厌氧菌的分离鉴定及药敏试验_张学英

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副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验

副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验张立宪;游一【摘要】Five strains of gram negative bacilli were isolated from a pig farm of Jiaozuo, which were suspected to be Haemophilus parasuis.Inorder to control the epidemic,Haemophilus parasuis was finally diagnosed by cultural and infection characteristics,biochemical tests,PCR and pathogenicity examination. The results of drug sensitivity test indicatedthat the isolated strains were sensitive to ceftiofur,cefotaxime, amikacin,lomefloxacin, and not sensitive tochloramphenicol,amoxicillin,clindamycin,chlortetracycline, enrofloxacin,doxycyclile, and resistant to penicillinG,ampicillin,streptomycin,sulfamonomethoxine.%从焦作市疑似感染副猪嗜血杆菌病的某猪场送检病料中分离到5株致病杆菌后，为控制疫情，对细菌进行培养特性、生化特性及PCR鉴定，并进行致病性和药敏试验。

结果显示，分离菌株为副猪嗜血杆菌，该菌对丁胺卡那、洛美沙星、头孢噻肟、头孢噻呋较为敏感，对强力霉素、恩诺沙星、金霉素、克林霉素、阿莫西林、氯霉素不太敏感，对链霉素、氨苄西林、青霉素G、磺胺间甲氧嘧啶耐药。

河北医科大学第四医院临床分离厌氧菌分布及耐药性分析

近年来，随着临床微生物检验的发展，厌氧菌的检出率逐步提高，由厌氧菌引起的机会性感河北医科大学第四医院临床分离厌氧菌分布及耐药性分析冯军花，何京，唐杰，李蓉蓉，邓艳丽，张金艳摘要：目的分析厌氧菌的临床分布情况及耐药程度，对比琼脂稀释法与E 试验法在脆弱拟杆菌药敏试验中的差异，探讨E 试验的应用价值。

方法收集2017年1月—2019年12月河北医科大学第四医院临床分离的137株厌氧菌，采用16S rRNA 测序技术、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术、传统生化反应卡鉴定菌株，琼脂稀释法和E 试验法进行药物敏感性试验。

结果 137株厌氧菌中分离自血液样本居多，占67.2%（92/137），其中感染菌种主要为脆弱拟杆菌，占79.3%（73/92）。

脆弱拟杆菌行琼脂稀释法对甲硝唑、氯霉素、亚胺培南、美罗培南、阿莫西林-克拉维酸、四环素、克林霉素的耐药率分别为1.2%、6.1%、22.0%、22.0%、41.5%、79.3%、96.3%，脆弱拟杆菌行E 试验法对以上药物的耐药率分别为1.2%、6.1%、22.0%、22.0%、41.5%、85.3%、96.3%。

结论该院临床分离厌氧菌主要以脆弱拟杆菌为主，对甲硝唑的耐药率最低，对克林霉素的耐药率最高，E 试验法与琼脂稀释法在抗菌药物对脆弱拟杆菌的MIC 分布上无差异。

关键词：厌氧菌；脆弱拟杆菌；流行病学；耐药性中图分类号：R378 文献标识码：A 文章编号：1009-7708 ( 2021 ) 03-0340-06DOI: 10.16718/j.1009-7708.2021.03.017Distribution and antibiotic resistance of clinical anaerobic isolates in the Fourth Hospital of Hebei Medical UniversityFENG Junhua, HE Jing, TANG Jie, LI Rongrong, DENG Yanli, ZHANG Jinyan （Department of Laboratory Medicine, the Fourth Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050011, China ）Abstract: Objective To survey the distribution and antibiotic resistance of anaerobic isolates, and analyze the results of antimicrobial susceptibility tests of Bacteroides fragilis by agar dilution versus Etest method. Methods A total of 137 strains of anaerobic bacteria were isolated from January 2017 to December 2019 in the Fourth Hospital of Hebei Medical University. These strains were identified by 16S rRNA sequencing, matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight-mass spectrometry, and traditional biochemical card. The antimicrobial susceptibility was tested by both agar dilution and Etest methods. Results Most of the anaerobic bacteria were isolated from blood (67.2%), primarily B. fragilis (79.3%). Agar dilution test reported that 1.2%, 6.1%, 22.0%, 22.0%, 41.5%, 79.3%, and 96.3% of the B. fragilis isolates were resistant to metronidazole, chloramphenicol, imipenem, meropenem, amoxicillin-clavulanic, tetracycline, and clindamycin, respectively. Etest results showed that 1.2%, 6.1%, 22.0%, 22.0%, 41.5%, 85.3%, and 96.3% of the B. fragilis isolates were resistant to the above antibiotics, respectively. Conclusions Most of the anaerobic pathogen isolated from patients are B. fragilis . Among the antibiotics tested, metronidazole is the most active anti-anaerobic agent, but clindamycin is the least active one. No difference is found in the MIC results between Etest and agar dilution methods.Keywords: anaerobes, Bacteroides fragilis , epidemiology, antibiotic resistance·论著·作者单位：河北医科大学第四医院检验科，石家庄 050011。

