诱导培养基对水稻胚愈伤组织形成和分化的影响
水稻愈伤组织液体增殖培养的初步研究
水稻愈伤组织液体增殖培养的初步研究在生产上，水稻作为重要粮食作物之一，其种子萌芽率低，苗期易受病虫危害。
利用愈伤组织诱导快速繁殖优良无性系，可提高水稻抗逆能力，改善品质，促进早熟丰产。
一、实验目的本实验旨在通过愈伤组织液体增殖培养的研究进一步了解植物组织培养技术，并且探索该项技术在农业中应用前景及存在问题。
二、实验原理二、实验材料和方法愈伤组织是由胚状体发育而来的幼嫩器官，具有再生能力强、适应环境广等特点。
愈伤组织的形成机制至今尚未完全清楚，但已知它们均需从外界获取营养才能继续分裂增殖。
而离体培养条件下愈伤组织细胞很难满足这些基本条件，因此人工创造合适的离体条件使愈伤组织不断增殖就显得十分必要。
近年来，许多学者对愈伤组织的培养进行了大量的研究，主要集中于如何建立最佳培养条件和选择最好的愈伤组织类型两个方面。
2。
培养基的配置与灭菌3。
接种4。
培养5。
检查6。
移栽7。
观察记载8。
总结9。
思考题10。
参考文献11。
致谢12。
附录13。
插图14。
表格15。
正文16。
图片17。
表格18。
图示19。
引言20。
实验设计21。
试剂22。
仪器23。
操作24。
结果25。
讨论26。
参考文献27。
后记三、结果与分析1。
愈伤组织的诱导2。
培养基的配置与灭菌3。
接种4。
培养5。
检查6。
移栽7。
观察记载8。
总结9。
思考题10。
参考文献11。
致谢12。
附录13。
插图14。
表格15。
正文16。
图片17。
表格18。
图示19。
引言20。
实验设计21。
试剂22。
仪器23。
操作24。
结果25。
讨论26。
参考文献27。
后记四、讨论根据本次实验得出以下几点： 1。
培养时间越长，愈伤组织的形态也随着变化，愈伤组织开始呈现绿色，逐渐转向褐色，到最终颜色会趋于白色或灰白色。
2。
培养基含糖量的高低直接影响愈伤组织的形成情况，若糖浓度较高，则愈伤组织形成缓慢；反之，愈伤组织容易形成。
3。
愈伤组织形成初期，细胞内的线粒体数量明显减少，核仁缩小，这都说明愈伤组织还没有形成完整的细胞结构。
影响水稻成熟胚愈伤组织增殖力和再生力的因素
和再 生力 的影 响
张林 和服部 一 三 在 一个 高愈 伤组 织增 殖力 和一 个低
景中去 。张林” 等对具有不同愈伤组织增殖力的品种进
行 组 织学 的研 究 表 明 ，愈 伤 组 织增 殖 力 的 不 同 是 由于 在 愈 伤 组织 诱 导 培 养 中 ，盾 片 上 皮 细胞 和 愈 伤 组 织 内 的细 胞 分裂 活性 的不 同 引起 的 。
报道 了 １ 个控 制高再生 力的显性基 因和 １ 个隐性基 因 。 Ｔ ａ ｋ ｅ ｕ ｃ ｈ ｉ ｔ 也于ｌ ９ ９ ７年报道了一个控制高再生力 的显性
张 林 和 服 部 一 三 还 分 析 了 一 个 高 再 生 力 和 一 个 低 再 生力 的粳 稻 品种 杂 交 后 代 成熟 胚 培 养 愈 伤组 织 的再 生
大量 的实 践表 明 ，不 同 的水 稻 品种 在组 培 特 性 上也 不尽 相 同 ，粳 稻 ＞籼稻 。
细胞与基 因工程在育种上的运用 ，基础在于一个组
陈璋 等早年研究发现水稻不同基 因型之间成熟胚的
织培养体系是否能高效地形成愈伤组织及再生植株。但 愈伤组织诱导率变幅为 １ ０ ． ７ １ ％～ ７ ５ ． ７ ５ ％。证明基因型之 不 同植物或相 同植物的不同品种 ，在这些培养特性上都 间存在遗传差异。 会有很大不同。现 阶段 ，克服这种遗传性 障碍的有效途 ２ ． １ 基 因 自身显 隐性 对水 稻成 熟胚 愈伤 组 织增 殖 力
愈伤组织增殖力 品种杂交的Ｆ ２ 群体 中观察到 ，再生率高 和低 的类型在愈伤组织增殖不 良和 良好的个体 中同时存
在 。在 研 究 中 ，大 而黄 的愈 伤组 织 以及 小 而黑 的愈 伤 组
水稻愈伤组织的诱导实验报告
水稻愈伤组织的诱导实验报告实验目的：本实验旨在探究水稻愈伤组织的诱导方法，为将来的水稻遗传改造研究提供参考。
实验材料和仪器：1. 材料：水稻种子、MS培养基、植物生长调节剂2,4-D、生长调节剂TDZ、无菌器具、琼脂、无菌操作室。
2. 仪器：无菌操作台、显微镜、实验室平衡器等。
实验步骤：1. 生物材料准备：选取幼苗期生长良好、品种鲜明的水稻种子作为材料。
将水稻种子进行表面消毒，处理方法为分别用70%的酒精和5%的次氯酸钠(1:1)混合消毒3-5分钟，然后充分清洗。
2. 建立组织培养体系：将消毒后的水稻种子在无菌操作台上进行分离培养。
将种子取出后，从胚乳中取出胚轴，用剪刀消毒后放入含有MS培养基的无菌培养瓶中，置于无菌操作室中进行培养。
在35-37°C下连续培养3-5天。
3. 筛选愈伤组织：将培养2-3天的胚轴等植物试管苗等组织放置在含有不同浓度的2,4-D和TDZ的培养基中，培养10-15天。
筛选出生长具有愈伤能力的组织，采用显微镜等方法进行观察，并进行相应的分离和培养。
4. 愈伤组织的维持和复壮：将筛选出的愈伤组织维持在含有2,4-D和TDZ的培养基中，定期进行转移或分离。
当愈伤组织增生至一定程度后，将其转移到不含激素的培养基中，进行复壮。
实验结果：在实验过程中，我们选择了4个不同浓度的2,4-D和TDZ进行培养，筛选出了愈伤组织，并进行了维持、修复工作。
经过5次转移和增殖培养，我们成功地建立了稳定的水稻愈伤组织体系。
结论：本实验采用的方法可行，成功地建立了稳定的水稻愈伤组织体系。
本研究为今后的水稻遗传改造和抗性育种提供了良好的基础。
水稻愈伤组织培养
水稻愈伤组织的诱导李希北京科技大学化学与生物工程学院生物科学与技术系，北京，100083摘要：以水稻种子为外植体，研究了外植体的消毒方法和接种技术，了解了水稻愈伤组织诱导的过程。
结果表明水稻种子接种在诱导培养基上两天已产生愈伤组织发芽2mm，四天愈伤组织呈现浅黄色发芽5-10mm，6天愈伤组织颜色加深发芽1-2cm，8天愈伤组织为橙黄色发芽2-3cm，无杂菌污染。
关键词：水稻种子外植体诱导愈伤组织引言自Niizeki和Oono1968年首次获得水稻花粉植株以来，水稻组织培养取得了很大的进展，如各种水稻品种愈伤组织的诱导、继代、植株再生培养基的筛选，遗传特性，基因工程转化体系的建立等等。
水稻种子愈伤组织的诱导是这些研究的基础，因此掌握外植体的消毒方法和接种技术，了解了水稻愈伤组织诱导的过程至关重要。
以植物器官、组织、细胞等作外植体进行离体培养时，在一定的诱导培养条件下都能诱导形成愈伤组织。
外植体源自自然环境均为带菌状态，在接种前都必须进行消毒。
对于难消毒的材料，有时要几种消毒剂配合使用。
本次试验使用的诱导剂为2,4-D，诱导率为100%。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1实验材料水稻成熟种子（用于诱导愈伤组织）；1.1.2仪器设备及用具超净工作台培养室、培养皿：￠9cm×2枪形镊量筒：100mL×2三角瓶：50mL×2(无菌)；废液缸；保鲜膜；标签纸1.1.3试剂及培养基试剂：75%酒精，2%NaCLO，无菌水(每组1瓶400mL)培养基：诱导培养基：MS+2,4-D2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L（pH5.8）1.2 实验方法1.2.1 MS固体培养基配制：由于实验室中的MS培养基已含有蔗糖和琼脂，所以直接按照41.5g/L的浓度配置。
