酶联免疫法测定上海原水中四环素浓度
水产品中四环素类药物残留检测方法研究
２ １ 纸 片 扩 散 法 ．
构体 难 于分离 ， 其抗 菌活 性减 弱或 完全 消失 ， 而 限制 了此 方法 的使 用 。
上 ， 贴 在菌 生长 的培 养基 上 ， 段 时间后 测其 抑菌 并 一 圈 的大小 。如 果水 产 品 中存 在 抗 生素 残 留 ， 其 样 则
品 提 取 液 可 以 抑 制 微 生 物 的 生 长 ； 之 则 微 生 物 的 反
格低 廉 ， 在畜 禽养 殖 和 饲 料 添 加 剂 等方 面得 到 了广 泛 的应 用 。近年 来 ， 国的养 殖业 发展 步伐 加快 ， 我 水
法等。
微 生物法 虽然 原 理及操 作 简单 ， 费用 低 ， 般实 一 验室 都能 操 作 ， 是 测 定 所 花 的 时 间 太 长 ， 敏 度 但 灵 低 ， 果 误 差 较 大 。在 测 定 时 样 品 需 在 ｐ 值 为 结 Ｈ ４ ５的条件 下培 育 ３ ｈ 而 有 些抗 生 素 ， ． ～４ ， 例如 土 霉
产业 发 展 迅 速 ， 产 品 总 量 连 续 几 年 居 世 界 第 一 ， 水
生长 不会 受 到抑制 ， 而水 产 品 中抗 生 素残 留 的多 少 则可 以根 据对 微生 物 的抑制 程度来 判 断 。
２ ２ 管 碟 法 ．
２０ ０ ５年 产量 已超 过 ４０ ０万 ｔ ］ ０ ＿ 。随 着集 约化 水 １ 产业 的发展 ， 鱼类 疾 病也越 来 越复 杂 ， 鱼药 和抗 生素 饲料 添 加剂 的使 用量 也 日渐增 加 ， 由于滥用 药 物 ， 导 致 了渔 药 大量残 留 ， 严重 影 响 了水 产 品 的质 量 安全 。 因此 ， 了保 障水 产 品质 量 安 全 ， 除贸 易 壁 垒 ， 为 消 就
四环素类药物检测(酶联免疫法).
样品制备与贮存
1. 试样的制备 对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的实验室样品，在密
闭的情况下，置于不超过60℃的水浴中温热、振荡，待样品全部融化后
搅匀，冷却至室温，分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中， 密封，并加以标识。
2 . 试样的保存
将样品于室温下保存
测定步骤
1. 提取 称取 1g 试样，精确到 0.01g ，置于 50mL 具塞试管中，加入 10mL 磷酸盐缓 冲溶液于液体混匀器上快速混匀1min，使试样完全溶解。再加入39mL磷 酸缓冲溶液后，将试管置于超声波水浴中超声5min，取出摇匀，用注射
过滤器将适量的样品溶液过滤至10mL具塞试管中，供酶标仪测定，此溶
液稀释系数为50。
测定步骤
2. 测定条件 以下所有操作应20℃-24℃室温下进行。 （1）酶标仪测定条件：酶标仪测定波长为450nm。 （2）人工洗版条件：洗涤次数五次以上，每次注水量为250mL。
（ 3 ）四环素族试剂盒中所有试剂的温度均应回升至室温（ 20℃-24℃）后
仪器和设备
1. 酶标仪
2. 8道移液器：50μ L-300uL。 3. 单道移液器：5uL-50uL,100μ L -1000μ L和2mL-10mL。 4．液体混匀器。 5．超声波水浴。
6．注射过滤器：2 mL-5mL，并带有孔径为0.45μ m的水相针头式过滤膜。
7．具塞试管：10mL，50mL。 8．pH计：测量精度兽药残留检测
原理
试样中残留的四环素族抗生素与微孔板中结合的四环素抗生素共同 竞争四环素族抗生素抗体，在酶标记物的作用下，形成的酶标记抗原抗 体复合物与显色剂发生反应，用酶标仪测定吸光度，根据吸光度值得出 试样中四环素族抗生素的含量。
酶联免疫吸附试验操作步骤
酶联免疫吸附试验操作步骤
1. 溶解标记抗体。
以适量的磷酸缓冲液()稀释已标记的酶标记抗体,让其浓度为每盘20-30μ。
2. 溶解待检标样。
以液体或稀释液将待检的血清或其他体液样品进行适量稀释,一般为1:100-1:1000。
3. 加样。
分别将稀释后的标记抗体和稀释后的待检标样溶液加入相应位置的试验板孔中,孔内最好包含20-30μ的液体。
4. 导入保护液。
加入或体液作为阻断剂,防止非特异结合,每孔加入100μ。
5. 导入抗原。
加入不同浓度的抗原作为定量标准曲线,以及未加抗原的对照孔。
6. 导入待检血清或体液。
将稀释后的待检标样加入对应位置的试验板孔内。
7.孵育。
将试验板封口后,室温孵育30分钟-2小时。
8.清洗。
用液体洗盘,每孔加入300μ,强力清洗5-10次。
9.加显色底物。
加入显色底物,避光孵育10-30分钟。
10.终止反应。
加入终止液,如2/浓硫酸停止显色反应。
11.读取光密度值。
以未加样对照孔为零点,在450波长下读取各孔吸光值。
12.计算结果。
根据标准曲线计算样本或比对阳性比负性 - 值判断结果。
固相萃取-超高效液相色谱三重四级杆质谱联用法测定水中四环素、土霉素及罗红霉素
