上调miRNA-145表达对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响

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MIR-145通过靶向EGFR和NUDT1抑制人肺腺癌细胞增殖

MIR-145通过靶向EGFR和NUDT1抑制人肺腺癌细胞增殖参考文献:William c.s. cho,* Andrew s.c. chow and Joseph s.K. Au.MiR-145 inhibits cell proliferation of human lung adenocarcinoma by targeting EGFR and NUDT1.RNA Biology 8:1, January/February 2011, 125-131.摘要：小RNA（miRNA）是新兴的具有重要调节功能的RNA,它们的出现在肿瘤发生中也发挥着关键作用。

MIR-145在几种人类恶性肿瘤中表达下调，包括肺癌，但其分子机制仍不清楚。

我们曾报道过，hsa-miR-145能够抑制癌细胞的生长，对于表皮生长因子受体（EGFR）突变的肺腺癌患者。

这项研究表明，hsa-miR-145针对肺腺癌细胞EGFR和二磷酸核苷相连部分的X- 1（NUDT1或MTh1）。

EGFR和NUDT1的mRNA表达对人肺腺癌细胞的miR-145转染后显著下调。

我们的研究结果证实了miR-145对EGFR和NUDT1表达无论是在mRNA还是蛋白水平都是负调控。

进一步分析发现，miR-145在这三个时间点（24，48和72小时），具有抑制转染肺腺癌细胞的细胞增殖能力。

miR-145的上调似乎是肺腺癌细胞增殖的重要基因调控机制，它与EGFR和NUDT1的下调密切相关。

有趣的是，我们的研究显示，改变肺癌细胞的增殖不伴随细胞凋亡的变化。

我们的发现提供了新的对复杂的调节通路的深刻理解，包含miR-145，EGFR，NUDT1和其他对细胞增殖而不是细胞凋亡的未知因素，。

了解miR-145的作用靶点及其调控通路可能产生对肺腺癌新的治疗策略。

方法:1,细胞转染miR-145或miRNA阴性对照miR-145表达载体（miRNASelect PEP-的miR-145）和miRNA的阴性对照载体（miRNASelect PEP-MIR空控制）购自Cell Biolabs公司（圣地亚哥，CA获得美国）。

miR-145通过靶向抑制SMAD3的表达抑制非小细胞肺癌细胞侵袭能力

•26何高燕，等miR-55通过靶向抑制SMAD3的表达抑制非小细胞肺癌细胞侵袭能力suppresson]J].Nut/tiox,2716,26(65):33-35.[16]LEE SUN EN,LIM JOO WEON,KIM HYEYOUNG.Achvatccproteis-1mediates docosabexaepoic acid-induced apoptosis oIhumao gastric ccoccs cells-J] ■Ann NY Acab Sci,O OC^,121：23-169.[26]ZHANG H,XU P,JIANG Y,et aU Gexomic,transc/ptomie,andepigexomic features diRerextiate gexes that are re/vvot Io muscular polyyasaturated fat/acibs is the commoo carp[J].Froot Gex-et,2616,16:22-228,[21]GIROS ANNA,GRZYBOWSKI MIKE,SOHN VANESSA R.Reg-ec Prev Res,2099,2(8)：732-742.[22]KATAN T,CABALLERO-SOLARES A,TAYLOR RG,et aUEffect oI plant-based diets with varyino ratios oI36to<n3fattyacibs ox growth pebormadce,tissue compositiox,Jatty acid bdsyy-thesis and lipib-related gexe expressiox is Atlantic salmoo(Sal-mo sa/r t[J]•Comp Biochem Physiol Pa/D Gexomicr Pre-teomicr,2616,2(39)：299-394.[23]DUAN YH,LI FN,LI LL,et aU Regulatiox oI physio/gdal func-tiox by proportiop oI o-6/2-3polyyasaturated fatty acibs-J].Natural Product Research and Developmext,2214,2：926-631.ulatiox oI colorectal cancer cell apoptosis by the n-3polyyasatu-(编校：张西敏) rated fatty acibs doccnaPexaeqoic and eicosapextaedoic t J].Cano-miR-55通过靶向抑制SMAD5的表达抑制非小细胞肺癌细胞侵袭能力何高燕，罗晓斌，赵勇，罗丽miR-103inhibits the invasion of non-small cell lung cancer cells by targeting inhibition of SMAD3expressiovHE Gaoyon,LUO Xiaobis,ZHAO Yony,LUO LlDepartment of'Respiratory and Critical Medicine,Suining City Central Hospital,Sichuan Suining626000,China.【Abstract】Objective:To investigate the effect of miR-55Braetiny the1011/1/0of SMAD3expression on theinvvsive abi/ty of non-small cell luny cancec cefs.Methods：The expression levels of miR-55and SMAD3in30oon-small cell luny caocer tissues and aPjacent tissues were deBcted by qRT-PCR and their000/1/00were ana-Uzed.The target geoe predichon site was used to predict the potenUal target geoe SMAD3of miR-145,which wasverified by the dual luciferase mpo/er gene assay.The tmnsfected cells of miR-55mimics,miR-55inhibitoc,siRNA SMAD3and related controls were Bansfected into oon-small cell luny cahcec A549cells by cell tmnsfechonexperiments j Trauswell assay was used to detect the iovvsive ability of A549cefs after tmnsfechon.The effect ofmiR-55on the expression of SMAD3protein was up-!011//0or dowo-1011//0in A549cells by Western b/t.Results:The results of qRT-PCR showed that miR-55was dowo-regumBq and SMAD3was highlo expressed inoon-small cell luuy cancec tissues,and the expression levels of both were hegakvelo00^//0.Taraet gene yredic-tion and vvhbation experiments showed that miR-55can specificaho bind to the3'-UTR of SMAD3,which was ataraet gene of miR-55.Western b/t analysis showed that tmnsfechon of miR-55mimics signi/cantlo decreasedthe expression of SMAD3proteih(P<0.001):and tmnsfechon of miR-55inhib/oc signi/cantlo iocmased the ep-pression of SMAD3protein(P<0.01).Tmoswef in vitro iovvsion assay showed that the transfected miR-145mimicgropp signi/cantlo reduced the iovvsive abi/ty of A549cells compared with the control groxa(P<0.001):and thetransfected miR-55inhibitor groxa signi/cantlo iocmased the invvsive abi/ty of A549cells(P<0.05).Comparedwith the control gropp,the iovvsive ability of khochdowh of SMAD3expressiny cells was weabened(P<0.001):The iovvsive abi/ty of co-transfected siRNA SMAD3and miR-55mimics A549cells was weaker than that ofkhochdowo of SMAD3alone(P<0.05).There was co significaot diderence in the iovvsive abi/ty of co-transfected【收稿日期】2629-93-92【基金项目】四川省卫生和计划生育委员会资助项目(编号：17pj937,5PJ499)【作者单位】遂宁市中心医院呼吸与危重症医学科，四川遂宁626009【作者简介】何高燕(192-),女，四川自贡人，硕士，医师，主要从事肺癌、肺纤维化及慢阻肺的诊疗工作。

miR-145过表达增强非小细胞肺癌细胞的放疗敏感性

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中国老年学杂志２０１８年ｌ０月第３８卷
ｍｉＲ一１４５过表达增强非小细胞肺癌细胞的放疗敏感性
杨峥房 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ娜饶石磊（南阳市中心医院肿瘤放疗科，河南南阳４７３００９）
［摘要］目的探讨ｍｉＲ－１４５过表达对非小细胞肺癌细胞放疗敏感性的影响。方法ＲＴ—ＰＣＲ检测非小细胞肺癌细胞株Ａ５４９、Ｃａｌｕ－３、Ｉ－Ｉ４６０、ＳＰＣ－Ａ－１及支气管黏膜上皮细胞１６ＨＢＥ中ｍｉＲ·１４５的表达水平。细胞转染ｍｉＲ．１４５模拟物（ｍｉＲ一１４５ｍｉｍｉｃｓ）、阴性对照（ｍｉｍｉｃｓｃｏｎｔｒｏ１），ＲＴ－ＰＣＲ检测转染效果。噻唑蓝（ＭＴＴ）、流式细胞术分别检测ｍｉＲ一１４５过表达、放疗和ｍｉＲ－１４５过表达联合放疗后细胞的增殖、凋亡能力，细胞克隆实验检测放疗敏感性。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶３（酶切Ｃａｓｐａｓｅ一３）、Ｗｎｔ信号通路下游靶基因（ｃ—ｍｙｃ）、ｐ一连环蛋白（Ｂ－ｃａｔｅｎｉｎ）表达水平。结果非小细胞肺癌细胞株Ａ５４９、Ｃａｌｕ一３、Ｈ４６０，ＳＰＣ—Ａ－１中ｍｉＲ．１４５的表达水平均明显低于支气管黏膜上皮细胞１６ＨＢＥ（Ｐ＜０．０５），且Ｃａｌｕ－３细胞中ｍｉＲ－１４５水平最低，后续选用Ｃａｌｕ－３细胞为研究对象。ｍｉＲ一１４５ｍｉｍｉｃｓ有效促进Ｃａｌｕ－３细胞中ｍｉＲ－１４５的表达，而ｍｉｍｉｃｓｃｏｎｔｒｏｌ没有明显作用。ｍｉＲ一１４５过表达或者放疗均能够抑制Ｃａｌｕ－３细胞增殖，促进Ｃａｌｕ－３细胞凋亡，促进细胞中酶切Ｃａｓｐａｓｅ－３的表达，抑制细胞中ｃ—ｍｙｃ、Ｂ－ｃａｔｅｎｉｎ的表达，且ｍｉＲ一１４５过表达联合放疗后细胞存活率最低，凋亡率最高，酶切Ｃａｓｐａｓｅ－３表达水平也最高，ｃ－ｍｙｃ、ｐ·ｃａｔｅｎｉｎ表达水平最低。ｍｉＲ一１４５能够增加细胞放疗敏感性，增敏比为１．３６３。结论ｍｉＲ一１４５过表达能够抑制非小细胞肺癌细胞增殖，促进非小细胞肺癌细胞凋亡，增加非小细胞肺癌细胞放疗敏感性，作用机制可能与Ｗｎｔ信号通路有关。