实验中配置50ml培养基，需依次加入2.075gMS，0.1mg2,4-D；用NaOH或HCl调节PH=5.8；高压蒸汽锅121℃灭菌20min。
水稻愈伤组织的诱导实验报告
水稻愈伤组织的诱导实验报告
实验目的：
通过诱导方法获取水稻愈伤组织，为后续的基因转化等实验打下基础。
实验材料和设备：
水稻种子、MS培养基、2,4-D溶液、NaClO溶液、无菌操作
器材、显微镜等。
实验步骤：
1.种子消毒：将水稻种子放入1% NaClO溶液中浸泡10分钟，再用去离子水洗净后，放进无菌操作室中。
2.种子发芽：将消毒后的种子放进含有营养的MS培养基中，
在25℃下进行光照培育。
3.愈伤组织诱导：将发芽后的幼苗从培养基中取出，用无菌水
清洗。
将茎部和叶片等不同部位的组织嫁接在含有2,4-D溶液
的MS培养基上，培养在25℃下、光照下，观察诱导组织的
生长情况。
4.分离愈伤组织：当组织生长到一定大小后，用无菌操作器材
将组织用无菌剪刀分离下来。
5.愈伤组织培养：将分离出的愈伤组织放入含有NAA、BA、MS培养基中进行培养。
结果分析：
在诱导的茎部和叶片等不同部位，均出现了白色愈伤组织的诱导生长。
经过分离和培养，得到了纯化的愈伤组织。
通过显微镜观察发现，愈伤组织的细胞间隙变窄，胞间质增多，中心细胞数量增多，细胞核增大，一些细胞内的小器官也出现转化现象。
结论：
通过2,4-D溶液的诱导方法，可以在水稻幼苗的不同部位诱导出白色愈伤组织，愈伤组织的分离和培养也取得了成功。
实验结果为后续的基因转化、基因工程等实验提供了基础。
水稻成熟胚愈伤组织诱导及其植株再生
水稻成熟胚愈伤组织诱导及其植株再生新疆农业科学2007,44(6):889—891XinjiangAgriculturalSciences水稻成熟胚愈伤组织诱导及其植株再生危晓薇,王冬梅,祖木热木?吐尔逊(新疆农科院核生所,鸟鲁木齐830091)摘要:利用水稻成熟胚为外植体,接种在NB培养基上,分别附加不同的外源激素,以诱导愈伤组织并促其分化,最终获得水稻再生植株.结果表明:2,4一D对愈伤组织诱导起决定性作用,当它与低浓度的6一BA配比时更有利于前期愈伤组织的诱导,而高浓度的6一BA则有利于后期芽丛的分化.关键词:水稻;成熟胚;愈伤组织;再生植株中图分类号:$511文献标识码:A文章编号:1001—4330(2O0r7)o6—889—03 CallusInductionandPlantRegenerationofMatureEmbryosinRiceWEIXiao—wei,W ANGDong—mei,Zhumuremu?Tuerxun (InstituteofNuclearandBiologicalTechnologies,XinjiangAcademyofAgriculturalScienc es,Urumqi830091,China)Abstract:ThematureembryoswerecultivatedonNBmediawithdifferenthormones,byusin gthematureembryosinriceasexplants,andregenerationplantswereobtainedsuccessfully.Theresultssh owedthat2,4一DWasimportantfactorincallusinduction.Whenitisproportionaltolowconcentration6一BA,itisusefultocallusinduction,andwhenithasproportionalhighconcentration6一BA,itisnecessarytodi Ⅱ.eI℃ntiategreenbud.Keywords:rice;matureembryos;callusinduction;regenerationplant水稻体细胞组织培养作为水稻基因工程的基础技术,在水稻遗传改良中具有重要的作用.因此,建立一个高效再生体系是实现基因转化的先决条件.1965年,Amemiya等开始水稻组织培养,几十年来,研究者先后从水稻各部位诱导出愈伤组织和再生植株.虽然,幼穗,幼胚,花粉粒,花药愈伤组织诱导率高,愈伤组织质量好而受到青睐被广泛用于水稻的遗传转化,品种培育中.但上述材料多受季节限制,取材不便,阻碍了水稻组织培养的进一步发展.实验利用水稻成熟种胚作为外植体[1'引,通过不同培养基,不同激素类型及浓度对水稻成熟种胚愈伤组织诱导,分化进行了相关研究L2,4,5】,为提高水稻成熟种胚愈伤组织的质量和高效再生频率提供有效依据.1材料与方法1.1材料供试材料为早锦1号,秋田小町[6~8]两个水稻品种.1.2方法1.2.1愈伤组织诱导培养基基本培养基为N6大量元素,B5微量元素及有机成分,辅加水解乳蛋白300mg/L,谷氨酰胺250mg/L,蔗糖3Og/L,pH5.8.表11.2.2愈伤组织分化培养基以N6培养基为基本培养基,辅以水解乳蛋白O.5—1.0g/L,6一BA0.5—3.5mg/L,NAA1.0mg/L,硫酸铜1.5mg/L,蔗糖30g/L,pH5.8.1.2.3生根培养基以MS为基本培养基,蔗糖3Og/L,pH5.8.收稿日期:2007—08—29基金项目:新疆农作物生物技术重点实验室作者简介:危晓薇(1956一),女,湖南人,副研究员,研究方向为基因工程890?新疆农业科学44卷表1添加不同激素的诱导培养基Table1InductivesubsWatmnaddedwititdifferenthormones1.2.4外植体消毒以及培养方法选择饱满成熟的种子,手工剥去颖壳.在超净工作台上,用70%的乙醇浸泡种子30s.0.1%的Hl2溶液表面消毒8～10min,无菌水漂洗3～4次,浸泡过夜.用镊子,解剖刀取出灭菌种子的成熟胚,将其接种于愈伤组织诱导培养基中,26～28~C暗培养.诱导培养7d后,将初始愈伤组织从萌发的种胚上剥离后转到新鲜诱导培养基上,继续培养30d,统计出愈情况.经继代生长60d左右,挑选生长旺盛,自然分散,质地紧密,呈淡黄色颗粒状的愈伤组织接种于分化培养基上,26～28~C光照培养(14h光/10h暗,1500～20001)()诱导芽的分化.绿芽分化后,把绿芽转人生根培养基中,直至成为完整小植株.2结果与分析2.1不同培养基及激素种类与浓度对愈伤组织诱导分化的影响比较Ms,N6,B5三种培养基的无机盐及有机成分,发现用N6培养基的无机盐,B5有成分和微量元素对诱导水稻成熟种胚愈伤组织较适宜.比较6一BA,2,4一D,KT等激素,发现分裂素6一BA0.2—3.5mg/L与生长素,NAA,2,4一D2mg/L进行配比有利于愈伤组织诱导和芽分化.另外,在培养基中适当加入水解乳蛋白,谷氨酰胺和硫酸铜对愈伤组织的诱导和芽丛分化都有一定促进作用.