厌氧菌的分离、培养及鉴定

厌氧菌的分离、培养及鉴定1.1实验内容:厌氧菌的分离、培养及鉴定;1.2目的:1掌握厌氧菌的分离、培养及活菌计数的一般方法。

了解厌氧菌菌鉴定的一般方法。

2复习并巩固平时所学的微生物知识与技能。

3培养独立思考、设计和动手实验的能力。

二介绍:厌氧微生物在自然界分布广泛，种类繁多，其生理作用日益受到人们的重视。

专性厌氧菌，对氧气非常敏感，因此，他们的分离、培养及活菌计数的关键是提供无氧和低氧化还原电势的培养环境。

厌氧菌的培养:在培养厌氧菌时，最需要控制的是厌氧条件，在pH=7.0,O2的浓度与1atm 的氧平衡时，O2--O2-反应的电位是0.81V，因此，在-0.33V时，O2浓度是大气压中O2浓度的10-75。

每升饱和了空气的水中含有1.48×10-55个O2。

所以说，要保证厌氧菌培养时的低电位是很重要的。

厌氧菌的培养方法很多，如厌氧箱法、厌氧袋法、厌氧罐法。

这些方法都需要特定的除氧措施，操作步骤多，较繁琐。

本实验介绍的是一种简便的试管培养法--亨盖特厌氧滚管技术，亨盖特厌氧滚管技术是美国微生物学家亨盖特于1950年首次提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术因此他是世界上第一个分离纯化厌氧菌的人。

以后这项技术又经历了几十年的不断改进，从而使亨盖特厌氧技术日趋完善，并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一套完整技术，而且多年来的实践已经证明它是研究严格、专性厌氧菌的一种极为有效的技术。

该技术的优点是:预还原培养基制好后，可随时取用进行试验;任何时间观察或检查试管内的菌种都不会干扰厌氧条件。

三实验材料与设备:3.1分离与培养:3.1.1菌种:待测样品;3.1.2培养基:改良的PRAS培养基(氮素自加)[配方组成--NH4CL1g,MgCl20.1g,K2HPO40.4g,KH2PO40.2g,甲酸钠5g,乙酸钠5g,甲醇3.5ml,Ph值为7.0,蒸馏水1000ml,1%的树脂刃天青(还原指示剂)1ml,121摄氏度灭菌20min.使用前每5ml培养基加入1%Na2S(还原剂)和5%NaHCO3及3000u/ml青霉素液(抑制剂)各0.1ml]3.1.3试剂:冰块Na2SNaHCO33.1.4器材:高纯氮气厌氧管厌氧手套箱注射器恒温培养箱铜柱除氧系统定量加样器厌氧罐超声波破碎仪酒精灯冰块水浴锅记号笔振荡器等3.2菌种的鉴定:3.2.1菌种:待测菌3.2.2培养基;糖发酵培养基、蛋白胨水培养基、淀粉培养基(液体);3.2.3试剂;乙醚吲哚试剂卢戈氏碘液;3.2.4器材:超净工作台恒温培养箱高压蒸汽灭菌锅接种环移液管载玻片显微镜等四、实验方法与步骤:4.1分离与培养4.1.1铜柱系统除氧铜柱是一个内部装有铜丝或铜屑的硬质玻璃管。

实用血培养厌氧菌分离鉴定及药敏试验方

实用厌氧菌分离鉴定及药敏试验方法临床重要的厌氧菌(主要是内源性)主要是拟杆菌科（G-b）和厌氧球菌。

血培养阳性厌氧菌主要有拟杆菌属、梭杆菌属、、普雷沃菌属、卟啉单胞菌属、消化链球菌属及其他厌氧菌。

一、必需的设备•厌氧罐、厌氧盒、厌氧袋（标本少）•厌氧发生气袋•厌氧指示剂二、培养基的准备•非选择厌氧血平板布氏血平板脑心浸液琼脂CDC厌氧血琼脂哥伦比亚血琼脂新鲜配制或经24h预还原（厌氧环境放置）！！！特殊成份（降低氧还电势）: L-半胱氨酸、氯化血红素(Hemin)、VitK1·选择性厌氧血平板：自制、商商品化三、厌氧血培养瓶报警后步骤二：耐氧试验确认厌氧菌情况一和二：耐氧试验24-48h再观察结果，有确认厌氧菌的菌落按下边鉴定步骤。

