HPLC法测定并比较喜树果、马比木中10-羟基喜树碱含量

HPLC法测定并比较喜树果、马比木中10-羟基喜树碱含量苏爱雪;周翔;罗娅君;边清泉
【摘要】目的：建立喜树果、马比木中10-羟基喜树碱的高效液相色谱法分析方法,并对两者10-羟基喜树碱含量进行比较分析。

方法：采用岛津LC-20A高效液相色谱系统对样品进行定量分析,色谱柱为ODS；甲醇：水(5.5：4.5)为流动相；检测波长为254nm；柱温35益；流速0.9mL·min-1。

结果：该条件下目标组分与其他组分有效分离( R>1.5),喜树碱进样量在0.01~0.09μg线性范围关系良好,相关系数 r=0.9996,平均回收率：100.4%,RSD：0.23%。

结论：该方法专属性强、分离效果好、分析速度快、灵敏度高、操作简便易行、结果准确可靠。

分析结果可为喜树果和马比木的深度开发提供参考依据。

【期刊名称】《产业与科技论坛》
【年(卷),期】2014(000)005
【总页数】2页(P78-79)
【关键词】HPLC;喜树果;马比木;10-羟基喜树碱
【作者】苏爱雪;周翔;罗娅君;边清泉
【作者单位】绵阳师范学院化学与化学工程学院;绵阳师范学院化学与化学工程学院;绵阳师范学院化学与化学工程学院;绵阳师范学院化学与化学工程学院
【正文语种】中文
喜树果是中国珙桐科植物(Camptotheca acuminate Decne)的果实，喜树又称旱
莲、水桐树、千张树，主要生长于云南、广西等地;马比木为茶茱萸科植物海桐假
柴龙树(Nothapodytes Pittosporoides Oliv.sleum)的根皮，又称为公黄珠子、
追风伞，分布于贵州、湖北、四川、湖南等地。

2种植物的共同特点是均含有活性成分喜树碱及其衍生物10－羟基喜树碱(10－hydroxycamptothecin，简称HCPT)，喜树碱及10－羟基喜树碱临床用于治疗膀胱癌、胃癌、直肠癌等消化系
统恶性肿瘤，10－羟基喜树碱作为S期的特异性抗癌物质，其毒性较喜树碱低，
用于直肠癌、原发性肝癌、胃癌、慢性粒细胞白血病、膀胱癌的治疗更为安全有效。

因此，深入研究10－羟基喜树碱的分布、存在形式、分离提取、药理药效等对新
的抗癌药物研究具有重要价值。

喜树碱的研究已有大量文献报道，10－羟基喜树
碱的研究起步相对稍晚，文献报道较少，对喜树果、马比木中10－羟基喜树碱含
量的比较研究更是鲜有报道。

本实验通过喜树果和马比木中10－羟基喜树碱含量
的分析检测，对2种植物中10－羟基喜树碱的含量进行比较，为喜树果、马比木
的深度研究开发及10－羟基喜树碱提取物生产原料的选择提供科学依据。

一、实验部分
(一)仪器与试验材料。

仪器:高效液相色谱仪系统(日本岛津)，包括 LC－20AT型输液泵，二极管阵列检测器，CLASS－vp5.0色谱数据处理工作站及CTD－6A色谱柱温箱;AY120电子天平(SHIMADZU)，Fw－80型粉碎机，KQ 250DE型医用超
声波清洗器，101—2A型电热鼓风恒温干燥箱，Sz－93型自动双重纯水蒸馏器。

试验材料:水为高纯水;喜树果、马比木购于成都中药材市场，10－羟基喜树碱标准品(本实验室分离纯化，面积归一法测定含量＞99%);甲醇为色谱纯(成都化学试剂厂)，其他化学试剂均为AR级，试验用水为二次重蒸水。

(二)色谱条件。

色谱柱:Kromasil C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm);流动相:甲醇:水(5.5:4.5);流速:0.8 mL·min－1;柱温:30℃;检测波长:254nm;进样量:10μL。