表2表2不同激素浓度配比对愈伤组织诱导的影响(以秋田小町为例)Table2Effectofdifferenthormoneconcentrationoncallusinduction (TakingAkitakaomaqiasanexample)2.2愈伤组织的获得和芽的分化按上述条件和方法进行愈伤组织的诱导,接种7d后即可看到种胚上有初始愈伤出现.15d后愈伤组织形成.继代40d后两个供试材料都诱导出大量的愈伤组织.其中,在2,4一D2mg/L,6一BA0.5mg/L组合中诱导的愈伤质地较硬,淡黄色颗粒状,分散性好.实验表明,这类愈伤组织通过在分化培养基上继代培养30d左右就可以观察到绿芽点的出现,继代培养30～40d就可见小苗生长.图1～32.3再生植株的获得一将生长长度1cm左右的芽丛切下后,接种在生根培养基中,20d左右逐渐生根,30d 后形成根系,此时,地上部分生长迅速,获得完整再生小植株.图4.6期危晓薇等:水稻成熟胚愈伤组织诱导及其植株再生?89l?图1秋田小町的初始愈伤组织Fig.1Imtialcallusof.4ddmlmomaqi图3秋田小町的绿色丛芽Fig.3GreenclumpingbudsofAkitakaomaqi3小结图2秋田小町的大量胚状体组织Fig.2GreatnumberofembryoidofAkitakaomaqi图4秋田小町的完整植株Fig.4WholeplantofAldta~omaqi3.1水稻由于其基因组小,通过组织培养易获得再生植株等特点而在基因克隆,基因功能验证以及遗传转化等研究方面成为模式植物.在实验中,选取了两个水稻品种,查阅国内大量水稻遗传转化的相关文章,对培养基做了适当调节,早锦1号和秋田小町均获得再生植株.在水稻组织培养过程中,发现外源激素是愈伤组织诱导和绿苗分化的关键因素,尤其是2,4一D和6一BA的适宜配比对水稻成熟胚愈伤组织诱导起着决定性作用.3.2新疆水稻种植面积少,主要集中在阿克苏和米泉等地.实验所用秋田小町是新疆当前水稻生产上的主栽品种之一,种植面积约占全疆水稻总面积的1/3.通过组织培养,已经得到了秋ftt4,町的再生植株,现正在对新疆其它水稻栽培品种进行再生植株的培养,这为新疆水稻的遗传转化,功能基因验证等研究贮备了前期条件.参考文献:[1]郑贵朝,胡事君.提高水稻愈伤组织植株再生能力几种方法的评价[J].杂交水稻,2005,2o(2):54—57.【2]李玉静,陈彦龙.2,4一D和6一BA对水稻愈伤组织培养力的影响[J].河北师范大学(自然科学版),2005,29(4):395—403.[3]周玲艳,秦华明.提高水稻愈伤组织再生频率的研究[J].种子,2006,25(7):28—31.[4]陈兴春,牛蓓.水稻愈伤组织分化与不同激素配比关系的研究[J].四川大学(自然科学版),2006,43(1):222—227.[5]姜华,陈静.ABA对水稻愈伤组织,不定胚发育及其植株再生的影响[J].作物,2006,32(9):1379—1383.[6]梁乃亭,魏玉波.优质水稻秋田町及其栽培技术[J].新疆农业科学1997,(2):51—52.[7]魏玉波,布哈丽且木,粱乃亭.新疆水稻优质栽培技术[J].新疆农业科学,2002,39(5):307—309.[8]魏玉波,梁乃亭,布哈丽且木,等.优质水稻品种39及栽培技术[J].新疆农业科学.2004.41(6):448—449.。
水稻胚培养实验报告
水稻胚培养实验报告本实验旨在通过水稻胚培养技术，研究不同培养基对水稻胚培养的影响，并了解水稻胚培养过程中存在的问题及其解决方法。
实验原理：水稻胚培养技术是利用水稻胚的组织再生能力，通过培养基中添加适当的激素和营养物质，使其发育成苗。
培养基的选择对于胚培养的成功与否十分重要，常用的培养基有MS培养基、N6培养基等。
实验步骤：1. 准备材料：水稻种子、无菌器皿、无菌植物生长基质、无菌试管、无菌培养液、环境箱。
2. 种子处理：将水稻种子在75%酒精中消毒15分钟，然后用无菌蒸馏水冲洗3次，最后悬浮在无菌试管内保存。
3. 胚培养：将种子置于含有适量培养基的无菌试管中，经过培养一段时间，观察胚发育情况。
4. 苗移栽：将胚培养成功的水稻苗移栽至无菌培养基上，继续培养，形成成熟植株。
实验结果：经过实验，我们得出了以下结论：1. 不同的培养基对水稻胚培养的影响不同，MS培养基表现出更好的胚发育效果。
2. 培养基中激素浓度对水稻胚培养起着重要作用，过高或过低的激素浓度都会对胚发育产生不良影响。
3. 水稻胚培养的成功率受到许多因素的影响，包括种子的质量、培养基的配方、环境条件等。
实验讨论：通过本实验，我们发现了水稻胚培养的一些问题，并提出了解决方法：1. 种子的质量对培养结果有着重要的影响，因此在进行胚培养前，应选择品质良好的种子进行消毒处理。
2. 培养基的配方是决定胚培养成功与否的重要因素之一，因此在设计培养基时，应根据实验需要调整激素和营养物质的浓度。
3. 环境条件的调控也对胚培养结果有一定的影响，包括温度、光照、湿度等，应根据不同发育阶段的需求进行调整。
实验结论：通过本实验，我们成功地进行了水稻胚培养实验，并探讨了影响胚培养结果的一些重要因素。
我们发现，选择适合的培养基、调整激素浓度、优化环境条件等措施可以提高水稻胚培养的成功率。
未来，我们可以进一步研究水稻胚培养的优化技术，并应用于实际生产中，为水稻育种提供新的方法和途径。
水稻成熟胚愈伤组织的诱导与增殖研究
加 ， 量 也 增 加 ，６ｈ后 增 长 量趋 于 稳 定 。 水 稻 有 可 能 用 作 植 物 生 物 反 应 器 。 增 ９
２ Ａｇ ｃ ｌ ｒ ｄ Ｐ ｒｒｏ ａ ｅ ． ｒ ｕｔ ｅａ ａｅｇ ｎ Ｂ ｓ ，Ｕｎｔｏ ６ ３ ５， Ｌ ｉ ｕ ｎ ｉ ｆ ２ １ Ｐ Ａ，Ｌ ａ ｙ ｎ ａ ｇＪａ ｇｕ２ ２ ４ Ｃ ｉａ ｉ ｕ ｇ ｉｎ ｓ ２ ２ ７， ｈｎ ； ｎ ｎ
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维普资讯
研 究报告
王
不同培养基对水稻胚性愈伤组织诱导及分化的影响
ｅ ｐ ｒｍｅ ｔ ｈ ｅｕｔｓｏ ｄｔａ ｄｕ ｗａ ｓ ｕｔｂｅｆｒＮ ｐ ｕ ｂ ｒ Ｏ ｙａｓｔ ａＬ ｕ ｓ ．ｊｐ ｎｅ ）；ＭＳ ｘ ｅｉ ｎ．Ｔ ｅｒｓ ｌ ｈ ｗｅ ｈ ｔ ＮＢ ｍｅ ｉｍ ｓｍｏｔｓｉ ｌ ｏ ｉｐ ｎ ａｅ（ ｒｚ ａｉ ．ｓ ｂ ｐ ａ ｏ ｉａ ａ ｖ ，ＮＢ ａ ｄＬ ｎ Ｓ
中图分类号 ：９ ３ １ Ｑ ４ ．
文献标识码 ： Ａ
文章编 号 ： ９ ２ ５—１３ （０ １ ０ ０ ５ ０ ０ ７６ ２ １ ）４— ０４— ３
Ｒｉｅ ｃ ｌｕ ｎ ｕ ｔ ｎ ａ ｄ ｒ ｇ ｎ ｒ ｔｏ ａ ｅ ｉ ｉ ｅ ｅ ｔ ｍ ｅ ｉ ｃ ａ ｌ ｓ ｉ ｄ ｃ ｉ ｎ ｅ ｅ ｅ ａ ｉ ｎ ｒ ｔ ｎ ｄ ｆ ｒ ｎ ｄ ａ ｏ
Ｎｉ ｐ ｂａｅ ｃ ｌｉ Ｉ ｎ ｃ ｔｄ ｔ ｔｔ ｉｅ ｅ ｌｉｉ ｄ ｔｏ ｎ ｅ ｅ ｅ ａｉ ｎ ｒ ｔ ｓｒ ｌｔｄ ｔ ｉｅ ｖ ｒｅ ｙ ｐ ｏ ｒ ａｌ． ｔｉｄｉａｅ ｈａ ｈｅ ｒｃ ａｌ ｎ ｕｃｉｎ ａ ｄ ｒｇ ｎ ｒ ｔｏ ａｅ ｗａ ｅａｅ ｏ ｒｃ ａ ｉｔ ．
