流式细胞仪测定小儿恶性肿瘤细胞DNA倍体及细胞周期的临床意义

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4"-DG# 上机检测 % 7%8流式细胞仪检测 用 :0 公司三 色荧光微球较准仪器的 BK 在 %L 以下 % 亚离子激光 器功率为 46-MJ 激发波长为 #$$G-J 对样品进行单参 数 012 含量分析 % 按 :0 公司 B.’’ND, 软件进行 012 指数 !0O " 及细胞周期数据处理 % !"% &’( 含量表示方法
4<4 为 二 倍 体 细 胞 # 判 断 结 果 时 # 将 近 二 倍 体 $ 四 倍
体 $ 多倍体及非整倍体均划为异倍体 % 细胞增殖指数 !9O " A!; UR! = V " = !R" = R4 U; UR! = V " H4""L J; 期 细 胞 !;9&"A; = !R" = R4U;UR! = V "H4""L%
! 关键词"# 肿瘤 $ 遗传学 $%&’ $ 细胞周期 $ 流式细胞术 ! 中图分类号"#G<H9;C !文献标识码 "! @ ! 文章编号D AIJAKI<L<MC889N89K8CIOK8<
!"# $%&’&()% *&+’&,&-.’/0 1, 234 5%1&67 .’6 $0%% $7/%0 $".8)/908 &’ 506&)98&/ :)%&+’)’9 ;<=18> ?7 @%1A B791=0987 2090/9&1’
公司产品含 2 #: 两种液 "’7%8 仪器 & 流式细胞仪为美 国 :0 公司 &2B;*C’DEF/ % !"$ 方法 748 制备单细胞液 组织标本用剪刀剪至匀浆状 # 加适量 9:; 缓冲液混匀 ’ 经 %"" 目滤网过滤至 4"-’ 试管离心 #46""/?-6-DG# 去上清 # 加 9:; 离心 # 重 复 洗 % 次 # 将细胞调整到 4H4" = -’ % 7!8 染色 取单细胞
I
# 结果
#"! &’( 倍体分析 012 倍 体 分 析 见 表 4% 在 !" 例 小 儿 恶 性 肿 瘤 中 # 二倍体肿瘤 S 例 # 异倍体肿瘤 44 例 % S 例二倍体 肿瘤中 # 肿瘤细胞病理类型高分化者 I 例 # 中分化者 % 例 #低分化者 " 例 ’44 例异倍体肿瘤中 #高分化者 ! 例 # 中分化者 # 例 # 低分化者 6 例 % 本组测定结果显
C4 徐州医学院附属医院中心实验室 4 江苏 徐州 CCA88C %
!摘 要D 目的 探 讨 小 儿 恶 性 肿 瘤 细 胞 核 >=@ 倍 性 分 布 & 细 胞 周 期 特 征 " 并 分 析 其 临 床 意 义 ’
法 胞 比 例4并 研 究 这 些 参 数 与 肿 瘤 组 织 分 期 之 间 关 系 ( 化 组 的 >E & 1-F 及 -E 有 显 著 性 差 异 ( 预后判断提供依据 ( 结论 结果 方
! 讨论
很多资料显示肿瘤是一类细胞周期性疾病 >?@" 对 于细胞增殖的细胞周期分析 " 就是对细胞内周期性 变化的物质进行检测 " 以达到对细胞增殖检测的目 的 # 自 :&% A+’’& 第 一 次 在 流 式 细 胞 仪 上 显 示 了
率 仅 为 CJK 而 低 分 化 细 胞 异 倍 体 发 生 率 为 ?88K4 并且 AL 有增高趋势 4 低分化与高分化细胞的 AL 有 显著性差异 %! MJ;8< ""N8;8J &" 低 分 化 与 中 分 化 细 胞 的 AL 亦有显著性差异 %!M<;O9I"N8;8J &# 说明肿瘤细 胞分化越差 "AGB 含量增高 " 常表明其生物遗传物 质丰富和恶性程度高 >9@# 因此可将其作为评价恶性 肿瘤的一个指标 # 由此可见 " 肿瘤的倍体分布与肿 瘤的预后有密切关系 # 1 期为细胞的 AGB 合成期 " 一般认为肿瘤细胞 1 期比率高 " 表示参与增殖的细 胞多 " 细胞倍增时间短 " 肿瘤发展快 >J@# 本组资料检 测显示肿瘤细胞随分化程度减低 "-L 和 1-P 显著增 高 " 提示癌细胞 AGB 合成活跃 # 低分化与高分化的
