小肠粘膜下层对大鼠创伤皮肤的实验研究
创伤及内毒素对大鼠肠屏障功能的损害
・实验研究・创伤及内毒素对大鼠肠屏障功能的损害丁连安 黎介寿 李幼生 朱念庭 刘放南 谭力 作者单位:266003青岛大学医学院附属医院普通外科 【摘要】 目的 探讨创伤合并感染对机体肠屏障功能的损害作用。
方法 随机、对照性实验。
雄性成年SD 大鼠35只,分为对照组(Con )及肠内营养(EN )、静脉营养(PN )和脓血症组(Sep )。
后三组做成静脉营养模型,施以不同损害刺激。
结果 Sep 组小肠黏膜损害最重,内毒素导致EN 、Sep 组血浆中一氧化氮升高,分别为103.39、113.33μmol/L ;Sep 组小肠通透性和细菌易位率增加,分别为4.00%和83.33%。
EN 组肠屏障损害显著减轻。
结论 静脉营养1周导致大鼠小肠黏膜萎缩,肠通透性增加;内毒素加重了创伤大鼠肠屏障功能损害,可能与体内一氧化氮产生增多有关;肠道喂养显著减轻了肠屏障功能损伤。
【关键词】 静脉营养; 内毒素; 肠屏障功能; 细菌易位; 双糖试验The intestinal b arrier d amage caused by trauma and lipopolysaccharide DIN G L ian 2an 3,L I Jie 2shou ,L I You 2sheng ,et al.3Depart ment of General S urgery ,A f f iliated Hospital of Qingdao U niversi 2ty Medical School ,Qingdao 266003,China【Abstract 】 Objective To investigate function damage of the intestinal barrier by trauma and in 2fection in rats.Methods The randomized and controlled ex periments that mimic surgical trauma and in 2fection in rats.Adult S prague Dawley rats were divided into four groups :control group (n =8),EN group (n =10),PN group (n =9)and Sep group (n =8).The latter three groups received different harmful stimulations.R esults The inflammatory responses became gradually aggravated from group EN to Sep group.The mucosal structure of small intestine was markedly impaired in groups PN and Sep.Lipopolysaccharide injection increased the nitric oxide levels in the blood plasma of the rats ,they were 103.39umol/L in EN group and 113.33μmol/L in Sep group..The intestinal permeability was 4.0088and bacterial translocation rate was 83.33%in Se p group ,they all increased significantly than that of control group.Conclusion Parenteral nutrition for one week caused an atro phy of the intestinal mucosa in rats.Endotoxemia (Lipopolysaccharide )damaged the intestinal barrier function due to the production of nitric oxide in the body ,and enteral nutrition decreased the kind of damage.【K ey w ords 】 Endotoxemia ; Parenteral nutrition ; Intestinal barrier function ; Bacterial translocation ; Lactulose/Mannitol test 严重感染是烧伤、严重创伤、严重感染等的主要死亡原因。