耐氧试验方法：选择每种形态的单菌落，转种一个厌氧血平皿和巧克力平皿，分别培养。

情况三：相当于耐氧试验，再结合菌落菌体形态，可以确认厌氧菌，用以下方法鉴定。

四、厌氧菌鉴定方法（一）快速商品鉴定系统（4h报告结果）1 无须厌氧培养，4h培养后人工输入结果，电脑软件辅助报告结果：VITEK ANI卡Rap ID 32AMicroScan Anareobe PanelRap ID ANA II等2厌氧环境培养24-48h观察结果API 20A特点是快速，可鉴定到种水平，但有时不一定获得满意结果，可同时进行以下操作提供临床初步报告。

（二）初步鉴定方法1 临床重要的厌氧菌特殊菌落形态和菌体形态及特征（图示）·G-cb有色素——普雷沃菌、卟啉单胞菌·细G-b，两端变尖——具核梭菌·多晶（空泡），染色着色浅G-b——拟杆菌属·非常小的G-c——韦容球菌属·“咬”琼脂（凹陷）——解尿拟杆菌群2 产色素、荧光·产黑色素拟杆菌——卟啉单胞菌、普雷沃菌·砖红色荧光——中间普雷沃菌、洛氏普雷沃菌·黄绿色荧光——梭杆菌属3 特殊鉴定用抗生素纸片（Oxoid, BBL,Diffico等）万古霉素5μg/ml卡那霉素1,00μg/ml多粘菌素10μg/ml聚茴香脑磺酸钠(SPS)1,00μg/ml：抑菌环直径小于10mm（R），大于12mm（S）于厌氧血平皿贴1/4平皿（划线第一区）；如果需要硝酸盐或SPS纸片，则贴另1/4区菌群万古卡那多粘菌素 SPSG- R V VG+ S V VB.frag 群 R R R解尿拟杆菌群 R S S梭杆菌属 R S S卟啉单胞菌属 S R R普雷沃菌属 R R V韦荣氏球菌属 R S S厌氧消化链球菌S Rs R S其他G+c S S R R4 生化反应触酶、吲哚、硝酸盐五、厌氧菌药敏1 经验用药☺>99%厌氧菌对甲硝唑、克林霉素、氯霉素、亚胺培南敏感☺95—99%β- 内酰胺酶/β- 内酰胺酶抑制剂复合抗生素类、革兰阴性厌氧杆菌对头孢菌素类抗生素敏感性不同，头孢菌素类、β- 内酰胺酶、青霉素类等。

《厌氧菌的检验》课件

01
03
厌氧菌的生长繁殖速度较慢，且对环境条件敏感，容易发生变异。
04
厌氧菌具有多种糖发酵途径，其中以乳酸发酵为主。
02
厌氧菌的检验方法
形态学检查
革兰染色
通过革兰染色可以将厌氧菌染成紫色，与其他细菌进行区分。
芽孢染色
观察芽孢的存在与否，有助于判断厌氧菌的种类。
鞭毛染色
某些厌氧菌具有鞭毛，鞭毛染色有助于厌氧菌的鉴别。
耐氧厌氧菌
可在有氧参与的情况下利用某些有机物生长繁殖，且其无氧呼吸受抑制，如反硝化细菌。
厌氧菌的生理特性
厌氧菌多为非运动型，其细胞壁缺乏环状肽链，因此其细胞壁不完整，缺乏有效的渗透屏障，且通透性较
大，易发生细胞壁缺陷或某些细胞器缺失。
输标02入题
厌氧菌的呼吸链不完整，缺乏氧化酶类，因此其代谢过程中产生的能量较少。
基因芯片技术
利用芯片上固化的探针与样品中的DNA或RNA进行杂交，通过检测杂交信号确定是否存在相应的厌氧菌。
03
厌氧菌感染的临床表现
局部感染
01
02
03
04
局部红肿热痛
厌氧菌感染常引起局部炎症反应，表现为红肿、热痛等症状
。
化脓性分泌物
感染部位可能产生大量脓性分泌物，这是厌氧菌繁殖的结果
。
组织坏死
对疑似感染病例进行流行病学调查，追踪感染源和传播途径。
抗菌药物使用
合理使用抗菌药物，避免滥用导致耐药性产生。
05
厌氧菌检验的未来发展
新技术的研发
基因测序技术
01Leabharlann 随着基因测序技术的不断进步，未来厌氧菌的检测将更加快速
、准确，能够更早地发现和诊断疾病。

