葛根提取物技术要求编制说明

葛根提取物技术要求编制说明为贯彻落实《食品安全法》对保健食品实行严格监管的要求，严格保健食品原料管理，加强保健食品原料的安全监管，提高保健食品准入门槛，做好保健食品许可工作，国家食品药品监督管理局开展了保健食品原料标准的研究工作。

按国家食品药品监督管理局食品许可司的要求，我院承担了保健食品原料-葛根提取物技术要求的研究工作。

现将编制情况说明如下：一、编制情况简介1、通过检索、查阅相关文献资料，收集了全国已有的生产样品，参照已收集的企业生产工艺、制法，经试验确定产品制法并自制部分样品。

主要从以下几方面制定产品的技术要求：1 真伪方面。

感官与鉴别。

从感官、薄层、特征图谱及所含功效成分等方面鉴别产品的真伪；2 安全方面。

按《中国药典》中药质量标准研究制定技术要求（国家药典委员会）中的规定，注重中药安全性检测方法和指标的建立和完善，加强对重金属及有害元素、残留农药、残留溶剂、残留二氧化硫、微生物、真菌毒素等外源污染物的检测。

3 产品质量方面。

参考《中国药典》2010年版及相关文献资料，根据产品的实际功效，选定相应的功效成分控制产品的质量。

4 根据稳定性研究结果提供产品的贮藏条件。

于2010年7月完成了保健食品葛根提取物原料技术要求的试验研究工作。

2、组织有关专家进行评审2010年7月份，组织相关专家召开了专家论证会。

对保健食品葛根提取物原料技术要求进行了论证并提出了修改意见。

3、委托三家检测单位进行了技术复核2010年9月份，国家食品药品监督管理局食品许可司召开了保健食品原料技术要求制订汇报工作会议。

会上对保健食品葛根提取物原料技术要求提出了有关要求。

按要求于9月下旬，委托陕西省食品药品检验所，湖北省疾病控制中心及武汉市食品药品检验所三家单位进行了复核。

三家检测单位复核结果基本一致，均认为所订葛根提取物原料技术要求整体可行、重现性好。

4、国家食品药品监督管理局食品许可司组织专家进行了技术审评2010年11月份和2011年1月，国家食品药品监督管理局食品许可司先后两次在北京召开了《保健食品原料葛根提取物质量标准（征求意见稿）》等专家论证会。

专家审核认为所建立的技术要求可行，能够有效控制葛根提取物原料的质量。

二、编制说明名称：按《中国药典》中药质量标准研究制定技术要求（国家药典委员会）中的规定，本提取物为粗提物，粗提物命名以药材名加提取溶剂加“提取物”构成，提取溶剂为水时可省略为药材名加“提取物”构成。

因此本品命名为“葛根提取物”。

制法：参考文献【1、3、4、5、6】，取葛根，粉碎成粗粉，分别以水、30%乙醇、50%乙醇、80%乙醇为提取溶剂，均加热回流提取两次，每次2小时，第一次加10倍量，第二次加8倍量，滤过，合并滤液，滤液于60℃减压浓缩至相对密度为1.10～1.20（室温）的清膏，放冷，每种提取物分别加乙醇使含醇量为60%、70%、80%，静置12小时，取上清液，减压回收乙醇，并浓缩至稠膏，干燥，即得葛根提取物，计算收率，同时测葛根素及其他异黄酮的含量。

结果见表1表1 不同提取工艺的结果比较表结果表明：综合考虑提取收率和各提取物中葛根素、其他异黄酮的含量，确定葛根提取物的提取工艺即制法为：取葛根，粉碎成粗粉，加30%乙醇加热回流提取两次，每次2小时，第一次加10倍量，第二次加8倍量，滤过，合并滤液，滤液于60℃减压浓缩至相对密度为1.10～1.20（室温）的清膏，放冷，加乙醇使含醇量为 70%，静置12小时，取上清液，减压回收乙醇，并浓缩至稠膏，干燥，即得。

感官：根据样品的实际外观、性状制定。

鉴别：《中国药典》2010年版收载野葛，其鉴别有显微鉴别和薄层鉴别。

因本品为提取物，依据产品的实际情况，只制定薄层鉴别。

并对展开剂、薄层板、溶液浓度及点样量进行了实验研究：1、薄层鉴别方法：A、对照品溶液的制备：取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

B、对照药材溶液的制备：取葛根对照药材0.8g，加甲醇10ml，放置2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为对照药材溶液。

C、供试品溶液的制备：取本品0.1g，加甲醇10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。

照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以三氯甲烷-甲醇-水（7：2.5：0.25）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑。

2、展开剂的选择：A、三氯甲烷：甲醇：水=7：2.5：0.25；见图1图1B、甲苯：甲醇：水=7：4：0.1；见图2拖尾、扩散图2C、三氯甲烷：甲醇=4：1；见图3主斑点Rf值＜0.3，扩散图3结果表明：展开剂A的展开效果最好，故展开剂A为实验选定展开剂。

3、薄层板的选择：供试液为不同产地的葛根药材A、自铺板结果见图4图4B、硅胶G板(青岛海洋化工厂) 结果见图5图5C 、硅胶G 板(烟台市化学工业研究所） 结果见图6图6结果表明：自制板和青岛海洋化工生产的硅胶G 板均可。

4、葛根素最低检出限的测定：取浓度为20ug/ml 的葛根素对照品溶液，分别点样0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1、2、3μL ，葛根素最低检出限为4ng 。