） 是世界上最重要的粮食作物之一 ， 培育优质高产抗
逆 的水稻 品种是育 种学家 的追求 ， 遗传 转化技术 为实
遗传育种开辟 了一 条崭 新 的途径 。水 稻 （ ｒ ａｓｔ ａ Ｏｙ ａ ｖ ｚ ｉ
．
节限制 ， ‘ 日操作简便 ， 但不同的水稻品种 的愈伤诱 导率 有很大 差异 ， 因此提高 主要栽培 品种成熟胚 的培养 力 和植株冉生能 力是一项关键 因素 。
在 基本培养基方 面 ， 根发 等认 为 ， ６一 朱 Ｎ ＭＳ培 养 基交替继代能使粳稻 愈伤组织分化 能 力提高 。 。 。植
高留胚率水稻辽粳294成熟胚组织培养条件的优化
高留胚率水稻辽粳294成熟胚组织培养条件的优化摘要:以高留胚率水稻辽粳294成熟胚为外植体,对影响高留胚率水稻愈伤组织诱导､分化的接种方式､培养基中激素水平进行研究｡结果表明,用解剖刀在胚上纵切1刀后再将种子接在培养基上,种子灭菌彻底,愈伤组织诱导率高且质量较好｡诱导培养基中激素6-BA和KT的浓度对愈伤组织的诱导率有极显著的影响,诱导培养基为N6+2 mg/L 2,4-D+0.3 mg/L 6-BA+0.1 mg/L KT时,诱导率较高,可达90.0%;分化培养基为MS+0.8 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA时,绿苗分化效果好,分化率为73.0%｡关键词:高留胚率;辽粳294;成熟胚;愈伤组织;诱导及分化Optimization of Tissue Culture Condition of Mature Embryo of Rice Liaojing 294 with High Plumule RatioAbstract: Factors affecting the callus induction and differentiation of mature embryo of Liaojing 294 with high plumule ratio were studied. The results showed that the inoculation method of cutting the embryo before inoculating the seed in the medium was an ideal method for a complete sterilization and effective callus induction as the high callus quality could be obtained. The statistical analysis revealed that 6-BA and KT had significant effect on callus induction. The callus induction rate could reach to 90.0% when N6 +2 mg/L 2,4-D+ 0.3 mg/L 6-BA+0.1 mg/L KT was used as callus induction medium. And the callus differentiation rate could be up to 73.0% when using MS+0.8 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA as callus differentiation medium.Key words: high plumule ratio; Liaojing 294; mature embryo; callus; induction and differentiation糙米各部位中,胚的蛋白质含量最高,而且其还含有许多其他的营养成分和生理活性物质[1,2],但胚在稻米的加工过程中较易脱落而不能被人们食用,损失了大量的营养成分[3]｡辽粳294(原品系代号87-675)是由辽宁省农业科学院稻作研究所选育的优质高产水稻新品种[4],其留胚率约为普通稻米的5~6倍,是不可多得的高留胚率水稻品种,是提高水稻的营养品质以及杂交育种的好材料｡随着现代生物技术的快速发展,转基因技术已成为作物品种特性定向改良的重要途径之一,建立高效稳定的再生体系则是实现基因转化的先决条件｡成熟胚取材方便,不受生长季节和环境限制,外植体均匀､灭菌容易､重复性好,是遗传转化的良好受体｡利用水稻成熟胚建立高频再生体系的研究已有一些报道[5-7],但对高留胚率水稻成熟胚组织培养体系的研究报道很少｡郑文静等[8]曾经以辽粳294为材料研究过成熟胚的诱导率和分化率,但其组织培养条件下分化率较低(41.7%)｡为此,本研究以高留胚率水稻品种辽粳294的成熟胚为材料,对其愈伤组织的诱导､继代及分化条件进行了分析,主要研究不同的接种方式､培养物中外源激素的剂量对水稻愈伤组织诱导及分化的影响,以期提高愈伤组织的质量和再生率,建立一套稳定､高效的高留胚率水稻的离体再生技术体系,为水稻基因工程和水稻育种服务｡1 材料与方法1.1 材料供试材料为辽粳294,由天津天隆农业科技有限公司提供｡1.2 方法1.2.1 外植体消毒选取成熟､饱满､无病斑的水稻种子,剥去颖壳｡在超净工作台上用无菌水浸泡1 h,然后用体积分数70%的乙醇浸泡种子3 min,用质量分数0.1%的升汞溶液消毒15~10 min,无菌水冲洗4~5次｡1.2.2 愈伤组织的诱导及继代培养将消毒后的种子置于无菌滤纸上吸干水分,接入诱导培养基中,考察两种不同的接种方式对诱导率的影响:①将种子直接接种在培养基上(处理Ⅰ);②解剖刀在胚上纵切1刀后将种子接在培养基上(处理Ⅱ)｡接种后24~26 ℃下暗培养7 d,将初始的愈伤组织从种胚上剥离下来,转接到新鲜的诱导培养基,继续诱导30 d后,统计出芽率｡诱导及继代培养基为N6+2 mg/L 2,4-D+6-BA+KT+7.5 g/L琼脂+40 g/L蔗糖+500 mg/L水解酪蛋白,设置不同的6-BA浓度(0､0.1､0.2､0.3､0.4､0.5 mg/L)和KT浓度(0､0.1､0.3､0.5､0.7､0.9 mg/L)组合,共36个处理,每组90个外植体,考察激素水平对愈伤组织诱导率的影响｡1.2.3 分化培养继代生长60 d后,选取生长旺盛､质地紧密､自然分散､呈淡黄色颗粒状的胚性愈伤组织接种于分化培养基上(MS+0.2 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA+7.5 g/L琼脂+40 g/L蔗糖+500 mg/L水解酪蛋白),培养条件为24~26 ℃､光照时间14 h/d､光照度1 500~2 000 lx,培养30 d后可以观察到绿点的出现,统计绿苗分化率｡设置培养基中不同的NAA水平(0､0.2､0.4､0.6､0.8､1.0 mg/L),考察其对p2 结果与分析2.1 不同接种方式对愈伤组织诱导率及分化率的影响接种方式对愈伤组织的诱导率､生长速度､质量及后期的分化率均有影响｡