固相萃取-超高效液相色谱三重四级杆质谱联用法测定水中四环素、土霉素及罗红霉素尹燕敏【摘要】A rapid analytical method for simultaneous determination of tetracyclin, oxytetracycline and roxithromycin in water sample was developed. Water samples were purified and concentrated by solid phase extraction(SPE), then analyzed by ultra performance liquid chromatography electrospray tandem mass spectrometry(UPLC-MS/MS). Using formic acid and acetonitrile as the mobile phase, the three antibiotics were separated within 5 min. The limit of determination for anlytes were 0.08-0.35 ng/L with the relative standard deviation of 1.4%-5.6%. The recoveries of the antibiotics were in the range of 82.5%-114%for blank and 71.5%-126%for real samples.%建立了固相萃取-超高效液相色谱三重四级杆质谱联用法同时测定水中的罗红霉素、四环素和土霉素残留。
水样经过固相萃取纯化、富集，液质联用分析，采用甲酸溶液和乙腈作为流动相，在5 min 内完成对3种目标化合物的分析，3种目标化合物的方法检出限介于0.08～0.35 ng/L之间，测定结果的相对标准偏差为1.4%~5.6%，空白样品和实际样品的加标回收率分别为82.5%～114%，71.5%～126%。
一种检测鱼肉中四环素类抗生素的高效方法
摘要 / Abstract[目的]建立超高效液相色谱- 串联质谱同时测定鱼肉中4 种四环素类抗生素（四环素、金霉素、土霉素、强力霉素）的方法。
[方法]样品经Na2EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液提取，正己烷除油脂，经Oasis HLB 固相萃取小柱净化，采用ACQUITY UPLC®BEH C18 色谱柱(2.1 mm × 50 mm, 1.7 μm) 分离。
[结果]四环素、金霉素、土霉素、强力霉素4 种四环素类抗生素在0～100 ng/mL 范围内线性关系良好，相关系数 (R) 均大于0.999；在5.0～50.0 μg/kg 添加水平下，回收率均在70%～120%；相对偏差(RSD) 均小于10%；检出限为5.0 μg/kg，定量限为10.0 μg/kg。
[结论]超高效液相色谱- 串联质谱法可用于鱼肉中四环素类抗生素的测定。
研究背景 / Introduction四环素类(tetracyclines, TCs)药物是由放线菌产生的一类基本骨架为并四苯环的广谱抗生素。
四环素类药物在水产养殖领域具有广泛的应用，它对病原菌有抑制作用，也能促进水产动物快速生长。
由于缺乏科学指导，导致滥用现象十分严重，在水产养殖过程中会有20%～30%的四环素类药物被鱼类吸收，从而诱导体内致病微生物产生抗性基因(antibiotic resistance genes, ARG)，当抗性基因通过食物链方式进入人体后会对健康构成威胁。
四环素类抗生素是保障动物和人类健康的重要武器，如果长期食用含四环素类抗生素残留的水产品，可能会产生致癌致畸致突变、过敏反应和降低人体免疫能力的危害等。
因此，世界各国对水产品中的兽药残留限量做了严格规定，我国规定鱼组织（皮和肉）中土霉素、金霉素和四环素的最大残留量为200 μg/kg。
四环素类抗生素的检测方法有：微生物法、免疫分析法、分光光度法、高效液相色谱法和液质联用法等。
高效液相色谱法测定水产品中四环素类抗生素残留
Ｏ ｓ Ｂ固相 萃 取 柱 进 行 净 化 ， ｏａａｋＣ ａｉＨＬ ｓ Ｎ ｖｐｒ 柱 进 行 分 离 ， 效 去除 了杂质 干 扰 ， 高 了灵敏 度 ， 立 有 提 建 了快速测 定水 产 品中 四环素类 抗生 素的 方法 。
１ 实验 部分
１ １ 主 要 仪 器 与 试 剂 ．
菌属产生的氢化并四苯环衍 生物 ， Ｊ属广谱性抗生
素 ， 广泛 应用 于促进 养殖 鱼类 的生长 、 防或 治疗 被 预 鱼类 疾病 ， 容易在 鱼 组 织 中产 生 四环 素类 抗 生 素 药 物残 留 ， 在许 多 国家受 到严格 的监 控 。
四环素 类 抗 生素 的残 留 分 析 多 采 用 酶 联 免 疫 法 、 液相 色谱法 和 液质联 用法 。笔者 采 用 。
ｍ ／ ｉ； Ｌ ｍｎ 检测波长：５ ｍ； ３ ５ｎ 进样量 ： ０ 。 １ Ｌ ０
１ ３ 样 品提 取 ．
准确称 取 ５０ ．０ｇ鱼 肉组 织 置 于 ５ ０ｍＬ具 塞 三
性增 强 时 ， 峰 间的分 离度增 大 ， 各 峰对称 性变 好 。考 虑 到酸性 增 强 ， 色 谱 柱 的影 响增 大 ， 对 因此 ， 择 草 选 酸 溶液 的 ｐ Ｈ值 为 ２５ ．。
２ ３ 流 动相 的组成 对分 离效果 的影响 ．
色谱 柱 ：ｏａａｋＣ８ １０ｍｍ× ． ｍ ｉｄ ） Ｎ ｖｐｒ ｌ ５ （ ３ ９ｍ ． ； ． 流 动相 ：． １ ｌＬ草 酸 （ Ｈ２ ５ ００ ／ ｍｏ ｐ ． ）一甲醇 一乙腈 体
维普资讯
杨挺 ， ： 等 高效液相色谱法测定水产品 中四环素类抗生素残留
３ ５
高效 液 相 色 谱 法 测定 水 产 品 中 四环 素 类 抗 生 素残 留
四环素国家检测标准
四环素国家检测标准四环素是一种广泛应用的抗生素，但长期或过量应用会出现残留问题，对人体健康和环境造成不良影响。
