真菌药敏试验方法比较
真菌药敏试验报告解读
真菌药敏试验报告解读
报告解读：
本次真菌药敏试验结果显示，对于不同的真菌菌株，药物的敏感性存在差异。
以下是对每种药
物的敏感性测试结果的解读：
1. 抗真菌药物A：
对真菌菌株A的浓度敏感性测试显示，抗真菌药物A在低浓度下可以有效抑制真菌生长，表现出良好的杀菌效果。
然而，随着浓度的增加，其对真菌的杀菌效果逐渐降低。
2. 抗真菌药物B：
对真菌菌株A的浓度敏感性测试表明，抗真菌药物B在各种浓度下均能有效抑制真菌的生长，表现出较好的杀菌效果。
尤其是在高浓度下，抗真菌药物B的杀菌效果更为显著。
3. 抗真菌药物C：
对真菌菌株A的浓度敏感性测试结果显示，抗真菌药物C对真菌生长的抑制作用相对较弱，尤其在低浓度时，其杀菌效果有限。
然而，在高浓度下，抗真菌药物C表现出一定的杀菌作用。
综合上述结果，不同真菌菌株对抗真菌药物的敏感性存在差异。
药物B在各种浓度下均表现出较好的杀菌效果，可以作为治疗真菌感染的一种有效选择。
抗真菌药物A和C在高浓度下也
具有一定的杀菌作用，但在低浓度下的抑菌效果较弱，需谨慎使用。
需要注意的是，本试验结果仅针对真菌菌株A进行了测试，对于不同的真菌菌株可能存在一
定的变异性，因此在临床实践中，应综合考虑真菌菌株的特点和药物的毒副作用等因素，进行
合理的抗真菌药物选择和应用。
抗真菌药物敏感试验指导
琼脂扩散法
培养基制备
基本培养基为MH琼脂，其中加入2%葡萄糖和亚甲基兰 （0.5μg/mL）。调整pH值至7.2～7.4（室温下）。高压灭菌后分装入 平皿，室温下冷却凝固后，37℃温箱中干燥10～30min，以去除平皿 表面水蒸气。 培养基平皿可在2～8 ℃冰箱保存一周。如采用塑料袋包裹可适 当延长。 使用前，应抽取同一批次平皿置于30～35℃孵箱中24小时，以确
4％琼脂：
40g 琼脂，溶于1000mL蒸馏水中，高压灭菌15min，备用。
琼脂稀释法
菌液的制备
受试菌在SDA中35℃ 培养24小时（念珠菌属）或48小时 （新生隐球菌）
取直径约5mm菌落，混悬于5mL灭菌的生理盐水中，涡
旋混匀15秒，采用分光光度计在530nm处，调整菌悬液至0.5 个麦氏单位浊度，相当于1×106～5×106/mL，作为菌液的 工作液。
试管液基稀释法
实验步骤：
(NCCLS-M27A)
取无菌的15mm×100mm试管进行实验 在试管中依次加入0.1mL倍比稀释的不同浓度药物工作液。 依次在试管中加入0.9mL菌工作液，混匀。注意整个过程需在 15min内完成。 实验过程中，设置空白对照和生长对照。同时进行质控菌株平行试 验，进行质量控制。 将试管置于35 ℃培养46～50h观察结果。对于新生隐球菌，培养时 间应延长至70～74h。
3. 将培养板置于35 ℃孵育48小时(新生隐球菌为72小时）后读取结果。
微量液体稀释法
结果判读
观察前，可轻轻震摇药敏板，使终点判读更容易。如果出现菌膜沉 淀，须进行吹打、涡旋或其他方法混匀后，在进行结果判读。
结果判读以生长对照孔作为标准，将生长情况进行评分：
抗真菌药敏试验及结果判读
0.5
A. flavus/ A. niger/A. terreus/A. versicolor
0.25
EUCAST法
临床实验室标准研究所（European Commission on Antimicrobial Susceptibility
Testing，EUCAST）方案
试验方法
检测菌种
肉汤稀释法
02
纸片扩散法
纸片扩散法
临床实验室标准研究所（Clinical laboratory standard institute，CLSI）
M44-A
➢ Tested Drug：FLC，VRC ➢ Media：Mueller-Hinton agar + 2%dextrose + 0.5ug/ml methylene blue ➢ Quality control：C.albicans ATCC 90028，C.parapsilosis ATCC 22019，
Amphotericin B, nystatin • 唑类--Inhibition of ergosterol
Echinocandins • 肽-核苷类—抑制几丁质合成
synthesis
Nikkomycin Z
Imidazoles:
• 嘧啶类—干扰核酸合成
Triazoles:
Flucytosine
• 丙烯胺类-- Inhibition of ergosterol • 其它类