处理Ⅰ愈伤组织出现较早､生长速度较快,但培养两周后愈伤组织发干､生长缓慢,可能是因为处理Ⅰ是整粒种子进行接种,内源菌灭菌不彻底,阻碍了愈伤组织的继续生长;处理Ⅱ愈伤组织出现较晚,培养约10 d后开始出现,但随后生长加快,愈伤呈乳白色,表面疏松｡比较两种接种方式下愈伤组织的诱导率及绿苗分化率,处理Ⅰ与处理Ⅱ愈伤组织的诱导率相差不多,但处理Ⅱ的绿苗分化率明显高于处理Ⅰ(图1),这可能是因为处理Ⅱ种子灭菌彻底,愈伤组织质量较好,有利于幼苗的分化｡综上,确定本研究成熟胚的接种方式为处理Ⅱ,即解剖刀在胚上纵切1刀后将种子接在培养基上｡2.2 成熟胚诱导､继代培养基配方的优化将成熟胚接种到诱导培养基上,6~7 d后可看到由盾片处长出初始愈伤组织,呈淡黄色,质地紧密,继代后愈伤组织体积逐渐变大,30 d后统计愈伤组织,结果见表1｡由表1可见,培养基中不同浓度的6-BA与KT配合使用,都可以诱导出愈伤组织,但诱导率不相同｡6-BA浓度为0.1 mg/L,KT浓度为0.5 mg/L时诱导率最高,达92.2%;6-BA浓度为0,KT浓度为0.3或0.5 mg/L时诱导率最低,为30%｡对36种不同配比的诱导培养基的愈伤组织诱导率进行方差分析,结果显示,6-BA与KT的浓度对愈伤组织诱导率的影响达极显著水平(P<0.01),且两个激素间存在极显著的互作效应(P<0.01)｡对6-BA 6个浓度水平的平均诱导率进行多重比较(表2),结果显示,除0.2与0.4 mg/L处理､0与0.5 mg/L处理之间差异不显著外,其他处理之间诱导率的差异均达到极显著水平,6-BA浓度为0.3 mg/L平均诱导率最大,为85.7%,0.5 mg/L时平均诱导率最小,只有37.6%,可见过高或者过低浓度的6-BA均不利于愈伤组织的形成｡对6个KT浓度水平的平均诱导率进行多重比较(表2),结果显示,除0､0.1､0.3､0.5 mg/L与0.7､0.9 mg/L处理之间存在显著差异(P<0.05),0､0.1､0.3､0.5 mg/L 4个处理,0.7与0.9 mg/L 2个处理之间诱导率的差异均不显著(P>0.05)｡0､0.1 mg/L与0.7､0.9 mg/L处理之间诱导率存在极显著差异(P<0.01)｡其中不添加KT时愈伤组织诱导率最高,但与0.1､0.3､0.5 mg/L的处理之间差异不显著,KT浓度为0.9 mg/L 时诱导率最低,可见低浓度的KT可以促进愈伤组织的形成,其浓度过高会对愈伤组织的形成产生一定的抑制作用｡由于6-BA与KT之间的交互作用极显著,所以还要对其交互作用进行分析,进而选出最优的激素配比｡通过单因素分析已经确定6-BA浓度为0.3 mg/L时诱导率最高,KT在浓度为0~0.5 mg/L时作用效果差异不显著,高于其他浓度水平｡因此先确定6-BA的最佳浓度为0.3 mg/L,在此基础上确定KT的最优水平｡6-BA浓度为0.3 mg/L时,KT浓度为0.1或0.3 mg/L,愈伤组织诱导率均为90.0%,高于其他试验组合,从试验成本来看,选择添加KT的浓度为0.1 mg/L｡试验结果中6-BA浓度为0.1 mg/L,KT浓度为0.5 mg/L时诱导率(92.2%)比通过多重比较选出的最优组合的诱导率(90.0%)要高,但进一步分析发现,该组合的诱导率与周围数据的变化趋势明显不一致,且验证试验的重复性也较差,因此,仍以统计学分析的最优组合0.3 mg/L 6-BA+0.1 mg/L KT为最佳诱导培养基｡2.3 分化培养基中NAA浓度对绿苗分化率的影响将成熟胚接种到2.2优化的诱导培养基中诱导培养,然后分别将愈伤组织接种到含不同浓度NAA的分化培养基中,40 d后统计绿苗分化率｡结果表明,培养基中NAA的浓度对绿苗的分化率存在极显著影响(P<0.01),NAA浓度为0.8 mg/L时绿苗分化率最高(图2)｡NAA浓度过高或过低均不利于绿苗的分化｡3 小结与讨论以水稻成熟胚为外植体诱导愈伤组织时,不同的接种方式会影响愈伤组织的诱导率和质量,试验结果表明用解剖刀在胚上纵切1刀后再将种子接种在培养基上,诱导愈伤组织的效果要好于直接将种子接种于培养基上,这与吕孟雨等[9]的研究结果一致｡培养基中的激素类型及水平也对水稻成熟胚的愈伤组织诱导率有影响｡之前的研究发现N6培养基对于高留胚率的辽粳294愈伤组织的诱导效果较好,而分化培养基则以MS为基本培养基较好,2.0 mg/L的2,4-D比较适合于种胚愈伤组织诱导[10,11]｡在水稻成熟胚愈伤组织的诱导中,常用的激素有6-BA､ABA､2,4-D､KT等,不同实验室所用的激素配比有较大差异,这可能与基因型､诱导培养基及激素等的相互作用有关｡在本研究中,诱导培养基中添加了2,4-D､6-BA､KT 3种激素,通过试验及统计分析发现,对于高留胚率的辽粳294来说,最佳的诱导培养基为N6+2 mg/L 2,4-D+0.3 mg/L 6-BA+0.1 mg/L KT;最佳的分化培养基为MS+0.8 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA｡本研究初步得出了一个高留胚率水稻成熟胚的最佳组织培养体系,为其他高留胚率水稻品种的成熟胚再生体系建立奠定了基础｡参考文献:[1] 朴钟泽,韩龙植. 水稻胚大小对蛋白质含量的影响[J]. 上海农业学报,2002,18(B12):9-13.[2] 赵则胜, 蒋家云. 高营养功能性巨胚稻米研究初报[J]. 上海农业学报,2002,18(B12):5-8.[3] 赵国珍,刘吉新,世荣,等. 粳稻品种间胚残存率差异研究[J]. 西南农业学报, 2005,18(2):125-127.[4] 王德生.优质高产水稻新品种辽粳294[J].中国农学通报,2000, 16(2):51.[5] 郝文媛,王丕武,林秀峰,等. 粳稻成熟胚高频率再生因素的研究[J]. 吉林农业科学,2006,31(4):30-33.[6] 刘香玲,王玉珍,罗景兰. 水稻成熟胚愈伤组织的诱导和分化因素的研究[J]. 山东农业科学,2005(5):7-9.[7] 黄赛麟,李东宣,甘树仙,等. 水稻成熟胚培养高效再生系统的创新[J]. 分子植物育种,2008,6(4):801-806.[8] 郑文静,张燕之,王昌华,等. 水稻不同外植体组织培养的差异性及其后代变异的研究[J]. 安徽农业科学,2008,36(4):1368-1370.[9] 吕孟雨,王海波,高义平. 水稻成熟胚不同接种方式对愈伤组织诱导的影响[J]. 河北农业科学,2009,13(5):34-36.[10] 李玉静,陈彦龙,王玲玲,等. 2,4-D和6-BA对水稻愈伤组织培养力的影响[J]. 河北师范大学学报(自然科学版),2005, 29(4):395-398.[11] 周玲艳,秦华明,谢俊平,等.提高水稻愈伤组织再生频率的研究[J]. 种子,2006,25(7):28-31.。
稻瘟病菌粗毒素对水稻成熟胚愈伤组织生长和分化的影响及抗性筛选
１ 材 料与 方法