猪小肠黏膜下基质的生物学特性的观察
猪小肠黏膜下基质的生物学特性的观察摘要】目的制备脱细胞小肠黏膜下基质(small intestinal Submocosa),探讨其作为组织工程生物膜的可行性。
方法利用物理和化学方法制备猪小肠黏膜下层,利用光镜、图象分析对其进行观察及分析,皮下埋植观察生物相容性。
结果光镜显示,SIS的疏密层度逐渐加深,孔径率在70-90%之间,扫描电镜显示胶原纤维结构规整,网孔丰富,纤维连续。
皮下埋植未见皮下明显的异物反应。
结论经过这种方法制备的SIS,韧性大,结构、层次分明,生物相容性良好,是一种理想的细胞支持架,是组织工程进行组织修复的良好材料。
【关键词】猪小肠黏膜下基质生物学特性观察【中图分类号】R392.12 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2012)01-0395-021 材料和方法1.1实验材料:猪小肠的回肠段,长度为10厘米(由沈阳医学院动物实验中心提供)1.2实验方法:1.2.1制备脱细胞小肠黏膜下基质:⑴物理方法处理:取经过检疫的健康成年猪的小肠用清水冲洗干净后,挑选管腔粗细均匀、管壁无破损及无淋巴结的部位。
先翻转小肠,使黏膜面向外,清除小肠黏膜层直至黏膜下层暴露,再次翻转小肠,清除浆膜和肌层组织。
洗净小肠黏膜下层,完全去除小肠黏膜下层上的残留组织,其间持续用4℃水冲洗[1]。
⑵化学方法处理:沿纵轴切开经物理方法处理的小肠,切成每段5c m长,将小肠段在4°C的1升0.2% TritonX- 100(σ化工有限公司、美国圣路易斯)含26.5mmol/ L的氨水中,浸泡7天。
脱细胞后,用去离子水清洗72小时,之后将猪S IS 在-55°C冷冻48小时并使用环氧乙烷消毒(沈阳市中心医院)。
双层PSIS支架纵向切出40×50×0.2 mm3进行植入。
标本在- 80°C[2]贮存。
1.2.2小肠黏膜下基质的形态学观察:⑴HE染色:取猪S I S膜,大小1c m×1c m,10%的甲醛固定24小时,石蜡包埋,常规切片,做HE染色。
小肠黏膜下层仿生双层敷料复合富血小板血浆促进难愈性皮肤溃疡的修复
小肠黏膜下层仿生双层敷料复合富血小板血浆促进难愈性皮肤溃疡的修复颜青龙;王文平;黄书鹏;李乐;葛良鹏;李世荣;曹川【期刊名称】《局解手术学杂志》【年(卷),期】2018(027)009【摘要】目的探讨小肠黏膜下层(SIS)仿生双层敷料复合富血小板血浆(PRP)对大鼠难愈性皮肤创面修复的影响.方法 40只SD大鼠随机分为对照组(Control组)、SIS修复组(SIS组)、PRP修复组(PRP组)、SIS复合PRP修复组(SIS+PRP组),对大鼠背部直径3 cm的区域进行25 Gy的辐照后,于辐照区制作1 cm×1 cm全层皮肤缺损,SIS+PRP组创面予以滴加了0.2 mL PRP的SIS仿生双层敷料覆盖后外贴手术贴巾,SIS组创面予以滴加了0.2 mL PBS的SIS仿生双层敷料覆盖后外贴手术贴巾,PRP组创面予以滴加0.2 mL PRP后外贴手术贴巾,对照组创面予以滴加0.2 mL PBS后外贴手术贴巾.观察各组大鼠术后第3,7,11,15天的创面愈合情况.采用酶联免疫吸附实验检测术后15 d时大鼠难愈性皮肤创面的MDA含量及SOD 活性,采用蛋白质免疫印迹检测Nrf2信号通路相关蛋白的表达情况.结果 SIS+PRP 组在术后第3,7,11,15天的愈合率均优于其他组,差异具有统计学意义(P<0.05).术后15 d,SIS+PRP组皮肤创面的MDA含量(5.58±0.86)μmol/g显著低于对照组(13.71±2.04)μmol/g、SIS组(11.26±1.79)μmol/g、PRP组(10.18±1.73)μmol/g,差异具有极显著性统计学意义(P<0.01);SIS+PRP组皮肤创面的SOD含量(17.60±3.89)U/mL显著高于对照组(5.02±2.05)U/m L、SIS组(7.10±2.41)U/mL、PRP组(11.37±2.96)U/mL,差异具有极显著性统计学意义(P<0.01).与对照组、SIS组和PRP组相比较,SIS+PRP组皮肤创面Nrf2的表达量显著升高(P<0.01),p-AKT及p-GSK-3β的表达量显著升高(P<0.01),而Fyn的表达量则下降(P<0.05).