氯雷他定片含量测定方法的改进

氯雷他定片含量测定方法的改进
[摘要] 目的改进氯雷他定片的含量测定方法。

方法采用kromasil c18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），柱温为室温，流动相为磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钾0.57 g，加水800 ml使溶解，用磷酸调节ph值为6.0，加水至1 000 ml）-甲醇（20∶80），检测波长247 nm，流速为1.0 ml/min，进样体积为10 μl，进样浓度为16 μg/ml。

结果降低进样浓度及流动相中盐的比例后，氯雷他定色谱峰型对称，符合系统适应性要求，进样量在0.031 96～0.639 20 μg范围内与峰面积有良好的线性关系（r = 0.999 99，n = 6），高、中、低3种浓度的平均加样回收率为99.4%（rsd = 0.58%，n = 9）。

结论该法结果准确可靠、重现性好，有利于延长泵及色谱柱的使用寿命，可作为氯雷他定片的含量测定方法。

[关键词] 氯雷他定片；进样浓度；含量测定；回收率
[中图分类号] r927.2 [文献标识码] a [文章编号] 1674-4721（2013）02（c）-0076-03
氯雷他定片是抗组胺药，用于缓解过敏性鼻炎有关的症状，亦适用于缓解慢性荨麻疹及其他过敏性皮肤病的症状[1-3]。

现行标准用高效液相色谱法测定含量，笔者在检验工作中发现，现行标准的进样浓度偏高，其后果易造成色谱柱超载，且流动相中磷酸盐的浓度偏高[4-5]，易损伤仪器和色谱柱，据此本文对现行方法进行了改进：降低进样浓度为原浓度的1/15，降低磷酸盐浓度为原浓度的1/4，实验证明此法可行，可作为氯雷他定片的含量测定方法。

1 仪器与试药
waters 2695-2489高效液相色谱仪；empower 2工作站；氯雷他定对照品（批号：100615-200602，中国药品生物制品检定所）；氯雷他定片（上海先灵葆雅制药有限公司，批号10erxf1020；山东罗欣药业股份有限公司，批号：110927；海南新世通制药有限公司，批号：110502）；甲醇为色谱纯；磷酸氢二钾、磷酸均为分析纯；水为超纯水。

2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：kromasil c18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钾0.57 g，加水800 ml使溶解，用磷酸调节ph值为6.0，加水至1 000 ml）-甲醇（20∶80）；流速：1.0 ml/min；柱温：室温；检测波长：247 nm；进样体积为10 μl；理论塔板数以氯雷他定峰计算不低于2 000；拖尾因子：1.02；氯雷他定与相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5。

2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品贮备溶液精密称取氯雷他定对照品6
3.92 mg，置100 ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 对照品溶液精密量取对照品储备溶液25 ml，置100 ml 容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取5 ml，置50 ml 容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 供试品溶液取供试品20片，精密称定，研细，取细粉适
量（约相当于氯雷他定10 mg），精密称定，置50 ml量瓶中，加流动相适量，振摇溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2 ml，置25 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得[6-8]。

2.3 专属性试验
取氯雷他定片细粉4份（每份约相当于氯雷他定10 mg），分别经以下条件处理：（1）加入1.0 mol/l的盐酸溶液5 ml破坏后，再加入1.0 mol/l的氢氧化钠溶液5 ml中和至中性；（2）加入1.0 mol/l的氢氧化钠溶液5 ml破坏后，再加入1.0 mol/l的盐酸溶液5 ml中和至中性；（3）在电炉上直火加热至片粉显微棕色；（4）经4 000 lx光照24 h。

取上述经酸、碱、强热及光照破坏的产物，照“2.2.3”项下制备供试品溶液，记录色谱图。

结果表明：氯雷他定与各降解产物分离良好，分离度均大于1.5。

见图1、2、3、4、5。

2.4 线性关系考察
精密量取对照品储备液25 ml，置100 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别精密量取1.0、2.0、5.0、10.0、15.0和20.0 ml，分别置于50 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。

进样10 μl，测定峰面积。

以进样量（μg）为横坐标x、峰面积为纵坐标y绘制标准曲线，得回归方程为y = 2 296 747.35x - 715.40，r = 0.999 99（n = 6）。