d作者简介 D魏华 )AHIHK %" 男 " 硕士 " 主治医师
临床小儿外科杂志 !""# 年 $ 月 第 % 卷 第 # 期 流式细胞仪 !&’() *+,(-.,/+" 可快速定量分析细 胞 012 #目前已广泛应用于肿瘤基础和临床研究 # 具 有客观 $ 定量和重复性强等优点3% 本研究对小儿恶性 肿瘤的细胞 012 含量及细胞周期特征进行分析 # 旨 在确定肿瘤恶性程度 # 为判断预后提供依据 %
应 用 流 式 细 胞 仪 测 定 C8 例 小 儿 恶 性 肿 瘤 细 胞 核 >=@ 倍 体 模 式 & >=@ 指 数 & 增 殖 指 数 和 1 期 细 二倍体肿瘤主要分布于细胞分化较好的
肿 瘤 $随 着 肿 瘤 细 胞 病 理 分 级 的 发 展 "异 倍 体 肿 瘤 的 检 出 率 逐 渐 上 升 ( 相 对 于 低 分 化 组 而 言 "高 &中 分 流 式 细 胞 仪 测 定 小 儿 肿 瘤 细 胞 核 >?@ 倍 体 模 式 及 细 胞 周 期 特 征 在 评 估 小 儿 肿 瘤 恶 性 程 度 上 有 重 要 意 义 "测 定 结 果 应 与 临 床 &病 理 资 料 相 结 合 "为恶性肿瘤
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表 C 小儿恶性肿瘤细胞的 AL $-L $1-P 与细胞分化关系 肿瘤细胞病理类型 高分化 ! 中分化 " 低分化 !
%ALT!U1VK W?;?? U8;8W S?;?S U8;8Q J?;98U8;?<
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流式细胞仪测定小儿恶性肿瘤细胞 >?@ 倍体及 细胞周期的临床意义
魏 华 AB 孔 燕 A4 丁 勇 A4 靳振怀 A" 冯 霞
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#A4 徐州医学院附属医院小儿外科 " 江苏 徐州 CCA88C $
以 012 指数 !012 OGP.QJ0O " 表示 012 相对含 量 # 同源正常细胞作为内定标 % 0OA 被测细胞 R" = R4 峰均道数 = 同源正常细胞 R" = R4 峰均道数 !0OA"<ST
! 材料和方法
!"! 实验材料
本院手术经病理组织学确诊的小儿恶性肿瘤标 本 !" 例 # 其中胚胎性恶性肿瘤 4! 例 ! 包括肾母细胞 瘤 # 例 $ 卵黄囊瘤 % 例 $ 骶尾部恶性畸胎瘤 % 例 $ 肝 母细胞瘤 4 例 $ 神经母细胞瘤 4 例 "# 甲状腺癌 ! 例 # 淋巴瘤 % 例 # 肾上腺肿瘤 4 例 # 腹部肌肉瘤 ! 例 % 分 化程度 & 高分化 $ 例 #中分化 5 例 # 低分化 6 例 %
A=B 含量直方图后 " 利用流式细胞仪进行 A=B 含
PQE R#&! ST=U V&%! >E=U V"%2! .0 &’; !"#$%&’"(& )* +",-.&%-/ 01%2"%3456" 7**-8-.&", 9):#-&.8 )* ;1<6)1 =",-/.8 >)88"2"4;1<6)14?-.(2:1 @ABCCA4>6-(.D CDE>98./9F GEH0/9&I0 W" +%X.60+2&0. 0Y. >=@ Z’"+/3 /+60$+[#0+"% &%/ ,.’’ ,3,’. ,Y&$&,0.$ +% Z./+&0$+, \&’+2%&%0 0#\"#$6 &%/ 0Y.+$ ,’+%+,&’ 6+2%+)+,&%,.; :09"16> @%.#Z’"+/3 \"/.’B>?@ +%/.]^>ENBZ$"’+).$&0+"% +%/.]^-EN &%/ 1KZY&6. )$&,0+"% " 1-F# _.$. /.0.$\+%./ [3 )’"_ ,30"\.0$3 +% C8 Z./+&0$+, \&’+2%&%0 0#\"#$6; WY. ,"$$.’