噬菌体抗体库技术
噬菌体展示技术的原理及应用
8、 DNA结合蛋白：
锌指蛋白是一类 DNA 结合小肽结构物，这些结 构含有锌，能用于构建一个大的蛋白区域，去识别 和结合特殊的 DNA 序列。噬菌体展示技术也可以用 于创造一个大的、具有识别不同 DNA 序列的 锌指 的多肽库。利用这个多肽库，可以研究有关氨基酸 序列与 DNA 结合位点之间的识别规则，可以通过设 计 锌指多肽去控制基因的表达，比如抑制小鼠细胞 系中的癌基因，也可以启动表达质粒的基因，或干 扰病毒感染插入的片段是从 某些组织或细胞中抽提的mRNA 的互补DNA 片 段,它用来筛选与受体特异性结合的片段。一般可 利用M13 噬菌体或其他表 达一部分真核蛋白,而M13 噬菌体和其他E. coli噬 菌体所能表达的真核蛋白更少。研究表明,没有一 个展示系统能够表达所有的真核细胞蛋白。无论 如何,噬菌体表面cDNA 库的表达将是研究蛋白质 之间相互作用的有用工具。cDNA 库的噬菌体展 示提供了一个应用免疫学方法进行酶：
例：碱性磷酸酶，蛋白水解酶类，等等
6、底物与抑制剂：
主要是蛋白酶的底物和其抑制剂。
7、信息传递研究:
利用噬菌体展示多肽库，发现了一些受体，如 凝血致活酶、黑皮质素受体、CD80 和一个 Hantaviral 受体；受体的配体， 如血管促生素、 αbungarotoxin， 和一些大蛋白分子中的折叠区域， 如 SH2、SH3 和 WW 区域。从多肽库中可分离 到与天然激素相似的、与受体结合的高亲和力的 多肽, 因此用完整细胞可以从多肽库中找到受体的 高选择性配体。在不知道任何有关的受体和配体 信息的情况下，用完整细胞和组织或动物，可筛 选到特异与靶组织结合的多肽和蛋白。
一、发展简史
Dulbecco等提出了在病毒表面展示外源抗原 决定簇和肽的概念。 1985年Smith — 首次利用基因工程技术将 EcoRⅠ内切酶的部分基因片段(171 bp和132 bp)与 pⅢ基因融合，获得的重组噬菌体可在体外稳定增 生，表达产物能被抗EcoRⅠ内切酶抗体所识别.。 1988年Parmley — 将已知抗原决定簇与噬菌体 PⅢ N端融合呈现在其表面，并提出通过构建随机 肽库可以了解抗体识别的抗原决定簇表位的设想.。 1990年McCafferty — 用噬菌体展示技术筛选 溶菌酶的单链抗体成功使噬菌体展示技术进入一 个广泛应用的时代。
噬菌体展示筛选抗体技术介绍
探索生物医学中的创新应用
目录
01 噬菌体展示筛选抗 体概述
06 噬菌体展示抗体的 发展前景
02 噬菌体展示技术原 理
03 噬菌体展示抗体筛 选流程
0Hale Waihona Puke 噬菌体展示抗体的 应用案例05 噬菌体展示抗体的 优点与缺点
01 噬菌体展示筛选抗体 概述
噬菌体展示筛选抗体概述
1 噬菌体展示筛选抗体技术介绍
疗效果并降低副作用。
05 噬菌体展示抗体的优 点与缺点
噬菌体展示抗体的优点与缺点
噬菌体展示抗体的优 势
噬菌体展示技术能够快速、 高效地筛选出特异性抗体， 大大缩短了实验周期，提高 了研究效率。
噬菌体展示抗体的局 限性
噬菌体展示技术虽然筛选速 度快，但存在假阳性率高的 问题，需要进一步的验证和 优化。
噬菌体展示筛选抗体技术是一种利用噬菌体表面
噬菌体展示筛选抗体的优势 2 展示特定蛋白质，通过生物淘选方法寻找与目标
噬菌体展示筛选抗体技术具有高度灵活性和多样
抗原特异性结合的抗体的方法。
性，能够快速、高效地筛选到具有高亲和力和特
异性的抗体，为免疫学研究和药物开发提供了重
要工具。 3 噬菌体展示筛选抗体的应用前景
噬菌体展示抗体的优 势
噬菌体展示技术具有高度灵 活性和多样性，可以快速、 大量地筛选出特异性强、亲 和力高的抗体，为生物医学 研究和药物开发提供了重要 工具。
噬菌体展示抗体的应 用前景
噬菌体展示抗体技术在肿瘤 治疗、免疫诊断、疫苗研发 等领域具有广泛应用前景， 有望为人类健康事业做出重 要贡献。
谢谢大家
噬菌体展示筛选抗体技术在疾病诊断、治疗和预
防等方面具有广泛的应用前景，包括癌症治疗、
生物技术制药模拟题答案最终版
一、名词解释生物技术药物:生物技术药物是指采用DNA重组技术或其他创新生物技术生产的治疗药物。
透析培养:透析培养是对微生物培养用透析膜包裹，并使外部有新鲜培养液流动着的一种培养方法。
单克隆抗体:单克隆抗体是由淋巴细胞杂交瘤产生的、只针对复合抗原分子上某一单个抗原决定簇的特异性抗体。
次级代谢产物:次级代谢产物是指微生物生长到一定阶段才产生的化学结构十分复杂、对该生物无明显生理功能，或并非是微生物生长和繁殖所必需的物质，如抗生素、毒素、激素、色素等。
固定化酶:用物理或化学方法处理水溶性的酶使之变成不溶于水或固定于固相载体的但仍具有酶活性的酶衍生物。
生物药物:生物药物是指运用生物学、医学、生物化学等的研究成果，综合利用物理学、化学、生物化学、生物技术和药学等学科的原理和方法，利用生物体、生物组织、细胞、体液等制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品。
生物药物，包括生物技术药物和原生物制药。
血液成分制品:系指单用物理方法自全血中分离制备的成分，包括红细胞、白细胞、血小板和血浆。
组织工程:应用生命科学和工程学的原理与技术，在正确认识哺乳动物正常及病理两种状态下组织结构与功能关系的基础上，研究、开发用于修复、维护和促进人体各种组织或器官损伤后功能和形态生物替代物的学科。
抗体酶:20世纪80年代以来出现的一种具有催化活性的蛋白质，是利用生物学和化学的成果在分子水平上交叉渗透研究的产物；其本质上是免疫球蛋白，只是在其易变区被赋予了酶的属性，因此抗体酶又称为催化抗体。
二、选择题1. 世界上采用基因工程生产的第一个传染性疫苗是（ A ）A 乙肝疫苗B 霍乱疫苗C 甲肝疫苗D 艾滋病疫苗2. 单克隆抗体杂交瘤细胞与抗体性状鉴定的主要方法是（ A ）A 染色体分析 B凝胶电泳 C 免疫荧光技术 D 层析3．下列不属于影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素是：（ D ）A 外源基因的拷贝数B 外源基因的表达效率C 表达产物的稳定性D 宿主细胞的容量4. cDNA法获得目的基因的优点是（ B ）A 成功率高B 不含内含子C 操作简便D 表达产物可以分泌5. 菌体生长所需能量（ A ）菌体有氧代谢所能提供的能量时，菌体往往会产生代谢副产物乙酸。
噬菌体抗体库技术：靠近理想的现实