miR-145对HepG2细胞中肿瘤干细胞增殖的影响

剂量的ｓｉＲＮＡｏｌｉｇｏ转染ＨｅｐＧ２细胞效果较好；各实验对照组相比，ｍｉＲ一１４５ — ５ｐ模拟物转染组的ｍｉＲ一１４５表达明显上调；过表达ｍｉＲ一１４５
抑制ＨｅｐＧ２细胞生长；转染后４８ｈ模拟物转染组过表达的ｍｉＲ一１４５可明显降低ＯＣＴ４蛋白水平及干细胞标志物ＣＤ９０ｍＲＮＡ的表达。结
论以Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ２０００为转染试剂，使用中剂量的ｓｉＲＮＡｏｌｉｇｏ转染ＨｅｐＧ２细胞效果优于低、高剂量，同时明显优于转染ｓｈＲＮＡ者；过
表达ｍｉＲ一１４５可抑制ＨｅｐＧ２细胞株增殖；ｍｉＲ一１４５可能通过下调ＯＣＴ４基因表达抑制ＨｅｐＧ２细胞株中肿瘤干细胞的增殖，是一种潜在的
ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ（ｍｉＲＮＡｓ）是生物进化上高度保守的一类非编码小
①实验分组：１、ｈｓａ — ｍｉＲ一１４５ｍｉｍｉｃｓ组２、Ｂｌａｎｋ组３、Ｍｏｃｋ组４、ＮＣ组。②引物设计：参考ＧｅｎＢａｎｋ￣因序列进行引物设计，并证实设
计碱基序列与目的基因相符。③逆转录反应体系（表１）。
表１逆转录反应体系表
பைடு நூலகம்
ＲＮＡ，研究表明其参与细胞活动的各方面，包括分化、生长、代谢、
增殖、凋亡、肿瘤生成等Ｊ。ｍｉＲＮＡ主要参与基因的转录后调控，通过与靶基因的ｍＲＮＡ完全或者不完全的互补配对而起到促进目标ｍＲＮＡ降解或者抑制蛋白翻译的作用】。研究显示ｍｉＲＮＡ与肝癌的转移、复发及预后关系密切。胡臻等研究证实ｍｉＲ－１４５在肝癌ＨｅｐＧ２细胞系中的表达水平低于正常肝组织。张帅等＿６研究发现ｍｉＲ．１４５通过

miRNA-145调控靶基因c-Myc抑制胃癌增殖、侵袭

miRNA-145调控靶基因c-Myc抑制胃癌增殖、侵袭彭伟辉;黄江生;段伦喜;张磊屹;左仲坤;唐腾龙【摘要】目的探索microRNA145(miR-145)对胃癌细胞增殖活性的影响,及与其靶基因c-Myc的调控关系.方法选取人胃癌细胞株SGC-7901作为研究对象,并向细胞株内转染miR-145模拟物和miR-145阴性对照物,荧光显微镜观察、Q-PCR 检测转染后细胞株miR-145的变化,并通过细胞软琼脂克隆增殖实验和MTT实验检测转染后SGC-7901细胞株的增殖能力、Transwell侵袭小室检测细胞侵袭能力.Western blot法检测转染后SGC-7901细胞株中c-Myc蛋白的表达情况.结果转染后,miR-145模拟物组中miR-145的表达明显高于miR-145阴性对照和空白组,转染miR-145模拟物后SGC-7901细胞增殖能力显著降低(P＜0.05),c-Myc蛋白表达也明显较低(P＜0.05).结论 miR-145能通过抑制靶基因c-Myc的表达,抑制胃癌细胞的增殖与侵袭能力.总之,miR-145可能在胃癌中发挥抑癌基因的作用,是胃癌潜在的早期诊断指标和治疗靶点.%Objective To investigate the effect of miR-145 on proliferation of gastric cancer,And its relationship with target gene c-Myc.Methods Human gastric cancer cell line SGC-7901 was selected as study object.miR-145 mimic and miR-145 NC were synthesised and transfected into SGC-7901 cells.Q-PCR was used to detect the relative expression levels of miR-145.The effects of miR-145 on proliferation and invasion were detected by colony formation and MTT assay and Transwell invasion chambers.The expression of c-Myc were detected by Western blot.Results miR-145 were successfully transfected into SGC-7901 cells.The number of colony-forming units was obviously lower than the miR-145 NC group and Normal group (P ＜ 0.05).The expression of c-Myc protein inmiR145 mimic group were significantly lower than miR-145 NC group and Normal group (P ＜ 0.05).Conclusion Therefore,we concluded that miRNA-145 can inhibit cell proliferation and invasion,and the partial mechanism may relate to the inhibition of the expression of c-Myc protein.Inbrief,miRNA-145 may play a role of cancer suppressor gene and it may become a new early diagnosis mark and therapy target in gastric cancer.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2018(047)005【总页数】5页(P60-64)【关键词】胃癌;miR-145;c-Myc;增殖【作者】彭伟辉;黄江生;段伦喜;张磊屹;左仲坤;唐腾龙【作者单位】410001 长沙,中南大学湘雅二医院微创外科;410001 长沙,中南大学湘雅二医院微创外科;410001 长沙,中南大学湘雅二医院微创外科;410001 长沙,中南大学湘雅二医院微创外科;410001 长沙,中南大学湘雅二医院微创外科;410001 长沙,中南大学湘雅二医院微创外科【正文语种】中文【中图分类】R4胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，在我国胃癌发生率和病死率排名第2，其发生率一直呈上升趋势。

miR145通过靶向AP4对非小细胞肺癌A549细胞迁移侵袭的影响

doi:10.3971/j.issn.1000-8578.2019.18.1160miR-145通过靶向AP4对非小细胞肺癌A549细胞迁移侵袭的影响赵天增，杨金华，刘向前，徐萌博miR-145 Attenuates Migration and Invasion of Non-small Cell Lung Cancer A549 Cells by Targeting AP4ZHAO Tianzeng, YANG Jinhua, LIU Xiangqian, XU MengboDepartment of General Thoracic Surgery, The First Affiliated Hospital of Nanyang Medical College, Nanyang 473000, ChinaAbstract: Objective To investigate the effect of miR-145 on the migration and invasion of non-small cell lung cancer (NSCLC) cells and possible mechanism. Methods The expression of miR-145 and activating enhancer binding protein 4 (AP4) mRNA in NSCLC tissues were detected by qRT-PCR. After the transfection with miR-145 mimic or AP4 siRNA, the migration and invasion of A549 cells were examined by wound healing and Transwell assay, respectively; The mRNA and protein expressions of AP4 were detected by qRT-PCR and Western blot, respectively. The relationship between AP4 mRNA and miR-145 was detected by double luciferase reporter gene method. Results Compared with adjacent normal tissues, the level of miR-145 was significantly decreased in NSCLC tissues (P <0.05), however, the mRNA and protein levels of AP4 were significantly increased (P <0.05). Compared with control group, the level of miR-145 was significantly increased (P <0.05), the mRNA and protein levels of AP4 were significantly decreased (P <0.05), and cells migration and invasion were significantly decreased (P <0.05) in A549 cells after the transfection with miR-145 mimic. Moreover, AP4 was a direct target of miR-145. After the transfection with AP4 siRNA, the migration and invasion of A549 cells were significantly decreased (P <0.05). Conclusion miR-145 upregulation could efficiently attenuate the migration and invasion of A549 cells via inhibiting target gene AP4 expression.Key words: Lung cancer; miR-145; Migration; Invasion; AP4摘要：目的探讨miR-145对非小细胞肺癌迁移与侵袭能力的影响及其可能的作用机制。

miR-145在非小细胞肺癌中的表达

ｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｗａｓｍｕｃｈｌｏｗｅｒｔｈａｎｉｎｔｈｅａｄｊａｅｅｎｔｎｏｒｍａｌｔｉｓｓｕｅｓ（Ｐ＜０．０５）．ＴｈｅａｒｅａｕｎｄｅｒＲ０ＣｃｕｒｖｅｏｆｍｉＲ一１４５
ｗａｓ０．８７５。ａｎｄｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｗｅｒｅ８８．５％ａｎｄ８４．８％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｌＯＷｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉＲ一１４５ｉｎｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅｓａｎｄｓｅｒｕｍｆｒｏｍｎｏｎ —ｓｍａｌｌｃｅｕｓｅｄａｓｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅｂｉｏｍａｒｋｅｒｆｏｒｄｉ— ａｇｎｏｓｉｓｏｆｎｏｎ — ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ．
ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＴｈｏｒａｃｉｃＳｕｒｇｅｒｙ，３２０１Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ＳｈａａｎｘｉＨａｎｚｈｏｎｇ７２３０００，Ｃｈｉｎａ；ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＴｈｏｒａｃｉｃＳｕｒｇｅｒｙ，ＴｈｅＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａ— ｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＸＦａｎＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．Ｓｈａａｎｘｉ缸ｎ７１０００４．Ｃｈｉｎａ．
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ｍｉＲ一１４５存非／
ｍｉＲ一１４５在非小细胞肺癌中的表达
张伟，刘伟良，王勇，张潍
ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉＲ——１４５ｉｎｎｏｎ——ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ
ＺｈａｎｇＷｅｉ，ＬｉｕＷｅｉｌｉａｎｇ，ＷａｎｇＹｏｎｇ，ＺｈａｎｇＷｅｉ
肺癌目前是世界范围内对人类健康威胁最大的恶性肿瘤之一，近半个世纪以来，我国肺癌的发病率和死亡率明显增加，大城市中肺癌发病率已占恶性肿瘤的首位 … 。肺癌的病理类型中约８０％是非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ），尽管手术、放疗、化疗等治疗技术不断发展，但ＮＳＣＬＣ的总体五年生存率仍不足２０％ｌ２Ｊ。研究发现ｍｉＲＮＡ参与了细胞分裂，增殖及

lncR_FOXD2-AS1_调控miR-145-5p_对非小细胞肺癌细胞生物学特性的影响

lncR FOXD2-AS1调控miR-145-5p对非小细胞肺癌细胞生物学特性的影响王巍1，王志武1，于镓锐1，董量1，曹博2，李剑锋31 唐山市人民医院放化二科，河北唐山063000；2 唐山市人民医院普外科；3 唐山市人民医院胸外科摘要：目的　探讨长链非编码RNA（lncR）FOXD2-AS1调控微小RNA（miR）-145-5p对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化（EMT）等生物学特性的影响。

方法　体外培养人NSCLC细胞系A549、H1299、SK-MES-1及人正常肺支气管上皮细胞系16HBE，应用RT-qPCR检测各细胞系中lncR-FOXD2-AS1和miR-145-5p表达。

选取lncR-FOXD2-AS1相对高表达的SK-MES-1作为敲低实验的研究对象，将SK-MES-1细胞按照转染处理的不同分为NC组（转染si-NC）和si-FOXD2-AS1组（转染si-FOXD2-AS1），转染后，RT-qPCR检测细胞中lncR-FOXD2-AS1、miR-145-5p表达，CCK-8法检测细胞增殖活性，Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力，Western blotting法检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、Fibronectin蛋白表达。

