2013年苏教版生物选修1全册精品课件 第四章第一节

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第四章
生物化学与分子生物学技术实践
要点突破•讲练互动
电泳法、影响电泳泳动速度 的因素、注意事项及容易产 生的几种现象
1.电泳法：带电颗粒在电场作用下向着与其电性相 反的电极移动的现象称为电泳。支持物电泳是目前 纯化蛋白质的一种较为普遍的方法。
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生物化学与分子生物学技术实践
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生物化学与分子生物学技术实践
【探规寻律】
必须清楚泳动速度的差异主
要取决于电荷的多少。所带净电荷越多，则 在电场中泳动的速度越快，反之则越慢。
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变式训练
1.有一混合蛋白质溶液，各种蛋白质的pH分别 为4.5、5.2、6.6、7.2，电泳时欲使其中三种泳 向正极，缓冲液的pH应该是( )
具体安装顺序和方法如下：
①固定热源——酒精灯。
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②固定蒸馏瓶，使其离热源的距离如上图中 所示，并且保持蒸馏瓶轴心与铁架台的水平 面垂直。 ③安装蒸馏头，使蒸馏头的横截面与铁架台 平行。
④连接冷凝管。保证上端出水口向上，通过
橡皮管与水池相连；下端进水口向下，通过 橡皮管与水龙头相连。 ⑤连接接液管(或称尾接管)。
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②离心沉降法：通过控制离心速率，使得分子 大小、密度不同的蛋白质发生沉降分层。 ③电泳法 a．含义：带电颗粒在电场作用下向着与其电性 相反的电极移动的现象；
b．原理：不同物质在同一电场中的__________ 泳动速度 不同；
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染色方法及检测方法等因素决定。对血清蛋
白的常规电泳分析，每厘米加样线不超过2～ 3 μL，相当于60～80 μg的蛋白质。
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(3)电泳：可在室温下进行。电压为25 V/cm， 电流为0.4～0.8 mA/cm。 (4)染色：一般蛋白质染色常使用氨基黑和丽春 红，血浆蛋白用甲苯胺蓝或过碘酸Schiff试 剂，脂蛋白则用苏丹黑或品红亚硫酸染色。 (5)脱色与透明：对水溶性染料应用最普遍的脱 色剂是5%醋酸水溶液。为了长期保存或进行光 吸收扫描测定，可浸入冰醋酸∶无水乙醇＝ 3∶7的透明液中。
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例1
(2012· 南京高二检测)仔细观察下图，所 )
带负电荷少的球蛋白是(
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A．α1-球蛋白 C．β-球蛋白
B．α2-球蛋白 D．γ-球蛋白
【解析】
对于几种球蛋白来说直径相差不
大，引起泳动速度的差异主要来自于所带电 荷多少，由图可知球蛋白由右向左泳动，因 右侧为负极，且γ-球蛋白距点样处最近，所以 γ-球蛋白所带负电荷最少。 【答案】 D
(2)点样要适量，2次左右即可，盖玻片的边缘 应避免出现明显液滴，点样要尽量在一条直 线上。 (3)电泳时间不低于1 h。 (4)点样处不要搭在滤纸上，以免血清渗入滤
纸。
(5)醋酸纤维薄膜应绷直，避免电泳槽隔离板 的干扰。 (6)不可同时接触正负极，防止触电。
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4.容易产生的几种现象 (1)电泳图谱不齐：点样时血清滴加不匀。
(2)电泳图谱出现条痕：点样后薄膜过干，或由于
电泳槽密闭性不良，或电流过大，温度升高，薄 膜水分蒸发干燥造成的。
(3)分离不良：样品滴加过多。
(4)区带拖尾：缓冲液离子强度小于0.05。 (5)区带过于紧密：缓冲液离子强度大于0.075。
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(6)染色后清蛋白中间色浅：染色时间不足，或清蛋 白含量过高，此时可减少检样用量或延长染色时 间。 (7)球蛋白向反方向移动：系电渗现象，可升高点样 端缓冲液液面高度，或适当加大电流量克服之。
(8)透明时若膜不干或透明液中醋酸含量不足，可造
成膜发白，不能完全透明；若透明液中醋酸含量过 高，或室温过高，可使膜溶解，此时可酌情减少醋 酸含量。
支持物可以是滤纸、醋酸纤维薄膜、大分子 凝胶等。采用醋酸纤维薄膜作为支持物具有 方法简单、快速、分离清晰、灵敏度高、样 品用量少、没有吸附、点样后区带界限清晰 等优点，广泛应用于科学实验、临床化验和
生化产品的分析(血清蛋第四章
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A．2.0
C．6.0
B．5.0
D．7.0
解析：选D。在缓冲液的pH为7.0的溶液中，pH 分别为4.5、5.2、6.6的蛋白质均带负电荷，在电 泳时移向正极。