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年 代初 期 ，Ｗｉｔｒ 首 次 报 道 利 用 噬 苗 体 抗 体 库 技 术 在 丝 ｎｅ 等 状噬 菌体 表 面 呈 示 免 疫 小 鼠脾 脏 Ｂ细 胞 的 垒 套 抗 体 基 因 ， 从 中筛 选得 劲 针 对 ｐ ｏ （ 一ｐ ｅ ｙｏａｏ一 ５ ｏ ｅ 的 特 ｈ Ｘ ２ ｈ ｎ ｌ ｚ￣ 一 ｎ ） ｘ 异性 抗体 。此 后 ，利 用 噬 菌 体 呈 示 技 术 构 建抗 体 库 筛 选 ］ 特 异 性 抗体 全 面 展 开 并 取 得 巨 大 进 展 ｌ ｇ 叫 噬苗 体 抗 体 库 技 术 包 括 两 个 内窖 ： 先 是插 人 到 丝 状 噬 首 菌体 病 毒 颗 粒 结 构 基 因（ Ⅲ或 ｇ 上 适 当位 点 的外 源 片 段 ， ｇ Ⅶ） 即 抗体 可变 区（ 区 ） 因 ， 一 个 由轻 链 和 重 链 基 因随 机 组 Ｖ 基 是 合 的氓 合体 ｝ 次 ， 人 的 抗 体 可 变 区 基 因 船 够 表 达 呈 示 于 其 插 噬 菌体 表面 ， 利用 特异 性 抗 原 对 呈 示 于 噬 菌体 表 面 的 蛋 白进
Ａ ｍｔａ ｔ Ａｎ ｉ ｏ ｈ ｇ ｉｐ ａ ｅ ｈ ｏ ｏ ｙ ｉ ａ ｎ ｗ ｉ ｒ ｒ ｃ ｎ ｌｇ ｎ ｔ ｅａ ｅ ｆｇ ｎ ｎ ｉｅ ｒｎ ｎ ｉｏ ｉｓｉ ｌ ｒ ｃ ： ｔ ｄｙ ｐ ａ ｅｄ ｓ ｌｙ ｔｃ ｎ ｌｇ ｓ ｅ ｌ ａ ｙ ｔ ｈ ｏ ｏ ｙ ｉ ｈ ｒ ａｏ ｅ ｅｅ ｇ ｎ ｅ ｉｇ ａ ｔｂ ｄ ｅ ｎ ｂ ｂ ｅ ｒ ｃ ｎ ｅ ｒ ． ｉ ｔ ｃ ｎ ｌｇ ｋ ｓ ｔ ｅ ｗｏ ｋ ｔ ｅ ｐ ｃｆ ｎ ｉ ｄ ｒ ｆｉｉｎ ｌ ｙ ｃ ｍｂ ｎ ｐ ｃ ｆ ｉｄ ｎ ｅ ｅ ｔｙ ａ ｓ Ｔｈ ｓ ｅ ｈ ｏ ｏ ｙ ｍａ ｅ ｈ ｒ ｏ ｇ ｔｓ ｅ ｉｉ ａ ｔ ｃ ｏ ｂ ｙ ｍｏ ｅ ｅ ｆ ｅ ｔｙ ｂ ｏ ｃ ｉｇ ｓ ｅ ｉ ｃ ｂ ｎ ｉ ｉ ｇ
免疫试题库(附答案)
免疫试题库（附答案）一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、制备抗血清首次与二次之间免疫接种的间隔时间通常为A、10-20dB、5-10dC、15-30dD、40-50dE、3-5d正确答案：A2、用于包被斑点金免疫层析试验载体膜质控条(线)的物质是A、人白蛋白B、胶体金颗粒C、待测抗原标准品D、胶体金标记抗体E、抗免疫金抗体正确答案：E3、噬菌体抗体库技术是利用λ噬菌体载体表达A、FcB、FabC、胸腺嘧啶核苷D、CD分子E、V-D-J正确答案：B4、免疫印迹法常用于A、补体测定B、甲胎蛋白的测定C、免疫球蛋白含量的测定D、抗HIV的确认试验E、细胞因子的测定正确答案：D5、下列细胞因子的英文缩写错误的是A、白细胞介素-ILB、肿瘤坏死因子-TNFC、干扰素-MCFD、集落刺激因子-CSFE、红细胞生成素-EPO正确答案：C6、下列成分有可能与大分子抗原结合而出现肉眼可见反应的是A、Fc段B、Fab段C、F(ab’)2段D、IgG的L链E、IgG的H链正确答案：C7、下列哪种免疫球蛋白在特应性过敏症患者血清中浓度可升高A、IgGB、IgMC、IgDD、IgAE、IgE正确答案：E8、补体不具备下列哪种作用A、溶解细胞作用B、过敏毒素作用C、中和毒素作用D、趋化作用E、调理作用正确答案：C9、慢性排斥反应的主要原因是A、CD4T细胞/巨噬细胞B、抗ABO血型抗体或HLA-Ⅰ类分子抗体C、NK细胞D、抑制细胞的活化E、对HLA抗原的耐受正确答案：A10、玻片法做ABO血型鉴定，属于A、直接凝集反应B、协同凝集反应C、间接血凝反应D、间接凝集抑制反应E、Coombs试验正确答案：A11、1分子亲和素可结合几分子生物素A、2分子B、1分子C、8分子D、3分子E、4分子正确答案：E12、能特异性刺激粒细胞集落形成单位生长的是A、EPOB、G-CSFC、M-CSFD、GM-CSFE、TPO正确答案：B13、在临床检验室内质量控制中，如果质控结果出现失控信号，下列做法正确的是A、增加质控规则，提高误差检出B、发出患者结果，不寻找原因C、增加质控的个数，提高误差检出D、寻找失控的原因，并采取一定的措施加以纠正，然后重新测定，再决定是否发出报告E、先发出患者结果，然后寻找原因正确答案：D14、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的病原体是A、HBVB、HCVC、HIVD、HPVE、HSV正确答案：C15、初次应答时，产生的抗体具有哪种特点A、抗体维持时间较长B、IgG与IgM几乎同时产生C、为低亲和性抗体D、抗体含量较高E、以IgG为主正确答案：A16、特异性体液免疫应答的介导细胞主要是A、T淋巴细胞B、B淋巴细胞C、巨噬细胞D、郎罕细胞E、TH1细胞正确答案：B17、ELISA双抗原夹心法检测抗体时，固相载体包被物是A、未标记的已知抗原B、未标记的已知抗体C、未标记的抗抗体D、酶标记的抗原E、酶标记的抗体正确答案：A18、类风湿性关节炎患者滑膜液中常检出的类风湿因子是A、同IgG轻链发生反应的IgMB、同IgG重链发生反应的IgMC、同细菌抗原发生反应的IgED、同胶原蛋白发生反应的IgE、同DNA发生反应的IgG正确答案：B19、不属于细胞因子生物学活性的是A、增强抗感染和细胞杀伤效应B、促进靶细胞的增殖和分化C、促进炎症过程，影响细胞代谢D、促进或抑制其他细胞因子和膜表面分子的表达E、中和及溶解病毒作用正确答案：E20、检测抗血细胞抗体主要用于检测超敏反应的类型是A、Ⅱ型B、Ⅳ型C、Ⅴ型D、Ⅰ型E、Ⅲ型正确答案：A21、关于抗核抗体下列选项中正确的是A、抗核抗体有器官特异性B、抗核抗体有种属特异性C、是以自身抗原作为靶抗原的一组自身抗体的总称D、抗核抗体泛指各种核成分的抗体E、抗核抗体只能与人的细胞核起反应正确答案：D22、人T细胞可根据下列哪个特征区别于B细胞及其它细胞A、形态B、Fc受体的存在C、胞浆颗粒的是否存在D、CD2E、Ig表面标志正确答案：D23、完全抗原的特征是A、有免疫原性，无反应原性B、无免疫原性和反应原性C、必须与载体结合才具有免疫原性D、有反应原性，无免疫原性E、有免疫原性和反应原性正确答案：E24、直接法荧光抗体技术检查抗原是将荧光素标记在A、特异性抗体B、抗补体抗体C、抗原D、抗人IgGE、补体正确答案：A25、下列免疫学测定方法中敏感性最高的是A、沉淀反应B、凝集反应C、ELISAD、放射免疫测定E、补体结合试验正确答案：D26、巨噬细胞产生的主要细胞因子是A、IL-5B、IL-1C、IL-4D、IL-10E、IL-2正确答案：B27、Percoll分离液的主要成分是A、聚蔗糖B、聚乙二醇C、聚乙烯吡咯烷酮D、经聚乙烯吡咯烷酮处理的硅胶颗粒E、泛影葡胺正确答案：D28、下列哪一项不属于粘附分子的功能A、参与体液免疫应答B、在肿瘤转移过程中发挥重要作用C、参与细胞的生长与分化D、参与细胞的信号转导E、参与细胞的伸展与移动正确答案：A29、将外毒素转变为类毒素A、可减弱毒素的毒性B、可增强毒素的免疫原性C、可增强吞噬细胞的吞噬活性D、可降低毒素的免疫原性E、可增强毒素的毒性正确答案：A30、CD4的功能是A、诱导B细胞参与免疫应答B、起正调节作用C、是HIVgp120受体D、抑制T细胞活化E、构成BCR-IgαIgβ复合体