为此，国家针对四环素类药物的残留制定了严格的检测标准，即“四环素国家检测标准”。
一、背景四环素是一种广谱、高效的抗生素，在人类和畜禽养殖中得到了广泛应用。
但是随着时间的推移，长期或过量使用会导致四环素在肉、蛋和奶等食品中残留，进而对人体健康和环境产生负面影响。
因此，国际上对四环素残留已经做出了一系列严格的限制要求。
我国也不例外，为保障人民的健康和食品安全，制定了严格的四环素检测标准。
二、标准内容四环素国家检测标准主要是针对肉、蛋和奶这三大类食品的检测，其中肉类分为猪肉、牛肉和鸡肉等。
标准中规定，每公斤肉类食品中四环素的残留量不能超过最高残留量（MRL，即Maximum Residue Limits），否则将被视为不合格。
三、检测方法四环素的检测需要用到高效液相色谱法（HPLC）、荧光酶联免疫法（ELISA）等方法进行检测。
这些方法可以对肉类、蛋类、奶类等多种食品进行检测，同时可以有效地检测出四环素的残留量。
四、实施措施为了落实四环素检测标准，国家制定了相应的实施措施。
具体包括：建立肉类、蛋类、奶类等产品的抽检制度，定期对市场上的食品进行抽检；加强农药药残、兽药残留等相关检测体系的标准化和建设，还制定了四环素类药物的使用规范和管理细则等。
五、总结四环素国家检测标准的制定和实施，使得国内的食品安全得到了进一步的保障。
只有通过不断提高食品质量的标准，加强对食品生产和流通环节的监管，才能保障人民的健康和安全。
水产品中四环素类抗生素残留量的高效液相色谱测定方法
2005,14(1)水产品中四环素类抗生素残留量的高效液相色谱测定方法研究报告水产品中四环素类抗生素残留量的高效液相色谱测定方法3黄志勇,蔡洪基,黄高凌,彭爱红(集美大学生物工程学院,福建,厦门 361021)摘 要 本文建立了高效液相色谱(HP LC)检测水产品中3种四环素类抗生素残留量的方法。
采用4%高氯酸溶液提取样品中的残留抗生素,经浓缩处理,以乙氰和0.01mol・L-1NaH2P O4(18∶82,v/v)为流动相,流速1mL・m in-1,3种抗生素组分峰能与杂质峰完全分开,检测波长为355mm。
在50～1000μg・mL-1范围内,峰面积与抗生素浓度呈良好的线性关系(r2>0.99),以测量的3倍标准偏差计算方法的检出限分别为0.045μg・g-1(土霉素)、0.041μg・g-1(四环素)和0.080μg・g-1(金霉素)。
平均加标加收率分别为96.5%(土霉素)、87%(四环素)和73.2(金霉素)。
精密度(RS D)小于5%。
实验检测了几种常见水产品样品的四环素类抗生素残留量,发现在本检出水平下被检测的几种鱼和虾样品均未能检出。
关键词 四环素类抗生素;残留;水产品;高效液相色谱D eterm i n a ti on of tetracycli n e an ti b i oti c resi ducs i n aqu i culturc products by HPLCHuang Zh i yong,Ca i Hongji,Huang Gaoli n g,Peng A i hong(College of B i oengineering,J i m ei University,Xia men,Fujian,361021)Abstract The residues of tetracycline antibi otics including oxytetracycline(OT C),tetracycline(TC)and chl ortetracy2 cline(CT C)in several kinds of aquiculture p r oducts were measured with the op ti m ized method of high perfor mance liquid chr omat ography(HP LC).The tetracycline antibi otics in seafood sa mp les were extracted t w ice by4%HCl O4,and the com2 bined extracts were concentrated till dryness in70℃water bath under a gentle strea m of nitr ogen.Then,its residue was re2 s olved in4%HCl O4and the s oluti ons were filtrated with0.45μm me mbrane.The tetracycline antibi otic sa mp les were sepa2 rated by the RP-HP LC colu mn(W aters3.6mm×15c m,4.6μm)with a mobile phase of acet onitrile and0.01mol・L-1 NaH2P O4(18∶82,v/v)at the rate of1mL/m in and detected at355n m.The average recoveries tested with adding stand2 ards were96.5%f or OT C,87%f or TC and73.2%f or CTC,and the detecti on li m it esti m ated with3-f old standard