配方复杂（稳定剂、掩蔽剂），稳定性差，不能完全避免内外源物质干扰。
按试剂组成分类
双试剂的特点
（1）可较彻底排除样品空白和内外源干扰物（2）更加符合酶偶联反应的特性和过程（3）试剂配方简单（4）试剂稳定，便于储存，运输和使用（5）可用抑制法直接测定某些同工酶
按试剂组成分类
单试剂液体单试剂就是将某种生化检验项目所用到的试剂科学地混合在一起，组成为一种试剂。应用时，只须将标本和试剂按一定比例混合，即可进行相应的生化反应，然后用适当的方法检测结果。双试剂液体双试剂就是将某些生化检测项目所用到的试剂，按用途科学地分成两类，分别配成两种试剂，通常第一试剂加入后可起到全部或部分消除某些内源性干扰的作用，第二试剂为启动被检测物质反应的试剂，两种试剂混合后才共同完成被检项目的生化反应。
液体双试剂的优点
增强了工作试剂的稳定性：试剂组分高度均一：不必冻干复溶，避免了干粉试剂复溶时所用蒸馏水污染杂质的干扰作用。避免了干粉试剂盒分装，冻干，复溶过程中引起的瓶间差，提高了测定的精密度和准确度.
试剂盒性能评价