结论小肠黏膜下层复合富血小板血浆可以促进难愈性皮肤溃疡的修复,可能与Akt/GSK-3β/Fyn信号通路介导的Nrf2/ARE活化有关.【总页数】5页(P620-624)【作者】颜青龙;王文平;黄书鹏;李乐;葛良鹏;李世荣;曹川【作者单位】陆军军医大学第一附属医院整形美容外科,重庆400038;陆军军医大学第一附属医院整形美容外科,重庆400038;陆军军医大学第一附属医院整形美容外科,重庆400038;陆军军医大学第一附属医院整形美容外科,重庆400038;重庆市畜牧科学研究院,重庆400039;陆军军医大学第一附属医院整形美容外科,重庆400038;陆军军医大学第一附属医院整形美容外科,重庆400038【正文语种】中文【中图分类】R628;R318.08【相关文献】1.自体富血小板血浆治疗难愈性创口效果观察 [J], 林俊宏;金斌;方立;李佳蔚2.富血小板血浆治疗下肢骨折术后难愈性伤口的临床观察 [J], 朱月华;朱余龙;丁德刚3.富含血小板纤维蛋白联合纳米银抗菌敷料修复难愈性骨外露创面的创面恢复及美观相关指标对比 [J], 林宙;李荣兴;温裕庆;张燕平;黎秋生4.自体富血小板血浆联合胫骨横向骨搬运在难愈性糖尿病足创面的应用 [J], 杜永伟;刘真;莫建文;徐房添;唐文;袁阁欢;姚飞5.RhaFGF局部外敷促进糖尿病大鼠难愈性皮肤溃疡修复的研究 [J], 宋久于;王敏华;李海坤;廖宝春;陈小波;朱贤森;曾祥泰因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
大鼠创伤失血性休克复苏后肠道粘膜屏障的形态改变
大鼠创伤失血性休克复苏后肠道粘膜屏障的形态改变周琳瑛;张良成;陈莲云;王宏梗【期刊名称】《福建医科大学学报》【年(卷),期】2002(36)1【摘要】目的研究用常规大容量晶体联合小量胶体(乳酸林格液/6%羟乙基淀粉)复苏创伤失血性休克大鼠后肠粘膜形态学改变.方法应用光镜、常规电镜及电镜细胞化学的方法观察肠粘膜形态学变化.结果光镜见粘膜上皮细胞水肿,部分细胞坏死脱落糜烂,固有层水肿疏松,较多淋巴细胞及不等量的中性粒细胞浸润;电镜下见小肠粘膜上皮细胞表面微绒毛脱落,部分上皮细胞膜破损,细胞质基质外溢,部分细胞内线粒体肿胀,上皮细胞间及固有层可见淋巴细胞及中性粒细胞浸润,单宁酸染色见暗细胞明显增多.结论大鼠创伤失血性休克复苏后肠道粘膜确有受损,其改变可能与创伤失血性休克复苏后的细菌移位有关.【总页数】4页(P42-44,51)【作者】周琳瑛;张良成;陈莲云;王宏梗【作者单位】福建医科大学,病理学系电子显微镜室,福州,350004;福建医科大学,附属第一医院麻醉科,福州,350005;福建医科大学,病理学系电子显微镜室,福州,350004;福建医科大学,附属第一医院麻醉科,福州,350005【正文语种】中文【中图分类】R541.64;R654.1【相关文献】1.乌司他丁对重度创伤失血性休克大鼠肠道屏障的影响 [J], 赵军魁;王云辉;程爱国2.大黄附子汤对大鼠失血性休克复苏后肠黏膜屏障的保护作用 [J], 郭帅;路晓光;战丽彬;范治伟;宋轶;吕春雨;白黎智;3.大黄附子汤对大鼠失血性休克复苏后肠黏膜屏障的保护作用 [J], 郭帅;路晓光;战丽彬;范治伟;宋轶;吕春雨;白黎智4.西沙必利对大鼠失血性休克复苏后肠屏障功能障碍的影响 [J], 张连阳;王正国;朱佩芳;秦红军;唐苏雅拉图5.肝素结合表皮样生长因子对失血性休克复苏后肠道屏障功能的保护作用 [J], 侯经元(编译);胡森(审校)因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
大鼠创伤失血性休克复苏后肠道粘膜屏障的形态改变
·临床研究·大鼠创伤失血性休克复苏后肠道粘膜屏障的形态改变刘海1,闫镝2,赵剑秋3,张淑娟3(1.河北省唐山市开滦总医院,河北 唐山 063000;2.河北省唐山市开滦总医院唐家庄医院 麻醉科,河北 唐山 063000;3.河北省唐山市开滦总医院 麻醉科,,河北 唐山 063000)摘要:目的分析大鼠创伤失血性休克(Hemorrhagic-traumatic Shock,HTS)复苏后肠道粘膜屏障形态改变特征,分析复苏后肠道损伤发生机制。
方法采用改良Wiggers法制备HTS模型,并进行复苏,动物模型制作60只,作为模型组,另取10只SD大鼠,除不放血外,制备模型,作为对照组,两组分别在建模后第0h、6h、12h处死取材采集标本,镜检。