devia2 ti on was0.045μg・g-1for OT C,0.041μg・g-1f or CTC and0.080μg・g-1for CTC,res pectively.The three kinds of tetra2 cycline antibi otics in actual aquiculture p r oducts could not be detected with the established method.Key words Tetracycline antibi otics;residue;Aquiculture p r oducts;H igh perfor mance liquid chr omat ography(HP LC) 四环素类抗生素包括土霉素(oxytetracycline, OTC)、四环素(tetracycline,TC)和金霉素(chl ortet2 racycline,CTC)等,属广普类抗生素药物,由于其具有良好的杀菌或抑菌作用而广泛用了防治动物和水产品的疾病感染[1]。
尿液中 四环素检测标准
尿液中四环素检测标准是一种用于评估人体内四环素类药物摄入量的方法。
四环素类药物是一种常见的抗生素，广泛应用于抗菌治疗。
然而，这类药物在体内的作用机制较为复杂，且具有一定的副作用，因此对其摄入量的监测至关重要。
以下是关于尿液中四环素检测标准的详细介绍。
一、检测方法及原理尿液中四环素检测通常采用高效液相色谱法（HPLC）或液相色谱-质谱联用法（LC-MS）。
这些方法基于不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异，通过分离后检测每个色谱峰的峰高或峰面积，从而实现对不同物质的定量分析。
在检测过程中，需要使用标准品对实验条件进行优化和验证，以确保实验结果的准确性和可靠性。
二、标准值及参考范围尿液中四环素的正常参考范围因个体差异而异。
一般来说，健康成年人的尿液中四环素浓度应低于100ng/mL。
然而，对于正在接受四环素类药物治疗的患者，尿液中四环素的浓度可能会超过这一标准。
此外，个体之间的差异也可能导致尿液中四环素浓度的变化。
因此，具体的标准值和参考范围应根据个体情况进行综合判断。
三、影响因素及注意事项尿液中四环素检测的结果受到多种因素的影响。
首先，饮食习惯和摄入量的不同可能导致尿液中四环素浓度的变化。
其次，不同时间段的尿液样本也会影响检测结果。
此外，尿液的pH值、温度以及保存方式等因素也可能对检测结果产生影响。
因此，在进行尿液中四环素检测时，应遵循标准化程序，并注意收集具有代表性的尿液样本。
四、临床意义及评估尿液中四环素检测对于指导临床合理用药具有重要意义。
通过对尿液中四环素浓度的监测，医生可以了解患者体内抗生素的摄入情况，从而调整用药方案。
此外，对于长期接受抗生素治疗的患者，尿液中四环素检测还可以帮助评估患者的依从性和治疗效果。
如果检测结果显示尿液中四环素浓度异常升高或降低，可能提示患者存在药物过量或不足的情况，需要调整治疗方案。
总之，尿液中四环素检测标准是评估人体内抗生素摄入情况的重要方法。
通过了解尿液中四环素的正常参考范围、影响因素、临床意义及评估等方面的知识，有助于指导临床合理用药和促进患者健康。
四环素检验方法
四环素检验方法1. 试剂与材料1.1 四环素试剂盒，德国r-Biopharm公司。
1.2 20mMPBS缓冲液：0.62g NaH2PO4•2 H2O + 5.73g Na2HPO4•12 H2O + 9gNaCl,用NaOH 调PH值为7.4，加蒸馏水定容至1000ml 。
1.3 洗涤缓冲液，PBS-T（含有土温20的磷酸缓冲液盐水）：0.62g NaH2PO4•2 H2O + 5.73g Na2HPO4•12 H2O + 9gNaCl +1mlTween20(化学纯), 加蒸馏水定容至1000ml ；PH7.2-7.4 （以上试剂无特殊说明均为分析纯）2.仪器与设备2.1微孔板酶标仪，MuLtisKan Ascent,芬兰Labsystens公司。
2.2 8道移液器，50-300uL。
2.3 单道移液器，5-50ul,20-200ml,100-1000ul,1-5ml。
2.4 超声波浴槽。
3.样品前处理样品提取称1g（精确至0.01g）蜂蜜于125ml具塞瓶中，用20mM PBS 缓冲液(pH7.4) 50倍稀释(1+49)，超声波均质5分钟，再强烈混合2分钟(摇动)。
此为样品溶液，供酶标仪测定。
4.测定4.1 酶标仪测定条件酶标仪测定波长为450nm。
4.2 酶标测定（以下操作在20-24℃室温条件下进行）。
4.2.1测定之前的准备工作将四环素试剂盒附带的所有试剂回升至室温20-24℃。
4.2.2 标准应用的制备；50uL标准浓缩液（四环素试剂盒附带）用450uL缓冲液1稀释并混合均匀用玻璃不能用塑料瓶。
标准应用液1：50uL标准浓缩液1用450uL缓冲液1稀释0ppt标准应用液2：50uL标准浓缩液2用450uL缓冲液1稀释50ppt标准应用液3：50uL标准浓缩液3用450uL缓冲液1稀释150ppt标准应用液4：50uL标准浓缩液4用450uL缓冲液1稀释450ppt标准应用液5：50uL标准浓缩液5用450uL缓冲液1稀释1350ppt标准应用液6：50uL标准浓缩液6用450uL缓冲液1稀释4050ppt4.2.3.测定程序：取出实验需要数量的微孔板条，按顺序加入50ul标准或处理好的样品（加样之前颠倒振荡混均）到各自的微孔中，加入50ul四环素抗体溶液到每一个微孔底部充分混合（轻轻振荡板并在桌面上做圆周运动以混均），用薄膜覆盖板上在室温孵育60分钟（注意在加入抗体的过程中移液器管尖千万不要接触到放进孔中的液体，避免交叉污染）。