双荧光素酶报告基因实验验证lncR-FOXD2-AS1和miR-145-5p的相互关系。

结果　与16HBE细胞相比，lncR-FOXD2-AS1在NSCLC细胞系中高表达（P<0.05），miR-145-5p在NSCLC 细胞系中低表达（P均<0.05）。

与NC组比较，si-FOXD2-AS1组细胞miR-145-5p表达升高（P<0.05），0、24、48 h时OD值降低（P均<0.05），迁移及侵袭穿膜细胞数减少（P均<0.05），E-cadherin蛋白表达升高（P<0.05），N-cadherin、Fibronectin 蛋白表达降低（P均<0.05）。

《2024年miR145-5p-HMGB3轴调控Notch信号通路抑制NSCLC进展的研究》范文

《miR145-5p-HMGB3轴调控Notch信号通路抑制NSCLC进展的研究》篇一miR145-5p-HMGB3轴调控Notch信号通路抑制NSCLC进展的研究摘要：本文深入研究了miR145-5p/HMGB3轴对Notch信号通路的调控作用，及其在非小细胞肺癌（NSCLC）进展中的抑制作用。

通过实验数据分析，揭示了miR145-5p与HMGB3之间的相互作用关系，并探讨了其对于NSCLC发展的潜在治疗价值。

一、引言非小细胞肺癌（NSCLC）是肺癌的主要类型之一，其发病率和死亡率均居高不下。

Notch信号通路在NSCLC的发生、发展中扮演着重要角色。

近年来，microRNAs（miRNAs）作为重要的调控因子，在肺癌等肿瘤疾病中的研究日益受到关注。

miR145-5p 作为其中一员，与HMGB3的相互作用可能对NSCLC的进展产生重要影响。

因此，本研究旨在探讨miR145-5p/HMGB3轴对Notch信号通路的调控作用及其在NSCLC中的抑制效果。

二、方法本研究采用细胞实验、动物实验及生物信息学分析等方法，探讨了miR145-5p/HMGB3轴对NSCLC中Notch信号通路的调控机制。

通过生物信息学预测及荧光素酶报告基因实验，确定miR145-5p与HMGB3之间的相互作用关系。

同时，利用细胞转染、qRT-PCR、Western blot等技术手段，检测相关基因的表达水平及信号通路的激活情况。

三、结果1. miR145-5p与HMGB3的相互作用通过生物信息学预测及实验验证，发现miR145-5p能够与HMGB3的3'UTR区域结合，从而抑制其表达。

这一结果在细胞转染实验中得到了进一步证实。

2. miR145-5p对Notch信号通路的调控作用miR145-5p的表达上调能够显著抑制Notch信号通路的激活，减少Notch受体的表达，并降低下游靶基因的活性。

这一作用可能通过与HMGB3的相互作用实现。

《2024年miR145-5p-HMGB3轴调控Notch信号通路抑制NSCLC进展的研究》范文

《miR145-5p-HMGB3轴调控Notch信号通路抑制NSCLC进展的研究》篇一miR145-5p-HMGB3轴调控Notch信号通路抑制NSCLC进展的研究一、引言肺癌作为全球最常见的恶性肿瘤之一，非小细胞肺癌（NSCLC）是其主要类型。

随着分子生物学和基因组学研究的深入，miRNA（微小RNA）在肿瘤发生发展中的调控作用逐渐成为研究热点。

其中，miR145-5p作为一种重要的肿瘤抑制因子，与多种癌症的进展密切相关。

本研究旨在探讨miR145-5p与HMGB3（高迁移率族蛋白B3）轴在调控Notch信号通路中的作用，及其对NSCLC进展的抑制效应。

二、miR145-5p与HMGB3的相互作用研究表明，miR145-5p的表达水平在NSCLC中显著降低，与肿瘤的恶性程度和预后不良密切相关。

而HMGB3作为一种重要的炎症因子和细胞因子，在肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭中发挥重要作用。

本部分通过生物信息学分析，发现miR145-5p与HMGB3之间存在潜在的相互作用关系。

通过实验验证，证实了miR145-5p能够直接靶向HMGB3基因，从而在转录后水平调控其表达。

三、miR145-5p/HMGB3轴对Notch信号通路的影响Notch信号通路在细胞增殖、凋亡、侵袭等过程中发挥重要作用，与NSCLC的发生发展密切相关。

本部分研究发现，miR145-5p/HMGB3轴能够影响Notch信号通路的活性。

当miR145-5p表达水平升高时，能够抑制HMGB3的表达，进而降低Notch信号通路的活性，从而抑制NSCLC细胞的增殖和侵袭。

相反，当HMGB3表达升高时，能够激活Notch信号通路，促进NSCLC细胞的恶性行为。

四、miR145-5p/HMGB3轴对NSCLC进展的抑制作用通过细胞实验和动物实验，我们发现miR145-5p/HMGB3轴对NSCLC进展具有显著的抑制作用。