厌氧菌的培养实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 熟悉厌氧菌的微生物学特性。

2. 掌握厌氧菌的分离和纯化方法。

3. 学习使用厌氧培养箱进行微生物培养。

4. 了解厌氧菌在生物工程和医学研究中的应用。

二、实验原理厌氧菌是一类在无氧或低氧环境中生长繁殖的微生物。

它们不能进行有氧呼吸，其能量代谢主要通过无氧发酵的方式进行。

厌氧菌在自然界中广泛存在，与人类的健康和疾病密切相关。

本实验旨在通过厌氧菌的分离和培养，了解其生长特性，为后续研究提供基础。

三、实验材料1. 厌氧菌样品：土壤、水体、粪便等。

2. 培养基：厌氧肉汤培养基、血琼脂平板、液体石蜡。

3. 器械：厌氧培养箱、接种环、接种针、无菌试管、锥形瓶、移液器、酒精灯、高压蒸汽灭菌器等。

四、实验方法1. 样品处理- 取一定量的厌氧菌样品，用无菌生理盐水进行稀释。

- 取适量稀释液，分别接种于厌氧肉汤培养基和血琼脂平板。

2. 厌氧环境制备- 将厌氧肉汤培养基和血琼脂平板放入厌氧培养箱中。

- 在厌氧培养箱中注入液体石蜡，覆盖培养基表面，隔绝空气。

3. 培养- 将厌氧肉汤培养基置于37℃恒温培养箱中培养24小时。

- 观察菌落生长情况，记录菌落形态、颜色等特征。

4. 分离和纯化- 将生长良好的菌落挑取，接种于血琼脂平板。

- 再次放入厌氧培养箱中培养，观察菌落生长情况。

- 重复上述步骤，直至获得纯化的厌氧菌。

五、实验结果1. 菌落形态- 厌氧肉汤培养基中的菌落呈圆形、表面光滑、边缘整齐、颜色为白色。

- 血琼脂平板上的菌落呈圆形、表面光滑、边缘整齐、颜色为白色，周围有溶血现象。

2. 分离和纯化- 通过多次接种和纯化，成功获得纯化的厌氧菌。

六、实验讨论1. 厌氧菌在自然界中广泛存在，对生态环境和人类健康具有重要意义。

2. 本实验成功分离和纯化了厌氧菌，为后续研究提供了基础。

3. 在厌氧菌的培养过程中，厌氧环境至关重要。

本实验通过使用厌氧培养箱和液体石蜡，成功制备了厌氧环境，保证了厌氧菌的生长。

七、实验结论1. 厌氧菌是一类在无氧或低氧环境中生长繁殖的微生物，其能量代谢主要通过无氧发酵的方式进行。

厌氧菌的检验课件

厌氧产气袋法：操作简便，不需要特殊实验条件，适合临床常规操作。但应注意厌氧产气袋产热导致细菌死亡，造成假阴性的产生。
厌氧菌的检验课件
厌氧菌的检验课件
培养及鉴定
1.培养：标本应迅速接种，然后放厌氧环境，一般培养48小时;特殊的可以延长。
2.鉴定：首先做耐氧试验，耐氧试验阳性的做革兰染色等染色方法，再做生化鉴定。
在临床是有重要意义的主要有：消化球菌消化链球菌韦荣球菌
厌氧菌的检验课件
厌氧菌的检验课件
革兰阴性无芽胞厌氧杆菌
类杆菌：是临床上分离最多的厌氧菌
厌氧菌的检验课件
厌氧菌的检验课件
梭状芽胞杆菌属
为一大群厌氧或微需氧的粗大芽胞杆菌，革兰阳性，均具有芽胞，故名。临床上有致病性的主要有以下几种：
破伤风梭菌产气荚膜梭菌肉毒梭菌艰难梭菌
厌氧菌的检验课件
破伤风梭菌
可引起破伤风，故名。形态特征：本菌细长，革兰阳性，动力
阳性，芽胞正圆形，比菌体大，位于菌体顶端，使菌体呈“鼓槌状”，为该菌的特征。
厌氧菌的检验课件
微生物检验：根据临床表现可作出诊断，一般不作细菌学检查，若临床需要可按下列方法进行。
1、直接涂片 2、厌氧培养 3、毒力试验 4、鉴定
厌氧菌的检验课件
产气荚膜梭菌
是引起气性坏疽的主要病原菌，或产生外毒素和多种侵袭性酶类。
形态特征：革兰阳性粗短大杆菌，两端纯圆，呈单
或双排列，芽胞体于菌体中央或次极端，不大于菌体，镜下不易观察到。动力阴性。
厌氧菌的检验课件
培养特性：不严格厌氧，在血平板上，多数菌株呈双层溶血环，内环为β 溶血，外环为不完全溶血。
厌氧菌的检验课件