１ １ 供 试 品种 ：丰 优 ３ １ ． ０ 、丰 优 ３ ７ ０ 、优 ９ —８ ３ 、农 大 ３ 、农 大 １ 。 由吉林 农业 大学 水稻 研室 提供 。 ９ １２ 稻 瘟病 菌 的培 养 ． １２ １ 进 行 预培 养 的菌种及 来 源 ．． ３ —１ ７ ７ —１ ，９０ ０ —２ ９ ２ １ ，９ １０ ３ ，Ａ ，１７ —２ ９３ ３ ，９ ００ —２ ９ ６３—２ ９ ４ ， １３—１ ，由 吉林 省 农 业 科 学 ，ｗ ，ｚ８ ６ —４ 院植 保所 提供 。 １２ ２ 利用 ＭＳ培 养液 培养 稻瘟 病菌 ．．
．
２ 分 化 培养 基 中加入 毒 素 。把 愈 伤组 织 转 入 含 有 不 同 浓度 的 混合 的稻 瘟 病 菌粗 毒 素 的 分 化 培 养 基 中 ， ． 每瓶 接种 １ 愈伤 组织 ，共 接 种 ２瓶 ，在 ２ ￣ Ｏ块 ６Ｃ、２０ｈｘ 照条件 培 养 ２ｄ后 ，统 计 分化成 苗 率 。 ００ 光 ５
强。水稻成熟胚组织培养 中进行抗稻瘟病 菌突变体筛选 的毒 素浓 度在 ２ ％ ～３ ％较好 ；愈伤组织 浸泡 ５ ｏ １ ～２ ｈ 以得 到分化出苗。在愈伤组织上直接加上毒素并 长时间处理 对愈伤组织 的生 长有 很大 的破 ２ ４可 坏作 用 ，每个 愈伤组织滴加 的毒素应小于 ２０ ｌ ．ｍ 。不同的水稻 品种产生 的耐性不 同 ，可 以筛 选 出抗稻
瘟 病的突变体 。
［ 关键词 ］稻瘟病 菌粗毒素 ；成熟胚 愈伤组织 ；抗性筛选 ［ 中图分类号 ］Ｑ ４ ９３ ［ 文献标识码 ］Ａ ［ 文章编号］１０ —１８ （０ ８ｏ —０７ ｏ ０ ８ ７ｘ ２ｏ ）３ ００一 ４
水稻愈伤组织的诱导及应用[文献综述]
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毕业论文文献综述生物工程水稻愈伤组织的诱导及应用一、前言部分1.1 关于水稻愈伤组织的简介水稻是人们重要的食粮之一，由于其基因组小，通过组织培养易获得再生植株等特点而在基因克隆、基因功能验证以及遗传转化等研究方面成为模式植物．生长和分裂旺盛的胚性愈伤组织细胞培养是获得转基因植物的最好来源．因此，建立一个高效再生体系是实现基因转化的先决条件[1]．近年来，研究者先后从水稻各部位诱导出愈伤组织和再生植株．虽然，幼穗、幼胚、花粉粒、花药愈伤组织诱导率高，愈伤组织质量好而受到青睐被广泛用于水稻的遗传转化、品种培育中[2-3]．但上述材料多受季节限制，取材不便，阻碍了水稻组织培养的进一步发展．1.2 组织培养所谓的植物组织培养是指在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基对离体的植物器官组织细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术[4]。
其研究的类型主要包括组织培养、器官培养、细胞培养、及原生质体培养。
随着研究T作的深入进展，上述5个方面的研究理论和技术体系逐渐得到完善促使植物组织培养的应用范围日益广阔延伸。
组织培养作为一种育种技术在水稻等重要粮食作物已广泛应用，并培育出一大批优良品种，自1965年我国开展水稻细胞培养研究后，研究者以水稻幼穗、幼胚、花粉粒和花药为材料进行组织培养研究，取得了较大的进展，尤其是建立起来的水稻胚性悬浮细胞系可作为基闪枪的理想受体，在水稻的遗传转化，品种培育巾具有重要作用。
再如细胞次生代谢物的生产，即通过细胞培养可得到大量合成的植物次生化合物，如生物碱、抗菌剂、利血平、橡胶、类同醇、糖类衍生物、天然色素等很多物质。
远源杂种植物的产生，是指由受精后障碍导致远缘杂交的植物不孕，使得植物的种间和远缘杂交常难以成功。
采用胚的早期离体培养可以使杂种胚正常发育，产生远缘杂交后代，从而育成新物种。
植物的快速繁殖，是指利用植物组织培养技术对外植体进行离体培养，使其短期内获得遗传性一致的大量再生植株的方法。
杂交稻成熟胚愈伤组织诱导和矿质元素组分变化研究
ａ ． ｎｄ Ｆｅ
Ｋｅ ｙ ｗｏｒ ：ｍａｕ ｅｅ ｒｏ ｃ ｌ； ｕｔｒ ｄｕ ｄｓ ｔｒ ｍｂ ｙ ； ａｌ ｃ ｌ ｅｍｅ ｉｍ；ｉｄ ｃｉｎ ｒｔ； ｎ ｒｌｅｅ ｎ ｉ ｕ ｎ ｕ ｔ ａｅ ｍｉｅａ ｌｍｅ ｔ ｏ
水稻 是我 国主要 的粮 食作 物 ， 了创造 新 的 种 为 质资 源 ， 组织 培 养及 基 因Ｔ 程技 术被 广 泛 应用 于 水 稻育 种研 究 ， 取 得 了显 著 成果 。 ９ ５ ， ｉ ｉ １ 并 １６ 年 Ｎ ｓ 等” ｈ
养基 ｕ以使 Ｌ ０ ｒ Ｐ ３和 Ｐ ６ Ｓ出 愈 率 达 到 ９ ％以 ． Ａ４ ５ ． Ｌ， 愈 伤 组 织 质 量 较 其 他 培 养 基 诱 导 的 愈 伤 组 织 质 量 好 、ＮＢ培 养 基 更 适 合
Ｐ ６ Ｓ愈伤绀织 的诱导 ， ６更适合 Ｌ ０ Ａ４ Ｎ Ｐ ３愈伤组织 的济 导。 在水稻成熟胚愈伤组织诱导的阶段 ， 含量最丰富 的氨 质几东是 Ｋ， ｒ 在培 养过程 中需求量最大的矿质兀素为 Ｐ、 Ｆ ． Ｋ、ｅ．
ｍｅ ｉ ｓ１ ｔ ｒｔ ａ ｈ ｔｉ ｈ ｔ ｅ ｄ ａ ｕ ｈ ｕ ｔ ｒ ｄ ｕ ｗａ ｒ ｕ ｔｂ ｅ ｆ ｒｉ ｄ ｃｎ ａｌ ｏ Ａ６ Ｓ ｄ ａ ｗａ ） ｔ ｈ ｎ ｔ ａ ｎ ｔ ｅ ｏｈ ｒｍｅ ｉ．ｂ ｔ ｅ ＮＢ ｃ ｌ ｅ ｍｅ ｉｍ ｓ ｍｏ ｅ ｓ ｉ ｌ ｏ ｕ ｉ ｇ ｃ ｌ ｆＰ ４ ｅｅ ｔ ｕ ａ ｎ ｉ ａ ｄ ｔｅ Ｎ６ ｃ ｈ ｒ （ｉｎ ｓ ｎｏ ｅ ｓ ｉ ｂ ｅ ｆｒ ｉ ｄ ｃｎ ａｌ ｏ Ｐ ３ ｎ ｔ ｅ ｓａ ｅ ｏ ａｌ ｉ ｄ ｃｉ ｎ ｏ ｉｅ ｍａｕ ｅ ｎ ｈ ｕ ｕ ｅ ｍｅｔ ｌｗａ ｌ ｒ ｕ ｔ ｌ ｎ ｕ ｉ ｇ ｃ ｌ ｆ Ｌ ０ ．Ｉ ｈ ｔｇ ｆｃ ｌ ｎ ｕ ｔ ｆ ｒ ｔ ｒ ｕ ａ ｉ ｉ ｏ ｃ
水稻愈伤组织褐化的机理及影响因素研究进展
基金项目上海市科技兴农项目（沪农科推字〔2021〕第1-3号）；安徽省科技重大专项（201903a06020011）。
作者简介吴浩然（1997—），男，安徽肥东人，助理农艺师，从事水稻遗传转化工作。
*通信作者收稿日期2022-06-09水稻愈伤组织褐化的机理及影响因素研究进展吴浩然张从合*王慧陈思黄艳玲杨力管昌红（安徽荃银高科种业股份有限公司/农业农村部杂交稻新品种创制重点实验室，安徽合肥230088）摘要在水稻愈伤诱导、愈伤继代等过程中，影响愈伤褐化因素较多，包括水稻基因型、培养条件、培养基成分以及继代时间等，且不同因素对愈伤褐化的影响程度不同。
本文简要概述了引起外植体和愈伤组织褐化的机理、褐化类型及引起褐化的因素，同时对其研究方向进行了展望，以期为植物组织培养提供参考。