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比较水蒸气蒸馏、压榨法和 有机溶剂萃取的异同点
实验原理 利用水蒸气 将挥发性较 强的芳香油 携带出来 方法步骤 适用范围
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2.纯化 (1)原理：蛋白质之间以及蛋白质与其他物质之
间在分子大小、溶解度、_________________、 所带电荷的多少
吸附性质等方面存在差异。 (2)方法 半透膜 ①透析法：利用蛋白质分子不能透过_________ 的特性使蛋白质与_____________________分离 其他小分子化合物 开来。
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第一节 生物成分的分离与测定技术
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学习导航 1.尝试蛋白质的提取和分离。(重点)
2．理解蛋白质分离与纯化的原理。(重难点)
3．研究从生物材料中提取某些特定成分。(重点) 4．尝试测定生物材料中某些化学物质的含量。(难点)
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特点
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(1)水蒸气蒸馏装置的安装顺序和方法
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如上图所示，整套蒸馏装置可分为左、中、 右三部分，其中左边的部分通过加热进行蒸 馏，中部将蒸馏物冷凝，右边的部分用来接 收。安装仪器一般都按照自下而上、自左到 右的顺序，拆卸仪器的顺序与安装时相反。
解的情况。
提示：不是一种蛋白质，而是包含多种蛋白质： 清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球
蛋白。
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三、从生物材料中提取某些特定成分 挥发性 芳香油特点：具有__________，能与水蒸气一 有机溶剂 起蒸发，易溶于___________，如石油醚、乙 醚或________等。 酒精 橘皮芳香油的特点：橘皮芳香油存在于
【答案】
D
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互动探究 在水蒸气蒸馏装置中，为什么要让冷水由冷
凝管的下方流入，上方流出？
【提示】 这样可以冷却得更充分。
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从植物材料中提取某些特定 成分
1.蒸馏法：植物芳香油提取的常用方法
蒸馏法的 水中蒸馏 类型 原料放在 蒸馏容器 的水中， 水要完全 浸没 水上蒸馏 容器中水 的上方有 筛板，水 量以沸腾 时不浸润 原料为宜 水气蒸馏 蒸馏容器下方有 一个通气孔，连 接外源蒸气，上 方有筛板，上面 放有原料
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【思路点拨】 析：
解答本题可以从两个角度分
①温度过高会破坏蒸馏提取物的有效成分。 ②时间过短会使有效成分得不到有效提取。
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【解析】
用蒸馏法分离植物有效成分时，
温度会影响其性质，如果温度过高则破坏其 结构，温度过低则分离不出其有效成分。如 果在一定温度范围内延长蒸馏时间，就可以 得到较多的植物有效成分。
水蒸 气蒸 馏
适用于提取 ①水蒸气蒸馏 玫瑰油、薄 ②分离油层 荷油等挥发 ③除水过滤 性强的芳香 油
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压榨 法
方法步骤 适用范围 ①石灰水浸泡、 通过机械加 漂洗 适用于柑橘、柠 压，压榨出 ②压榨、过滤 檬等易焦糊原料 果皮中的芳 静置 的提取 香油 ③再次过滤 使芳香油溶 解在有机溶 剂中，蒸发 溶剂后就可 获得芳香油 ①粉碎、干燥 ②萃取、过滤 ③浓缩 适用范围广，要 求原料的颗粒要 尽可能细小，能 充分浸泡在有机 溶液中
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2.响电泳泳动速度的因素 影响电泳泳动速度的因素很多，其中主要因素
有带电颗粒的性质，即颗粒的大小、形状和所
带净电荷的多少；此外，还有电场强度、溶液 的pH等因素。
3.注意事项
(1)保持醋酸纤维薄膜的清洁，避免用手直接接 触薄膜。
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特别提醒 第一步中缓冲液要用容量瓶准确配制，试剂要
多配一些备用。第二步中要驱除气泡，贴紧贴
实，避免影响电泳速度和分离效果。第三、四 步中作有记号的醋酸纤维薄膜光泽面朝下。第
七步中染色时间要适中(5～10 min)，不宜过长
或过短。第八步中漂洗要彻底，防止遮盖蛋白 质色带颜色。
c．泳动特点：带电颗粒直径越小，越接近于球 形，所带净电荷_______，则在电场中的泳动速 越多 度越快；反之，则越慢。