腹内感染162例的厌氧菌分离鉴定和药敏分析

腹内感染162例的厌氧菌分离鉴定和药敏分析［摘要］目的探讨212株厌氧菌在腹内感染中的分布情况，了解它们对10类抗生素的敏感性。

方法采用多种选择性培养基和厌氧手套箱法对162例腹内感染样本进行厌氧菌培养和鉴定。

用布氏肉汤稀释法进行药敏试验。

结果 162例标本检测出92份厌氧菌培养阳性，厌氧菌检出率56.7%。

共分离各种厌氧菌212株，平均每份阳性标本2.2株，其中脆弱类杆菌113株（53.3%），其次是各种消化链球菌和梭杆菌。

甲硝唑能抑制各类厌氧菌生长，万古霉素对革兰阳性厌氧菌有效，克林霉素比林可霉素对厌氧菌生长抑制作用强。

结论腹腔内感染属于内源性感染，厌氧菌分离率高，常以脆弱类杆菌为主。

腹内感染常为多种细菌的混合感染，临床上治疗腹内感染采取联合用药，疗效最好。

［关键词］腹内感染；细菌学；厌氧菌；药敏试验厌氧性细菌是一群在有氧条件下不能生长，必须在无氧条件下才能生长繁殖的细菌。

绝大多数的厌氧菌均为体内正常菌群，广泛存在于皮肤、口腔、上呼吸道、肠道及泌尿道黏膜上，因而容易引起这些部位的内源性感染，约60%的临床感染有厌氧菌参与［1］，临床上许多疑为感染而常规细菌检验阴性的病例，很可能是厌氧菌感染，这些厌氧菌感染发病率和死亡率均较高，治疗方法又与需氧菌不同［2］。

因此要提高临床上对感染性疾病的诊断率，就必须加强对厌氧菌的检验。

现将我院2003~2005年对162例腹内感染病例标本进行厌氧菌培养鉴定及药物敏感结果报告如下。

1 材料与方法1.1 菌株来源自2003年3月~2005年3月我院收治各类腹内感染病人，其中普外科急性阑尾炎患者67例，腹内脓肿5例及各种原因引起的弥漫性腹膜炎32例，肝胆外科胆道感染64例，全部病例均在剖腹后，立即用无菌注射器抽取脓液、胆汁或炎性渗出液1~2 ml，排尽气泡，把针头插上无菌胶塞立即送检。

1.2 细菌培养与鉴定1.2.1 肉眼观察每次接种前应观察标本的性状，如是否为脓性、带血，有无黑色坏死组织或黑色分泌物，有无硫磺样颗粒，是否有恶臭气味等，并做原始记录。

厌氧菌的药敏方法介绍PPT课件

1.取上述准备好的受试菌液0.5ml，加入灭菌瓷板槽孔中,按顺序并作标记。
2.用30-50点种针在上述各孔中沾取菌液,用手工或机械手点种到已准备好的抗生素平板面上(每点1 l-3 l)
3.被点种平板做好标记并记录好顺序,同时点种两块不含抗生素平板，留一块作需氧对照, 其余全部进入厌氧手套箱中,一般37 ℃厌氧培养48h。
抗生素
脆弱类杆菌 ATCC 25285
多形类杆菌 ATCC 29741
迟缓真杆菌 ATCC 43055
头孢替坦
4-16
32-128
32-128
（cefotetan）
头孢唑肟
NO
（ceftizoxime）
4-16
16-64
头孢曲松
32-128
64-256
NO
（ceftriaxone）
头孢孟多
32-128
4. 也可将菌的混悬液经厌氧培养4-6h（生长缓慢菌应培养12h），这时应注意菌的浓度，如仍在0.5号MF管内就不作处理, 超过此浓度宜作稀释后再使用。
5.每次药敏试验受试菌中应注意加入标准菌株作为质控.
①B.fragilis脆弱类杆菌(ATCC 25285或NCTC 9343)
②B.thetaiotaomicron多形类杆菌(ATCC 29741) ③C.perfringens产气荚膜梭菌(AATCC 13124) ④E.lentum迟缓真杆菌(ATCC 43055)
≤16
32
≥64
≤8
16
≥32
≤4
8
≥16
续表3 MIC法解释标准（琼脂稀释法）
抗生素
MIC(µg/ml或mg/L)
敏感
中介