正确答案：C31、膜载体的酶免疫测定最常用的载体为A、硝酸纤维素膜B、华特曼滤纸C、分子筛D、醋酸纤维膜E、聚丙烯酰胺正确答案：A32、抗原抗体反应的特点是A、抗原抗体结合是不可逆的B、抗原抗体结合后仍可与其他抗原结合C、解离后抗体不能再与抗原结合D、解离后抗体活性和特异性不变E、解离后抗原抗体结构活性改变正确答案：D33、属于肿瘤主动生物治疗方法的是A、LAK细胞治疗B、化疗C、TIL治疗法D、接种肿瘤疫苗E、放射性核素标记mAb正确答案：D34、用针对哪一种抗原的单克隆抗体可鉴定人的Tc细胞A、CD8B、CD4C、CD3D、gh-2E、Lyt-1正确答案：A35、较长时间(4-5年)保存抗体，最好采用A、-30℃保存B、-10℃保存C、-20℃保存D、4℃保存E、真空干燥保存正确答案：E36、抗原抗体反应特点不包括A、电离性B、特异性C、比例性D、阶段性E、可逆性正确答案：A37、能帮助T细胞将TCR与抗原肽结合的信息传入细胞内的分子是A、CD2B、CD3C、CD4D、CD21E、CD19正确答案：B38、终点法散射比浊分析应保证A、抗体过量B、抗原过量C、抗原：抗体为2:1D、抗原:抗体为1：2E、抗体抗原处于最适比正确答案：A39、初次免疫应答时产生抗体的特点是A、为高亲和性抗体B、抗体效价高C、IgG为主D、以IgM为主E、持续时间长正确答案：D40、载体至少连接多少数目以上的半抗原才能有效地产生抗体A、30B、10C、50D、40E、20正确答案：E41、甲、乙两种抗原都能与某一抗体发生特异性结合反应，这两种抗原相互称为A、半抗原B、完全抗原C、TD-AgD、TI-AgE、共同抗原正确答案：E42、荧光素发射荧光属于A、电化学发光B、偏振光C、化学发光D、生物发光E、光照发光正确答案：E43、辅助性T细胞表达的CD抗原是A、CD4B、CD8C、CD19D、CD35E、CD40正确答案：A44、下列为NK细胞特有表面抗原的是A、CD2B、CD16C、CD56D、CD39E、无特异表面抗原正确答案：C45、TCR、BCR可变区基因重排的机制是A、7-12-9与7-12-9环出B、7-23-9与7-23-9环出C、7-12-9与7-23-9环出D、7-12-9与9-23-7环出E、内含子之间环出正确答案：C46、沉淀反应中如抗体过量将出现A、沉淀物增多B、后带现象C、等价带现象D、前带现象E、假阳性正确答案：D47、HLA分子中与移植免疫的关系最为重要的是A、HLA-AB、HLA-BC、HLA-CD、HLA-DRE、HLA-DP正确答案：D48、参与免疫溶血反应的成分是A、红细胞、补体B、红细胞、抗红细胞抗体、补体C、白细胞、抗白细胞抗体、补体D、红细胞、抗红细胞抗体E、抗红细胞抗体、补体正确答案：B49、肿瘤免疫学检验试图通过免疫学方法检测的物质是A、补体B、细胞因子受体C、细胞因子D、肿瘤标志物E、免疫球蛋白正确答案：D50、CD8的配体是A、MHCII类分子B、MHCI类分子C、B7D、CD28E、CD40正确答案：B51、T细胞表面不表达的分子是A、CD2B、CD3C、CD28D、CD80(B7)E、TCR正确答案：D52、HLA-I类抗原A、主要存在于B细胞、单核巨噬细胞和部分活化T细胞表面B、只能用混合淋巴细胞培养法检测，故又称LD抗原C、其重链由第6号染色体上HLA-I类基因编码D、由α和β两条糖肽链借非共价键连接组成E、为TH细胞活化的协同刺激分子正确答案：C53、常用于诊断小细胞肺癌的酶类肿瘤标志物是A、碱性磷酸酶B、乳酸脱氢酶C、神经元特异性烯醇化酶D、谷胱甘肽-S-转移酶E、酸性磷酸酶正确答案：C54、关于NK细胞错误的是A、来源于骨髓B、CP16、CD56是其特有标志C、表达TCR-CD3复合物D、大多数为CD4-CD8-E、识别CD1分子提呈的脂类或糖类抗原正确答案：B55、最先被用作免疫标记技术的标记物是A、酶B、放射性核素C、荧光素D、激素E、生物素正确答案：C56、抗原抗体反应中，何种条件形成肉眼可见的免疫复合物A、抗体显著多于抗原B、抗原略多于抗体C、抗原抗体比例适当D、抗原显著多于抗体E、抗体略多于抗原正确答案：C57、作为荧光显微镜光源不可能是A、高压汞灯B、紫外线C、氙灯D、卤素灯E、氚灯正确答案：B58、参与体液免疫应答的主要免疫细胞是A、淋巴细胞B、T细胞C、B细胞D、吞噬细胞E、粒细胞正确答案：C59、哪项不是初次应答的规律A、抗体亲和力高B、潜伏期长C、抗体水平低D、产生的抗体以IgM为主E、抗体维持时间短正确答案：A60、有关BCR和抗体描述正确的是A、1个B细胞的BCR和分泌的抗体特异性不同B、二者编码的基因相同C、不具有类别转换D、基因重排发生于免疫应答阶段E、二者可变区不同正确答案：B61、将人IgG给家兔免疫后可得到A、抗γ链抗体B、抗κ链抗体C、抗λ链抗体D、抗Fc段抗体E、以上均可正确答案：E62、艾滋病免疫学检查一般包括A、人类免疫缺陷病毒抗体和B细胞B、T细胞和B细胞C、人类免疫缺陷病毒和其他病毒抗体D、人类免疫缺陷病毒抗体和T细胞E、细菌和真菌正确答案：D63、属于被动免疫治疗的是A、TILB、应用短小棒状杆菌疫苗C、接种狂犬疫苗D、接种肿瘤疫苗E、使用卡介苗正确答案：A64、关于化学发光酶免疫分析不正确的是A、以过氧化物酶为标记酶B、加入发光剂提高敏感度和稳定性C、以邻苯二胺为底物D、化学发光剂作为酶反应底物E、是将发光系统与免疫反应相结合的技术正确答案：C65、关于特异性抗体的鉴定叙述正确的是A、抗体特异性鉴定常采用凝集反应B、抗体效价鉴定常采用单向琼脂扩散试验C、抗体效价鉴定常采用酶联免疫法D、抗体纯度鉴定常采用双向免疫扩散法E、抗体纯度鉴定常采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法正确答案：E66、酶免疫分析技术中常用于标记的酶有A、辣根过氧化物酶和过氧化氢酶B、碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶C、β半乳糖苷酶D、过氧化氢酶E、B和C正确答案：E67、IgE分子的哪个部位与肥大细胞膜上的相应受体结合A、Fab段B、CH2C、H链可变区D、H链恒定区E、Fc段正确答案：E68、AIDS患者的T细胞亚群检测一般会出现A、CD4↓CD4/CD8↓B、CD8↓CD4/CD8↑C、CD4↑CD4/CD8↑D、CD8↑CD4/CD8↓E、CD3↑CD4/CD8↑正确答案：A69、导致慢性移植排斥反应的主要原因是A、微生物感染B、再灌注损伤C、迟发型超敏反应D、抑制剂的应用E、局部缺血正确答案：C70、GVHR的中文全称为A、移植物抗宿主反应B、荧光偏振免疫分析C、补体依赖的细胞毒作用D、宿主抗移植物反应E、人类白细胞抗原正确答案：A71、细胞毒性T细胞的主要功能是A、辅助B细胞分化成抗体产生细胞B、放大细胞免疫应答C、促进杀伤肿瘤细胞、病毒感染细胞D、特异性溶解靶细胞E、与NK细胞协同反应正确答案：D72、检测浆膜腔积液何种