结果模型组第6hChiu评分低于0h、第12h低于第6h,对照组第0min、1h、4hChiu评分低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论 HTS可致小肠绒毛顶端上皮下间隙增宽、固有膜脱离甚至崩解,复苏后随着时间的推移形态学病理改变会明显减轻。
关键词:创伤失血性休克;复苏;肠道粘膜屏障中图分类号:R765.21 文献标识码:A DOI:10.3969/j.issn.1671-3141.2016.55.0520 引言创伤是人类死亡第四大病因。
创伤失血性休克是最常见、严重的死亡率最高的创伤之一,仅次于重型颅脑创伤、胸外伤,是现代创伤早期死亡的首位病因,约1/3创伤死亡事件与HTS 有关[1]。
近年来有关于HTS发病机制、预后研究越来越多,有报道显示继发严重感染是HTS患者死亡的重要原因,肠道是人体重要的存血器官,失血后肠道损失大量的血容量,再给予复苏治疗恢复血容量后,便可能引起缺损再灌注损伤,给肠道粘膜屏障造成机械性损伤[2]。
本次研究试分析大鼠HTS复苏后肠道粘膜屏障形态改变特征,分析复苏后肠道损伤发生机制。
1 材料与方法1.1 实验材料与对象。
小肠粘膜下层(SIS)桥接周围神经缺损的实验研究
中华创伤骨科杂志
.//0 年 !/ 月第 # 卷第 !/ 期 1’() 2 34,’+5 6478-79 3&,+:;4 .//0% <+=% #% >+% !/
(BCB) 小肠粘膜下层 桥接周围神经 缺损的实验研究
苏 琰 张长青 孙鲁源 张 晔 曾炳芳
・实验研究・
【摘要】 目的 应用小肠粘膜下层 (BCB) 桥接周围神经缺损并观察结果。 方法 选取健康的 BD 大鼠"/ 只, 随机分成三组, 每组 !/ 只。先造成坐骨神经 !/-- 缺损, 然后分别用 BCB 桥接、 自体神经移植和旷置不做 自体神经移植对照组和空白对照组。 分别于术后 # 周和 !/ 周取材, 通过病理组织检 处理, 即 BCB 桥接神经组、 查、神经电生理检查和计算机图像分析来评价神经再生。 结果 BCB 桥接神经组可见有再生神经组织长过 缺损, 呈条索状连续样, 且神经纤维多集中在 BCB 形成的桥接管周缘区域, 而中心区域可见胶原组织和孔隙较 多。从电生理检查和计算机图像分析结果来看, BCB 桥接神经组比自体神经移植组略差。 结论 BCB 具有促 进周围神经轴突再生的作用, 有望成为自体神经的替代材料应用于周围神经缺损的修复。 【关键词 】 周围神经缺损E 小肠粘膜下层 (BCB) E 自体神经移植 【中图分类号 】 【 】 【 文献标识码 H 文章编号 】 F#G!% " !#?!A?#// I .//0 J !/A!!"#A/0 !" #$%#&’(#")*+ ,)-./ 01 &#%*’&’"2 %#&’%3#&*+ "#&4# 2*%, 5’)3 %0&6’"# ,(*++ ’")#,)’"*+ ,-7(-60,* 8 9:9 ; 7&’.2’"2 !" #$%& ’()*+ ,-$%./01%.& !"* 23/43$%& ’()*+ #5& ’6*+ 71%./8$%. 95:$;<=5%< >8 ?;<->:$5@1AB& !-$%.-$1 !1C<- D5>:E5’ B (>B:1<$E& F1$><>%. "%1G5;B1<4& !-$%.-$1 HIIHJJ& ,-1%$ !3::>;<5@ K4 !<$<5 L>3%@$<1>% 8>; *$<3;$E !A15%A5B 1% ,-1%$ M JIJNOPPPP Q ,>;;5B:>%@1%. $3<->;R ’6*+ 71%./8$%. 【!7,)&*6)】 <7=#6)’4# 6+ +:K;4L; ,’; +8,&+-;K +M :4(NO()O 5;4(5’;47= );4L; O75K 8K()O 5+4&(); K-7== (),;K,()7= K8:-8&+K7 I BCB J % >#)30., "/ BD 47,K $;4; N(L(N;N (),+ " O4+85K 47)N+-=P9 $(,’ !/ 47,K () ;7&’ O4+85% Q(4K,=P !/A-- O75K +M K&(7,(& );4L; $;4; -7N; () 47,K 7)N ,’;) ,4;7,;N 4;K5;&,(L;=P :P 4;57(4()O $(,’ 5+4&(); K-7== (),;K,()7= K8:-8&+K7 I BCB J :4(NO()O9 78,+A);4L; O47M,()O 7)N )+)(),;4M;4;)&; () ,’; " O4+85K% # $;;RK 7)N !