在细胞实验中，过表达miR145-5p能够显著抑制NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

MiRNA-145在肿瘤表达中的生物学意义研究进展

㊃综述㊃d o i:10.3969/j.i s s n.1671-8348.2021.16.027M i R N A-145在肿瘤表达中的生物学意义研究进展*王雪振1综述,夏雷2ә审校(山东中医药大学:1.中医学院;2.病理学系,济南250355)[摘要]微R N A-145(m i R N A-145)的表达在多种肿瘤的生长抑制㊁转移㊁侵袭及化疗敏感度等方面起着重要的调控作用㊂肿瘤组织细胞高表达m i R N A-145可抑制原癌基因激活,而下调m i R N A-145表达,可降低抑制原癌基因表达的能力,癌细胞生长㊁增殖甚至转移㊂本文就m i R N A-145在卵巢癌㊁胃癌㊁肺癌㊁乳腺癌㊁前列腺癌等肿瘤的研究进展作一综述,为m i R N A-145在肿瘤早期诊断㊁预后判断㊁病情评估,以及作为肿瘤潜在治疗靶点的可能机制提供依据㊂[关键词]微R N A-145;恶性肿瘤;早期诊断;预后判断;病情评估;靶点[中图法分类号] R730.43[文献标识码] A[文章编号]1671-8348(2021)16-2826-05 R e s e a r c h p r o g r e s s i n b i o l o g i c a l s i g n i f i c a n c e o f m i R N A-145e x p r e s s i o n i n t u m o r*WA N G X u e z h e n1,X I A L e i2ә(1.C o l l e g e o f C h i n e s e M e d i c i n e;2.F a c u l t y o f P a t h o l o g y,S h a n d o n g U n i v e r s i t yo f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e,J i n a n,S h a n d o n g250355,C h i n a)[A b s t r a c t] T h e e x p r e s s i o n o f m i c r o R N A-145(m i R N A-145)p l a y s a n i m p o r t a n t r e g u l a t o r y r o l e i n t h e a s p e c t s o f g r o w t h i n h i b i t i o n,m e t a s t a s i s,i n v a s i o n a n d c h e m o t h e r a p y s e n s i t i v i t y o f m u l t i p l e t u m o r s.H i g h e x-p r e s s i o n o f m i R N A-145i n t u m o r t i s s u e c e l l s c a n i n h i b i t t h e p r o t o-o n c o g e n e a c t i v a t i o n,w h i l e d o w n-r e g u l a t i n g t h e m i R N A-145e x p r e s s i o n c a n r e d u c e t h e a b i l i t y f o r i n h i b i t i n g p r o t o-o n c o g e n e e x p r e s s i o n,g r o w t h,p r o l i f e r a-t i o n,e v e n m e t a s t a s i s o f c a n c e r c e l l s.T h i s a r t i c l e r e v i e w e d t h e r e s e a r c h p r o g r e s s o f m i R N A-145i n o v a r i a n c a n c e r,g a s t r i c c a n c e r,l u n g c a n c e r,b r e a s t c a n c e r,p r o s t a t e c a n c e r a n d o t h e r t u m o r s,i n o r d e r t o p r o v i d e r e f e r-e n c e s f o r m i R N A-145i n t h e e a r l y d i a g n o s i s o f t u m o r s,p r o g n o s i s j u d g m e n t,d i s e a s e e v a l u a t i o n,a n d p o s s i b l e m e c h a n i s m s a s a p o t e n t i a l t h e r a p e u t i c t a r g e t o f t u m o r.[K e y w o r d s] m i c r o R N A-145;m a l i g n a n t t u m o r;e a r l y d i a g n o s i s;j u d g e m e n t o f p r o g n o s i s;c o n d i t i o n e v a l u-a t i o n;t a r g e t恶性肿瘤是目前全球发病率和病死率最高的疾病之一[1],全球对于恶性肿瘤的有效治疗方式高度关注,相对于传统的手术㊁放化疗㊁分子靶向治疗及内分泌治疗方式[2-4],基因㊁免疫等治疗方式在恶性肿瘤的临床治疗中较为新颖,并且研究发现基因表达调控在恶性肿瘤发生㊁发展中具有一定的作用,特别是微R N A(m i c r o R N A,m i R N A)在肿瘤的生长抑制㊁转移及化疗敏感度等方面发挥着重要的调控作用㊂1 m i R N A的研究m i R N A s是一组由基因组编码的长度21~24个核苷酸的非编码R N A,通过和靶基因m R N A碱基配对引导沉默复合体降解m R N A或阻碍其翻译,在转录以后调节m i R N A靶基因的表达[5]㊂时序性和组织特异性是m i R N A的主要特征,这一特征决定了细胞功能的特殊性,m i R N A以其特征性的表达,从而促进了细胞特异性蛋白质的表达㊂研究表明,m i R N A参与大部分细胞的生命活动,如生长㊁发育㊁分化㊁代谢等过程,其表达水平更是与许多疾病密切相关[6]㊂对于肿瘤细胞而言,m i R N A发挥着举足轻重的作用,其表达升高或降低不仅影响肿瘤的发生㊁发展,还可作为判断预后的临床指标,同时对癌症治疗具有重要的临床意义㊂2 m i R N A-145与恶性肿瘤的关系诸多研究表明,m i R N A-145与肿瘤发生密切相6282重庆医学2021年8月第50卷第16期*基金项目:国家自然科学基金青年科学基金项目(81703839)㊂作者简介:王雪振(1997-),在读硕士研究生,主要从事中西医结合肿瘤的防治研究㊂ә通信作者,E-m a i l:p a t h o l o g y001@s i n a.c o m㊂Copyright©博看网 . All Rights Reserved.关,特别是卵巢癌㊁胃癌㊁肺癌㊁乳腺癌㊁前列腺癌等㊂m i R N A-145可通过其自身表达水平的升高或降低对肿瘤产生一系列影响㊂通常m i R N A-145表达水平升高可以抑制肿瘤的生长㊁转移与侵袭,肿瘤细胞中m i R N A-145水平降低又可成为诊断癌症的依据,并且相关研究表明转染m i R N A-145模拟物至肿瘤细胞后,可增强其对放化疗的敏感性[7]㊂2.1 m i R N A-145与卵巢癌卵巢癌是女性发病率和病死率最高的恶性肿瘤[8],由于卵巢癌的无症状性使其在初期阶段难以被发现,而临床治疗方式的局限性和对化疗药物的耐药性等使卵巢癌预后大多较差且病死率较高[9]㊂近几年研究发现,m i R N A-145的表达对卵巢癌的诊断治疗,以及细胞的转移㊁侵袭和耐药等方面起着重要的调节作用㊂K I M等[10]通过实时定量P C R技术对卵巢癌患者与非卵巢癌患者(卵巢良性肿瘤和非肿瘤患者)血清外泌体的7种m i R N A表达水平进行评估,结果显示m i R N A-145㊁m i R N A-200c㊁m i R N A-93在血清外泌体中呈现显著的高表达,其中m i R N A-145升高最明显,并推断m i R N A-145是诊断卵巢癌最佳的生物标志物㊂陈梅等[11]研究表明,m i R N A-145可作为卵巢癌治疗的新作用靶点,高表达的m i R N A-145可控制卵巢癌细胞的生长㊁增殖,同时运用划痕实验和T r a n s w e l l小室法分别检测卵巢癌细胞的转移和侵袭能力,验证了m i R N A-145可抑制卵巢癌细胞的转移及侵袭㊂L I等[12]的研究进一步表明,m i R N A-145对卵巢癌细胞增殖㊁转移和凋亡控制是通过抑制Y T H D F2蛋白来实现的㊂丁照黎等[13]的研究表明,对于顺铂化疗的卵巢癌患者转染m i R N A-145-5p m i m i c s后使m i R N A-145呈现高表达,进而抑制卵巢恶性肿瘤的增殖,使细胞核变形促进其凋亡,从而增强了卵巢癌患者机体对顺铂化疗的敏感性,推测这种敏感度的增强与M D R1㊁P-g p基因表达下调有关㊂Z HO U等[14]研究表明,m i R N A-145-5P通过靶向S MA D4来抑制卵巢癌细胞的增殖㊁转移,并促进卵巢癌细胞的凋亡等㊂2.2 m i R N A-145与胃癌胃癌是全球常见的恶性肿瘤之一[15],近年来研究发现m i R N A-145与胃癌之间具有相关性㊂Z HO U 等[16]研究证明,m i R N A-145-5p对胃癌上皮细胞的增殖㊁转移㊁侵袭具有抑制作用,其机制为通过m i R N A-145-5p高表达来降低A N G P T2的表达,进而影响核苷酸结合寡聚化结构域1(N O D1)㊁核苷酸结合寡聚化结构域2(N O D2)和核因子-κB(N F-κB)的蛋白质水平,从而抑制胃癌上皮细胞的增殖㊁转移和侵袭㊂WA N G等[17]通过实时定量P C R检测m i R N A-145在胃癌细胞及正常胃上皮细胞的表达,使用噻唑蓝(MT T)比色法检测m i R N A-145模拟物㊁m i R N A-145抑制剂转染的胃癌细胞的增殖,利用T r a n s w e l l板检测m i R N A-145对胃癌细胞的侵袭能力,通过刮擦伤口愈合测定法检测m i R N A-145对胃癌细胞转移的作用,结果显示m i R N A-145通过对磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(P I3K/A K T)信号通路的调节来抑制胃癌细胞的生长,m i R N A-145的高表达可抑制胃癌细胞的增殖㊁转移及侵袭能力,其高表达的模拟物可促进胃癌细胞的凋亡,使细胞周期停滞㊂由此可得出,m i R N A-145是胃癌肿瘤的抑制剂,并且可作为胃癌治疗的潜在靶点㊂2.3 m i R N A-145与肺癌近年来我国肺癌患者病死率呈上升趋势[18]㊂流行病学研究表明,在21世纪50年代之前,肺癌仍将是国家的主要公共卫生问题[19]㊂MO等[20]研究表明,神经型钙黏附蛋白(N-c a d h e r i n)受m i R N A-145的调节,m i R N A-145通过靶向N-c a d h e r i n来抑制肺癌细胞的侵袭和转移㊂C U I等[21]研究结果显示,MA L-A T1调节肺癌细胞中与化疗耐药性相关的癌基因K L F4,且与之呈正相关关系,而m i R N A-145高表达又可降低K L F4m R N A水平,表明MA L A T1可通过m i R N A-145/K L F4起调节作用,从而增强肺癌患者对顺铂化疗的敏感度,提高治疗疗效㊂S U I等[22]选取76例非小细胞肺癌患者及60例健康者,采用实时定量P C R检测其血清m i R N A-145与m i R N A-197水平,结果显示非小细胞肺癌患者m i R N A-145表达水平明显低于对照组,提示m i R N A-145可能参与非小细胞肺癌的发生㊁发展,并可作为诊断非小细胞肺癌的生物标记物㊂2.4 m i R N A-145与乳腺癌目前,乳腺癌已成为全世界女性癌症死亡的主要原因之一[23],近年来的发病率呈上升趋势且发病年龄趋于年轻化[24]㊂因此,寻找适合的乳腺癌生物标记物及更好的治疗方法是临床关注点㊂T A N G等[25]通过实时定量P C R检测m i R N A-145-5p的表达,运用MT T检测和流式细胞仪分析乳腺癌细胞的增殖情况,结果显示m i R N A-145-5p在乳腺癌组织细胞中表达下降,呈现低表达状态,而且m i R N A-145-5p通过靶向S O X2抑制了乳腺癌细胞的增殖,由此推断m i R N A-145-5p可作为诊断乳腺癌风险的生物标记物,并且可通过靶向S O X2抑制其癌细胞的增殖㊂G A O等[26]研究m i R N A-145在乳腺癌耐药性中的作用,结果显示阿霉素可使多药耐药相关蛋白1 (M R P1)表达上调,同时降低m i R N A-145在乳腺癌组织中的表达水平,进一步的研究结果表明m i R N A-7282重庆医学2021年8月第50卷第16期Copyright©博看网 . All Rights Reserved.145通过直接靶向M R P13'非翻译区来抑制M R P1表达,并通过抑制M R P1的表达来增强细胞内阿霉素的积累,增强乳腺癌对阿霉素化疗药物的耐药性㊂从而得出结论,m i R N A-145可通过抑制M R P1的表达增强乳腺癌的耐药性㊂2.5 m i R N A-145与膀胱癌膀胱癌具有高复发率㊁高病死率和高发病率的特征,寻找并确定膀胱癌发生的潜在机制及新的分子靶标具有至关重要的临床意义㊂Z H A N G等[27]研究发现,m i R N A-145在膀胱癌细胞和组织中的表达水平降低,并且抑制着膀胱癌细胞的转移和侵袭能力(此能力是通过调节靶向N-c a d h e r i n来实现的),由此可得见m i R N A-145在膀胱上皮细胞中起着抑癌作用,并可能成为预测诊断及治疗膀胱癌的生物标记物㊂WA N G等[28]研究表明,K C N Q1O T1通过m i R-145-5p/多聚胞嘧啶结合蛋白2(P C B P2)轴来调节膀胱癌中的细胞增殖和迁移㊂2.6 m i R N A-145与宫颈癌宫颈癌对于女性健康有着严重威胁,并且其诊断治疗方式也有一定的局限性,通过临床研究发现m i R N A-145与宫颈癌的关系较为密切㊂MA等[29]研究m i R N A-145在宫颈癌中的潜在机制和功能,运用P C R检测组织中m i R N A-145和F a s c i n-1(F S C N1)表达水平,用W e s t e r n b l o t测定F S C N1蛋白水平,用荧光素酶测定法验证m i R N A-145的直接靶标,与非癌组织相比,宫颈癌细胞中m i R N A-145表达显著下降, F S C N1表达水平上调,二者之间呈负相关关系,同时F S C N1被证实是宫颈癌细胞中m i R N A-145的直接靶标㊂通过此研究表明,m i R N A-145通过F S C N1来抑制宫颈癌细胞的增殖㊂H E等[30]也证实了m i R-N A-145-5p通过调节F S C N1的表达来抑制宫颈癌细胞的侵袭和转移㊂C A O等[31]通过研究发现,宫颈癌细胞中m i R N A-145-5p呈低表达,K rüp p e l样因子5 (K L F5)表达上调,而m i R N A-145-5p可通过下调K L F5抑制宫颈癌细胞的增殖㊁转移及侵袭㊂2.7 m i R N A-145与前列腺癌前列腺癌也是癌症死亡的常见原因之一㊂诸多研究表明,m i R N A-145在前列腺癌的诊治㊁转移㊁侵袭㊁放疗敏感性等方面具有重要的临床意义㊂I S C A I F E等[32]通过研究证实了m i R N A-145可治疗转移性前列腺癌㊂G O N G等[33]研究表明,m i R N A-145可调节前列腺癌细胞对放疗的敏感性,m i R N A-145表达上调后可明显增强前列腺癌细胞对放射的敏感性,由此可见m i R N A-145可增强前列腺癌细胞的放射敏感性㊂P A N等[34]研究表明,m i R N A-145-5p 或m i R N A-145-3p通过调节异黏蛋白(MT D H)来抑制前列腺癌细胞的生长和转移㊂2.8 m i R N A-145与其他肿瘤李志慧等[35]转染m i R N A-145模拟物至白血病细胞中并将白血病细胞作为对照,运用MT T法检测白血病细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测m i R N A-145对细胞周期和凋亡的影响,其结果显示转染m i R-N A-145模拟物的白血病细胞凋亡率明显高于对照组,且上调m i R N A-145表达可能通过抑制P I3K/ A K T通路来阻碍白血病细胞的增殖,并促进白血病细胞的凋亡㊂Z H A O[36]等研究m i R N A-145在神经母细胞瘤(N B)中的潜在肿瘤抑制作用及机制,结果显示m i R N A-145高表达后通过下调MT D H来抑制N B细胞的生长,并提示m i R N A-145可作为N B临床治疗的潜在的治疗靶点㊂G U O等[37]研究发现,m i R-N A-145在喉癌细胞中表达下降,m i R N A-145可抑制喉癌细胞的增殖并可作为诊断喉癌的生物标记物㊂M E I等[38]研究证明,m i R N A-145-5p通过S p1/N F-κB信号通路来抑制食管鳞状癌细胞的转移与侵袭能力㊂3小结从现有文献可知,m i R N A-145在相关肿瘤表达中往往呈现肿瘤细胞内低表达;肿瘤细胞外,如外泌体中呈现高表达的特点㊂这种变化在肿瘤细胞的增殖㊁转移,以及对放化疗的敏感度等方面发挥了重要作用㊂m i R N A-145可作为检测肿瘤的生物标记物;可抑制肿瘤细胞的转移与侵袭能力,促进癌细胞凋亡;增强对放化疗的敏感度,降低肿瘤细胞对药物的耐药性等㊂但目前大多数关于m i R N A-145的研究局限于分析信号通路或靶点对肿瘤细胞的作用,较少研究药物对于m i R N A-145产生的影响,未来可通过研究药物对m i R N A-145产生的影响,获取可调高组织m i R N A-145表达水平的药物,以此更好地在肿瘤的临床诊治中发挥作用㊂参考文献[1]F E R L A Y J,C O L O M B E T M,S O E R J O M A T A R A MI,e t a l.E s t i m a t i n g t h e g l o b a l c a n c e r i n c i d e n c e a n dm o r t a l i t y i n2018:G L O B O C A N s o u r c e s a n d m e t h o d s[J].I n t J C a n c e r,2019,144(8):1941-1953. 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miRNA-145在胆囊癌发病过程中的调控作用及机制研究的开题报告

miRNA-145在胆囊癌发病过程中的调控作用及机制
研究的开题报告
题目：miRNA-145在胆囊癌发病过程中的调控作用及机制研究
研究背景与意义：
胆囊癌是一种具有高度凶险性的恶性肿瘤，常见于40岁以上的患者，其病因至今仍不是很清楚。