肿瘤标志物有助于胰腺癌的诊断A、CEAB、AFPC、HCGD、CA199E、CA724正确答案：D73、CD8抗原存在于A、辅助性T淋巴细胞表面B、细胞毒性T淋巴细胞表面C、吞噬细胞表面D、所有成熟的T淋巴细胞表面E、B淋巴细胞表面正确答案：B74、不属于Ⅱ型变态反应的是A、新生儿溶血症B、特发性血小板减少性紫癜C、自身免疫性溶血性贫血D、输血反应E、过敏性休克正确答案：E75、关于小分子抗体的叙述，错误的是A、采用干细胞技术B、不能通过胎盘C、属基因工程抗体D、易于穿透血管和组织E、不含Fc段正确答案：A76、CD3主要分布在A、DCB、APCC、胸腺细胞D、浆细胞E、成熟T细胸正确答案：E77、属于肿瘤糖链抗原的是A、AFPB、PSAC、CEAD、CA19-9E、APT正确答案：D78、“新生儿溶血症”多发生于A、Rh+的胎儿+Rh+的母体B、Rh-的母体+Rh+的胎儿C、Rh-的胎儿+Rh+的母体D、Rh+的母体E、Rh-的母体正确答案：B79、制备单克隆抗体最常用的细胞融合剂为A、HATB、8-AGC、PEGD、PHAE、BSA正确答案：C80、补体系统被激活后形成的膜攻击复合物是A、C1-C9B、C3bBbC、C5b6789D、C4b2bE、C4b2b3b正确答案：C81、关于IRMA的说法正确的是A、反应中加入过量的标记抗原B、反应中加入定量的标记抗原C、反应中加入过量抗体D、反应中加入过量的标记抗体E、反应中加入定量的标记抗体正确答案：D82、下列哪一个HLA功能区在人类中具有相同的抗原性A、胞浆区B、HLA穿膜区C、肽结合区D、Ig样区E、以上均不是正确答案：D83、关于淋巴细胞分离的描述错误的是A、Ficoll分离液法是一种单次差速密度梯度离心的分离法B、温度可影响Ficoll分离的细胞收率C、为获得较纯的单个核细胞，需根据待分离细胞的比重调整分离液的比重D、采用贴壁黏附法分离到的淋巴细胞群中不会损失B细胞E、Percoll分离是一种连续密度梯度离心分离法，是纯化单核细胞和淋巴细胞的一种较好的方法正确答案：D84、与抗体产生有关的细胞是A、粒细胞B、NK细胞C、巨噬细胞D、Tc细胞E、红细胞正确答案：C85、不属于杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理的是A、采用转基因技术B、利用代谢缺陷补救机制筛选出杂交瘤细胞C、杂交瘤保持双方秦代细胞的特性D、杂交瘤细胞可以无限增殖E、淋巴细胞产生抗体的克隆选择学说正确答案：A86、在电场作用下的加速度的单向扩散试验是A、火箭电泳B、对流免疫电泳C、免疫电泳D、免疫固定电泳E、区带电泳正确答案：A87、制作荧光抗体染色标本最关键的是A、力求保持抗原的完整性B、切片尽量薄些C、采用石蜡切片或冷冻切片法D、材料要新鲜并立即处理及时冷藏E、标本需要固定正确答案：A88、当怀疑患有性联丙种球蛋白缺乏症时应首先考虑进行A、SmIg的检测B、CD的测定C、同种血型凝集素测定D、Ig浓度测定E、特异性抗体产生能力的测定正确答案：D89、少量多次的抗毒素脱敏疗法的基本原理是A、稳定肥大细胞膜，阻止其脱颗粒B、逐步消耗肥大细胞上的IgEC、舒张平滑肌D、中和IgDE、以上都是正确答案：B90、对死疫苗叙述错误的是A、需多次接种B、注射的局部和全身反应较重C、能诱导细胞免疫形成和特异性抗体产生D、用免疫原性强的病原体灭活制成E、保存比活疫苗方便正确答案：C91、参与Ⅱ型超敏反应的细胞是A、嗜碱性粒细胞、NK细胞B、肥大细胞、巨噬细胞C、NK细胞、巨噬细胞D、嗜碱性粒细胞、巨噬细胞E、肥大细胞、NK细胞正确答案：C92、牛痘苗的发明者是A、德国BehringB、法国PasteurC、德国KochD、澳大利亚BurnetE、英国Jenner正确答案：E93、免疫对机体是A、有利也有害B、正常条件下有利，异常条件下有害C、有利的D、有利无害E、有害的正确答案：B94、乳糜泻病人与下列哪种HLA抗原呈关联A、HLA-B17B、HLA-B8C、HLA-DR2D、HLA-DR3E、HLA-B35正确答案：D95、自身抗体检测对某些自身免疫病诊断的价值正确的是A、敏感性低，特异性低B、敏感性低，特异性强C、相关性不明显D、敏感性高，特异性强E、敏感性高，特异性较低正确答案：E96、在荧光抗体技术中，常用的荧光素为A、FITCB、RB200C、TRITCD、PEE、R-RE正确答案：A97、抗原的特异性取决于A、抗原结构的复杂性B、抗原的化学组成C、抗原分子量的大小D、抗原决定簇的性质、数目及空间构型E、抗原表位的数量正确答案：D98、Ficoll 淋巴细胞分离法是一种A、连续密度梯度离心法B、差速密度梯度离心法C、离子交换层析法D、自然沉降法E、亲和层析法正确答案：B99、抗CD4单克隆抗体不可检出下列哪些细胞A、TH0B、TH1C、TcD、TDTHE、TH2正确答案：C100、ELISA操作过程中导致空白对照孔显色加深的主要原因是A、加样不准B、保温时间不准C、洗涤不彻底D、酶标抗体变性，酶脱落E、照射时间长正确答案：C。
免疫学试题库含答案
免疫学试题库含答案一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、双向琼脂扩散试验中，抗原含量较大，反应沉淀线应A、沉淀线弯向抗原孔B、在两孔之间C、靠近抗体孔D、呈多条沉淀线E、靠近抗原孔正确答案：C2、关于ADCC效应说法错误的是A、可由NK细胞介导B、是抗体依赖性细胞介导的细胞毒效应C、依赖IgG的参与D、不能直接杀伤靶细胞E、可以直接杀伤靶细胞正确答案：D3、用间接法免疫荧光技术检测组织中的抗原，应将荧光素标记A、抗原B、相应抗体C、抗免疫球蛋白抗体D、抗原-抗体复合物E、抗C3抗体正确答案：C4、作为前列腺癌辅助诊断项目是A、CA125B、CA199C、CA15-3D、NSEE、PSA正确答案：E5、体外抗原抗体反应表现为A、沉淀反应B、毒素中和反应C、吞噬反应D、杀菌反应E、超敏反应正确答案：A6、与类风湿关节炎关系较密切的自身抗体是A、ANAB、抗ds-DNAC、抗Sm抗体D、抗DNP抗体E、RF正确答案：E7、外周血单个核细胞是指A、中性粒细胞以外的细胞B、单核细胞和淋巴细胞C、淋巴细胞D、吞噬细胞E、单核细胞正确答案：B8、产生免疫球蛋白的细胞是A、T细胞B、B细胞C、NK细胞D、浆细胞E、白细胞正确答案：D9、人类T细胞具备的表面标志有A、CD2、CD3B、FcrR、CD19C、C3bR、LAF-3D、CD19、LPS受体正确答案：A10、属于肿瘤主动生物治疗方法的是A、LAK细胞治疗B、化疗C、TIL治疗法D、接种肿瘤疫苗E、放射性核素标记mAb正确答案：D11、皮肤迟发型超敏反应病人的皮损部位活体组织学检查，其特点为A、动脉壁有Ig和补体沉积B、小血管周围有单个核细胞浸润C、水肿D、表皮坏死E、中性粒细胞浸润正确答案：B12、GVHR的中文全称为A、移植物抗宿主反应B、补体依赖的细胞毒作用C、荧光偏振免疫分析D、宿主抗移植物反应E、人类白细胞抗原正确答案：A13、仅与载体结合在一起才有免疫原性的物质称为A、亲和素B、半抗原C、佐剂D、变应原E、TI-Ag正确答案：B14、在放射免疫分析检测中，B/B+F表示(注：B为结合态的标记抗原，F 