/ $;;RK 7M,;4 ,’; ,4;7,-;),9 $; ’74L;K,;N ,’; -7,;4(7=K ,+ ;L7=87,; ,’; );4L; 4;O;);47,(+) :P 57,’+A C) ,’; =+O(&7= ;S7-()7,(+)9 );847= ;=;&,4+5’PK(+=+O(&7= ;S7-()7,(+) 7)N &+-58,;4(T;N (-7O()O 7)7=PK(K% ?#,-+), BCB O4+859 ,’; 4;O;);47,(L; );4L; ,(KK8; O4;$ 7&4+KK ,’; O759 );4L; M(:;4K -+K,=P 7OO4;O7,;N 74+8)N ,’; 5;4(5’;47= 74;7 +M ,’; &+)N8(,K +M BCB9 7)N -+4; &+==7O;) 7)N ’+=;K $;4; K;;) () ,’; &;),47= 74;7% 6’; ;=;&,4+5’PK(+=+O(&7= ;S7-()7,(+) 7)N &+-58,;4(T;N (-7O; 7)7=PK(K K’+$;N ,’7, ,’; );4L; 4;O;);47,(+) () ,’; BCB O4+85 $7K 7 =(,,=; ()A B()&; BCB 5+KK;KK;K ,’; 7:(=(,P ,+ 54+-+,; ,’; 4;A M;4(+4 ,+ ,’7, () ,’; 78,+A);4L; O47M,()O O4+85% @0"6+-,’0" O;);47,(+) +M ,’; 5;4(5’;47= );4L; 7S(KA&P=()N;4 ,(KK8;9 (, (K 7 54+-(K()O 4;5=7&;-;), -7,;4(7= M+4 78,+AO47M,()O $’(&’ &7) :; 755=(;N () 4;57(4 +M ,’; 5;4(5’;47= );4L; O75K% 【A#/ 50&.,】 U;4(5’;47= );4L; O75E B-7== (),;K,()7= K8:-8&+K7 I BCB J E H8,+A);4L; O47M,()O ’->%.-3$ ,-3$%.B-$%. +3S5 ’$T-1 M ,-1% F ?;<->: U;$3=$ Q & HIIP& V M OI Q R OOJV/OOJW
猪小肠粘膜下层复合骨髓间充质干细胞修复大鼠肌腱缺损的实验研究的开题报告
猪小肠粘膜下层复合骨髓间充质干细胞修复大鼠肌腱缺损的实验研究的开题报告一、研究背景和意义肌腱缺损是一种常见的肌肉骨骼系统损伤,通常发生在运动员或者运动爱好者身上。
目前,世界各地都在寻找肌腱细胞更好和更快的治疗方法。
在干细胞治疗领域中,骨髓间充质干细胞 (MSCs) 是最有希望的细胞类型之一。
然而,MSC 的获得过程十分昂贵且困难,并且约有2-3%的成功率。
针对这种问题,近年来研究人员提出以猪小肠粘膜下层为载体的 MSCs,这种 MSC 的获取更加方便,且使用效果也较好。
本研究旨在探索猪小肠粘膜下层复合 MSCs 修复大鼠肌腱缺损的治疗效果,以期为肌腱缺损的治疗提供有效的 MSCs 方案和理论基础。
二、研究内容1. 大鼠肌腱缺损模型的建立。
2. 从猪小肠粘膜下层中分离和培养 MSCs。
3. 将猪小肠粘膜下层 MSCs 移植到大鼠肌腱缺损处。
4. 通过比较 MSCs 移植组和对照组的治疗效果,评价MSCs 修复大鼠肌腱缺损的疗效及其作用机制。
三、研究方法1. 动物模型实验:将50只大鼠随机分为两组,其中一组将建立肌腱缺损模型,另一组做对照。
缺损模型的建立方法为对大鼠的切口和肌肉进行切割和缝合,形成完整创伤,从而建立一个肌腱缺损模型。
2. 猪小肠粘膜下层 MSCs 分离和培养:通过猪小肠粘膜下层的外形和组织结构,利用酶消化和筛选等技术手段,获得 stem cell 常用的 mesenchymal stem cells (MSCs).3. 移植:将猪小肠粘膜下层 MSCs 移植到肌腱缺损处。
4. 评估治疗效果:通过肌腱组织学和生物学指标,对 MSCs 移植组和对照组进行比较评估,以确定 MSCs 修复大鼠肌腱缺损的治疗效果和确切机制。
四、研究意义本研究可以为体育损伤、医学骨折、肌肉损伤等常见病症提供一种新的 MSCs 治疗方案和支持。
同时,研究中采用从猪小肠粘膜下层获得MSCs 的技术,减少了浪费,也拓宽了 MSCs 的来源渠道,为 MSCs 研究提供了一条新途径。
两种方法制备猪小肠黏膜下层重建SD大鼠前交叉韧带力学对比研究