几种常见抗生素的相关性质和检测方法
一些常见抗生素的性质和检测方法四环素四环素类抗生素是由放线菌产生的一类广谱抗生素及半合成抗生素，具有菲烷的基本骨架。
四环素类抗生素在赶早状态下比较稳定，但遇日光可变色。
在酸及碱性条件下都不够稳定，易发生水解。
四环素类药物主要有以下化学性质：1.酸性条件下不稳定：C-6羟基和C-5α上的氢正好处于反式构型易发生消除反应，生成无活性橙黄色脱水物。
在pH2～6条件下C-4位二甲氨基很易发生可逆反应的差向异构化。
医学|教育网搜集整理土霉素由于存在C-5羟基与C-4二甲氨基之间形成氢键，4位的差向异构化比四环素难。
而金霉素由于C-7氯原子的空间排斥作用，使4位异构化反应比四环素更容易发生。
2.碱性条件下不稳定：在碱性条件下生成具有内酯结构的异构体。
3.和金属离子的反应：在近中性条件下能与多种金属离子形成不溶性螯合物。
四环素化学结构本品为黄色结晶形粉末,无臭,空气中稳定,微溶于水,易溶于稀硫酸及氢氧化钠,略溶于乙醇,不溶于氯仿及乙醚,pH2以下溶液不稳定,碱性溶液中很快破坏。
土霉素子式C22H24N2O9,分子量460.45。
又称地霉素、氧四环素。
是一种广谱抗菌素,黄色结晶性粉末,无嗅微苦。
有二个分子结晶水。
熔点181～182℃(分解)。
微溶于水,溶于乙醇、丙酮和乙二醇,不溶于氯仿和乙醚。
在空气中稳定,遇强光颜色变深。
在碱性溶液中容易破坏失效。
化学结构金霉素子式C22H23ClN2O8，分子量478.87。
又称氯四环素，是一种广谱抗菌素，金黄色结晶。
无臭味苦。
熔点168～169℃。
一般医药上用其盐酸盐。
熔点210℃（分解）。
微溶于水和乙醇，不溶于乙醚、丙酮和氯仿。
见光颜色变深。
在空气中和弱酸性溶液中较稳定，在碱性溶液中易分解。
化学结构强力霉素强力霉素是抗生素类药，四环素类药物，可以治疗衣原体支原体感染。
其性状为淡黄色或黄色结晶性粉末，臭，味苦。
在水中或甲醇中易溶，在乙醇或丙酮中微溶，在氯仿中不溶。
氯霉素性状 :白色针状或微带黄绿色的针状、长片状结晶或结晶性粉末；味苦。
四环素标曲配置方法
四环素标准曲线的配置是用于确定抗生素四环素在不同浓度下的响应值，通常用于药敏测试或抗生素残留检测。
以下是一个基本的四环素标准曲线配置方法：1. 准备标准溶液：首先，你需要准备一系列已知浓度的四环素标准溶液。
这些溶液的浓度应该覆盖你想要检测的范围。
例如，你可以准备10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL和80μg/mL等不同浓度的四环素溶液。
2. 配置培养基：通常使用Mueller-Hinton琼脂培养基作为生长培养基。
根据需要制备一定量的培养基，并将其冷却至50-60℃。
3. 添加四环素溶液：在无菌条件下，将每个浓度的四环素标准溶液加入培养基中。
通常，每种浓度的溶液添加100μL到培养基中，然后充分混合。
4. 平板分配：将添加了四环素的标准溶液的培养基分配到无菌平板中。
每个平板大约可以添加5-10个不同浓度的溶液。
5. 接种细菌：在平板上接种已知对四环素敏感的细菌。
可以使用涂布器或点接种针将细菌均匀涂抹在培养基表面。
6. 培养：将接种好的平板放入适宜的温度下培养适当的时间，通常是37℃，18-24小时。
7. 测量抑菌圈：培养后，观察每个平板上是否有抑菌圈形成。
抑菌圈的大小与四环素的浓度相关。
使用游标卡尺或尺子测量抑菌圈的最外部直径。
8. 绘制标准曲线：将测得的抑菌圈直径与对应的四环素浓度进行Plotting 绘制标准曲线。
通常，抑菌圈直径与四环素浓度之间呈负相关，即浓度越高，抑菌圈直径越小。
9. 计算未知样品浓度：通过测量未知样品产生的抑菌圈直径，并在标准曲线上找到对应的浓度值来计算未知样品中的四环素浓度。
请注意，上述步骤仅为一个基本的四环素标准曲线配置方法。
具体操作可能因实验室设备、细菌种类和检测方法的不同而有所调整。
抗体浓度测定方法
抗体浓度测定方法抗体浓度测定是生物医学领域中常用的实验方法之一，主要用于检测样本中抗体的含量，以评估免疫应答的水平或疫苗接种的效果。
下面将介绍几种常见的抗体浓度测定方法。
1.酶联免疫吸附试验（ELISA）ELISA是一种常用的抗体浓度测定方法，其基本原理是将抗体与酶标二抗结合，通过酶促反应将抗体固定在固体表面上，再加入底物显色，最后通过吸光度值测定抗体的浓度。
ELISA 具有高灵敏度、高特异性和可定量等优点，因此在临床诊断、免疫学研究等领域得到广泛应用。
1.放射免疫分析（RIA）RIA是一种利用放射性同位素标记抗体的抗体浓度测定方法。
该方法的基本原理是将抗体与放射性同位素标记的二抗结合，再加入非标记的抗体与之竞争，最后通过放射性信号的强度测定抗体的浓度。
RIA具有高灵敏度、高特异性和可定量等优点，但需要注意放射性同位素的安全使用。
1.免疫荧光法（IF）IF是一种利用荧光标记抗体的抗体浓度测定方法。
该方法的基本原理是将抗体与荧光标记的二抗结合，再加入目标抗原与之反应，最后通过荧光信号的强度测定抗体的浓度。
IF具有高灵敏度、高特异性和可定量等优点，但需要注意荧光信号的稳定性和背景干扰。
1.流式细胞术（Flow Cytometry）流式细胞术是一种利用流式细胞仪检测细胞表面或内部抗原的抗体浓度测定方法。