传统发酵食品浆水中厌氧微生物分离鉴定初探

浆水是西北等地传统的发酵食品，对其的研究很少，主要有张轶[19]、何玲[20]等对其中的主要微
生物、营养价值和亚硝酸盐等方面进行了研究，但就厌氧微生物的分离鉴定没有过报道。
本实验主要对其厌氧微生物进行了研究分离出 7 株厌氧菌株。A、B 鉴定为酵母菌；C、E 为乳杆菌；D 为肠球菌；F 为乳球菌，G 为待定菌。本实验由于方法有限，未能鉴定出乳酸菌的具体菌种，初步分离的肠球菌和乳球菌未曾报道过，鉴定到该菌种还需要进一步的实验。
征、培养特征、生理生化特征鉴定。结果表明：浆水中的优势菌群为乳酸菌和酵母菌，7 株菌株
初步鉴定 A、B 为酵母菌；C、E 为乳杆菌；D 为肠球菌；F 为乳球菌。
关键词：浆水；厌氧微生物；分离；初步鉴定
中图分类号： TS 201.3
文献标志码： A
文章编号： 1005-9989(2010)04-0039-03
1.2 仪器 PGX 型可编程光照培养箱：宁波东南仪器有
限公司；SW-CT-2G 型双人净化工作台：苏州净化设备有限公司；不锈钢手提式灭菌锅、不锈钢电热蒸馏水器：上海申安医疗器械厂； FA2004N 电子天平：上海精密科学仪器有限公司；KDM 型控温电热套；SANYO CO2 培养箱。 1.3 培养基
2010 年第 35 卷第 4 期
பைடு நூலகம்
但其制作工艺简单，一般通过民间“引子”(菌种) 家庭自制自用，缺乏系统技术优化及理论研究，更难以实现传统优质食品的现代化。本文就甘肃传统食品浆水中的优势厌氧微生物进行了初步的分离与鉴定，以期对浆水的生产提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料浆水：市售。
分离培养基采用改良 MRS 为分离培养基[6]。鉴定培养基：蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、明胶基础培养基、V-P 实验培养基、柠檬酸铁铵半固体培养基、运动性培养基。

细菌快速分离鉴定和药敏试验方法学探讨

细菌快速分离鉴定和药敏试验方法学探讨张秀珍;宣天芝;陶凤蓉;雷蕾;王寰【期刊名称】《中华医院感染学杂志》【年(卷),期】1997(7)3【摘要】建立２４小时快速报告细菌学鉴定及药敏试验结果的常规程序，为及时发现和控制医院感染潜伏危险因素提供细菌学依据。

本研究根据不同菌体生长条件的差异进行分离培养，快速获得单一菌落，并用单克隆抗体乳胶诊断系列和快速生化鉴定系统对获得的单一菌落进行鉴定。

每次试验用标准鉴定系列、ＡＰＩ或全自动细菌鉴定系统ＶＩＴＥＫ－ＩＭＳ作对比实验，优选出最佳快速分离时间和鉴定终点。

研究结果表明：当标本内含１０８／ｍｌ菌体时，在３５℃需氧或５％～７％ＣＯ２条件下培养，可在６～１２小时获得单一菌落。

直接标本药敏试验和获得单一菌落后试验，同时进行可在６～１２小时内得到药敏结果。

证明２４ｈ快速细菌学报告是可以实现的。

【总页数】4页(P139-142)【关键词】细菌;快速分离鉴定;药敏试验【作者】张秀珍;宣天芝;陶凤蓉;雷蕾;王寰【作者单位】北京医院;北京医科大学检验系;大连石化公司职工医院【正文语种】中文【中图分类】R378;R372【相关文献】1.虹鳟细菌性疾病病原菌分离鉴定及药敏试验 [J], 冯栋亮;李勤慎;刘哲;王静汝2.血流感染细菌快速鉴定及药敏试验的方法学评价 [J], 丁毅伟;吴思敏;韩志海3.某牛场奶牛产后败血症的细菌分离鉴定与药敏试验 [J], 牟婧;金圣子;关桐旭;雷磊;刘云4.杨凌某牛场犊牛腹泻病细菌的分离鉴定及药敏试验 [J], 仇薪鑫;牛华锋;贾燕青;张振仓5.畜禽肠杆菌科细菌分离鉴定及药敏试验 [J], 魏甜甜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