研究表明，microRNA(miRNA)在肿瘤发生、
发展和治疗中发挥着重要的调控作用。

miRNA-145是近年来被广泛研究
的一种miRNA，已证实在多种肿瘤中的表达水平下调，而其上调则能够
抑制肿瘤细胞增殖、侵袭和转移。

然而，在胆囊癌中miRNA-145的功能
和机制仍没有完全探明。

因此，研究miRNA-145在胆囊癌中的调控作用
和机制具有重要的理论和实际意义。

研究内容和方法：
本研究计划通过以下几个方面来探究miRNA-145在胆囊癌发病过程中的调控作用和机制：
1. 分析miRNA-145在胆囊癌组织中的表达水平及其与患者临床病理特征的关系；
2. 在胆囊癌细胞系中操纵miRNA-145表达水平，观察细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡等细胞生物学行为的变化；
3. 通过生物信息学方法和实验验证，筛选出miRNA-145靶基因，并对其进行功能和机制分析；
4. 进一步分析miRNA-145与其靶基因之间的相互作用机制，以及miRNA-145作为调控因子是否介导了其他信号通路和因子的调控。

预期结果和意义：
通过以上方法，我们将深入了解miRNA-145在胆囊癌中的调控作用和作用机制，为进一步阐明胆囊癌病因和治疗提供理论和实验基础，同时也为miRNA在肿瘤研究中的应用和开发提供新思路和方法。

MicroRNA--145调控Klf4和Oct4对肺癌细胞生物学行为的影响的开题报告

MicroRNA--145调控Klf4和Oct4对肺癌细胞生物
学行为的影响的开题报告
研究背景及意义：
肺癌是全球范围内最常见的癌症之一，也是导致死亡的主要原因之一。

生物学行为的改变是引起肺癌发病的关键因素之一。

研究表明，微
小RNA(miRNA)参与肺癌的发生和发展。

其中，microRNA-145(miRNA-145)是一种重要的肿瘤抑制基因，在不同类型的肿瘤中表达水平下降。

然而，miRNA-145在肺癌细胞中的作用及其调控机制仍需进一步探讨。

研究内容：
本研究旨在探究miRNA-145在肺癌细胞中的作用机制。

通过实验验证miRNA-145是否能够调节Krüppel-like factor 4 (KLF4)和Oct4的表达，从而影响肺癌细胞的生物学行为。

研究方法：
1.构建miRNA-145激活质粒并转染至肺癌细胞株中。

2.采用Real-time PCR检测miRNA-145、KLF4、Oct4的表达水平。

3.利用Western blotting检测KLF4、Oct4蛋白表达水平。

4.细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移实验，以探究miRNA-145对肺癌细
胞生物学行为的影响。