&0+"% ") 0Y.6. Z&$&\.0.$6 _+0Y Y+60"’"2+, 2$&/+%2 _&6 &%&’36./ +% 0Y.6. 0#\"#$6; J0><%9> >+Z’"+/3 \&+%’3 .]+60 +% _.’’K/+)).$.%0+&0./ 0#\"$6; @%.#K Z’"+/3 /.0.,0./ $&0. _&6 +%,$.&6./ _+0Y 0Y. .6,&’&0+"% ") Z&0Y"’"2+,&’ 2$&/+%2 &%/ Z""$ /+)).$.%0+K &0+"% ") 0Y. 0#\"$; WY. ’.X.’6 ") >EB1-FB-E +% Z""$’3 /+)).$.%0+&0./ 0#\"$6 _.$. 6+2%+)+,&%0’3 /+)K ).$.%0 )$"\ +% Y+2Y &%/ \+//’. /+)).$.%0+&0./ "%.6;^E ‘8;8LN; K1’/%<>&1’> WY. 60#/3 6Y"_6 0Y&0 +%X.60+2&0+%2 0Y. Z’"+/3 ") 0#\"$ &%/ ,.’’ ,3,’. ,Y&$&,0.$ \&3 [. & Z$./+,0"$ +% .X&’#&0+"% ") 0#\"$ \&’+2%&%,3 /.2$..; WY. Z$"2%"6+6 ") Z&0+.%06 \&3 [. .]&,0’3 .60+\&0./ [3 0Y. ,"$$.’&0+"% [.0_..% 0Y. $.6#’06 ") /.0.$\+%&0+"% &%/ ,’+%+,&’KZ&0Y"’"2+,&’ /&0&; CL07 M186>F ?."Z’&6\6aUQb >?@c *.’’ *3,’.c F’"_ *30"\.0$3
!") 统计学分析
所测数据经 ;9;;44<" 统计软件处理 J 两组比较 用 ! 检验% 检验水准取 CA"<"6J"W"<"6 有统计学有差异%
Hale Waihona Puke !"# 试剂与仪器 试 剂 & 7489:; 缓 冲 液 "<4-(’ = > 磷 酸 盐 缓 冲 液 7?@A5<#!8# 用时 4" 倍稀释 ’7!8012 试剂盒 ! 美国 :0
示 & 随着肿瘤细胞病理类型分级的发展 # 异倍体肿瘤 的发生率逐渐上升 %
悬 液 4""F’J 加 2 液 !6"F’J 室 温 孵 育 4"-DG ’: 液
!""F’ 室 温 孵 育 4"-DG#B 液 !""F’## B 避 光 孵 育
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表 4 肿瘤细胞病理类型与癌细胞核 012 倍体之间关系 肿瘤细胞病理类型 高分化 中分化 低分化
!!#!<%IJ"W"<"6"X 低分化与中分化细胞的 0O 有显著 性差异 7! A%<I#J" W"<"68J;9& 有显著性差异 !! A!<"%J" W
"<"6 "#9O 有显著性差异 !! A!<4SJ" W"<"6"J 而中分化与 高分化细胞的 0O $;9&$9O 比较均无显著性差异 %
G $ 5 6
二倍体 !L "
异倍体 !L "
I !56 " % !#% " " !" "
! !!6 " # !65 " 6 !4"" "
#"# 肿瘤细胞的 &*$+*$,+- 与细胞分化关系 肿瘤细胞的 0O $9O $;9& 与细胞分化关系见表 ! % 细胞周期分析 !" 例小儿恶性肿瘤细胞比较低分化 与 高 分 化 细 胞 的 0O 有 显 著 性 差 异 7! A6<"%J" W"<"68J ;9& 有显著性差异 !!A!<%4J"W"<"6 "J9O 有显著性差异
-LT!U1VK C9;;<8UC;O9 CJ;??U?;S? CW;98U<;OO
1-PT!U1VK ?9;<?UC;JC ?J;8C U?;OS ?S;QWU<;<O
注 X! 与 ! 比较 0ALMJ;8< "01-PMC;<? "0-LMC;<O " 有统计学差异 ""N8;8JY