中国社区医师2019年第35卷第17期实验研究小肠黏膜下层(SIS)是天然不含细胞的细胞外基质类材料,在组织工程的支架材料领域有较多成功应用经验[1-2]。
它是从猪小肠中提取出来的一种生物活性膜,具有多功能、多分化而且容易分离等特点,厚度仅0.1mm,主要成分为细胞外基质,主要由胶原和水构成[3-4]。
其作为生物工程材料已广泛应用,但其力学强度仍存在一定差异。
本实验通过两种不同方法制作猪SIS(编织和轴卷),并测试两者力学性能,以寻找一种增加其强度的制作方法。
资料与方法材料与分组:取新鲜猪小肠若干,通过以下方法制取SIS,并对其进行分组,A 组为编织组,B 组为轴卷组。
每组选取20个标本进行力学性能检测。
方法:①SIS 制备:取新鲜猪小肠,自十二指肠远端10cm 起取100cm 长,按每段10cm 进行横行切断,纵向剖开小肠,使浆膜层置于0.9%氯化钠溶液浸湿的纱布上,黏膜层朝上。
用纱布包裹手术刀柄,刮除小肠表面黏膜层,边刮除边用0.9%氯化钠溶液进行冲洗,见该面为乳白色半透明基膜样组织时将小肠翻转;同样方法刮除小肠肌层和浆膜层,同样边刮除边冲洗,全部刮除干净后将SIS 放置于0.9%氯化钠溶液中清洗后以化学方法处理其残留的其他细胞组织。
将以上已用物理方法处理后的SIS 用Abraham 法进行化学处理[5],将SIS 置于含EDTA 100mmol/L 和NaOH 10mmol/L 的混合溶液,pH=11,浸泡16h。
取出后用去离子水冲洗干净,置于含HCl 和NaCl 的混合溶液(pH=0.5)中,浓度均为1mmol/L,浸泡6~8h。
取出后同样采用去离子水冲洗干净,置于含NaCl 1mmol/L 的PBS 中浸泡16h。
取出后以去离子水冲洗干净,在PBS(pH=7.4)中浸泡2h。
取出后用去离子水冲洗。
杀菌:SIS 在含1%过氧乙酸的体积分数20%乙醇溶液中浸泡8h,用含0.05%叠氮化钠的PBS 清洗2h。
小肠黏膜下层在组织工程学中的应用
Th p l a i n o ma li t si a u mu o a i is e e gn e i g ea p i to fs l n e t l b c n s c s n tsu n i e rn
Z HA0 , HEN Xi ANG Jn u BoC , HU iy
广 泛 的应用 , 学前 景 也十 分可 观 。 医
【 关键 词 J肠黏 膜 下层 ; 织工程 ; 用 、 组 应
【 中图分类号】 3 80 R 1. 8
【 文献标识码】A
【 文章编号】1 7 — 7 12 1 )8 c 1 — 2 6 4 4 2 (0 0 0 (卜0 4 0
s e i ctsu n e rd o ltl.S I a eu e ss afl trasa d h sar a yb e d l s d i is e p cf is e a d d g a ec mpeey oS S c n b s d a cfod maei n a e d e n wieyu e n t u i l l s e gn eig a dciia p l ain . eme ia rs e t fS S i e yc n iea l. n i e rn n lnc a p i to s Th dc p o p c I sv r o sd rb e l c l o
t, h r i n y tee s oi n lgcl e ein I cncn u t n u p r tego t f ot el i vv ,rmo ee eaini mmu ooia rj t .t a o d c a ds p oth rw ho s cl io po t rgn rt e o h sn e o n
( e a me t f l ia Meia o ee erS s m, hn dcl nvri , io igPoic, h n ag l 0 0 , D p r n i cl dcl fS vn Y a yt C iaMe ia U ies y Lann rvn e S e y n 0 I t oC n e t 1
创伤性脑损伤大鼠肠黏膜损害及小肠运动功能障碍的关系研究