• CLSI M27-A FLC对600余株念珠菌MIC值：分离自150余例AIDS 的食管念珠菌病，一致性好；治疗失败者，MIC值 大于64 µg/ml
Mahmoud A.G, JCM 1996, 34:489-495
真菌药敏试验方法比较
真菌药敏试验方法比较1.环形扩散法：环形扩散法是目前最常用的真菌药敏试验方法之一、该方法将抗真菌药物以不同浓度滴入含有标准化真菌菌悬液的琼脂平板上，然后培养一段时间后观察菌落的生长。
通过测量最小抑菌浓度（MIC），可以判断真菌对抗真菌药物的敏感性。
环形扩散法具有操作简便、结果比较准确的优点，但需要较长的培养时间。
2.E测试法：E测试法是一种可定量测定真菌对抗真菌药物敏感性的方法。
该方法使用一种含有不同浓度抗真菌药物的梯度试纸条，将试纸贴附在含有真菌菌悬液的琼脂平板上，然后培养一段时间。
抗真菌药物的最小抑菌浓度可以通过读取试纸上的抑菌浓度值来测定。
E测试法具有快速、准确、可定量的优点。
3.微量平板法：微量平板法是一种适用于真菌药敏试验的高通量筛选方法。
该方法在微孔控制出菌的琼脂平板上，以液体方式将不同浓度的抗真菌药物加入孔中，并装入真菌菌悬液。
随后，通过观察孔内菌落的生长情况，可以确定真菌对抗真菌药物的敏感性。
微量平板法适用于大规模组织后续处理的真菌药敏试验，具有扩增快、操作简便的特点。
4.流式细胞仪法：流式细胞仪法是一种新兴的真菌药敏试验方法。
该方法利用流式细胞仪对真菌菌株进行染色，然后利用多色激光激发荧光信号。
通过检测细胞死亡、增殖和产生细胞壁变化等生物学特性，可以评估真菌对抗真菌药物的反应。
流式细胞仪法具有高通量、高灵敏度和定量分析的优点。
总的来说，环形扩散法是目前应用最广泛的真菌药敏试验方法，但需要较长的培养时间。
近年来，随着技术的进步，E测试法、微量平板法和流式细胞仪法等新方法的应用逐渐增多，可以更准确、快速地评估真菌菌株对抗真菌药物的敏感性。
真菌药敏试验方法的选择应根据实验目的、研究对象和实验条件等因素来确定。
需要进一步的研究来评估这些方法在临床实践中的可行性和可靠性。
药敏试验判定标准
药敏试验判定标准
药敏试验是评估细菌或真菌对不同抗生素或抗真菌药物的敏感性的一种实验方法。
根据药敏试验的结果，可以对患者进行个体化的治疗选择。
药敏试验主要根据药物对细菌或真菌的最低抑菌浓度（MIC）进行判定，以下是药敏试验判定标准的一般指导：
1. 敏感（S）：菌株对药物的MIC低，表示菌株对该药物敏感。
2. 中度敏感（I）：菌株对药物的MIC中等，表示菌株对该药物的敏感性较低。
3. 高度耐药（R）：菌株对药物的MIC高，表示菌株对该药物耐药。
4. 缺乏临床数据（NC）：该菌株与此药物之间的敏感性还没有明确的临床数据。
5. 不适用（NA）：该药物对该菌株没有药敏试验的意义。
需要注意的是，药敏试验的结果仅供临床参考，并不绝对
决定治疗方案。
临床医生应结合患者的具体情况、病原体
的临床意义、药物的不良反应等因素进行综合判断和决策。
纸片真菌药敏法与浓度梯度法检测 氟康唑对 种酵母样真菌 …
中华医院感染学杂志 2004 年第 14 卷第 10 期
·1101 ·
计算 。
112 菌株鉴定 将不同标本直接划种沙保弱琼脂 (自制) ,35 ℃培养 ,用全自动细菌鉴定系统 VITEK2 CC4 的 YBC 鉴定卡 (法国生物梅里埃公司) 进行鉴 定 ,鉴定概率值 > 90 % ,作为本次实验菌株 。 113 Etest 方法 氟康唑 Etest 试条由 AB BioDisc 生 产 ,MIC 检测范围 01125～256mg/ L ,按操作说明进 行 ,酵母菌配制成 015 麦氏浊度 ,35 ℃培养 24～48 h 后观测结果 ;隐球菌属配制成 1 个麦氏浊度 ,35 ℃培 养 48～72 h 观测结果 。质控标准 :近平滑假丝酵母 菌 ATCC 22019 ,2～16 ;克柔假丝酵母菌 ATCC 6258 , ≥256 ;白色假丝酵母菌 ATCC 90028 ,01125～1 。氟 康唑的判断标准 : (1997NCCLS 推荐) MIC ≤8mg/ L 为 敏感 ( S) ; MIC16 ～ 32mg/ L 为 剂 量 依 赖 性 敏 感 (SDD) ;MIC ≥64mg/ L 为耐药 (R) 3 。 114 纸片法真菌药敏 (丹麦 Rosco 公司) 4 氟康 唑纸片的含量为 15μg/ 片 。将改良 Shadomy 琼脂平 皿置 35 ℃干 燥 20 ～ 25 min , 吸 110ml 待 检 菌 液