为游离态的标记抗原A、结合态的标记抗原与总的标记抗原之比B、结合态的标记抗原与游离的标记抗原之比C、总标记抗原与抗原抗体复合物之比D、结合态的抗原与总的抗体之比E、结合态的抗原与总的抗原之比正确答案：A15、先天性胸腺发育不全是属于A、T细胞缺陷病B、B细胞缺陷病C、联合免疫缺陷病D、吞噬细胞缺陷病E、补体缺陷正确答案：A16、大肠肝菌或小牛肠粘膜提取的是A、HRPB、APC、β半乳糖苷酶D、过氧化氢酶E、酸性磷酸酶正确答案：B17、TMB经HRP作用后，加入硫酸终止反应后变为A、绿色B、红色C、橙黄色D、黄色E、蓝色正确答案：D18、抗原抗体反应中，何种条件形成肉眼可见的免疫复合物A、抗体略多于抗原B、抗原显著多于抗体C、抗体显著多于抗原D、抗原抗体比例适当E、抗原略多于抗体正确答案：D19、良性单克隆丙种球蛋白病常出现A、本周蛋白B、游离轻链C、贫血D、骨损害E、血中Ig升高正确答案：E20、有关Ⅱ型超敏反应正确的是A、两种细胞与组织损伤机制B、NK细胞是引起靶细胞溶解的主要细胞C、细胞毒性T细胞参与D、细胞毒抗体直接溶解靶细胞E、组胺酶的释放可起重要调节作用正确答案：D21、下列缩写代表主要组织相容性复合体的是A、MHCB、MHAC、MHSD、HLAE、MPC正确答案：A22、抗原肽中决定与HLA肽结合区的氨基酸称为A、Ig样区B、可变区C、锚定残基D、共同基序E、跨膜区正确答案：C23、哪项不是初次应答的规律A、抗体水平低B、产生的抗体以IgM为主C、抗体维持时间短D、抗体亲和力高E、潜伏期长正确答案：D24、荧光素发射荧光属于A、生物发光B、光照发光C、偏振光D、化学发光E、电化学发光正确答案：B25、CH50试验检测补体总活性与下列因素无关的选项是A、缓冲液的pHB、离子强度C、绵羊红细胞数量D、反应温度E、钠、钾浓度正确答案：E26、用于标记的HRP的RZ值应大于A、204B、1.5C、3.0D、5.0E、3.5正确答案：C27、制备蛋白质抗原时破碎组织细胞最简便的方法是A、表面活性剂处理法B、自溶法C、反复冻融法D、超声破碎法E、酶处理法正确答案：C28、通过激活补体参与移植排斥的主要抗体是A、IgGB、IgAC、IgMD、IgEE、IgD正确答案：A29、下列哪种免疫球蛋白在特应性过敏症患者血清中浓度可升高A、IgGB、IgMC、IgDD、IgAE、IgE正确答案：E30、参与体液免疫应答的主要免疫细胞是A、淋巴细胞B、T细胞C、B细胞D、吞噬细胞E、粒细胞正确答案：C31、噬菌体抗体库技术是利用λ噬菌体载体表达A、FcB、FabC、胸腺嘧啶核苷D、CD分子E、V-D-J正确答案：B32、可将IgG分解成F(ab’)2和pFC ’的酶是A、木瓜蛋白酶B、胰酶C、胃蛋白酶D、激肽原酶E、脂氧化酶正确答案：C33、抗原抗体结合形成复合物的主要原理是A、由疏水胶体转变为亲水胶体B、由亲水胶体转变为疏水胶体C、氨基酸数量发生改变D、氨基酸结构发生改变E、氨基酸种类发生改变正确答案：B34、自身抗体检测对某些自身免疫病诊断的价值正确的是A、相关性不明显B、敏感性高，特异性较低C、敏感性高，特异性强D、敏感性低，特异性强E、敏感性低，特异性低正确答案：B35、保留抗原结合部位的最小功能片段是A、VHB、FvC、ScFvD、FabE、Fc正确答案：B36、甲、乙两种抗原都能与某一抗体发生特异性结合反应，这两种抗原相互称为A、半抗原B、完全抗原C、TD-AgD、TI-AgE、共同抗原正确答案：E37、B细胞识别抗原决定基的特点是A、特异性识别隐蔽抗原决定基B、特异性识别抗原分子表面的决定基C、特异性识别载体决定基D、特异性识别载体与隐蔽的抗原决定基E、特异性识别所有的抗原决定基正确答案：B38、下列免疫学测定方法中敏感性最高的是A、沉淀反应B、凝集反应C、ELISAD、放射免疫测定E、补体结合试验正确答案：D39、酶免疫分析的基本技术组成不包括A、最佳固相载体和抗体包被技术B、应有高活性的酶和高质量的酶标抗体C、最佳酶作用的底物D、通过电场来精确控制整个分析过程E、检测放大系统正确答案：D40、初次免疫应答时产生抗体的特点是A、持续时间长B、以IgM为主C、抗体效价高D、为高亲和性抗体E、IgG为主正确答案：B41、细胞毒性T细胞的主要功能是A、辅助B细胞分化成抗体产生细胞B、放大细胞免疫应答C、促进杀伤肿瘤细胞、病毒感染细胞D、特异性溶解靶细胞E、与NK细胞协同反应正确答案：D42、经各种机制作用，一个个体内可产生的BCR多样性可高达A、1010B、1012C、1013D、1014E、1015F、1016正确答案：C43、目前已发现的IL有A、26种B、18种C、12种D、8种E、16种正确答案：B44、下列哪项指标可以评价AIDS病人的细胞免疫功能A、CD2+／CD3+比值B、CD3+／CD4+比值C、CD3+/CD8+比值D、CD4+/CD8+比值E、CD2+/CD4+比值正确答案：D45、细菌、螺旋体等颗粒抗原与相应抗体反应称之A、直接凝集反应B、协同凝集反应C、间接凝集反应D、反向间接凝集反应E、Coombs试验正确答案：A46、人类MHC的染色体定位于A、第17号染色体B、第6号染色体C、第9号染色体D、第2号染色体E、第22号染色体正确答案：B47、临床上同种移植后最常见的排斥反应为A、急性移植物抗宿主反应B、慢性移植物抗宿主反应C、超急性排斥反应D、急性排斥反应E、慢性排斥反应正确答案：D48、目前ELISA中应用最广泛的底物是A、OPDB、ABTSC、TMBD、5-ASAE、p-NPP正确答案：C49、决定抗原与抗体反应特异性的物质基础是A、载体B、佐剂C、抗原决定基D、TI-AgE、TD-Ag正确答案：C50、双扩散试验中，如果抗原的量较大，反应沉淀线A、在两孔之间B、靠近抗体孔C、不出现D、呈多条沉淀线E、靠近抗原孔正确答案：B51、对人类而言属于异嗜性抗原的物质是A、人抗白喉外毒素血清B、BSAC、破伤风抗毒素D、ABO血型抗原E、大肠杆菌O1正确答案：E52、属于TCRγ链可变区的编码基因是A、D基因B、Cμ基因C、J基因D、Cγ基因E、Cδ基因正确答案：C53、异种移植成功的最大障碍是A、迟发性异种移植排斥反应B、超急性排斥反应C、细菌感染D、病毒感染E、Ⅰ型超敏反应正确答案：B54、T细胞表面不表达的分子是A、CD2B、CD3C、CD28D、CD80(B7)E、TCR正确答案：D55、III型超敏反应性疾病中引起组织损伤作用最强的细胞是A、T细胞B、血小板C、单核细胞D、中性粒细胞E、淋巴细胞正确答案：D56、免疫自稳功能异常可发生A、病毒持续感染B、肿瘤C、超敏反应D、自身免疫病E、免疫缺陷病正确答案：D57、完全福氏佐剂的成分A、羊毛脂B、液体石蜡C、BCGD、羊毛脂+液体石蜡E、羊毛