创伤性脑损伤大鼠肠黏膜损害及小肠运动功能障碍的关系研究张倩;朱玉群;李毅;吕栋;徐有青【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2010(50)32【摘要】目的观察创伤性脑损伤(TBI)后大鼠肠黏膜形态学改变及小肠动力变化,探讨二者的关系.方法采用改良Feeney自由落体撞击伤法建立TBI模型.64只雄性健康Wistar大鼠随机分为假手术对照组和TBI组,两组又根据实验终止时间各分为4个亚组,分别于伤后3、6、12、24 h光镜下观察小肠黏膜的病理变化及利用美蓝染色法计算小肠推进比.结果 TBI组小肠推进比均低于对照组(P<0.05).光镜下TBI组3 h即可见肠绒毛肿胀、增粗、缩短,12 h见绒毛破损、剥脱.结论 TBI后早期即可出现肠黏膜损伤和肠动力障碍,二者可能互为因果.【总页数】3页(P5-7)【作者】张倩;朱玉群;李毅;吕栋;徐有青【作者单位】首都医科大学附属北京天坛医院,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院,北京,100050【正文语种】中文【中图分类】R641;R574.4【相关文献】1.肠黏膜血流改变在创伤性脑损伤大鼠肠黏膜屏障应激性变化中的作用 [J], 王燕斌;杨昭徐2.骨桥蛋白在大鼠重度创伤性脑损伤后肠黏膜中表达水平变化 [J], 李景毅;郎宇璜;陈凤媛;缪京丰3.缺血性脑卒中大鼠肠黏膜的损害及小肠运动功能障碍 [J], 啜佳然;玉群;徐立新;袁芳;徐有青;王晨4.老年大鼠创伤性脑损伤后血管再生调节因子表达与肠黏膜、肠屏障功能的变化[J], 钱春生;张斌;钱腾达;何云文;李益欢;董吉英5.大鼠弥漫性脑损伤后小肠黏膜超微结构与黏膜上皮细胞凋亡的动态变化 [J], 刘刚;朱军;李建珉;付爱军;邹西峰因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
肠内肠外营养对烧伤大鼠肠粘膜屏障功能的影响及其机制
肠内肠外营养对烧伤大鼠肠粘膜屏障功能的影响及其机制
彭曦汪仕良王凤君陶凌辉赵云尤忠义
(第三军医大学西南医院烧伤研究所D
观察不同营养支持途径对严重烧伤所致肠粘膜屏障功能损害的影响并探讨其机制O采用30%体表面积I度烧伤大鼠模型随机分成伤前对照(D静脉营养(PN D及肠道营养(EN D组EN和PN组给予等氮~等热量~等体积的营养液O 动态观察了肠粘膜通透性~肠上皮细胞增殖指数~血浆二胺氧化酶(DAO D活性~肠组织中肠三叶因子(ITF D含量以及肠粘液层厚度和成分的变化O结果:烧伤后肠粘膜通透性~血浆DAO活性明显高于伤前而肠上皮细胞增殖指数~ITF含量~肠粘液层厚度及己糖和唾液酸的含量则明显低于伤前O 两组相比EN组大鼠肠粘膜通透性~血浆DAO活性明显低于PN组而肠上皮细胞增殖指数~ITF含量~肠粘液层厚度及己糖和唾液酸的含量则明显高于PN组O结论:严重烧伤后肠粘膜屏障功能受损肠上皮细胞增殖能力下降O与静脉营养相比肠道营养可减轻肠粘膜受损程度促进肠粘膜修复O
肠内肠外营养对烧伤大鼠肠粘膜屏障功能的影响及其机制作者:彭曦, 汪仕良, 王凤君, 陶凌辉, 赵云, 尤忠义
作者单位:第三军医大学西南医院烧伤研究所
刊名:
肠外与肠内营养
英文刊名:PARENTERAL & ENTERAL NUTRITION
年,卷(期):2000,7(4)
本文链接:/Periodical_cwycnyy200004066.aspx。
肠内免疫营养对创伤Wistar大鼠肠屏障功能的影响
肠内免疫营养对创伤Wistar大鼠肠屏障功能的影响【摘要】目的:探讨肠内免疫营养对创伤后大鼠肠屏障功能的影响。
方法:将30只Wistar大鼠随机分为3组:对照组(Control)、普通肠内营养组(EN)和肠内免疫营养组(ELN)。
通过胃造瘘术建立大鼠创伤模型,分别给予不同成分的肠内营养7天,观察各组大鼠小肠黏膜形态,免疫组化检测肠黏膜CD3+、CD4+、CD8+、IgA+细胞。
结果:肠内免疫营养组的感染性并发症低于普通肠内营养组和对照组(P<0.05),而小肠黏膜绒毛高度、肠腺隐窝深度、黏膜厚度及绒毛表面积高于对照组(P<0.01)。
对照组和普通肠内营养组的小肠CD3+、CD4+、CD8+、IgA+细胞数量明显低于肠内免疫营养组(P<0.01、P<0.05)。
结论:肠内免疫营养能较好地改善创伤后大鼠的小肠机械屏障和免疫屏障功能,促进肠屏障功能的恢复。
【关键词】肠内营养;免疫营养;肠屏障功能;动物实验创伤使机体处于应激状态,而肠道是全身应激反应的中心器官[1]。
肠内营养在保护肠屏障功能方面有着重要作用。
但肠内免疫营养在这方面的作用还认识不足。
为此,我们用Wistar大鼠创伤模型,研究肠内免疫营养对大鼠肠屏障功能的影响。
1 材料与方法1.1 实验动物:用清洁级Wistar大鼠30只(合格证号:川医动字第2401115),体重190~270 g,雌雄各半,随机分为3组:对照组(Control)、普通肠内营养组(EN)和肠内免疫营养组(EIN),每组10只大鼠。