rosco纸片法真菌药敏其操作简单相对比中华医院感染学杂志2004年第14卷第10etest方法成本低与nccls认可的肉汤稀释法有良好符合率本次结果也显示与etest方法有较高符合率9215同时结果判读清晰已被多个国家使用来监测真菌的耐药性26但该纸片法在本次实验中对于检测处于临界值mic的菌株有一定的误差对于区分sdd株存在不足与国外报道基本一致因此对从严重的系统感染患者分离到的酵母菌应遵循更为严格的判断标准有条件的实验室应用etest方法检测其mic值有利于临床准确使用抗真菌药物
如何正确解释真菌药敏结果及其与临床疗效的关系
梯度扩散法（E-test）：酵母菌、丝状真菌
NCCLS/CLSI推荐的药敏方法
方法
适用菌种
适用药物
研发公司
M27-A肉汤
稀释法
M38-A
肉汤稀释法
ATB半自动
药敏系统
M44-A美兰
纸片扩散法
E-test
酵母菌 丝状真菌 酵母菌 酵母菌
5-FC、AMB、氟康 唑、伊曲康唑、伏立 康唑
5-FC、AMB、氟康 唑、伊曲康唑、伏立 康唑
E-test法酵母菌折点（引自CLSI M27-A2）
伊曲康唑折点：只适用于粘膜念珠菌感染
丝状真菌的敏感性折点
形态学鉴定更重要，CLSI推荐方法，但未推荐药物折点 • 两性霉素B：对大多数丝状真菌的MIC为0.5-2µg/ml，对某些菌
种(土曲霉等）>2µg/ml（2-16µg/ml）。从目前数据看，两性 霉素B的MIC>2µg/ml时，临床治疗失败率较高。 • 伊曲康唑和其他新的三唑类药物：对丝状真菌MIC为0.0316µg/ml，目前无折点。 • 氟胞嘧啶：丝状真菌对其多不敏感，MIC>64µg/ml。 • 氟康唑：丝状真菌对氟康唑多不敏感，MIC>64µg/ml。
，
MIC≥0.5 mg/L代表耐药菌株；
•氟康唑、伏立康唑:可参照NCCLS M27-A标准检测酵母菌MIC，与体内有良好相关性
；
•卡泊芬净:药敏结果与疗效相关性差,有报道用MIC=2mg的预后比MIC=1mg的还好；卡
泊芬净对丝状真菌的药敏结果各实验室差异大，可比性非常差。
CLSI M27-A2 （2002） 抗真菌药物对念珠菌属的药敏标准
•耗时费力，成本高 •质量控制要求严格 •不同人判读误差大
两种酵母菌药敏试验的介绍及比较_16003
两种酵母菌药敏试验的介绍及比较【摘要】目的：建立一种简便、实用的酵母菌药敏试验方法。
方法：酵母菌纸片扩散法。
结果：38株真菌在M44 P方案平皿和M27 A 方案平皿上对氟康唑的平均抑菌圈直径分别为31.32 mm和31.26 mm，t=0.16，P=0.874>0.05；38株真菌在M44 P方案平皿和M27 A方案平皿上对沃尔康唑的平均抑菌圈直径分别为33.50 mm和33.24 mm，t=1.15，P=0.257>0.05。
结论：M44 P酵母菌纸片扩散法敏感试验方案操作简便、实验结果稳定、可靠。
【关键词】酵母菌药敏试验方法酵母菌纸片扩散法比较随着各种抗真菌药物的相继问世和耐药真菌菌株的出现，真菌药物敏感性试验已越来越受到人们的重视，为此美国临床试验室标准化委员会（NCCLS）于2003年介绍了M44 P酵母菌纸片扩散法敏感试验方案，制定了氟康唑（floconazole）和沃尔康唑（voriconazole）质控株的参考范围及氟康唑的抑菌圈解释标准，研究已证实氟康唑对酵母菌的纸片扩散法敏感试验有很好的重复性，可方便、准确地检测酵母菌对氟康唑的敏感性［1～5］。
我科同时用M44 P方案和M27 A方案酵母菌纸片扩散法敏感试验两种方法对36株临床常见酵母菌及2株质控株进行氟康唑和沃尔康唑纸片扩散法敏感试验进行比较。
1 材料与方法1.1 试验菌株36株临床常见酵母菌来源于临床各科送检的痰液、尿液及阴道拭子等标本，用SDA（沙保弱培养基）分离培养，先经科玛嘉显色培养基初步鉴定，后经API 20C准确鉴定，其中有白色假丝酵母菌19株，热带假丝酵母菌5株，光滑假丝酵母菌4株，克柔假丝酵母菌3株，近平滑假丝酵母菌3株，季也蒙假丝酵母菌2株；质控菌株：白色假丝酵母菌ATCC90028 1株和近平滑假丝酵母菌ATCC22019 1株均为北京协和医院细菌室老师惠赠。
1.2 设备(35±1)℃孵育箱，0.5号麦氏标准比浊管（自配方法：取0.5 ml 0.048 mol/L BaCl2(1.175%W/VBaCl2²2H2O)加入99.5 ml 0.18 mol/ H2SO4溶液中即可获得0.5号麦氏标准比浊管。
真菌的鉴定及药敏试验分析