研究意义：
本研究预期能够探明miRNA-145作为肿瘤抑制基因对于肺癌细胞生物学行为的影响，并解析其调控机制。

结果将为肺癌治疗和新药开发提
供理论支持，具有重要的临床应用价值。

上调miR-145对Th9细胞分化及相关因子表达的影响

doi:10.3969/j.issn.1000⁃484X.2020.24.001㊃基础免疫学㊃上调miR⁃145对Th9细胞分化及相关因子表达的影响①韦　茜　黄尤艺　张湘莲　姜海行　覃山羽　(广西医科大学第一附属医院消化内科,南宁530021) 中图分类号　R735.7 文献标志码　A 文章编号　1000⁃484X (2020)24⁃2945⁃06①本文受国家自然科学基金(No.31560257㊁No.81960439)资助㊂作者简介:韦　茜,男,硕士,主要从事消化系统肿瘤疾病方面研究,E⁃mail:327821730@㊂通讯作者及指导教师:覃山羽,女,博士,教授,博士生导师,主要从事消化系统肿瘤疾病基础及临床方面的研究,E⁃mail:qsy0511@㊂[摘　要]　目的:探讨上调miR⁃145对Th9细胞分化及相关因子表达的影响㊂方法:从小鼠脾脏分离Naive CD4+T 细胞然后随机设置为3组:实验组(转染miR⁃145mimic)㊁对照组(转染miR⁃145mimics NC)和空白组,转染后RT⁃PCR 法检测各组细胞miR⁃145和NFATc1mRNA 的表达;转染后的细胞加入IL⁃4㊁TGF⁃β分化培养3d,流式细胞术检测Th9细胞标志物的表达;ELISA 检测IL⁃9的表达;RT⁃PCR 分别检测Smad3㊁IL⁃9的mRNA 表达水平㊂结果:经过分化培养,与对照组相比,经过分化培养,Th9细胞比例升高(P <0.05);转染后,与对照组相比,RT⁃PCR 结果显示实验组细胞miR⁃145表达显著增高(P <0.01),实验组NFATc1的mRNA 表达下降(P <0.01),实验组IL⁃9的mRNA 表达下降(P <0.05);ELISA 检测显示实验组IL⁃9分泌水平下降(P <0.01);流式检测结果显示实验组Th9细胞比例降低(P <0.05)㊂结论:miR⁃145可抑制Th9细胞分化和IL⁃9的表达㊂[关键词]　miR⁃145;Th9细胞;IL⁃9;细胞分化Effect of up⁃regulated miR⁃145on differentiation and cytokines expression in Th9cellsWEI Xi ,HUANG You⁃Yi ,ZHANG Xiang⁃Lian ,JIANG Hai⁃Xing ,QIN Shan⁃Yu .Department of Gastroenterology ,the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University ,Nanning 530021,China[Abstract ]　Objective :To investigate the effect of up⁃regulated miR⁃145on differentiation and cytokines expression in Th9cells.Methods :Naive CD4+T cells were isolated from mouse spleen and randomly allocated into 3groups:Experimental group (transfected miR⁃145mimic),Control group(transfected miR⁃145mimics NC)and Blank group.After transfection,the expression level of miR⁃145and NFATc1mRNA was detected by RT⁃PCR.Transfected cells were stimulated with TGF⁃βand IL⁃4for 3days,the Th9markers were detected by flow cytometry.IL⁃9expression were detected by ELISA.The mRNA expression levels of IL⁃9and Smad3were detected by RT⁃PCR.Results :After differentiation culture,the Th9proportion was increased compared with control group(P <0.05).After transfection,miR⁃145expression of Experimental group was up⁃regulated significantly compared with Control group (P <0.01),the NFATc1mRNA expression of Experimental group was decreased (P <0.01),the IL⁃9mRNA expression of Experimental group was decreased(P <0.05),the IL⁃9secretion levels of Experimental group was reduced(P <0.01),the Th9cells proportion of Experimental group was reduced(P <0.05).Conclusion :miR⁃145inhibits differentiation and IL⁃9expression of Th9.[Key words ]　miR⁃145;Th9cell;IL⁃9;Differentiation 恶性腹腔积液(malignant ascites,MA)是由多种因素共同作用的结果,常见于卵巢癌㊁肝癌㊁胃癌等疾病的晚期阶段,目前其形成机制尚不完全清楚㊂除了肿瘤细胞外,MA 中还含有大量的免疫细胞,如淋巴细胞(主要是CD4+淋巴细胞)㊁巨噬细胞㊁粒细胞等,发生MA 时,它们被有选择性地募集到腹腔,进而发挥生物学作用[1,2]㊂Th9细胞是CD4+辅助性T 细胞亚群,可由转录生长因子β(transforming growth factor β,TGF⁃β)和IL⁃4在体外刺激诱导初始CD4+T 细胞获得,主要分泌IL⁃9和IL⁃10,具有免疫调节㊁促炎㊁抗肿瘤等效应[3,4]㊂本课题组前期研究显示Th9细胞在MA 的发展过程中发挥重要作用,而anti⁃IL⁃9处理可以延长小鼠MA 模型的中位生存期[5,6]㊂微小RNA145(miR⁃145)是微小RNA家族的一员,miR⁃145在多种癌症中普遍下调,其通过靶向多种癌基因调控细胞周期㊁增殖㊁凋亡和侵袭等[7]㊂研究显示卵巢癌患者MA中的miR⁃145表达下调[8]㊂此外,Lam等[9]研究显示在卵巢癌小鼠模型中,激活miR⁃145可抑制卵巢肿瘤的生长和转移,从而减少MA产生㊂Wang等[10]研究显示在实验性重症肌无力大鼠模型中,过表达miR⁃145可抑制Th17细胞的分化㊂目前miR⁃145的研究多集中在肿瘤细胞,但对MA免疫微环境中的miR⁃145与Th9细胞之间的关系及其作用机制鲜有报道㊂因此,本研究重点探讨上调miR⁃145对Th9细胞及相关因子表达的影响㊂1　材料与方法1.1　材料　C57BL/6小鼠(6~8周,雌性),体质量18~22g,SPF级,由广西医科大学实验动物中心提供,动物许可证号:SYXK(桂)2014⁃0002㊂RPMI1640细胞培养基,胎牛血清(美国Gibco);青链霉素(北京索莱宝);Recombinant Human TGF⁃β1, Recombinant Mouse IL⁃4(美国R&D);EasySep TM Mouse Naïve CD4+T Cell Isolation Kit(加拿大StemCell);Stain Buffer(FBS),Fixation/ Permeabilization Solution Kit,anti⁃Mouse CD3e,anti⁃Mouse CD28,AlexaFluor647标记anti⁃Mouse IL⁃9抗体,PerCP⁃Cyanine5.5标记anti⁃Mouse CD4抗体, Leukocyte Activation Cocktail,流式细胞仪FACSCanto Ⅱ(美国BD);TransIT⁃TKO转染试剂(美国Mirus); miRNeasy Micro Kit(德国QIAGEN);miRNA逆转录试剂盒,miRNA qPCR Kit(北京天根生化科技); mRNA逆转录试剂盒(日本TaKaRa);TRIzol Reagent,mRNA RT⁃PCR试剂盒(美国Thermo Fisher);小鼠IL⁃9ELISA检测试剂盒(武汉华美生物工程);miR⁃145⁃5p mimic,miR⁃145⁃5p mimic Negative Control(韩国Bioneer)㊂1.2　方法1.2.1　脾脏单细胞悬液制备及初始CD4+T细胞的分选　参考Pham[11]的方法,颈椎脱臼法处死小鼠,无菌环境中解剖小鼠,分离脾脏置于盛有预冷的5ml RPMI1640完全培养基的培养皿中,用1ml注射器尾部研磨脾脏,用吸管轻轻反复吹散细胞,将组织研磨液用200目尼龙网过滤,以1500r/min离心5min弃上清,用1ml红细胞裂解液重悬裂解红细胞,1min后立即加入20ml培养基终止反应, 1500r/min离心5min,弃上清,沉淀用PBS溶液重悬,细胞计数,再离心留细胞沉淀㊂用含2%胎牛血清的PBS重悬形成1×108个/ml浓度的细胞悬液㊂按试剂盒说明书进行细胞免疫磁珠分选㊂分选后的细胞用流式细胞术检测CD4+T细胞的纯度㊂1.2.2　Th9细胞的体外诱导分化　参考Humblin 等[12]的方法,将初始CD4+T细胞种植于预先包被anti⁃CD3(2μg/ml)的96孔板中,加入anti⁃CD28 (2μg/ml)㊁IL⁃4(20ng/ml)和TGF⁃β(2ng/ml)诱导为Th9细胞,对照组Th0细胞不加IL⁃4㊁TGF⁃β,各组细胞在含有10%胎牛血清的RPMI1640完全培养基中置于37℃㊁5%CO2条件下培养3d㊂72h后收集细胞,用流式细胞术㊁RT⁃PCR进行分析㊂1.2.3　细胞体外转染　取初始CD4+T细胞随机设置为实验组㊁对照组和空白组,按1×105个/孔细胞接种于96孔板㊂实验组和对照组细胞内分别转染miR⁃145mimic㊁miR⁃145mimic NC,空白组不转染㊂基因转染步骤按TransIT⁃TKO转染试剂说明书进行,转染后24h收集各组细胞应用RT⁃PCR检测miR⁃145表达水平㊂1.2.4　流式细胞术检测CD4+T细胞纯度及Th9细胞诱导比例　加入Leukocyte Activation Cocktail (2μl/ml)刺激细胞,37℃㊁5%CO2培养4~6h后收集细胞并计数,按1×105个/管分装至流式管中, 1500r/min离心5min,PBS洗1遍,离心后弃上清,用100μl PBS重悬细胞,加入PerCP⁃Cyanine5.5标记CD4抗体,4℃避光染色20min,PBS洗1遍, 1500r/min离心5min,弃上清,加入Fixation/Per⁃meabilization固定/破膜液250μl,室温固定30min,加入2ml Perm/Wash液洗1遍,1500r/min离心5min弃上清,以50μl Perm/Wash液重悬细胞,加入AlexaFluor647标记IL⁃9抗体,室温避光染色30min,Perm/Wash洗1遍,1500r/min离心5min 弃上清,用200μl PBS重悬后用流式细胞仪检测㊂1.2.5　ELISA检测Th9细胞上清液IL⁃9的分泌水平　转染后的细胞诱导分化3d,收集细胞培养上清液,检测IL⁃9的分泌㊂按照试剂盒说明操作,加入配好的标准品和样品,37℃温育2h,倒掉液体,加生物素标记抗体混匀,37℃温育1h,洗3次,加辣根过氧化物酶标记的亲和素工作液,37℃温育1h,洗5次,加TMB底物,37℃温育15~30min,加终止液终止反应,5min内读板,450nm波长检测吸光度㊂1.2.6　RT⁃PCR检测细胞miR⁃145㊁NFATc1mRNA㊁IL⁃9 mRNA及Smad3mRNA表达水平　细胞转染24h 后收集各组细胞,按miRNeasy Micro Kit说明书提取细胞miRNA,并按miRcute Plus miRNA First⁃StrandcDNA Kit说明书进行逆转录合成,反应条件:42℃60min㊁95℃3min(1个循环)㊂按照miRcute Plus miRNA qPCR Kit说明书进行实时荧光定量RT⁃PCR 检测,扩增条件:95℃15min(1个循环),94℃20s㊁64℃30s㊁72℃34s(5个循环),94℃20s㊁60℃34s(43个循环)㊂以U6为内参照基因,采用2-ΔΔCt 计算miR⁃145的相对表达量,miR⁃145及U6特异性引物均由生工公司设计合成,miR⁃145上游引物序列为5′⁃ACGGTCCAGTTTTCCCAGGAATCCCT⁃3′㊂于转染后24h收集细胞检测NFATc1mRNA,于转染并诱导3d后收集细胞检测IL⁃9mRNA及Smad3 mRNA,按TRIzol试剂操作说明书提取细胞总RNA㊂按照PrimeScript TM RT reagent Kit with gDNA Eraser 说明书进行逆转录,反应条件:37℃15min㊁85℃5s (1个循环)㊂按照PowerUp TM SYBR TM Green Master Mix说明书进行实时荧光定量RT⁃PCR检测㊂扩增条件:UDG酶激活95℃2min(1个循环),预变性95℃2min(1个循环),95℃15s㊁60℃1min(40个循环)㊂以GAPDH为内参照基因,采用2-ΔΔCt计算mRNA的相对表达量,引物序列见表1㊂1.3　统计学处理　采用SPSS22.0软件对数据进行统计分析,测定值用x±s表示㊂两组间均数差异比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析(One⁃way ANOVA),组间两两比较采用LSD法;P< 0.05表示差异有统计学意义㊂2　结果2.1　Th9细胞诱导分化比例　分选后的细胞用流式细胞术检测比例为(91.4±2.7)%,获得高纯度的初始CD4+T细胞㊂按Th9㊁Th0细胞诱导条件培养72h后,分别检测两组的细胞标志物,结果显示, Th9组CD4+IL⁃9+细胞比例高于对照Th0组[(10.9±2.0)%vs(2.22±0.2)%,P<0.05],差异有统计学表1　目的基因引物序列Tab.1　Primers for target geneTarget genes Sequence(5′⁃3′)GAPDH F:AGGCCGGTGCTGAGTATGR:TGCCTGCTTCACCACCTTCT Smad3F:ACGGCCTTCACAGCACCTTCR:CGTCTGCAATGCCACATCTTC IL⁃9F:AATGCCACACAGAAATCAAGACR:ACACGTGATGTTCTTTAGGACT NFATc1F:CAAGTCTCACCACAGGGCTCACTAR:TCAGCCGTCCCAATGAACAG 意义,Th9细胞诱导成功,见图1㊂2.2　细胞转染后miR⁃145的表达情况　转染24h 后分别提取各组细胞miRNA,并逆转录得到相应cDNA,以其作为模板对miR⁃145进行扩增㊂结果显示,与转染miR⁃145mimic NC组和对照组相比,转染miR⁃145mimic组细胞miR⁃145表达水平均显著增高,差异具有统计学意义(P<0.01),见图2㊂2.3　miR⁃145可抑制Th9细胞标志物的表达　细胞转染后诱导分化72h,检测各组细胞标记物CD4+图1　CD4+细胞纯度及Th9细胞诱导流式分析Fig.1　Flow cytometry analysis of CD4+cell purity and Th9cellsNote:Naive CD4+T cell were differentiation under a Th9cell⁃inducing conditions for3d,and then CD4+T cells were first gated on FSC and SSC to remove debris and conjugates,Th9cells were defined as CD4+IL⁃9+subpopulations by flow pared with Th0group,*.P<0.05.图2　RT⁃PCR分析转染后miR⁃145的表达Fig.2　RT⁃PCR analysis of miR⁃145expression after transfectionNote:Naive CD4+T cells were transfected with miR⁃145mimic or miR⁃145mimic NC,RT⁃PCR analysis of miR⁃145expression after 24h,**.P<0.01.图3　流式细胞术分析转染后诱导的Th9细胞Fig.3　Flow cytometry analysis of Th9cells after transfec⁃tionNote:Naive CD4+T cells were transfected with miR⁃145mimic or miR⁃145mimic NC,and then polarised under Th9conditions 3d,analysed by flow cytometry,*.P <0.05.图4　miR⁃145对Th9细胞分泌IL⁃9及IL⁃9mRNA 和Smad3mRNA 表达的影响Fig.4　Effects of miR⁃145on expression of IL⁃9,IL⁃9mRNA and Smad3mRNA in Th9Note:A.RT⁃PCRanalysisofNFATc1mRNAexpressionaftertransfection,**.P <0.01;B.The supernatant was collected and the IL⁃9secretion was detected with ELISA,**.P <0.01;C.RT⁃PCR analysis of IL⁃9mRNA and Smad3mRNA expression,ns.P >0.05,*.P <0.05,**.P <0.01.IL⁃9+,实验结果显示CD4+IL⁃9+细胞的比例为:miR⁃145mimic 组(3.24±1.66)%㊁miR⁃145NC 组(7.84±1.92)%㊁对照组(8.58±2.36)%㊂结果显示转染miR⁃145mimic 组的细胞CD4+IL⁃9+表达较转染miR⁃145mimic NC 组和对照组均降低,差异具有统计学意义(P <0.05),见图3㊂2.4　miR⁃145可抑制CD4+T 细胞NFATc1的mRNA 表达　转染24h 后分别检测miR⁃145mimic组㊁miR⁃145mimic NC 组细胞NFATc1mRNA 表达,结果显示,与转染miR⁃145mimic NC 的细胞相比,转染miR⁃145mimic 细胞的NFATc1mRNA 表达水平降低(t =-4.932,P <0.01),差异具有统计学意义,见图4A㊂2.5　miR⁃145可抑制Th9细胞IL⁃9的分泌　细胞转染24h 后,刺激诱导分化为Th9细胞,3d 后收集细胞上清分别检测各组细胞IL⁃9泌水平,结果显示:转染miR⁃145mimic 组(107.1±9.6)pg /ml,转染miR⁃145mimic NC 组(173.8±9.9)pg /ml,对照组(185.0±5.1)pg /ml㊂结果显示组间整体比较差异有统计学意义(F =73.2,P <0.01),多重比较显示:转染miR⁃145mimic 组的细胞IL⁃9表达水平比转染miR⁃145mimic NC 组和对照组均显著减少(P <0.01),差异具有统计学意义,见图4B㊂2.6　miR⁃145可抑制Th9细胞IL⁃9的mRNA 表达　各组转染后的细胞刺激诱导72h,分别检测IL⁃9㊁Smad3的mRNA 表达水平,结果显示,组间整体比较差异均有统计学意义(IL⁃9:F =11.428,P <0.01;Smad3:F =6.033,P <0.05)㊂与转染miR⁃145mimic NC 组和对照组相比,转染miR⁃145mimic 组的IL⁃9的mRNA 表达水平降低(P <0.05);与对照组相比,转染miR⁃145mimic 组的Smad3的mRNA 表达水平下降(P <0.05),差异均具有统计学意义㊂而与转染miR⁃145mimic NC 组相比,转染miR⁃145mimic 组细胞的Smad3的mRNA 表达降低(P >0.05),差异无统计学意义㊂实验结果证实上调miR⁃145可抑制Th9的IL⁃9的mRNA 表达,见图4C㊂3　讨论Th9细胞是新近被发现和确认的CD4+细胞的一个亚群,其可由Th2细胞在TGF⁃β刺激下获得,也可在体外由小鼠初始CD4+T 细胞在TGF⁃β和IL⁃4共同刺激下诱导产生,主要分泌IL⁃9效应因子,能够激发炎症反应,参与多种免疫性疾病的病理生理过程[3,13]㊂在本研究中,从小鼠脾脏细胞分选初始CD4+T 细胞后经诱导分化培养,CD4+IL⁃9+细胞比例较未诱导细胞明显增高,与Wang 等[14]结果基本一致㊂Th9细胞分化涉及多种转录因子调控,编码细胞因子IL⁃9的基因是Il9,调控Il9基因转录的调节因子包括PU.1㊁IRF1㊁IRF4㊁STAT5㊁STAT6㊁NFAT㊁GATA⁃1㊁GATA3㊁Smads㊁Etv5㊁Notch以及NF⁃κB㊁AP⁃1等[15]㊂Jash等[16]研究显示T细胞受体活化激活了核因子NFAT和NF⁃κB,促进其核定位和Il9基因的表达,协同促进Th9细胞分化㊂NFATc1是NFAT家族的一员,Peng等[17]研究发现NFATc1调控T和B细胞的活化与分化,NFATc1缺失则导致淋巴细胞增殖受损,淋巴细胞的分化也受到抑制㊂此外,在Th9调控中,Smad3是TGF⁃β受体的下游信号,TGF⁃β/Smad信号途径可以激活IL⁃9的表达, Smad2㊁3和4缺失时,明显抑制Th9细胞分化[18]㊂这些结果都提示NFATc1㊁Smad3在Th9细胞的分化机制中起重要作用㊂MicroRNAs是一种内源性的小型(18~25个核苷酸)非编码RNA,通过抑制翻译或降低mRNA的稳定性在转录后水平调控基因表达㊂miR⁃145在多种癌症中普遍下调,通过靶向多种癌基因调控细胞周期㊁增殖㊁凋亡和侵袭等多种细胞过程[7]㊂Wang 等[10]证实了过表达的miR⁃145可降低CD4+T细胞中NFATc1蛋白表达水平,从而影响Th17细胞表达㊂本研究同样观察到过表达miR⁃145可抑制CD4+T细胞中NFATc1的mRNA水平,同时Th9细胞的分化和细胞因子分泌也受到了抑制,因此推测miR⁃145通过抑制CD4+T细胞的NFATc1从而影响Th9细胞分化㊂同时,本研究观察到过表达miR⁃145可影响Th9细胞Smad3的mRNA表达㊂Megiorni等[19]结果表明Smad3是miR⁃145的潜在靶基因,miR⁃145可负调控Smad3的表达㊂Liu等[20]发现在HK⁃2细胞中miR⁃145可抑制TGF⁃β依赖的Smad信号通路活性㊂因此,miR⁃145是否通过影响TGF⁃β/Smad信号通路而影响Th9细胞分化尚不清楚,今后将进一步研究miR⁃145影响Th9分化的具体机制㊂综上所述,本研究显示上调miR⁃145可抑制Th9细胞分化和IL⁃9分泌水平㊂参考文献:[1]　Bamias A,Tsiatas ML,Kafantari E,et al.Significant differences oflymphocytes isolated from ascites of patients with ovarian cancer compared to blood and tumor lymphocytes.Association of CD3+CD56+cells with platinum resistance[J].Gynecol Oncol,2007, 106(1):75⁃81.[2]　Giuntoli RL2nd,Webb TJ,Zoso A,et al.Ovarian cancer⁃associated ascites demonstrates altered immune environment: implications for antitumor immunity[J].Anticancer Res,2009,29(8):2875⁃2884.[3]　Dardalhon V,Awasthi A,Kwon H,et al.IL⁃4inhibits TGF⁃beta⁃induced Foxp3+T cells and,together with TGF⁃beta,generates 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上调 miRNA145对肝癌细胞的作用及其机制研究