200例女性生殖道厌氧菌鉴定与药敏结果分析

200例女性生殖道厌氧菌鉴定与药敏结果分析目的对女性生殖道的感染进行厌氧菌培养和药敏结果分析,为临床提供抗生素使用依据。

方法培养采用厌氧手套箱法进行培养;药敏实验采用布氏肉汤稀释法。

结果引起女性生殖道感染的厌氧菌主要为拟杆菌、普雷沃菌属和消化链球菌属为主;最为敏感的抗生素是替硝唑和甲硝唑。

结论治疗厌氧菌引起的女性生殖道感染应首选替硝唑和甲硝唑。

标签：女性生殖道感染;厌氧菌;培养;药敏实验在女性生殖道的感染中,厌氧菌的感染率约占到64.3%[1],但由于目前厌氧菌培养所需要的苛刻条件,使国内对于女性生殖道厌氧菌培养及药敏分析极为少见。

现总结并分析了本院200例女性生殖道厌氧菌的分离鉴定及药敏结果。

现报告如下。

1 材料与方法1.1 菌株来源200例女性生殖道标本均来自2009年3月至2009年12月来本院妇科门诊就诊的患者。

1.2 方法1.2.1 采样用无菌扩阴器暴露宫颈,以无菌棉球檫净宫颈口,用无菌棉拭子取宫颈管(约15 mm处)分泌物或阴道顶端分泌物,迅速接种于培养基内进行培养[2]。

1.2.2 培养与鉴定所有标本均同时接种1种非选择性培养基和3种选择性培养基,采用厌氧手套箱法进行培养,长菌者分纯并做耐氧实验,证实为专性厌氧菌者分别用微量生化管进行鉴定;所有的标本在接种的同时均进行涂片,革兰氏染色并记录结果[3]。

1.2.3 药敏试验采用布氏肉汤稀释法[4]。

培养基均购自英国OXOID公司。

质控菌株脆弱类杆菌ATCC25285。

2 结果2.1 200份标本中有136份培养出厌氧菌,阳性率约为68%;共培养出厌氧菌172株,平均每份阳性标本1.27株。

2.2 172株厌氧菌鉴定结果见表1。

172株厌氧菌对常用抗生素的药敏结果见表2。

表1172株厌氧菌鉴定结果(株,%)菌名株数百分率(%)拟杆菌属7040.7普雷沃菌属5431.4消化链球菌属3118.0梭杆菌属105.8小韦荣球菌21.2消化球菌属21.2其他31.7合计172100表2172株厌氧菌对11种常用抗生素的药敏结果(株,%) 药物敏感株数敏感率(%)头孢噻肟12371.5头孢替坦13075.6万古霉素11969.2克林霉素9756.4林可霉素7845.4氯霉素15590.1四环素3721.5红霉素2715.7甲硝唑15791.3青霉素1911.1替硝唑16193.63 讨论女性生殖道分泌物是临床上细菌培养常见的标本之一,由于培养条件的限制,绝大多数临床微生物实验室仅只进行需氧菌与兼性厌氧菌的培养,而对引起女性生殖道炎症的主要菌群厌氧菌的培养及药敏实验则极为少见;因此,我们统计和分析了2009年3月至2009年12月本院对女性生殖道分泌物培养出的172株厌氧菌的鉴定和药敏结果,以便给临床提供一个用药参考。

一种用于厌氧菌鉴定的药敏纸片试验

一种用于厌氧菌鉴定的药敏纸片试验
魏涛;吕慧贤
【期刊名称】《中国抗生素杂志》
【年(卷),期】1989(014)006
【摘要】厌氧菌感染在临床上普遍存在,随着厌氧菌分离技术的改进,许多微生物学家或临床检验工作者已从临床各种标本中分离出厌氧菌。