真菌的鉴定及药敏试验分析真菌对人类健康的危害包括由病原性真菌、条件致病真菌所致的深部真菌病和浅部真菌病；由气传真菌所致的变态反应真菌症即过敏；由污染真菌产毒所致的真菌中毒症。
随着医学的发展，特别是抗生素的广泛使用，大量治疗手段的开展，免疫障碍疾病的大量发生，使真菌感染的情况日益增加，医院感染中的真菌感染也不断增加，因而，掌握真菌检验的方法就成为检验工作中的一个重要组成部分。
1 材料与方法1.1 真菌来源收集临床送检标本所分离出的真菌120例，男性84例，女性36例，其中痰液96株，粪便11例，咽拭子12例、尿液5例、血液4例，分泌物3例。
1.2 采集及处理根据真菌侵犯组织和器官的不同而采集不同的标本，而采集最合适的标本是决定能否找到病原性真菌的关键，要尽量用消毒方法采集标本以免污染。
深部真菌病的标本如血液、脑脊液、脓液、尿、痰等应及时收集检查，一般不超过1～2h，以免变质污染，标本采取前，应忌用药。
为避免污染杂菌，在收集标本时，应严格无菌操作，必要时在培养基内加入抗生素类。
1.3 检验方法1.3.1 酵母样菌的检验直接涂片法各类标本，除脑脊液、尿、胸水、腹水等需离心沉淀后取沉淀物作涂片外，其他均可用生理盐水或10％～40％KOH作涂片后直接镜检或用革兰、墨汁、0.1％甲苯胺蓝染色后镜检。
分离酵母样菌所选用的培养基为沙保弱固体或液体培养基，在培养基中可加入各种抗生素抑制细菌的生长、有利于真菌生长含抑制剂的霉菌琼脂。
将备类标本直接接种上述培养基，除新型隐球菌需同时接种两支培养基；一支孵育于37℃，另一支孵育于22～28℃，其他酵母菌均孵育于22～28℃。
每日观察生长情况。
根据酵母菌在培养基上的菌落特征及在玉米粉吐温80培养基上生长物在显微镜下生长情况可作初步鉴定。
1.3.2 丝状真菌的检验某些丝状真菌如孢子丝菌或荚膜组织胞浆菌的直接涂片，必须染色后检查。
真菌的形态和结构通过染色更为清楚，不染色涂片不易保存，染色涂片可长期保存。
抗真菌药敏试验在2种不同琼脂平板的比较
抗真菌药敏试验在2种不同琼脂平板的比较刘龙燕;袁水斌;邹学森;王春阳;王占科【期刊名称】《实验与检验医学》【年(卷),期】2012(030)004【总页数】3页(P407-409)【关键词】念珠菌;培养基;药敏试验【作者】刘龙燕;袁水斌;邹学森;王春阳;王占科【作者单位】江西省肿瘤医院检验科,江西南昌330029;江西省肿瘤医院检验科,江西南昌330029;江西省肿瘤医院检验科,江西南昌330029;江西省肿瘤医院检验科,江西南昌330029;解放军第九四医院检验科,江西南昌330000【正文语种】中文【中图分类】R446.5;Q939.92;R978.5随着真菌感染发病率的不断上升，真菌感染性疾病的治疗也面临着严峻的挑战，且有关耐药菌株的报道也逐渐增多。
肿瘤病人因自身免疫功能低下,受各种医源性因素影响较多,更易发生院内感染[1],特别是深部真菌感染。
真菌体外药敏试验也越来越显得重要，这也是临床上用以评价药物敏感性最基本的方法之一。
目前认为准确性、重复性最好的抗真菌药物敏感性试验方法是美国临床实验室标准化委员会(CLSI)推出的酵母菌的液体培养基稀释法抗真菌药物敏感试验标准方法(M-27)[2]，但该方法操作复杂，难以作为临床常规检查项目。
CLSI发表的“酵母菌纸片扩散法抗真菌药敏试验方案”(M44-A)，操作方法简单，结果直观[3]，而且有商品化的抗真菌药敏纸片供应，有利于作为临床常规项目检测。
由于目前国内外对酵母样真菌体外药敏纸片扩散法选用培养基配方不是完全一致。
因此，对其测试结果可信度受到一定的影响。
我们选用5种温州康泰生物科技有限公司的BIO-KONT抗真菌药敏纸片，在真菌药敏专用琼脂(温州康泰生物有限公司)和葡萄糖亚甲蓝改良琼脂(M-H琼脂)2种培养基上，对临床分离的193株常见酵母菌做了检测，以康泰公司的产品为参照，得到了较为满意的比较结果。
现将比较分析果报道如下。
1.1 实验菌株 2010年3月至2010年5月期间从临床送检的确诊真菌感染的标本193株，包括痰、咽拭子、分泌物及尿液等。
药敏实验的方法有哪些
药敏实验的方法有哪些
药敏实验是研究不同细菌对抗生素的敏感性和耐药性的方法，常用的药敏实验方法包括：
1. 纸片扩散法：将含有不同抗生素的消毒纸片施加在含菌培养基表面，观察菌落周围的抑菌圈直径大小，判断细菌对抗生素的敏感程度。
2. 微量稀释法：在含有不同浓度抗生素的液体培养基中接种细菌，观察最小抑菌浓度，即该抗生素能够抑制该菌株的最低有效浓度。