上调 miRNA145对肝癌细胞的作用及其机制研究王寰昱;周奇;王亚峰;张昆松;张朝晖;张梓健;黄陕州;吴健;彭宝岗;陈东【摘要】目的：探讨微小RNA145（ miRNA145）对肝癌细胞生长、凋亡及侵袭转移的影响。

方法：实验将HepG2细胞随机设置为3组：空白对照组、空质粒组及转染组，转染后real－time PCR法检测验证各组细胞miR－NA145及N－钙黏蛋白（ N－cadherin） mRNA的表达，并用Western blot检测miRNA145目标蛋白N－钙黏蛋白的表达， MTS增殖实验检测各组细胞的生长情况，流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率，Transwell法检测各组细胞的侵袭转移能力。

结果：Real－time PCR结果证实转染组细胞miRNA145表达比空质粒组和空白对照组细胞明显增多（P＜0．05），同时N－钙黏蛋白的表达在转染组细胞中显著减少（P＜0．05）；经Western blot结果证实，转染组细胞中N－钙黏蛋白表达比空质粒组和空白对照组细胞明显减少（ P＜0．05）；转染组细胞活性在转染后第2天、第3天均明显下降，70．04％的细胞周期停止在G1期，转染后HepG2细胞凋亡率明显增高，细胞的侵袭转移能力下降，差异均有统计学意义。

结论：上调miRNA145表达能有效抑制肝癌细胞的细胞周期进展和侵袭转移，促进细胞凋亡。

%[ ABSTRACT] AIM:To investigate the effects of microRNA145 ( miRNA145 ) on the viability, apoptosis, inva-sion and metastasis of hepatoma HepG2 cells.METHODS: HepG2 cells were randomly allocated into 3 groups: blank control group, empty mimic transfected group and miRNA145 mimic transfected group.Under the induction of Lipofectami-neTM 2000, the recombinant was transfected into HepG2 cells.After transfection, the expression level of miRNA145 was detected by real-time PCR.The protein level of N-cadherin and the mRNA expression levels ofmiRNA145 and N-cadherin were detected by Western blot and real-time PCR.The cell viability was detected by MTS assay.The cell cycle and apopto-sis were analyzed by flow cytometry.Invasion and metastasis were detected by Transwell assay.RESULTS:Compared with negative control, miRNA145 expression was up-regulated significantly, while the expression of N-cadherin was down-regu-lated significantly.Meanwhile, the cell viability, cell cycle, apoptosis, invasion and metastasis of hepatoma HepG2 cells were all significantly inhibited (P<0.05).CONCLUSION:miRNA145 dramatically inhibits viability, apoptosis, inva-sion and metastasis of hepatoma cells.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2015(000)006【总页数】7页(P1019-1025)【关键词】微小RNA145;肝细胞癌;细胞增殖;细胞凋亡;细胞侵袭【作者】王寰昱;周奇;王亚峰;张昆松;张朝晖;张梓健;黄陕州;吴健;彭宝岗;陈东【作者单位】中山大学附属第一医院肝胆外科，广东广州510080;中山大学附属第一医院肝胆外科，广东广州510080;河南省人民医院肝胆外科，河南郑州450000;中山大学附属第一医院肝胆外科，广东广州510080;中山大学附属第一医院肝胆外科，广东广州510080;中山大学附属第一医院肝胆外科，广东广州510080;中山大学附属第一医院肝胆外科，广东广州510080;中山大学附属第一医院肝胆外科，广东广州510080;中山大学附属第一医院肝胆外科，广东广州510080;中山大学附属第一医院肝胆外科，广东广州510080【正文语种】中文【中图分类】R730.23［修回日期］2015-05-04▲并列第1作者［ABSTRACT］AIM: To investigate the effects of microRNA145 (miRNA145) on the viability，apoptosis，invasion and metastasis of hepatoma HepG2 cells.METHODS: HepG2 cells were randomly allocated into 3 groups: blank control group，empty mimic transfected group and miRNA145 mimic transfected group.Under the induction of LipofectamineTM2000，the recombinant was transfected into HepG2 cells.After transfection，the expression level of miRNA145 was detected by real-time PCR.The protein level of N-cadherin and the mRNA expression levels of miRNA145 and N-cadherin were detected by Western blot and real-time PCR.The cell viability was detected by MTS assay.The cell cycle and apoptosis were analyzed by flow cytometry.Invasion and metastasis were detected by Transwell assay.RESULTS: Compared with negative control，miRNA145 expression was up-regulated significantly，while the expression of N-cadherin was down-regulated significantly.Meanwhile，the cell viability，cell cycle，apoptosis，invasion and metastasis of hepatoma HepG2 cells were all significantly inhibited (P＜0.05).CONCLUSION: miRNA145 dramatically inhibits viability，apoptosis，invasion and metastasis of hepatoma cells.［KEY WORDS］MicroRNA145; Hepatocellular carcinoma; Cell proliferation;Apoptosis; Cell invasion肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是癌症中致死率较高的一种，尽管在过去的几十年中，肝癌的各治疗手段取得了显著的进步，但患者的5年生存率仍然较低［1］，这与HCC具有较高的增殖侵袭迁移能力有关。