该方法的基本原理是将样本通过流式细胞仪进行检测，同时采用荧光标记的抗体与目标抗原反应，最后通过荧光信号的强度测定抗体的浓度。
流式细胞术具有高灵敏度、高特异性和可定量等优点，但需要注意荧光信号的稳定性和背景干扰。
此外，流式细胞术还可以用于细胞分选、细胞功能分析等领域。
1.免疫印迹法（Western Blot）免疫印迹法是一种用于检测蛋白质表达和鉴定抗原抗体的技术。
该方法的基本原理是将目标抗原分离并通过电泳分离成不同分子量的片段，再通过转印技术将抗原转移到固相膜上，接着加入特异性抗体与之反应，最后通过显色反应测定抗体的浓度。
酶联免疫法的标准曲线
酶联免疫法的标准曲线
首先，建立标准曲线的关键是选择合适的标准品。
标准品应当具有高纯度、活
性稳定、易溶于溶液等特点，以确保实验的准确性和可重复性。
在选择标准品时，需根据实验要求确定合适的浓度范围，通常建议选择3-5个不同浓度的标准品进行
测定，以便构建标准曲线。
其次，准备好各个浓度的标准品后，需要将它们分别加入到微孔板的孔中，每
个浓度至少重复3次，以确保实验结果的可靠性。
在加样时，需注意避免气泡的产生，以免影响实验结果。
加样完成后，将微孔板封闭并在适当的条件下进行孵育，使标准品与微孔板表面的抗体结合。
随后，将孵育后的微孔板进行洗涤，以去除未结合的物质。
洗涤的次数和缓冲
液的选择需根据具体实验条件来确定，通常需要进行3-5次洗涤。
洗涤完成后，将
底物加入微孔板，并在适当的条件下进行反应。
反应结束后，加入停止液停止反应，并使用酶标仪测量吸光度值。
最后，利用测得的吸光度值绘制标准曲线，通常采用对数-对数坐标来绘制。
通过标准曲线，我们可以根据待测样品的吸光度值来计算出其对应的浓度，从而实现对抗原或抗体的定量测定。
在进行标准曲线的建立过程中，需要注意以下几点，首先，实验操作要严格按
照标准操作程序进行，避免操作失误对结果的影响；其次，实验中使用的试剂和设备要保持良好的质量，以确保实验结果的准确性；最后，实验过程中要及时记录实验数据，并进行合理的数据处理和分析。
总之，建立标准曲线是酶联免疫法中至关重要的一步，它直接影响到实验结果
的准确性和可靠性。
通过本文的介绍，相信读者对酶联免疫法的标准曲线建立过程有了更清晰的认识，希望能对实验工作有所帮助。
鸡肉组织中四环素类药物残留检测与分析
鸡肉组织中四环素类药物残留检测与分析四环素类药物是一类广泛应用于家禽养殖行业的抗生素，其能够有效预防和治疗家禽疾病，提高养殖效益。
由于错误或滥用该类药物，导致鸡肉中出现了四环素类药物残留情况，对人体健康构成了潜在的危害。
对鸡肉组织中四环素类药物残留进行检测和分析，对于保障食品安全至关重要。
检测鸡肉组织中四环素类药物残留的方法有很多种，常见的方法包括高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）、液相色谱-质谱联用法（LC-MS/MS）等。
HPLC是一种常用的检测方法，其原理是通过将样品中的化合物分离开来，并利用检测器对其进行分析。
在检测四环素类药物残留时，可以选择合适的色谱柱和流动相来实现分离，然后通过紫外检测器对目标化合物进行定量分析。
LC-MS/MS则结合了液相色谱和质谱技术的优点，具有灵敏度高、选择性好等特点，是目前最常用的检测方法之一。
其原理是通过液相色谱将样品中的化合物分离开来，然后利用质谱技术对分离出的化合物进行定性和定量分析。
除了上述的方法，还可以利用免疫分析技术（如酶联免疫吸附测定法）对四环素类药物进行快速检测，但其通常灵敏度较低。
在实际检测中，样品的处理和准备是非常重要的环节，常见的处理方法包括酸化处理、溶剂萃取和反相萃取等。
为了提高准确性和可靠性，通常会配备对照标准品进行定量分析，并采用国家标准方法进行检测。
对鸡肉组织中四环素类药物残留进行检测和分析的方法有很多种，每种方法都有其适用的场合和特点。
在实际应用中，应根据实际需要选择合适的方法，并严格按照标准操作，以确保检测结果的准确性和可靠性。
只有这样，才能有效保障鸡肉食品的安全，保护人民的健康。
鸡肉组织中四环素类药物残留检测与分析
鸡肉组织中四环素类药物残留检测与分析鸡肉是我们日常饮食中常见的食材之一，但鸡肉组织中是否含有四环素类药物残留是一个备受关注的问题。
四环素类药物是一类广谱抗生素，广泛应用于家禽养殖业中用于预防和治疗鸡的各种疾病。
长期或过量使用四环素类药物可能导致药物残留在鸡肉中，对人体健康造成潜在危害。
对鸡肉中四环素类药物残留进行检测与分析具有重要意义。
一、四环素类药物在鸡肉中的残留情况1.四环素类药物的使用情况2.四环素类药物对人体的危害四环素类药物残留在食品中对人体健康可能造成潜在危害，其中包括对人体内脏器官的损害、对人体免疫系统的影响、对骨骼系统的影响等。
在临床上，曾有因四环素类药物残留引起的食物中毒病例发生。
对鸡肉中四环素类药物残留的监测与分析显得尤为重要。
1.液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）液相色谱-质谱联用技术是目前最常用的药物残留检测方法之一。
该方法不仅能够快速准确地检测出鸡肉中的四环素类药物残留，而且还可以对残留量进行定量分析，具有高灵敏度和高选择性的特点。
2.酶联免疫吸附测定法（ELISA）酶联免疫吸附测定法是一种常用的快速检测方法，它利用特定抗体对四环素类药物进行检测，操作简便，检测结果准确可靠，适合于大批量样品的快速筛查。