3. 气溶胶化验法：将含有不同抗生素的气溶胶喷洒在含菌培养基中，观察菌落周围的抑菌圈直径大小，判断细菌对抗生素的敏感程度。
4. 坦能法：将不同抗生素与抑菌剂混合，制成坦能板后进行药敏实验，以检测革兰氏阴性细菌对抗生素的敏感性和耐药性。
5. 自动化微生物分析系统：采用自动化设备对不同细菌的抗生素敏感性进行测试，具有高效、精确、快速等优点。
抗药敏实验报告结论(3篇)
第1篇本次实验旨在探究不同抗真菌药物对致病性外瓶霉的敏感性，为临床正确用药提供理论依据。
实验采用微量稀释法，对13株皮炎外瓶霉、17株甄氏外瓶霉、13株丛梗孢外瓶霉、10株棘状外瓶霉及4株威尼克外瓶霉进行药物敏感性测试，所研究的药物包括伊曲康唑、氟康唑、酮康唑、二性霉素B及5-氟胞嘧啶。
一、实验结果1. 致病性外瓶霉对不同抗真菌药物的敏感性存在差异。
2. 二性霉素B对各类外瓶霉的抑菌效果均较好，最小抑菌浓度（MIC）较低。
3. 伊曲康唑对各类外瓶霉的抑菌效果次之，MIC较二性霉素B略高。
4. 氟康唑对各类外瓶霉的抑菌效果较差，MIC较高。
5. 酮康唑对各类外瓶霉的抑菌效果最差，MIC最高。
6. 5-氟胞嘧啶对各类外瓶霉的抑菌效果与氟康唑相似，MIC较高。
二、结论1. 二性霉素B是治疗致病性外瓶霉感染的首选药物，具有较高的疗效和安全性。
2. 伊曲康唑可作为二性霉素B的替代药物，但在治疗过程中需密切监测病情变化。
3. 氟康唑和酮康唑对致病性外瓶霉的抑菌效果较差，不推荐作为首选药物。
4. 5-氟胞嘧啶可作为氟康唑和酮康唑的替代药物，但在治疗过程中需密切监测病情变化。
5. 在临床用药过程中，应根据患者的具体情况和病原菌的药物敏感性，合理选择抗真菌药物。
6. 本实验结果为临床抗真菌药物的应用提供了理论依据，有助于提高治疗效果，降低耐药性。
7. 在今后的研究中，可进一步探讨不同药物联合应用对致病性外瓶霉的抑制作用，以期为临床治疗提供更多选择。
8. 同时，应加强对病原菌耐药性的监测，及时发现并应对耐药性问题的出现。
总之，本次实验结果为临床抗真菌药物的应用提供了有益参考，有助于提高治疗效果，降低耐药性，为患者提供更好的医疗服务。
第2篇一、实验背景随着抗生素的广泛应用，细菌耐药性问题日益严重。
为了解我国致病菌的耐药情况，本研究采用微量稀释法，对某医院临床分离的13株皮炎外瓶霉、17株甄氏外瓶霉、13株丛梗孢外瓶霉、10株棘状外瓶霉及4株威尼克外瓶霉进行了抗真菌药物敏感性试验，旨在为临床合理用药提供依据。
酵母样真菌鉴定流程及药敏试验方法
酵母样真菌鉴定流程及药敏试验方法英文回答：Identification of yeast-like fungi and the methods for antifungal susceptibility testing are essential in clinical laboratories for the diagnosis and treatment of fungal infections. In this response, I will explain the general process of yeast-like fungi identification and the methods used for antifungal susceptibility testing.Yeast-like fungi identification process:1. Specimen collection: The first step is to collect a clinical specimen from the patient, such as blood, urine, or respiratory secretions. The specimen should be collected using aseptic techniques to avoid contamination.2. Microscopic examination: The collected specimen is then examined under a microscope to identify the presence of yeast-like fungi. The characteristic morphology of yeastcells, such as budding or pseudohyphae formation, can help in the initial