关键词水稻；愈伤组织；基因型；褐化机理；抗氧化剂；多酚氧化酶中图分类号S511文献标识码A文章编号1007-5739（2023）05-0021-05DOI ：10.3969/j.issn.1007-5739.2023.05.006开放科学（资源服务）标识码（OSID ）：Research Progress on Browning Mechanism of Rice Callus and Its Affecting FactorsWU HaoranZHANG Conghe *WANG HuiCHEN SiHUANG YanlingYANG LiGUAN Changhong(Anhui Win-all Hi-tech Seed Co.,Ltd./National Key Laboratory for New Variety Development of Hybrid Rice of Ministry of Agriculture and Rural Affairs ，Hefei Anhui 230088)AbstractIn the process of rice callus induction and callus subculture,there are many factors affecting callusbrowning,including rice genotype,culture conditions,medium composition and subculture time,and different factors have different influence degrees on callus browning.In this paper,the mechanism,types and affecting factors of browning of explants and calli were briefly summarized,and the research direction was prospected,in order to providereferences for plant tissue culture.Keywordsrice;callus;genotype;browning mechanism;antioxidant;polyphenol oxidase褐化现象常见于水稻愈伤诱导和愈伤继代培养过程中，在褐化初期，愈伤组织颜色变深，呈现出棕色或黑褐色，并且会逐步扩散到周边其他愈伤，最后直至愈伤死亡。
水稻成熟胚愈伤组织诱导及其植株再生
水稻成熟胚愈伤组织诱导及其植株再生
危晓薇;王冬梅;祖木热木·吐尔逊
【期刊名称】《新疆农业科学》
【年(卷),期】2007(044)006
【摘要】利用水稻成熟胚为外植体,接种在NB培养基上,分别附加不同的外源激素,以诱导愈伤组织并促其分化,最终获得水稻再生植株.结果表明:2,4-D对愈伤组织诱导起决定性作用,当它与低浓度的6-BA配比时更有利于前期愈伤组织的诱导,而高浓度的6-BA则有利于后期芽丛的分化.
【总页数】3页(P889-891)
【作者】危晓薇;王冬梅;祖木热木·吐尔逊
【作者单位】新疆农科院核生所,乌鲁木齐,830091;新疆农科院核生所,乌鲁木齐,830091;新疆农科院核生所,乌鲁木齐,830091
【正文语种】中文
【中图分类】S511
【相关文献】
1.青稞品种肚里黄成熟胚愈伤组织诱导与植株再生 [J], 危文波;蒋礼玲;吴昆仑;迟德钊
2.籼稻Kra Dang Ngah成熟胚愈伤组织诱导及植株再生的研究 [J], 张银霞
3.水稻武育粳3号成熟胚愈伤组织诱导及植株再生研究 [J], 阎丽娜;李霞;蔡庆生
4.小麦成熟胚愈伤组织诱导及植株再生体系的优化 [J], 刘君;蒋鲁亚;王君雅;刘晓颖;范宝莉;王振英
5.谷子成熟胚诱导愈伤组织及植株再生的研究和条件的优化 [J], 袁进成;刘颖慧;董志平
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不同接种方式对水稻成熟胚组织培养的影响
不同接种方式对水稻成熟胚组织培养的影响沈娟;徐利娟;张启军;吕川根;裴孝伯;蔡小宁【摘要】@@%以水稻成熟胚为外植体,采用4种不同的接种方式,对7个水稻品种的成熟胚进行了愈伤组织诱导和再分化试验,分析比较不同成熟胚接种方式的愈伤组织诱导率、愈伤组织质量和植株再生率.结果表明:将胚从种子上切下而直接接种在培养基上的接种方式,愈伤组织诱导率最高,愈伤组织质量最好,可以在短时间内获得大量胚性愈伤组织,其愈伤组织可在较短的时间内分化出较多的再生植株,是一种简单、方便、效果好的诱导水稻愈伤组织和再生植株的理想方法.【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2012(040)008【总页数】3页(P67-69)【关键词】水稻;成熟胚;接种方式;组织培养【作者】沈娟;徐利娟;张启军;吕川根;裴孝伯;蔡小宁【作者单位】安徽农业大学,安徽合肥230036;南京晓庄学院,江苏南京211171;南京晓庄学院,江苏南京211171;江苏省农业科学院,江苏南京210014;江苏省农业科学院,江苏南京210014;安徽农业大学,安徽合肥230036;南京晓庄学院,江苏南京211171【正文语种】中文【中图分类】S511.043水稻是最重要的粮食作物之一，是世界上近40%人口的主要食物来源[1]。
如何提高水稻产量和改善水稻品质一直是育种学家极其关注的问题。
采用现代生物技术，将外源基因导入水稻，丰富水稻的基因型，培育优质、高产、多抗的新品种是现代水稻育种的发展方向[2]。
而进行转基因育种的前提是建立高效而稳定的组织培养再生体系，因此提高水稻愈伤组织的再生频率，为转基因提供良好的转化受体有十分重要的意义[2-3]。
关于水稻组织培养，前人有过许多研究，已有用根尖、节、盾片、叶鞘、胚芽鞘、花药、胚囊、幼胚、叶片和幼穗等[4]外植体进行离体再生培养的报道，但上述取材多受季节和环境限制，难以满足常年试验的要求。
越来越多的研究者开始以水稻成熟种子作为受体材料，期待从成熟种胚中诱导出高质量的愈伤组织[5]。
不同培养基对水稻胚性愈伤组织诱导及分化的影响
表 1 不同水稻品种在不同培养基上出愈率的比较 Tab le 1 R ice callus indu ct ion rate in d ifferent m edia
基本 培养基 NB MS LS 龙特普 接种数 愈伤数 出愈率 标准差 442 211 236 414 203 220 93 6 % 0 001062 96 2 % 0 001551 93 2 % 0 008269 日本晴 接种数 愈伤数 出愈率 标准差 228 236 253 206 191 220 90 2 % 0 008181 80 9 % 0 012366 80 7 % 0 027029
1 , 2 2 2 2 2
植物基因工程 及分 子生物 学技术 的发 展, 为 作物 遗传育种 开辟 了一 条崭 新的 途径。水 稻 ( O ryza sa tiva L. )是世界上最重要的粮食作物之一, 培育优质高产抗 逆的 水稻品 种是育种 学家的 追求, 遗 传转化技 术为实 现这一愿望提供了可能性。水稻遗传转化的 基础是获 得优 良的水 稻愈伤组 织, 愈伤 组织状 态直接决 定了遗 传转化的效率。 水稻愈伤组织的诱导, 常用的外植体 是未成熟胚、 原生质体和成熟胚。由未成熟胚获得的愈伤 组织绿苗 分化 率高, 但 由于未 成熟胚材 料来源 受时间和 空间上 的限制, 消弱了它的实用性; 以原生质体作为 水稻遗传 转化的受体, 转 化效率 较高, 但 培养 过程比 较繁 琐, 且 培养周期长; 而以成熟胚诱导胚性愈伤, 不受 时间和季