10 －羟基喜树碱的保留时间为7.06min(见图1)。

理论塔板数按10－羟基喜树碱计
算大于4，000。

10－羟基喜树碱与相邻组分分离良好(R ＞1.5)。

(三)标准品与供试品溶液的制备。

精确称取10－羟基喜树碱标准品5.4 mg，置于
50 mL容量瓶，加甲醇定容，摇匀，得10－羟基喜树碱储备液。

取储备液1 mL
置于10 mL容量瓶中，甲醇稀释至刻度，振荡均匀，即得标准品溶液，备用。

10－羟基喜树碱的浓度为10.8μg·mL－1。

将供试样品喜树果、马比木于65℃干燥至恒重(12h)，粉碎，过0.30 mm筛，备用。

精密称取喜树果样品0.2046 g、马比木样品0.3024 g，分别置50 mL三角
烧瓶，分2次加入约45 mL甲醇，每次避光超声(250 W，30 kHz)萃取20 min，合并萃取液，0.45 μm滤膜过滤，转入100 mL棕色容量瓶，甲醇定容至刻度，
得喜树果、马比木供试品溶液。

二、方法与结果
(一)检测波长与流动性的选择。

在实验流动相系统条件下，通过二极管阵列检测器(DAD)对10－羟基喜树碱标准品全波段紫外吸收扫描，10－羟基喜树碱的λmax
为254 nm。

254 nm处待测定组分10－羟基喜树碱与相邻不明物组分分离度＞1.5，满足分析要求，故确定10－羟基喜树碱检测波长为254 nm。

HPLC测定10－羟基喜树碱含量的流动相文献已有报道。

分别对文献中各流动相
进行对比试验。

结果发现，甲醇与水体积比为5.5:4.5流动相体系时，峰形对称性良好，喜树果和马比木中的10－羟基喜树碱与相邻组分色谱峰分离度良好，出峰
时间适宜，满足分析方法需求。

故选择流动相为甲醇与水体积比5.5∶4.5。

(二)标准曲线的制备。

分别精密吸取10－羟基喜树碱的标准溶液 1，3，6，9，12 μL，注入高效液相色谱仪，测定其峰面积，记录图谱及色谱参数，以进样量(X)对
峰面积(Y)回归分析，得到线性回归方程为y=21022x－880.8，相关系数
r=0.9996，线性范围 0.011 ～0.13 μg。

(三)精密度与稳定性试验。

精密吸取10－羟基喜树碱标准品溶液，在实验条件下
连续进样5次，测定10－羟基喜树碱的峰面积，RSD=0.6%。

结果表明仪器精密度良好;分别取喜树果、马比木供试品溶液在0，3，6，9，12 h进样分析，测定
目标组分含量，喜树果RSD=0.7%，马比木溶液RSD=0.5%。

表明喜树果和马比木供试品溶液在12 h内稳定。

(四)供试品加标回收试验。

精密称取约0.20～0.35 g已知含量的马比木6份，1
份为测定本底值，另5份准确添加与样品中含量相近量的10－羟基喜树碱标准品，按上文实验制备供试品溶液，按实验要求测定含量，每样重复测定3次，求均值，计算回收率。

结果见表1。

表1 加标回收率测定结果(n=5)
(五)含量测定。

分别精密吸取标准品和供试品待测液10μL，重复进样5次，求峰
面积值均值，外标法一点法计算含量，喜树果和马比木中10－羟基喜树碱含量分
别为1.94 mg·g－1和0.76 mg·g－1。

标准品与供试品色谱图见图 1。

图1 标准品与样品HPLC色谱图注:A10－羟基喜树碱标准品;B喜树果样品;C马比木样品;a10－羟基喜树碱。

三、结论
供试样品喜树果、马比木测定结果表明:喜树果中10－羟基喜树碱含量为马比木的2.6倍。

在不考虑原料是否易得(两植物我国多省份均有分布)及原料成本(喜树果价格为马比木的2倍)的前提下，生产10－羟基喜树碱提取物选择喜树果为原料更为经济合理。

本实验结果将为喜树果、马比木的深度开发提供科学依据。

【参考文献】
【相关文献】
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2.李猛，黄意涵，李沁媛，等.HPLC法测定马比木中喜树碱的含量[J].绵阳师范学院学报，2010
3.徐春艳，黄明智，薛传薪.10－羟基喜树碱的合成及光谱表征[J].光谱学与光谱分析，2005
4.边清泉，杨振萍.10－羟基喜树碱单体制备方法的研究[J]..兰州大学学报(自然科学版)，2004
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