如果能准确地鉴定厌氧菌的种类测定其对药物的敏感性无疑将为临床的治疗或控制其感染提供重要的依据。

目前国际上的药敏试验是以Bauer-kirby的纸片法为标准的方法。

但主要限于需氧菌及兼性厌氧菌,而对厌氧菌的药敏方法尚未标准化。

由于不同种类的厌氧菌对抗生素的敏感性存在着差异,Finegold等建议利用这一特性作纸片药敏试验以协助鉴定临床上分离出的无芽胞厌氧菌。

国内在这方面报道甚少,为此我们应用部分国际标准菌株及国内地方株进行了初步的观察。

【总页数】3页(P442-444)
【作者】魏涛;吕慧贤
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R981.9
【相关文献】
1.抗真菌药敏试验ATBFUNGUS2微量稀释法、ROSCO纸片法和NCCLS纸片法的对比研究 [J], 陈霁明;姚涌;汪学龙
2.厌氧菌的分离鉴定及药敏试验 [J], 张学英;齐欣;孙延波;杨国天;关显智;嵇菲
3.成人牙周炎龈下厌氧菌分离鉴定及药敏试验结果分析 [J], 陈莉丽;唐琪;吴燕岷;孙伟莲;严杰
4.厌氧菌药敏纸片稳定性研究 [J], 王宇倩;朱德妹
5.抗菌素厚纸片用于药敏试验的实验观察 [J], 李少华;向友华
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厌氧菌的采集、送检、培养、分离鉴定及注意事项

厌氧菌在有氧的情况下不能生长。

要培养厌氧菌，必须创造一个环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。

如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。

常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。

1.厌氧缸法：接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。

2.厌氧袋：即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。

塑料袋透明而不透气，内装气体发生管、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。

放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。

先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。

如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育（较为推荐）。

3.厌氧手套箱：是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。

它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。

箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。

欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。

箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。

该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。

金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。

4.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。

5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物，消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。

我没见过。

6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。

焦性末食子酸与碱反应后耗氧。

厌氧菌中药实验报告模板

一、实验名称厌氧菌中药实验二、实验目的1. 了解厌氧菌的生长特性。

2. 探讨中药成分对厌氧菌的抑制作用。

3. 分析不同中药对厌氧菌的抑制效果。

三、实验时间2023年X月X日四、实验地点实验室名称五、实验者姓名、学号、班级六、实验原理厌氧菌是一类在无氧或低氧条件下生长的微生物。

中药中的某些成分具有抑制厌氧菌生长的作用。

本实验通过观察不同中药成分对厌氧菌的生长抑制情况，探讨中药在厌氧菌防治中的应用。

七、实验材料1. 厌氧菌菌种2. 中药样品（如大蒜、金银花、连翘等）3. 培养基4. 无菌操作设备5. 光学显微镜6. 其他实验用品八、实验方法1. 中药提取- 将中药样品粉碎，加入适量溶剂（如乙醇、水等）进行提取。

- 提取液过滤，得到中药提取液。

2. 厌氧菌培养- 将厌氧菌接种于培养基中，置于厌氧培养箱中培养。

3. 中药抑菌实验- 将中药提取液加入厌氧菌培养基中，制成不同浓度的中药抑菌溶液。

- 将厌氧菌接种于中药抑菌溶液中，培养一段时间后观察生长情况。

4. 显微镜观察- 对生长良好的厌氧菌进行显微镜观察，记录其形态。

九、实验步骤1. 准备实验材料- 称取适量中药样品，加入溶剂进行提取。

- 将提取液过滤，得到中药提取液。

2. 厌氧菌培养- 将厌氧菌接种于培养基中，置于厌氧培养箱中培养。

3. 中药抑菌实验- 将中药提取液加入厌氧菌培养基中，制成不同浓度的中药抑菌溶液。

- 将厌氧菌接种于中药抑菌溶液中，培养一段时间后观察生长情况。

4. 显微镜观察- 对生长良好的厌氧菌进行显微镜观察，记录其形态。

十、实验结果与分析1. 中药提取- 中药提取液呈棕黄色，具有特殊气味。

2. 厌氧菌培养- 厌氧菌在培养基中生长良好，菌落呈灰白色，边缘整齐。

3. 中药抑菌实验- 不同浓度的中药抑菌溶液对厌氧菌的生长均有抑制作用，其中大蒜提取液对厌氧菌的抑制作用最强。

4. 显微镜观察- 厌氧菌在中药抑菌溶液中生长缓慢，菌体形态发生改变。