见图71 2 3 4 5 6 7 8 图75、葛根原药材的薄层鉴别结果 见图81、点样量3μl2、点样量2μl3、点样量1μl4、点样量0.5μl5、点样量0.4μl6、点样量0.3μl7、点样量0.2μl8、点样量0.1μl1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11图86、葛根提取物的薄层鉴别结果见图9、101 2 3 4 5 6 7 8 9 1011 12 13 14 15图91 2 3 4 5 6 7 8图10检查1 粉葛20100601-42 粉葛09023 葛根素对照品4 葛根对照药材5 粉葛09036 葛根09017 葛根20100601-28 葛根20100601-31、厂家D2、金贵3、神龙4、广西（自购）5、安徽（自购）6、葛根对照药材（中国药品生物制品检验所，批号：121175-200302）7、葛根素对照品（中国药品生物制品检验所，批号：110752-200912）8、四川（自购）9、厂家C10、厂家A11、厂家B1、葛根提取物（厂家A，批号：A－1）2、葛根提取物（厂家A，批号：A－2）3、葛根提取物（厂家B，批号：B－1）4、葛根提取物（厂家B，批号：B－2）5、葛根提取物（厂家B，批号：B－3）6、葛根对照药材（中国药品生物制品检验所，批号：121175-200302）7、葛根提取物（厂家C，批号：C－1）8、葛根提取物（厂家C，批号：C－2）9、葛根素对照品（中国药品生物制品检验所，批号：110752-200912）10、葛根提取物（厂家C，批号：C－3）11、葛根提取物（厂家C，批号：C－4）12、葛根提取物（厂家D，批号：D－1）13、安徽葛根提取物（自制，批号：20100506）14、四川葛根提取物（自制，批号：20100504）15、广西葛根提取物（自制，批号：20100503）一、水分取本品，按照《中国药典》2010年版一部附录Ⅸ H第一法测定，测得结果见表2。

表2 葛根提取物的水分测定结果表结果表明：葛根提取物的水分绝大部分在5%以下，为了更好控制产品质量，将水分的限度确定为：不得过5.0%。

二、炽灼残渣取本品，按照《中国药典》2010年版一部附录Ⅸ J测定，测得结果见表3。

表3葛根提取物的炽灼残渣测定结果表结果表明：葛根提取物的炽灼残渣绝大部分在5%以下，为了更好控制产品质量，将炽灼残渣的限度确定为：不得过5.0%。

三、按《中国药典》中药质量标准研究制定技术要求（国家药典委员会）中的规定，要注重中药安全性检测方法和指标的建立和完善，加强对重金属及有害元素、残留农药、残留溶剂、残留二氧化硫、微生物、真菌毒素等外源污染物的检测。

依据本品的来源及实际情况，本品主要测以下指标：1 重金属及有害元素取本品，按照GB 5009.12-2010、GB/T 5009.11-2003、GB/T 5009.13-2003、GB/T 5009.15-2003、GB/T 5009.17-2003测定，测得结果见表4表4 葛根原药材及葛根提取物的重金属及有害元素测定结果表注单位：mg/kga 葛根原药材测定结果表b 葛根提取物的测定结果表2 六六六、滴滴涕取本品，按照GB/T 5009.19-2008测定，测得结果见表5。

表5葛根原药材及葛根提取物的六六六、滴滴涕测定结果表a 葛根原药材测定结果表b 葛根提取物的测定结果表3 微生物取本品，按照GB 4789.2、GB 4789.3、GB 4789.4、GB 4789.5、GB 4789.10、GB 4789.11、GB 4789.15规定的方法检验，同时微生物的限量依据为“中华人民共和国国家标准保健( 功能) 食品通用标准 GB 16740一1997”。

测得结果见表6。

表6 微生物检验结果特征图谱按照《中国药典》中药质量标准研究制定技术要求（国家药典委员会），通过对所得到的能够体现葛根提取物整体特性的图谱识别，提供一种能够比较全面的控制葛根提取物质量的方法，从化学物质基础的角度保证葛根提取物质量的稳定和可靠。

提取物与对照药材特征图谱具相关性，提取物图谱中的特征峰在药材的色谱图上均能指认。

进行了专属性、精密性及重现性的试验。

1、仪器与试剂戴安UltiMate3000高效液相色谱仪，UltiMate3000紫外检测器，Chromeleon色谱工作站；葛根对照品（中检所，批号：110752-200912，含量：96.0%），大豆苷对照品（中检所，批号：111738-200501），染料木苷（中检所，批号：111709-200501），大豆素（中检所，批号：100347-200702，含量：99.7%），染料木素（中检所，批号：111704-200501）；水为纯化水，甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯；葛根药材与葛根提取物的来源及批号见表7表7 葛根原药材及葛根提取物的样品来源a 葛根原药材来源b 葛根提取物的样品来源2、色谱条件：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（AichromBond-AQC18 4.6×250mm 5μ）；流动相：乙腈（流动相A）-0.02mol/L乙酸铵（pH=4.6）（流动相B），梯度洗脱，洗脱梯度程序见表8；检测波长：260nm；柱温：35℃。

表8 流动相洗脱梯度表时间（min）流速（ml/min）A（%）B（%）0.09.010.0 12.0 18.0 18.5 26.0 1.01.01.01.01.01.01.020303048482020807070525280803、溶液的制备3.1 参照物溶液的制备取葛根素对照品适量，精密称定，加60%乙醇制成每1ml含葛根素0.2mg的溶液，即得。