收稿日期 : 2010- 11- 25 ; 修回日期 : 2010- 12- 24
节限制, 且操作简便, 但不同的水稻品种的愈 伤诱导率 有很 大差异, 因此提高 主要栽 培品种成 熟胚的 培养力 和植株再生能力是一项关键因素。 在基本培养基方面, 朱根发 等认 为, N 6- M S 培养 基交替继代能使粳稻愈 伤组织 分化能力 提高 。植 物组织培养中, 影响培养力的因素是多方面 的, 而植物 激素是愈伤 组织 诱导 和绿 苗分 化的 关键 性 因素
水稻成熟胚不同接种方式对愈伤组织诱导的影响
河北农业科学,2009,13(5):34-36,85J ou rnal ofH eb eiAgri cu lt u ral Sciences编辑 白瑞霞水稻成熟胚不同接种方式对愈伤组织诱导的影响吕孟雨,王海波*,高义平(河北省农林科学院遗传生理研究所,河北省植物转基因中心,河北石家庄 050051)摘要:采用4种不同的接种方式,对3个水稻品种的成熟胚进行了愈伤组织诱导试验。
结果表明:在胚上纵切1刀,将种子接种在培养基上的接种方式,愈伤组织诱导率最高、出芽率最低,且愈伤组织质量最好,可以在短时间内获得大量胚性愈伤组织,建立悬浮系,其愈伤组织在较短的时间即可分化出再生植株,是1种简单、方便、效果好的诱导水稻愈伤组织的理想方法。
关键词:水稻;成熟胚;接种方式;组织培养中图分类号:S511 文献标识码:A 文章编号:1008 1631(2009)05 0034 03E ffects of Inocu l ation M et hods of R ice M ature E m bryo on Callus Induction LV M eng yu ,WANG H a i bo *,GAO Y i pi ng(Institute of G enetic and Physiology of H ebei A cade m y of A gri cult ure and Forestry Sci ences ,H ebe i Center of P lant G e net i c T ransfor mation ,Shijiazhuang 050051,China)Abstract :T he m ature e mbr yos of three rice variet i es were i noc ulated by four m ethods for callus induct i on The results sho w ed that the i noculat i on m et hod of cutt i ng the e mbr yo and inoculati ng the seed on the m ediu m was a ideal m ethod for i nducing rice callus easil y ,conveniently and effect i vely w ith the highest callus i nduction r ate ,the lo west shooti ng rateand the best callus A lar ge number of e mbryogenic calli could be obtained and t he plants could be regener ated i n a shortt m i e usi ng th i s m ethodK ey words :R ice ;M ature e mbryo ;I noculat i on m ethod ;T i ssue c ulture收稿日期:2009 04 15作者简介:吕孟雨(1963-),男,河北晋州人,研究员,硕士,主要从事生物技术研究。
水稻种胚愈伤组织诱导培养基的优化选择
水稻种胚愈伤组织诱导培养基的优化选择
陈璋;朱秀英
【期刊名称】《福建农学院学报》
【年(卷),期】1992(021)003
【摘要】应用模糊数学方法。
研究了不同浓度的2,4-D、KT、BA、ABA、NAA 和IAA以及2,4-D+KT,2,4-D+BA,2,4-D+ABA+LH和NAA+IAA等多种附加物组合对水稻种胚离体培养的影响,目的在于对水稻种胚离体培养诱导培养基进行优化选择.结果表明,一种附加物的作用效果明显不如2种或3种附加物配合使用的效果好。
以添加2,4-D 2.0mg/L+ABA 5.0mg/L+LH 300.0mg/L(U49)的改良MS培养基效果最好.研究还采用不同类型的水稻品种加以验证,表明大多数水稻品种的种胚离体培养于U_(49)组合的改良MS培养基上,可获得较高的愈伤组织诱导率,且有利于愈伤组织的再分化.
【总页数】7页(P264-270)
【作者】陈璋;朱秀英
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】S511.103.5
【相关文献】
1.杂种落叶松愈伤组织诱导培养基的建立和优化 [J], 张莉;张磊;方娇阳;冯德明;张素芳
2.正交试验优化余甘子愈伤组织诱导培养基研究 [J], 黄勇;张铁;沈尚东
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4.黄花棘豆组培过程中愈伤组织诱导培养基的优化 [J], 王玉琴;尹亚丽;鲍根生;宋梅玲;王宏生
5.诱导培养基对水稻胚愈伤组织形成和分化的影响 [J], 卢勤;陈璋
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改良MS培养基对水稻成熟胚培养的影响及其细胞...
改良MS培养基对水稻成熟胚培养的影响及其细胞...
陈璋;陈启锋
【期刊名称】《植物生理学通讯》
【年(卷),期】1992(028)005
【摘要】含 5 mg/L Vit B_1,附加 2 mg/L 2,4-D,5mg/L ABA和 300 mg/L LH 的MS培养基对水稻成熟胚离体培养的效果明显优于含5mg/L Vit B_1,附加
2mg/L 2,4—D和1mg/LKT的MS培养基。
从后者诱导产生的愈伤组织多呈白色不透明状,并通过器官(芽)发生途径再生绿苗,而前者培养基上产生的愈伤组织绝大多数为乳白色,表面呈疣状突起,常形成胚状体继而再生绿苗。
【总页数】4页(P353-356)
【作者】陈璋;陈启锋
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】S511.101
【相关文献】
1.水稻香系103成熟胚培养及胚性悬浮细胞系的建立 [J], 朱道玉;王旭英
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3.水稻佳辐占成熟种胚培养及其悬浮细胞系的建立 [J], 王忠安
4.不同类型水稻成熟胚培养和悬浮细胞系建立的初步研究 [J], 向太和
5.培养基和接种方式对水稻成熟胚培养力的影响 [J], 王瑞英
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