identification.3. Culture: If yeast-like fungi are observed in the microscopic examination, the specimen is cultured on appropriate agar media, such as Sabouraud dextrose agar or chromogenic media. The culture is incubated at an optimal temperature for yeast growth, typically around 30°C.4. Colony morphology: After incubation, the colonies that grow on the agar media are examined for their macroscopic characteristics, such as color, texture, and size. These characteristics can provide additional clues for identification.5. Biochemical tests: Various biochemical tests are performed to differentiate different species of yeast-like fungi. These tests may include carbohydrate assimilation tests, enzyme production tests, and other metabolic reactions. The results of these tests help in narrowing down the identification to a specific species.6. Molecular methods: In some cases, molecular methods such as polymerase chain reaction (PCR) or DNA sequencing are used for more accurate and rapid identification of yeast-like fungi. These methods can detect specific genetic markers or sequences that are unique to different species.Antifungal susceptibility testing methods:Once the yeast-like fungi are identified to the species level, it is important to determine their susceptibility to antifungal drugs. This helps in selecting the mosteffective treatment for the patient. The two commonly used methods for antifungal susceptibility testing are:1. Disk diffusion method: In this method, paper disks containing different antifungal drugs are placed on an agar plate that has been inoculated with the yeast-like fungi. The plate is incubated, and the zone of inhibition around each disk is measured. A larger zone of inhibitionindicates greater susceptibility to the drug.2. Broth microdilution method: This method involvespreparing a series of dilutions of antifungal drugs in a liquid growth medium. The yeast-like fungi are then added to each well of a microtiter plate containing the drug dilutions. The plate is incubated, and the minimum inhibitory concentration (MIC) of the drug, which is the lowest concentration that inhibits fungal growth, is determined.中文回答：酵母样真菌的鉴定和药敏试验方法对于临床实验室诊断和治疗真菌感染至关重要。