非小细胞肺癌患者血浆miRNA-145和miRNA-221表达与临床特征及术后复发的相关性研究

非小细胞肺癌患者血浆miRNA-145和miRNA-221表达与临床特征及术后复发的相关性研究黄刚;陈霏;肇玉博;张迪【摘要】目的探讨血浆微小RNA (microRNA,miRNA)-145和miRNA-221表达在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)术后复发中的诊断价值.方法选取2016年4月～2018年4月期间在陕西中医药大学附属医院和陕西省核工业二一五医院胸外科行手术切除的55例原发性非小细胞肺癌患者的临床资料进行回顾性分析,依据术后是否复发分为复发组和未复发组.同时选取50例同期体检健康者作为对照组.采用实时聚合酶联反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测NSCLC患者血浆miRNA-145和miRNA-221的表达,采用电化学发光方法检测血清细胞角蛋白片断21-1(CYFRA21-1)和癌胚抗原(CEA)水平,比较分析以上标志物的变化与NSCLC患者术后复发的关系.结果在对照组、未复发组和复发组中,血浆miRNA 145和miRNA221的表达分别为0.97±0.27,0.35±0.15,0.17±0.09和0.20±0.11,0.39±0.17,1.06±0.31.未复发组的miRNA221表达显著高于对照组,而显著低于复发组;未复发组的miRNA-145表达显著低于对照组,而显著高于复发组;以上比较的差异均有统计学意义(F=118.73～123.72,均P＜0.01).在对照组、未复发组和复发组中,血清CYFRA21-1 (ng/ml)和CEA(ng/ml)水平分别为3.02±1.17,9.05±3.43,47.68±16.72和2.31±2.03,7.37±3.29,29.37±12.49.复发组和未复发组的CYFRA21-1和CEA水平与对照组比较显著增高;复发组两肿瘤标志物水平与未复发组比较显著增高;以上比较差异均有统计学意义(F=87.46～96.83,均P＜0.01).在复发组中,血浆miRNA 145和miRNA221表达具有负相关性(r2=0.772,P＜0.01).miRNA 145表达分别与CYFRA21-1和CEA水平有负相关性(r2=0.772～0.794,均P＜0.01),而miRNA-221表达分别与CYFRA21-1和CEA水平有正相关性(r2=0.663～0.687,均P＜0.01).血浆miRNA-221和miRNA-145表达在鳞癌中的异常率高于腺癌,在TNMⅢ期中的异常率高于工-Ⅱ期(x2 =0.012～0.039,均P＜0.05);两标志物与患者年龄、肿瘤大小和吸烟无明显相关性(x2=0.301～1.000,均P＞0.05).结论血浆miRNA 145和miRNA 221的差异表达与NSCLC的病变进展有关,检测血浆miRNA-145和miRNA-221表达可用于监测NSCLC术后的复发.【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2019(034)004【总页数】5页(P40-44)【关键词】非小细胞肺癌;微小RNA-145;微小RNA-221;细胞角蛋白片断21-1(CYFRA21-1);癌胚抗原(CEA)【作者】黄刚;陈霏;肇玉博;张迪【作者单位】陕西中医药大学附属医院检验科,陕西咸阳 712000;陕西省核工业二一五医院检验科,陕西咸阳 712000;陕西中医药大学附属医院检验科,陕西咸阳712000;陕西中医药大学附属医院检验科,陕西咸阳 712000【正文语种】中文【中图分类】R734.2;R730.43肺癌是目前世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)是其最常见的类型[1]。

miRNA与小细胞肺癌关系的研究进展

miRNA与小细胞肺癌关系的研究进展
郑杨;帕提古力·阿尔西丁
【期刊名称】《临床医学进展》
【年(卷),期】2024(14)3
【摘要】小细胞肺癌(Small Cell Lung Cancer, SCLC)是一种恶性程度高的神经内分泌肿瘤,其病情进展快,短期内易出现耐药或复发,预后很差。

微小RNA (microRNA, miRNA)是一类由19~25个核苷酸组成的非编码单链RNA,广泛分布于真核生物中,参与多种疾病的发生过程。

有研究显示,miRNA在SCLC中表达失调,发挥抑癌或促癌作用,参与SCLC的增殖、侵袭、转移及耐药的生物学过程。

同时,也有报道,miRNA作为SCLC的诊断及预后的生物标志物提供了可能性。

本文就miRNA在SCLC的增殖转移、耐药、诊断、预后等相关的研究进展作一综述。

【总页数】6页(P1704-1709)
【作者】郑杨;帕提古力·阿尔西丁
【作者单位】新疆医科大学附属肿瘤医院肺内科一病区乌鲁木齐
【正文语种】中文
【中图分类】R73
【相关文献】
1.miRNA-141、miRNA-145在非小细胞肺癌中的表达及与临床病理的关系
2.miRNA-126与非小细胞肺癌关系的研究进展
3.circRNA-miRNA-mRNA调控
网络在非小细胞肺癌诊断、预后及治疗抵抗中的研究进展4.MiRNA-186在非小细胞肺癌中的研究进展5.非小细胞肺癌中miRNAs的表达水平及作用机制研究进展
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上调miR-145表达抑制卵巢癌HO8910细胞侵袭、迁移及促进TβR-Ⅱ蛋白表达

上调miR-145表达抑制卵巢癌HO8910细胞侵袭、迁移及促进TβR-Ⅱ蛋白表达祁振军;戴志琴【期刊名称】《现代肿瘤医学》【年(卷),期】2022(30)5【摘要】目的:探究微小RNA-145(microRNA-145,miR-145)对卵巢癌(ovarian cancer, OC)HO8910细胞侵袭、迁移及TβR-Ⅱ蛋白水平的影响。

方法:将某大学研究实验室细胞库提供的OC细胞HO8910分为ZW组(无转染HO8910细胞)、ZN组(转染miR-145-NC)、YJ组(转染miR-145 mimics)。

采用qRT-PCR、MTT、Hoechst33258荧光染色、Transwell小室、细胞划痕、Western blot检测miR-145、转化生长因子βⅡ型受体(transforming growthfactorβtypeⅡreceptor, TβR-Ⅱ)表达、细胞活力、凋亡、侵袭、迁移能力以及TβR-Ⅱ蛋白量。

结果:YJ组HO8910细胞中miR-145的表达量最高,提示转染成功。

YJ组TβR-Ⅱ表达量较其他两组对比明显提高(P<0.05),ZW组、ZN组miR-145、TβR-ⅡmR NA表达水平无明显差异(P>0.05);培养48、72、96 h, YJ组细胞活力较ZW组、ZN组比较明显减弱(P<0.05),随着时间的延续,培养96 h三组细胞活力均优于48、72 h(P<0.05);YJ组与ZW组、ZN组对比细胞凋亡率明显提高(P<0.05);ZW组HO8910细胞荧光强度最弱,细胞凋亡率最低,ZW组与ZN组对比无明显差异(P>0.05);三组细胞侵袭、迁移数量相比差异较大(P<0.05),其中YJ组侵袭、迁移数量少于其他两组(均P<0.05),ZN组与ZW组的细胞侵袭、迁移数量无明显差异(P> 0.05);YJ组TβR-Ⅱ蛋白表达量与ZU组、ZN组对比明显升高(P<0.05),YJ组转化生长因子-β(transforming growth factorβ,TGF-β)蛋白表达量与其他两组对比均降低(P<0.05),ZW组TGF-β、TβR-Ⅱ蛋白表达量与ZN组对比差异较小(P> 0.05)。

microRNA-145对食管鳞状细胞癌细胞增殖的影响

microRNA-145对食管鳞状细胞癌细胞增殖的影响孙嘉伟;刘凤霞;刘文亚;薛敏杰;王潇【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2013(036)006【摘要】目的探讨microRNA-145(miR-145)对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖的影响.方法用脂质体法将miR-145转染入ESCC细胞,实验分为正常对照组、随机序列组和miR-145组.在荧光显微镜下观察细胞生长及基本形态,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-145的表达,采用噻唑蓝(MTT)增殖试验检测细胞增殖情况,用伤口愈合实验检测细胞迁移.结果 72 h后,MTT增值实验显示,miR-145组[表达值为(0.56+0.04)]的癌细胞增殖速度较正常对照组[表达值为(0.98+0.09)]和随机序列组[表达值为(0.95+0.11)]明显下降,差异有统计学意义(P ＜0.05).结论 miR-145对ESCC细胞的增殖可能有抑制作用.【总页数】4页(P756-758,762)【作者】孙嘉伟;刘凤霞;刘文亚;薛敏杰;王潇【作者单位】基础医学院人体解剖教研室,乌鲁木齐,830011;基础医学院人体解剖教研室,乌鲁木齐,830011;第一附属医院影像中心,乌鲁木齐,830054;基础医学院人体解剖教研室,乌鲁木齐,830011;基础医学院人体解剖教研室,乌鲁木齐,830011【正文语种】中文【中图分类】R735.1【相关文献】1.MicroRNA-145对骨肉瘤细胞增殖及凋亡的影响 [J], 范磊;邵增务;吴强;魏玉龙;于晓巍2.咖啡酸对食管鳞状细胞癌KYSE150细胞增殖、迁移、侵袭及裸鼠移植瘤生长的影响 [J], 孙晓萌;齐义军;高社干3.上调环状RNA_8199表达对食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响[J], 王伟;燕迪迪;丁爽;倪凯园;姜国忠4.RBMX在食管鳞状细胞癌中的相关性研究——RBMX对食管鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响 [J], 刘芳;李贵才;丁宗梅;秦凯;陆松华5.S1P/S1PR1通路调节补体B因子的表达对食管鳞状细胞癌细胞增殖和迁移的影响 [J], 徐凤敏;陈昱伶;任玲;蒙春梅;李倩倩;胡为民因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

miR--145在宫颈癌放疗敏感性调节中的作用及机制研究的开题报告

miR--145在宫颈癌放疗敏感性调节中的作用及机制
研究的开题报告
题目：miR-145在宫颈癌放疗敏感性调节中的作用及机制研究
研究目的：
宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一。

放疗是宫颈癌的常规治疗方法之一，但其疗效却受到很大限制。

因此，探究宫颈癌放疗敏感性的调节机制及新治疗靶点是十分必要的。

近期研究表明miR-145可能涉及宫颈癌的发生和发展，因此，本研究拟探究miR-145对宫颈癌放疗敏感性的调节作用及其相关机制。

研究内容：
1. 收集宫颈癌患者组织样本及相关临床数据；
2. 分离宫颈癌细胞系，并构建miR-145的过表达和下调表达模型；
3. 通过MTT法及流式细胞术分析miR-145对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响；
4. 基于生物信息学分析miR-145的靶点基因；
5.验证miR-145靶向调控的基因在宫颈癌放疗敏感性中的作用。

预期结果：
本研究预期探究miR-145在宫颈癌放疗敏感性中的调节作用及其相关机制，进一步明确miR-145在宫颈癌放疗中的作用。

通过这一研究，有望为宫颈癌的治疗提供新的靶点及思路。

关键词：miR-145；宫颈癌；放疗；敏感性；靶向调控。