脂+液体石蜡+BCG正确答案：E58、TCRα链基因重排发生在A、V-D-JB、V-D-J-CC、V-J-CD、V-JE、V-J-D-C正确答案：D59、荧光显微镜中能阻断红外线透过的滤板为A、吸收滤光片B、激发滤光片C、衍射滤光片D、隔热滤光片E、折射滤光片正确答案：D60、与Tc细胞表面CD8分子结合的部位是A、MHC-I类分子轻链B、MHC-II类分子α1β1功能区C、MHC-II类分子α2β2功能区D、MHC-I类分子重链α1α2功能区E、MHC-I类分子重链α3功能区正确答案：E61、有的抗原称为胸腺依赖性抗原(TD-Ag)是因为A、B细胞需要胸腺的辅助才能产生抗体B、TD-Ag刺激机体在胸腺内产生抗体C、TD-Ag在胸腺中被加工、处理后刺激机体产生抗体D、TD-Ag需要巨噬细胞、T和B细胞相互协作，才能刺激机体产生抗体E、TD-Ag只能引起细胞免疫应答，不能刺激机体产生抗体正确答案：D62、酶免疫技术中悬浮在溶液中具有液相反应速率的固相载体是A、聚氯乙烯B、硝酸纤维素膜C、聚苯乙烯D、磁性微粒E、尼龙膜正确答案：D63、HLA抗原多态性的原因是A、HLA基因是复等位基因B、HLA基因连锁不平衡C、HLA基因经过重排D、HLA抗原有类别转换E、以上各项均有关正确答案：A64、半抗原的特点是A、只能与载体结合后才能和相应抗体结合B、是大分子物质C、通常是多肽D、本身无免疫原性E、仅能刺激B细胞活化正确答案：D65、室间质控定性测定的靶值应为A、明确的阴性或阳性B、弱阳性C、强阳性D、参考方法值E、参考实验室均值±2s正确答案：A66、以下关于抗体与免疫球蛋白(Ig)的描述错误的是A、均由浆细胞合成B、抗体是生物学功能上的概念C、Ig是化学结构上的概念D、所有Ig都是抗体E、所有的抗体都是Ig正确答案：D67、再次免疫应答时产生抗体的特点是A、IgG与IgM同时发生B、以IgM为主C、持续时间长D、抗体效价低E、为低亲和性抗体正确答案：C68、能够在HAT培养基长期存活的细胞是A、脾-瘤融合细胞B、脾细胞C、骨髓瘤细胞D、脾-脾融合细胞E、瘤-瘤融合细胞正确答案：A69、琼脂凝胶扩散试验的反应类型A、补体参与的反应B、凝集反应C、溶血反应D、沉淀反应E、中和反应正确答案：D70、关于Ⅱ型超敏反应的特点不正确的是A、抗原或抗原抗体复合物存在于细胞膜上B、介导的抗体是IgG和IgAC、有补体参与D、有吞噬细胞、NK细胞参与E、后果为靶细胞被破坏正确答案：B71、红细胞生成素的缩写A、EPOB、G-CSFC、GM-CSFD、M-CSFE、Meg-CSF正确答案：A72、下列组合中正确的是A、乙型肝炎-HBsAg阳性B、AIDS-T细胞数量增加C、SLE-ANA皆阳性D、过敏性休克-IgE常降低E、原发性肝癌-AFP常降低正确答案：A73、补体系统被激活后形成的膜攻击复合物是A、C1-C9B、C3bBbC、C5b6789D、C4b2bE、C4b2b3b正确答案：C74、用针对哪一种抗原的单克隆抗体可鉴定人的Tc细胞A、CD8B、CD4C、CD3D、gh-2E、Lyt-1正确答案：A75、位于Th细胞表面的抑制性受体是A、FcεRⅠB、FcγRⅡ-BC、KIRD、CTLA-4E、TCR正确答案：D76、载体至少连接多少数目以上的半抗原才能有效地产生抗体A、10B、20C、30D、50E、40正确答案：B77、刺激T细胞增殖的细胞因子是A、IL-6B、IL-4C、IL-2D、IL-3E、IL-1正确答案：C78、初次应答时，产生的抗体具有哪种特点A、为低亲和性抗体B、以IgG为主C、抗体含量较高D、抗体维持时间较长E、IgG与IgM几乎同时产生正确答案：D79、接触性皮炎多属于A、Ⅰ型超敏反应B、Ⅳ型超敏反应C、Ⅴ型超敏反应D、Ⅱ型超敏反应E、Ⅲ型超敏反应正确答案：B80、不属于细胞因子生物学活性的是A、增强抗感染和细胞杀伤效应B、促进靶细胞的增殖和分化C、促进炎症过程，影响细胞代谢D、促进或抑制其他细胞因子和膜表面分子的表达E、中和及溶解病毒作用正确答案：E81、B细胞作为免疫效应细胞，其表面主要的协同刺激分子受体A、CD40B、LFA-2C、CD40LD、B7E、CD28正确答案：A82、下例何种方法用一种标记物可检测多种被测物A、ELISA双抗体夹心法B、ELISA竞争法C、放免疫法D、ELISA捕获法E、ELISA间接法正确答案：E83、临床使用胎盘丙种球蛋白的副作用是A、容易引起肿瘤B、抗病毒感染C、容易引起超敏反应D、容易引起自身免疫病E、容易造成病毒感染正确答案：C84、关于AFP，不正确的是A、是胚胎期的重要血清成分B、由胚胎细胞产生C、原发性肝细胞癌者均升高D、妊娠、急慢性肝炎等有一过性升高E、消化道肿瘤有部分升高正确答案：C85、免疫应答过程不包括A、T细胞在胸腺内分化成熟B、B细胞对抗原的特异性识别C、巨细胞对抗原的处理和提呈D、T细胞和B细胞的活化、增殖和分化E、效应细胞和效应分子的产生和作用正确答案：A86、属于人工主动免疫特点的是A、免疫力维持时间短B、输入的物质为抗原C、常用制剂为抗毒素D、多用于治疗E、免疫产生时间快正确答案：B87、IgE对以下细胞有高度亲和力A、单核细胞、血小板B、T、B淋巴细胞C、巨噬细胞、平滑肌细胞D、中性粒细胞、红细胞E、肥大细胞、嗜碱性粒细胞正确答案：E88、能特异性刺激粒细胞集落形成单位生长的是A、EPOB、G-CSFC、M-CSFD、GM-CSFE、TPO正确答案：B89、在宿主抗移植物反应中，排斥最严重的是A、急性排斥B、超急排斥C、亚急性排斥D、慢性排斥E、以上均不是正确答案：B90、当怀疑患有性联丙种球蛋白缺乏症时应首先考虑进行A、SmIg的检测B、CD的测定C、同种血型凝集素测定D、Ig浓度测定E、特异性抗体产生能力的测定正确答案：D91、一个8个月婴儿，反复发生革兰氏阳性细菌感染最可能的原因是A、母体未在妊娠期内传递给他足够的免疫力B、婴儿患新生儿溶血症C、婴儿补体缺陷D、对母乳过敏E、以上均错正确答案：C92、ELISA中的双位点一步法试验时，造成抗原测定值低于实际含量或假阴性的常见原因是A、固相抗过多B、待测物过浓C、标记抗体过多D、反应时间不够E、洗涤不彻底正确答案：B93、斑点金免疫渗滤试验的载体材料为A、醋酸纤维素膜B、塑料膜C、硝酸纤维素膜D、滤纸E、尼龙膜正确答案：C94、抗原抗体结合形成复合物的原理主要是蛋白质A、氨基酸种类发生变化B、氨基酸数量和结构发生变化C、氨基酸结构发生改变D、由亲水胶体转化为疏水胶体E、氨基酸数量发生变化正确答案：D95、关于免疫透射比浊试验描述不正确的是A、溶液中的抗原-抗体复合物应足够大B、选择高亲和力抗体C、检测需要温育时间D、检测中保证抗原过量E、溶液中的抗原-抗体复合物应足够多正确答案：D96、下列不可用于检测血清IgE的是A、免疫印迹法B、酶联免疫吸附试验C、化学发光法D、直接凝集E、RAST正确答案：D97、引起支气管哮喘持续状态的物质是A、组胺B、前列腺素C、白三烯D、S-羟色胺E、激肽原酶正确答案：C98、与II型超敏反应无关的成分是A、IgM/IgGB、吞噬细胞C、补体D、T细胞E、NK细胞正确答案：D99、荧光显微镜与普通光学显微镜相同的结构是A、光源B、滤光片C、物镜D、聚光器E、目镜正确答案：E100、免疫对机体是A、有害的B、有利的C、正常条件下有利，异常条件下有害D、有利也有害E、有利无害正确答案：C。