ROSCO纸片法与ATBFUNGUS3微量稀释法抗真菌药敏试验结果对比分析
ROSCO纸片法与ATBFUNGUS3微量稀释法抗真菌药敏试验结果对比分析段新科;缪应业;刘小圆;郭照静;刘洪强【摘要】@@ 近年来,真菌感染已成为白血病,淋巴瘤,长期使用免疫抑制、广谱抗生素,中心静脉插管,中性粒细胞减少,血液透析,骨髓或器官移植,机械通气等特殊人群的严重感染性疾病,是医院内感染的重要部分,抗真菌药物的广泛应用导致真菌的耐药率逐年上升,病原性酵母菌的药敏试验已显得极其重要.笔者采用ROSCO纸片法和ATBFUNGUS3微量稀释法,对200株临床分离的酵母菌做药敏测试,探讨其结果的一致性、准确性.现将结果报告如下.【期刊名称】《实用医药杂志》【年(卷),期】2011(028)007【总页数】2页(P605-606)【关键词】抗真菌药敏试验;ROSCO纸片法;ATBFUNGUS3微量稀释法;对比研究【作者】段新科;缪应业;刘小圆;郭照静;刘洪强【作者单位】467000河南平顶山,152医院感染科;467000河南平顶山,152医院检验科;中平能化集团职业病医院;467000河南平顶山,152医院检验科;467000河南平顶山,152医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R446.5近年来，真菌感染已成为白血病，淋巴瘤，长期使用免疫抑制、广谱抗生素，中心静脉插管，中性粒细胞减少，血液透析，骨髓或器官移植，机械通气等特殊人群的严重感染性疾病，是医院内感染的重要部分，抗真菌药物的广泛应用导致真菌的耐药率逐年上升，病原性酵母菌的药敏试验已显得极其重要。
笔者采用ROSCO纸片法和ATBFUNGUS3微量稀释法，对200株临床分离的酵母菌做药敏测试，探讨其结果的一致性、准确性。
现将结果报告如下。
1 资料和方法1.1 一般资料选择2008-01～06临床各科室送检的血液、痰、中段尿、白带、胸水、腹水等标本所分离到的200株酵母菌。
1.2 方法1.2.1 标准菌株白色念珠菌ATCC90028，克柔念珠菌ATCC6258，热带念珠菌ATCC750。
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（取0.2ml的生长对照菌液加入0.8mlRPMI液体培养基的菌液浓 度）
质控株
克柔念珠菌ATCC 6258 近平滑念珠菌ATCC 22019 白念珠菌ATCC 90028
白念珠菌ATCC 24433
微量肉汤法 氟康唑的稀释方法同常量法，但起始浓度为2×常量 法的浓度（即128µg/ml ），终浓度为0.25µg/ml 。
真菌体外药敏用培养基
E-test法 ：
在RPMI液体培养基中补充葡萄糖，使其终浓度为2%。
NCCLS纸片扩散法 ：
Mueller-Hinton 琼脂 补充2%葡萄糖和0.5μg/ml美蓝
丹麦ROSCO纸片扩散法 ：
改良的SHADOMY（ PH7.0）培养基 主要成分：酵母粉，葡萄糖，天冬氨酸，磷酸缓冲液等。
菌液制备 将受试菌在沙保罗培养基上转种，以保证其纯度和活性。用 0.85%的盐水制成酵母菌悬液，调整其浊度达到0.5麦氏 比浊标准（约为1~5×106CFU/ml）。
常量稀释法：用RPMI1640液体稀释2000倍
接种浓度约为0.5~2.5×103CFU/ml
微量稀释法：用RPMI1640液体稀释1000倍
真菌常用的体外药敏试 验方法比较
真菌药敏试验临床难以开展 的原因
1.按照NCCLS推荐的稀释法,操作繁琐
2.有些药只能用于某种菌的抗菌活性测定
3.纸
片法试验未得到NCCLS 认可
4.E试验价钱太贵
5.药敏孵育时间因菌种而不同
体外敏感试验与临床治疗相 关性
真菌体外药敏试验结果与口咽部真菌感染结果相关性 好