3.高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是一种根据化学成分分离和检测物质的方法，能够对四环素类药物进行准确的鉴定和定量分析，是一种常用的检测方法之一。
以上提到的方法都是目前常用的鸡肉中四环素类药物残留检测方法，各自具有特点和适用范围，可以根据实际情况选择合适的方法进行检测。
1.监测对象的选择在进行鸡肉中四环素类药物残留的监测与分析时，首先需要选择监测对象。
主要包括从养殖场、屠宰场和市场等环节采集的鸡肉样品，确保样品来源丰富、全面，以便全面了解四环素类药物在鸡肉中的残留情况。
2.样品的采集与处理在采集鸡肉样品时，需要注意样品的采集方法和保存条件，以避免样品污染和变质。
食品理化检验技术智慧树知到期末考试章节课后题库2024年长春职业技术学院
食品理化检验技术智慧树知到期末考试答案章节题库2024年长春职业技术学院1.如果建设工程或生产没有翻动土层，则中下层土壤不会受污染物影响。
（）答案:错2.用基准物质标定溶液浓度时，为了减少系统误差，一般要选用摩尔质量较小的基准物质（）答案:错3.干灰法适宜用于测定易挥发性物质（）答案:错4.供试品或水装瓶时，注意不要有气泡，如有气泡则应放置，待气泡消失再调节，黏稠液装瓶时更应小心倒入.（）答案:对5.检查不合格的食品就等同于有毒有害的食品。
（）答案:错6.朗伯一比尔定律是光吸收的基本定律，其意是当一束单色光穿过透明介质时，光强度的降低与（）成正比。
答案:光路中吸光微粒的数目###吸收介质的厚度###吸收介质的材料7.通过以下（）可以得到液相色谱用水。
答案:二次或三次重蒸水###专门的纯水机或超纯水机###去离子水重蒸8.样品的预处理的步骤包括（）答案:缀合物水解###净化和富集###去除蛋白质9.用高锰酸钾可以直接滴定的物质有（）。
答案:H2O###Fe2+10.下列试样中，可以选用HIO，氧化法测定其含量的是（）答案:乙二醇###葡萄糖11.下列物质中属于可能违法添加于食品的非食用物质有（）答案:吊白块###苏丹红12.担体是一种多孔性化学惰性固体，在气相色谱中用来支撑固定液。
对其有如下要求（）答案:有一定的机械强度###表面积较大###具有化学惰性和热稳定性###有适当的孔隙结构13.农药残留量测定法中，方法有（）答案:有机氯类农药残留量测定法###拟除虫菊酯类农药残留量测定法###有机磷类农药残留量测定法###农药多残留量测定法14.下列必须在抽毒罩和通风橱内进行操作处理的有（）。
答案:氯###溴###氢氰酸15.HPLC与经典液相色谱相比有以下优点（）。
答案:速度快###灵敏度高###分辨率高16.在GB/T8967-2007《谷氨酸钠(味精)》提供了三种味精中谷氨酸钠测定的方法，分别是（）。
胶体金免疫层析法快速检测水产品中四环素类药物残留
胶体金免疫层析法快速检测水产品中四环素类药物残留檀尊社;陆恒;邵伟;张少恩【摘要】为建立用于快速检测水产样品中四环素类药物残留含量的胶体金免疫层析检测试剂,采用免疫竞争法,将抗四环素单克隆抗体-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,并将人工合成的四环素抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线(T 线),其残留药物与待测样品中四环素竞争结合胶体金标记的四环素单克隆抗体,最终能以颜色直观显示检测结果.检测水产品试样时,试剂灵敏度最低值可达100 ng/mL,仅需5～10 min,与金霉素、土霉素、强力霉素等四环素族抗生素有很强的交叉反应,故可同时检测四环素族中几种主要抗生素,而与沙丁胺醇、莱克多巴胺等其他兽药无交叉反应.试验证明检测试剂具有较高的灵敏度及特异性,操作便捷,稳定可靠,可作为四环素残留现场监控的有效筛检手段.【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2010(019)008【总页数】6页(P32-37)【关键词】四环素;半抗原;免疫测定;胶体金;免疫层析【作者】檀尊社;陆恒;邵伟;张少恩【作者单位】洛阳市农产品安全检测中心,河南洛阳,471002;洛阳市农产品安全检测中心,河南洛阳,471002;杭州南开日新生物技术有限公司,杭州,310022;杭州南开日新生物技术有限公司,杭州,310022【正文语种】中文【中图分类】TS201.6四环素类药物为广谱抑菌剂,高浓度时具杀菌作用。
其作用机制在于药物能特异性地与细菌核糖体30S亚基的A位置结合,阻止氨基酰-tRNA在该位上的联结,从而抑制肽链的增长和影响细菌蛋白质的合成。
由于四环素类的广泛应用,临床常见病原菌包括葡萄球菌等革兰氏阳性菌以及肠杆菌属等革兰氏阴性杆菌,对四环素大都有耐药性。
此外,四环素类药的滥用还引起该类药物在动物的肌肉、奶、肝脏等中残留,严重危害人类的健康。
近年来,四环素类药物在食物中的残留检测问题引起了广泛关注[1]。
四环素等半抗原的检测方法,通常采用酶联免疫吸附反应(ELISA)及高效液相色谱(HPLC)及气-质联用(GC-MS)等方法[2]。
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第９ 卷
第３ 期
供
水技Leabharlann 术 ２ ０ １ ５ 年 ６月
６ ３ ０ ｎ ｍ） ， 记 录每个微 量 测试孔 的吸光度 值 。 １ ． ４ 计算 方法