ScFv噬菌体抗体库技术研究进展及其在寄生虫学上的应用
・综述・ScFv 噬菌体抗体库技术研究进展及其在寄生虫学上的应用侯俊然 何蔼 詹希美 摘要 随着蛋白组学时代的到来,对目的抗体的需求量的增加,噬菌体抗体库技术获得抗体的优越性得到充分发挥。
该文主要介绍噬菌体抗体库技术的重要一种ScFv (单链抗体)噬菌体抗体库技术。
从理想ScFv 噬菌体抗体库的构建、可溶性表达、液体和固体筛选的优缺点及其在寄生虫学的应用等几个方面对此技术的研究进展作一综述。
关键词 噬菌体抗体库;可溶性表达;筛选;ScFv作者单位:510080广州,中山大学基础医学院寄生虫学教研室E 2mail :houjunran2003@ 电话:020********* 单链抗体(single 2chain antibody fragment ,ScFv ),仅为完整抗体的六分之一,相对分子质量(Mr )约为27000,由轻链可变区(vl )和重链可变区(vh )之间通过14～15个氨基酸的弹性小肽连接形成,具有许多优点:体积小,免疫原性低,不易引起人体排斥反应;无Fc 段,不易与具有Fc 受体的非靶细胞结合,成像清晰;渗透性好,能有效穿透致密的组织屏障;易于基因操作和基因工程大量生产。
在诊断和治疗方面有广泛的应用前景,将成为基因工程抗体技术的重要方法之一。
1 ScFv 噬菌体抗体库的技术流程从有关的细胞(免疫脾细胞、淋巴结细胞、外周血淋巴细胞等)克隆出抗体可变区Ig G ,设计引物,利用PCR 扩增出轻链可变区(vl )和重链可变区(vh ),用一段弹性连接肽将其连接,构成单链抗体ScFv 。
重组到噬菌体表达载体中,感染宿主菌,通过与噬菌体外壳蛋白形成融合蛋白,把单链抗体ScFv 表达在噬菌体表面,利用特异性抗原进行筛选,并重复筛选过程,达到抗体的富集。
2 ScFv 噬菌体抗体库技术2.1 理想ScFv 噬菌体抗体库的构建Okamoto[1]认为理想ScFv 噬菌体抗体库是包含所有抗体可变区的功能位点,包含所有抗体组合形式,抗体多样性最大。
噬菌体抗体库技术及其应用研究进展
ｔｏ ｒｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ａｒｅａ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｉｎ ｒｅｃｅｎｔ ｙｅａｒｓ． Ｔｈｉｓ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｅｍｐｌｏｙｅｓ ａｎ ｕｎｉｑｕｅ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ， ａｎｄ ｃｈａｎｇｅｓ ｔｈｅ ｃｌａｓｓｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ． Ｉｔ ｐｒｏ— ｍｏｔｅｓ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， ｉｎｔｏ ａ ｎｅｗ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ｓｔａｇｅ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｍａｎｙ ｏｔｈｅｒ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｉｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆ ｉｅｌｄｓ． Ｓｏ ｆａｒ ｐｈａｇｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｌｉｂｒａｒｙ ｉｓ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ａｎｄ ｗｉｄｅｌｙ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｉｎ ｔｈｅ ｆ ｉｅｌｄ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｅｐａｒａ— ｔｉｏｎ． Ｉｎ ｔｈｉｓ ｒｅｖｉｅｗ，ｗｅ ｆｏｃｕｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｔｈｉｓ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．
ＰＡＮ Ｂｏ ２，ＴＯＮＧ Ｙｉ－Ｇａｎｇｊ
１． Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｐａｔｈｏｇｅｎ ａｎｄ Ｂｉｏｓｅｃｕｒｉｔｙ， Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ， Ｂｅｉｊｉｎｇ
抗体库筛选技术介绍
抗体库筛选技术介绍导读自从噬菌体展示技术于1985年创立以来，细胞生物学、免疫学、蛋白质工程以及医药行业等领域深受影响。
它从根本上了改变了传统的单抗制备流程（杂交瘤技间接术），宣告在体外改良抗体的特异性以及进行亲和力成熟。
随着该技术的不断发展，继而出现了核糖体展示、mRNA展示、细菌展示和酵母展示等多种展示技术。
这篇文章主要以噬菌体展示抗体库为例，来介绍抗体库的筛选技术。
抗体库的筛选是指从抗体库中筛选出针对某一抗原的特异性抗体，是获得高亲和力抗体过程中的关键环节。
那什么是抗体库呢？通过PCR和DNA重组技术克隆人类或者动物体内全套抗体可变区基因（关于抗体的具体结构详见抗体的基本结构），并通过展示技术进行表达，得到的全套抗体基因表达文库即为抗体库。
图1、抗体库克隆的抗体基因片段（SCFV）图2、噬菌体展示抗体库构建流程由于单抗性质的千差万别，抗体库的筛选需要根据不同的单抗制定严格的筛选条件，优化筛选方法，因此抗体库的筛选技术一直处于发展和改进的状态，根据出现时间的先后，主要分为经典筛选法和新型筛选法。
1、经典筛选法经典筛选法主要包括固相筛选法和液相筛选法，适合针对性质明确并且可纯化的抗原进行抗体筛选。
固相筛选法是通过包被在酶标板或者免疫试管等固相介质上的抗原富集高亲和性的噬菌体；液相筛选法是将生物素化的抗原包被在与亲和素偶联的磁珠或琼脂糖上，通过磁珠富集能与抗原特异性结合的噬菌体抗体，再通过洗涤、洗脱、回收等步骤。
如此反复筛选数次，可得到高亲和性的噬菌体。
这两种方法可通过添加脱脂牛奶或者BSA来减少非特异性结合。