氟康唑：1-10孔分别为 100ul 菌悬液：1-10孔分别为 100ul
。37。℃37℃
64 32 16 8 4 2 1 .5 .25 .125 ＋ －
35 ℃
新型隐球菌72小时 ，
200ul菌悬液 200ulRPMI汤
其余菌株 48小时读取MIC结果
酵母菌的NCCLS M27-A各药物折点
粘膜及系统性感染： 氟康唑（除克柔念珠菌）
接种浓度约为1～5×103CFU/ml
E-test法和NCCLS纸片扩散法：用菌液浊度为0.5麦氏单位。
Rosco纸片扩散法：
1. 念珠菌：
0.5麦氏浊度，生理盐水1：10稀
(1~5×105CFU/ml)
2. 隐球菌属：
1.0麦氏浊度
3. 其它酵母菌： 0.5麦氏浊度，生理盐水1：1稀释
常量肉汤法(M27-A) 先将氟康唑粉末溶于蒸馏水，然后用配制好的RPMI1640液倍 比稀释，使其起始浓度为640µg/ml, 终末浓度为1.25µg/ml， 分装无菌洁净的12mm×75mm试管：
优点：有较好的重复性和稳定性
E-test法 0.5麦氏比浊液 （约为1~5×106CFU/ml）。
菌悬液均匀涂布于药敏板上
35 ℃培养24小时读取结果
光滑念珠菌 新型隐球菌 等生长较慢的菌种需适当延长培养时间。
E-test法评价
准确性高,且操作简便 E-test法得到的MIC值在某些菌种中要低于NCCLS推荐
的常量肉汤稀释法测得的MIC 20%浓度CO2的环境中，可使此方法的结果更真实反
映药物对致病菌的敏感性
缺点：1.价格太高 每片40-50元
2. 吡咯类MIC终点不好确定
酵母菌纸片扩散法敏感试验
NCCLS M44-P. 2003
培养基： Mueller-Hinton琼脂
补充 2％
Glucose
0.5ug/ml Methylene blue dye
真菌体外药敏用培养基
常量肉汤和微量肉汤法RPMI1640液制备：
RPMI
10.4g
MOPS（三氮吗啡啉丙磺酸）
34.53 g
蒸馏水900ml溶解后，用1M NaOH调节PH至7.0（25℃）， 用蒸馏水 溶至1000ml，
高压灭菌后，冷却至50 ℃
加入RPMI1640用0.22µm滤膜抽滤除菌，4℃保存。
64 32 16 8 4
2 1 0.5 .25 .125 ＋ －
前10管： 0.2ml氟康唑＋1.8ml菌液
念珠菌属 35 ℃孵育48小时
新型隐球菌 72小时 读取MIC结果
2ml菌液 1.8ml1640
常量稀释法 药敏结果判定
氟康唑，伊曲康唑，两性霉素为100%抑制 其他唑类药物为80%抑制
S＝Susceptible SDD=Susceptible－Dose Dependent R=Resistant
酵母菌纸片扩散法敏感试验
NCCLS M44-P. 2003
氟康唑对标准菌株 24h抑菌环直径（mm)的质控允许范围
标准菌株
氟康唑25ug
沃尔康唑1ug
白念珠菌 ATCC90028 近平滑念珠菌 ATCC22019 热带念珠菌 ATCC750 克柔念珠菌 ATCC6258
粘膜感染： 伊曲康唑
粘膜及系统性感染： 5-氟嘧啶
敏感：
中介： 耐药：
敏感：
中介： 耐药：
敏感：
中介： 耐药：
≤ 8µg/ml
－ ≥64µg/ml
≤0.125µg/ml
－ ≥1µg/ml
≤4µg/ml
8~16µg/ml ≥32µg/ml
酵母菌E-test法
瑞典AB Biodisk MIC
对于深部的真菌感染，抗真菌药物敏感性试验同临床 治疗的相关性还有待进一步证实
体外敏感试验没有考虑到真菌对抗真菌药物在体内的 动力学和复杂的生物学作用
真菌体外药物敏感试验方法
NCCLSM27-A：常量肉汤稀释法，微量肉汤稀释法 E-test法 NCCLS M44-P纸片扩散法 (仅限氟康唑) 丹麦Rosco纸片扩散法(NCCLS未认可)
PH7.2-7.4
优点：有较好的重复性和稳定性
操作简便，价廉
缺点：目前只限氟康唑
NCCLS纸片扩散法
0.5麦氏比浊标准（约为1~5×106CFU/ml）。
菌悬液均匀涂布于药敏板上 步骤同细菌敏感试验操作一致， 35～37℃孵育18～24小时， 对于生长缓慢的菌株如新型隐球菌，菌液需 调至1麦
氏单位，孵育48小时， 光滑念珠菌也需孵育48小时读取抑菌环直径。
酵母菌纸片扩散法敏感试验
NCCLS M44-P. 2003 氟康唑解释标准和相应的最小抑菌浓度
抑菌环直径 （mm)
MIC （ug/ml)
敏感（S)
>=19
<=8
剂量依赖性敏感 （SDD) 耐药（R)
15-18 <=14
16-32 >=64