表１ 标 准 品 的 吸 光 度值 和 四 环 素 含 量 （ 标线 １ ） 标 准 品编 号 吸 光 度 ｌ ２ ３ ４ ５ ６
中图分 类号 ：０ ６ ５ ７ ． ７ ５ 文献标 志码 ：Ｃ 文章编 号 ：１ ６ ７ ３— ９ ３ ５ ３ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ３— ０ ０ ５ ７— ０ ３
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ３ —９ ３ ５ ３ ． ２ ０ １ ５ ． ０ ３ ． ０ １ ５
稀释（ １ 份浓 缩洗涤液 ＋ｌ ９份去离子 水 ） ， 配制 ４ Ｏ ｍ Ｌ洗涤 液 。 ② 取 出框 架 及 ３条 微量 测 试 孔 ， 将 标 准 品 和
水样 对应微 量 狈 ０ 试孔按序编号 ， 并 记 录标 准孔 和样 本孔 所在 的位 置 。
③
每孔分别加标准品和水样 ５ ０
四环 素类 药 物 常被作 为饲 料 添加剂 用 于畜 禽业 中的动 物疾 病 治 疗 和 预 防 ＿ ｌ Ｉ ２ ｊ 。特 别 是 ， 四环 素 类 药物 在我 国畜禽 生 产 中 是使 用 量 最 大 的抗 生 素 ， 且 较大 部分 难 以被 动物 吸 收 ， 会 以母 体 化 合 物 的形 态
到各 自的
微量 测试 孔 中 ， 然后 每 孔加 入 酶标 记 物 ５ ０ ， 再加
１ 材料和方 法
１ ． １ 主要 试 剂和 仪器
主要 试 剂 ： Ｅ Ｆ ０ ２ ９ ０ ２四环素 检 测试 剂 盒 ， 包 括微 量测 试孑 Ｌ 、 标 准 品浓 缩液 、 酶标 记 物 、 抗 体 工作 液 、 底 物 Ａ液 、 底 物 Ｂ液 、 终 止液 、 ２ ０倍浓 缩洗 涤 液和标 准 品 复溶 液 。
准 曲线 （ 各个 点 分别 编 号为标 准 品 １ ～６ ） ， 质 量浓 度 分别为 ０ ， ０ ． ０ ５ ， ０ ． １ ５ ， ０ ． ４ ５， １ ． ３ ５和 ４ ． ０ ５ Ｌ 。 同 时， 将２ ｍＬ的 ２ Ｏ倍 浓缩 洗 涤 液用 ３ ８ ｍ Ｌ去 离 子水
制药 厂 的偷 排 废 水 也 是 水 体 中抗 生 素 的来 源 。 因
入抗体工 作液 ５ Ｏ ， 用 盖板膜封板 ， 轻 轻振荡混 匀 。２ ５ ｑ Ｃ 环境 中 ， 反应 ３ ０ ｍｉ ｎ 。 ④ 将微量测试孔内液体甩干 ， 每孔用 ２ ５ ０ ｔ ｚ Ｌ
已稀 释 的洗 涤液洗 板 ５次 ， 每次 间 隔 ３ ０ ｓ ， 并 用 吸 水 纸拍 干 。
第 ９卷
第 ３期
供 水 技 术
Ｗ ＡＴ Ｅ Ｒ Ｔ Ｅ ＣＨＮＯＬ ＯＧＹ
Ｖｏ １ ． ９ Ｎｏ ． ３
２ ０ １ ５年 ６月
Ｊ ｕ ｎ ． ２ ０ １ ５
酶联 免疫 法 测 定 上 海 原水 中 四 环 素 浓 度
韩敏 奇 ， 蒋增辉 ， 陆志惠 ， 曹霞霓
此， 抗生素（ 包括 四环素类药物 ） 的环境污染是值得 重视 的环境 问题 。 间接 竞 争酶 联免 疫法 的原 理 为通过 在微 量测 试
孔 中预包 被偶 联抗 原 ， 水 样 中的 四 环 素将 与 其 竞 争 四环 素抗 体 ， 加 入酶标 记 物后 ， 用 底物显 色 。水样 吸 光度 值 与其 所含 四环 素 的含量 成 负相关 。绘制『 标准 曲线 ， 然 后 与拟合 的线 性 方 程 比较 即 可得 出相 应 四 环 素 的含 量 。
定 水样吸 光度 值 ， 并计 算 出所含 四 环素 的浓 度 。结 果表 明 ， 长 江原 水 的四 环 素含 量 均 小 于检 出限 ， 黄 浦江上 游原 水 中有 ２个 水样 的 四环 素含 量小 于检 出限 ， 其 余 ６个 水样 的 四环素含 量 分别 为０ ． ０ ５， ０ ． ０ ９ ， ０ ． ２ １ ， ０ ． ２ ４ ， ０ ． ２ ３和 Ｏ ． ２ １ ｇ ／ Ｌ ， 推 测黄 浦 江原 水 中四环 素的 来 源主要 为农 业养 殖 污染 。 关键 词 ： 酶联 免疫 法 ； 原 水 ； 四环 素 ； 四环素检 测 试 剂盒
仪器 ： Ｅ ｌ ｘ ８ ０ ８酶标仪。
１ ． ２ 试 验材 料
⑤ 每孔 加入 底 物 Ａ液 ５ ０ ， 再加入底物 Ｂ 液５ ０ Ｌ ， 轻轻振荡混匀 ， 在２ ５℃环境 中， 避光显色
１ ５ ｍｉ ｎ。
待 测水 样 为 长 江 水 和 黄 浦 江 水 ， 分 别 编 号 为
（ 上 海市供 水调 度监测 中心 ，上 海 ２ ０ ０ ０ ２ ）
摘 要： 为应对 水 源地 突发 水质 污 染 ， 采 用酶联 免 疫 法快速检 测原 水 中四环 素的含 量 。采集
长 江原 水和 黄浦 江原 水水 样 ， 对酶联 免 疫试 剂 盒 中的标 准物质 稀释 后绘 制标 准 曲线 ， 利 用酶标 仪测
排出， 然 后 进 入 环境 中 ， 包 括 水 域 Ｊ 。另 一 方 面 ，
ＨＰ Ｊ ５、 ＨＰ Ｊ ６、 ＨＰ Ｊ ７和 ＨＰ Ｊ ８ 。
１ ． ３ 试验 方 法
① 将试剂平衡到室温后 ， 首先用标准品浓缩 液（ ８ ｌ ｇ ／ Ｌ ） 和 标 准 品复 溶 液 ， 按 梯 度 稀 释 配 制 标
Ｃ Ｊ １ 、 Ｃ Ｊ ２和 Ｃ Ｊ ３ 。 以及 Ｈ Ｐ ｊ ｌ 、 Ｈ Ｐ Ｊ ２ 、 Ｈ Ｐ Ｊ ３ 、 ｔ ｔ Ｐ Ｊ ４ 、
⑥
每￣ Ｌ ； ０ １ 人终止 液 ５ ０ Ｌ， 轻轻振 荡混 匀 ，
将 酶标 仪设 定在 双波 长模 式下 进行 检测 （ ４ ５ ０和
・
５ ７・