表明氯雷他定进样量在0.031 96～0.639 20 μg范围内与峰面积有良好的线性关系。

2.5 精密度试验
取对照品溶液，按“2.1项下方法”连续重复进样5次，考察峰面积变化，结果rsd值为0.20%，表明仪器的精密度良好，能满足测定要求。

2.6 稳定性试验
取同一批供试品溶液，在室温条件下放置，分别在0、4、8、12、24 h测定，平均峰面积为365 430，rsd值为0.31%（n = 5）。

表明供试品溶液至少在24 h内稳定。

2.7 重复性试验
取同一批号的氯雷他定片（批号：10erxf1020），按“2.2.3”项下制备供试品溶液5份，依法测定，rsd值为0.45%（n = 5），表明该方法重复性良好。

2.8 回收率试验
精密称取已知含量的氯雷他定片（批号：10erxf1020）细粉适量（相当于氯雷他定5 mg）9份，分为3组，每组分别精密加入对照品贮备液6、8、10 ml，配成低、中、高3个浓度，按“2.2.3”项下制备供试品溶液，测定回收率。

见表1。

2.9 样品测定
取对照品溶液、供试品溶液各10 μl，进样测定，记录色谱图，按外标法计算含量。

本法与现行方法测定结果进行比较，结果显示，两法的测定结果基本一致。

见表2。

3 讨论
3.1 进样浓度的选择
高效液相色谱分析中，进样量不宜过大，以免色谱柱超载或检测器超限，本法选用“2.4”项下标准曲线的中间浓度为进样浓度，响应值的重现性良好。

本法的浓度用岛津uv-2550紫外分光光度计测定，吸收度约为0.6，而现行标准测定浓度的吸收值因检测器超限而无法显示数据。

3.2 流动相的选择
《中华人民共和国药典》2010年版二部新增关于流动相的选择原则是：应尽可能少用含有缓冲液的流动相，必须使用时，应尽可能选用含较低浓度缓冲液的流动相[9]。

笔者曾选用不加盐的流动相甲醇∶水（80∶20）、乙腈∶水（80∶20）进行考察，结果显示主峰不为分离峰；分别用现行方法及本法的高、低两种磷酸盐浓度进行比较，色谱峰除保留时间有差异外，分离效果均良好，故选用低浓度的缓冲盐溶液作为流动相，将缓冲盐溶液给仪器和色谱柱带来的损害降至最低；本研究还曾选用乙腈代替本法流动相中的甲醇进行试验，柱效及峰高虽提高至原来的2倍，但考虑到本法已经达到系统适用性的要求，且乙腈的毒性和成本较大，所以不建议使用。

3.3 专属性
经破坏试验验证，本法的氯雷他定主峰与降解产物达到良好的分离，能够排除降解产物的干扰，专属性强且峰型良好，拖尾因子为1.02，可以有效地控制氯雷他定片的质量。

本法测定氯雷他定片的含量，具有较宽的线性范围和较高的回收
率，结果可靠、准确、重现性好，色谱条件符合系统适用性要求，有利于延长泵及色谱柱的使用寿命，与现行方法测定结果比较，两法的测定结果基本一致，可以作为氯雷他定片的含量测定方法。

[参考文献]
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[2] 崔京，黄健，霍立茹，等. 氯雷他定片含量及有关物质的hplc 测定[j]. 中国医药工业杂志，2002，33（6）：294-295.
[3] 康军，张鹤. hplc法测定氯雷他定片含量[j]. 中国医药导报，2011，8（4）：56-58.
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[5] 张带荣，周利娟. 高效液相色谱法测定氯雷他定糖浆中氯雷他定含量[j]. 中国医院药学杂志，2007，27（9）：1316-1317.
[6] 刘东权，王晓文，陈鑫，等. 氯雷他定泡腾片的含量和含量均匀度测定[j]. 中国医药导报，2011，8（32）：55-57.
[7] 孙大赢，张传霞. 高效液相色谱法测定氯雷他定胶囊的含量[j]. 中国药业，2009，18（14）：33-33.
[8] 柏学东，崔志红，王兆钦，等. 高效液相色谱法测定氯雷他定颗粒剂的含量[j]. 中国药业，2008，17（9）：27-28.
[9] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典[s]. 二部. 北京：中国医药科技出版社，2010：29-30.
（收稿日期：2012-12-03 本文编辑：袁成）。