2、新型筛选法对于抗原无法提纯或者性质不明确的情况（如癌细胞表面受体），或者经典筛选过程可能造成抗原失活的情况，需要开发新的筛选方法。
目前的新型筛选法主要有细胞筛选法、组织切片或体内筛选法、选择感染筛选法和蛋白质芯片筛选法等。
细胞筛选法：细胞筛选能维持抗原和抗体的天然构象，因此在对肿瘤细胞筛选方面应用较多，该技术还适合于细胞表面受体筛选和抗原鉴定等。
大题38 现代生物科技专题-2021年高考生物大题题型增分密训(解析版)
大题38 现代生物科技专题1．[生物——选修3：现代生物科技专题](15分)高温胁迫是影响植物生长发育的重要因素之一，高温会使番茄的生长发育受到限制。
科学家将来自土壤细菌中的codA基因转入番茄，使番茄对高温的耐受性大于野生型番茄。
回答下列问题：(1)过程①获得的DNA片段________(填“可以”“部分可以”或“不可以”)实现物种间的基因交流。
采用PCR 技术扩增codA基因时，操作过程中需要加热至90～95 ℃的目的是_________________________________________。
(2)去磷酸化是去掉黏性末端最外侧游离的磷酸基团，过程③对已开环的质粒两端去磷酸化的主要作用是________________；为使codA基因在受体细胞中表达，需要将其插在启动子之后，目的是_____________________________。
(3)过程④最常用的方法是________________，过程⑤用到的细胞工程技术是____________。
codA基因能否在番茄细胞中稳定遗传的关键是_____________。
【答案】(1)可以目的基因受热变性解旋为单链(2)防止质粒自身环化驱动codA基因(目的基因)的转录(3)农杆菌转化法植物组织培养codA基因(目的基因)是否插入到番茄的染色体DNA上(3分)【解析】(1)原核细胞DNA分子不含内含子，且过程①获得的DNA片段是反转录形成的，可以实现物种间的基因交流。
采用PCR技术扩增codA基因时，加热至90～95 ℃是为了打开双链。
(2)过程③构建基因表达载体时，对已开环的质粒两端去磷酸化可以避免质粒自身环化；启动子是RNA 聚合酶识别和结合的位点，可以驱动目的基因的转录，故为使codA基因在受体细胞中表达，需要将其插在启动子之后。
(3)过程④把目的基因导入受体细胞最常用的方法是农杆菌转化法，过程⑤指植物组织培养。
codA基因能否在番茄细胞中稳定遗传的关键是目的基因是否插入到受体细胞的染色体DNA上。
噬菌体展示技术和其通用实验技术简介
重组后的噬菌体质粒转化进宿主细胞，并在辅助噬菌体的
帮助下在宿主体内完成组装，复制，增值的过程。
噬菌体展示技术和其通用实验技术简介
ห้องสมุดไป่ตู้
3.6.3主要衣壳蛋白PⅧ展示系统
PⅧ展示系统。PⅧ是丝状噬菌体的主要外壳蛋白， 位于噬菌体外侧，每个病毒颗粒有2 700个左右PⅧ拷贝。 PⅧ的N端附近可融合五肽，但不能融合更长的肽链，因为 较大的多肽或蛋白会造成空间障碍，影响噬菌体装配，使 其失去感染力。但有辅助噬菌体参与时，可提供野生型 PⅧ蛋白，降低价数，此时可融合多肽甚至抗体片段。
噬菌体展示技术和其通用实验技术简介
4.1单链丝状噬菌体展示在鼠源重组
抗体制备中的应用
抗体制备时噬菌体展示技术的重要应用体的制备为例，简 述一下噬菌体展示技术在抗体制备中的作用和方法。
噬菌粒载体可以方便克隆，提高遗传的稳定性。
噬菌体展示技术和其通用实验技术简介
相比噬菌体载体噬菌粒具有以下优点：
1.双链DNA既稳定又高产，具有常规质粒的特征； 2.免除了将外缘DNA片段从质粒亚克隆于噬菌体载体这一
繁琐又费时的步骤； 3.由于载体足够小，故可得到长达10kb的外源DNA区段的
噬菌体展示技性。
噬菌体展示技术和其通用实验技术简介
噬菌体展示技术和其通用实验技术简介
3.5 T4噬菌体展示系统
T4噬菌体展示系统是20世纪90年代中期建立起来的一种新的展示系统。它 的显著特点是能够将两种性质完全不同的外源多肽或蛋白质，分别与T4衣壳表 面上的外壳蛋白SOC（9 ku）和HOC（40 ku）融合而直接展示于T4噬菌体的表 面，因此它表达的蛋白不需要复杂的蛋白纯化，避免了因纯化而引起的蛋白质 变性和丢失。T4噬菌体是在宿主细胞内装配，不需通过分泌途径，因而可展示 各种大小的多肽或蛋白质，很少受到限制。SOC与HOC蛋白的存在与否，并不影 响T4的生存和繁殖。SOC和HOC在噬菌体组装时可优于DNA的包装而装配于衣壳 的表面，事实上，在DNA包装被抑制时，T4是双链DNA噬菌体中唯一能够在体内 产生空衣壳的噬菌体（SOC和HOC也同时组装）。因此，在用重组T4做疫苗时， 它能在空衣壳表面展示目的抗原，这种缺乏DNA的空衣壳苗，在生物安全性方 面具有十分光明的前景。
基于细胞的噬菌体抗体库筛选技术
研究 日 益 广 泛 。针 对 结 肠 癌 [8～12 ] 、乳 腺 癌 [13 ] 、肺 腺 癌 [ 14, 15 ] 、胰腺癌 [ 16 ] 、前列腺癌 [ 16～18 ] 、卵巢癌 [ 19 ] 、黑色素 瘤 [ 20, 21 ] 、急性髓白血病 [ 22～24 ]以及神经胶质瘤 [ 25 ]等多种 肿瘤都有细胞筛选的报道 。此外 ,该技术也用于细胞 表面受体 [26, 27 ]和血管内皮细胞抗原表位 [28, 29 ]抗体的筛 选 ,还可用于抗原鉴定 [ 13, 16, 24, 30, 31 ] 。针对细胞的抗体筛 选包括靶细胞的确定 、构建抗体库以及抗体的筛选和 鉴定几个环节 。 1. 1 细胞表面抗原的特殊性 肿瘤抗原多为蛋白质或糖蛋白 ,种类繁多 ,而且表 达量很低 ,因此难以分离和纯化 。与新生血管生成有 关的血管上皮抗原表位也与肿瘤的发生和转移密切相 关 ,这些肿瘤相关抗原和受体蛋白一样 ,多具有膜蛋白 的结构特征 ,或是可以形成复杂的结构 。常规的固相 筛选中 ,包被的固定化抗原不能保持天然构象 ,因而不 适于对膜抗原或细胞表面的抗原表位进行筛选 。 自上世纪 90 年代以来 ,直接对肿瘤组织 、完整细 胞或细胞 膜 裂 解 物 进 行 抗 体 筛 选 的 研 究 逐 渐 开 展 起 来 。筛选的靶材料可以是经非离子型去污剂处理过的 细胞碎片 [32 ] ,全血细胞 [6, 7 ] , 肿瘤组织切片 [8, 33 ]以及固 定化单层细胞 [19, 34 ] 。在这些材料中 ,抗原分子可以保
如果先以分离的上皮细胞免疫小鼠构建免疫抗体库后再以固定化细胞膜的方法对抗体库进行筛选就可以集成体内免疫和体外筛选的优点既可以借助负选择对噬菌体库进行预清除也可以通过优化孵育和洗涤参数来提高选择的特异性利用筛选获得的抗体通过免疫共沉淀质谱分析和数据库搜索可以进一步研究靶抗原的特征进行细胞表面抗原的鉴定分离和纯化1630313基于细胞的抗体库筛选的系统优化细胞筛选不同于对固定化抗原的筛选因为细胞表面蛋白数量很多某些蛋白组分丰度较高容易对细胞筛选造成干扰导致筛选结果的信噪比signalnoiseration过低甚至得不到可用的抗体