1.2 模型制作及标本处理:大鼠单笼适应性喂养2天后,氯胺酮麻醉,行胃造瘘术,并将造瘘管一端置于十二指肠内,另一端经皮下隧道置于大鼠颈背部中央固定,以免被啃咬。
然后将大鼠置于安静、通风的环境中饲养7天。
Control 组给予普通大鼠专用饲料(400 kcal/100 g)喂养,10 g/(100g·d)。
EN组造瘘管给予瑞素,EIN组给予瑞能。
大鼠皮肤损伤模型方案
1 材料和方法1.1 动物模型建立及实验分组:SPF级Wistar/SD大鼠18只.体重0.20—0.25kg,雌雄各半,购自医科大学实验动物中心。
实验前1周实验室喂养,实验当天禁食,3%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔内注射麻醉,以8%硫化钠在大鼠背部净毛.面积9cm x 8cm,然后用特制致伤器(打孔器)在背中部脊柱两侧旁开1.5cm,共切割4个圆形溃疡,直径1.8cm.面积2.54cm ,深至皮下,止血后备用。
18只大鼠共制备溃疡72个,随机将溃疡分为3组:L凝胶剂治疗组(A组)、凝胶基质对照组(B组)、空白对照组(C组),每组24个溃疡(12个用于观察溃疡面积愈合情况,12个用于组织取材切片)。
1.2 药物及用药方法:L凝胶剂(含L )、凝胶基质(不含L )均为自制药品(另有文献报道)。
各组均予造模后第二天开始用药,A组给予L凝胶剂,同等量的基质用于B组,将药物均匀单层涂于相应溃疡面,用无菌凡士林油纱及纱布包扎,单笼喂养,每日换药1次,至伤后l4天。
c组不予用任何药,其余处理同A、B组。
喂全价颗粒饲料每只30g/d. 自由饮水,每3日更换垫料。
1.3 评价指标1.3.1 血糖测定:随机抽取其中的l2只大鼠,于首次涂用L凝胶剂前30min及治疗后l、2、3、4、6、8h取大鼠尾静脉血,用便携型血糖仪检测血糖浓度。
1.3.2 溃疡面积:于伤后第3、7、l0、l4天溃疡面照相,用透明膜覆盖溃疡面沿创缘描记、剪膜,置分析天平称取质量换算面积,观察溃疡愈合情况。
1.3.3 组织病理学检查:于伤后第3、7、l0、l4天取溃疡创面组织,经10%福尔马林液固定、脱水、石蜡包埋,进行苏木素一伊红 HE)染色,光镜下重点观察溃疡面肉芽组织生长(包括毛细血管生长、胶原沉积)以及再上皮化情况,以评价愈合效果。
1.3.4 bBGF免疫组化1.4 统计学处理:应用SPSS13.0统计软件包处理,实验数据以均数±标准差±s)表示,采用方差分析,组问两两比较采用LSD法,P<0.05为有统计学意义。
肠内肠外营养对大鼠肠道损伤后屏障功能恢复的实验研究
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细胞凋亡在严重烧伤大鼠肠粘膜屏障损伤中的作用
细胞凋亡在严重烧伤大鼠肠粘膜屏障损伤中的作用
袁建成;李艳萍;秦孝健
【期刊名称】《中华危重病急救医学》
【年(卷),期】1999(011)012
【摘要】目的:研究烫伤后大鼠小肠粘膜细胞调亡在肠粘膜屏障损伤中的作用。
方法:Wistar大白鼠,Ⅲ度烫伤,随机分为正常对照组、烫伤不复苏组及烫伤复苏组。
分别在伤后2、4、6、12、24小时活杀动物,取小肠的回盲部,运用原位凋亡检测试剂盒,光镜下观察小肠粘膜细胞凋亡变化,同时观察其病理形成变化。
结果:①凋亡细胞以粘膜表皮细胞为主。
②凋亡细胞的数量以伤后6 ̄12小时最多,分布于绒毛顶端,后延伸至绒毛中下部;伤
【总页数】1页(P715)
【作者】袁建成;李艳萍;秦孝健
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】R644.02
【相关文献】
1.诱导型一氧化氮合酶和细胞凋亡在急性百草枯中毒大鼠肾损伤中的作用 [J], 王鑫;赵艳霞;李海霞;李爱军;刘爽;陈惠敏;崔卫正
2.细胞凋亡在实验性急性胰腺炎大鼠肠粘膜屏障功能障碍中的作用 [J], 许利剑;杨春;苗毅
3.ICAM-1在大鼠肠粘膜屏障损伤中的作用 [J], 吴寒;贾晓斌;柯靖;梅广林
4.胰岛素在严重烧伤大鼠急性肺损伤中的保护作用 [J], 张万福;贾赤宇;王耘川;吕根法;朱雄翔;汤朝武;胡大海
5.氧自由基在肝硬化门脉高压大鼠肠粘膜屏障损伤中的作用及别嘌呤醇的保护作用[J], 唐银河;刘志苏;艾中立
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猪小肠黏膜下层海绵的构建与细胞黏附性观察
猪小肠黏膜下层海绵的构建与细胞黏附性观察孙慧哲;田伟;曾亮;裘锦云;张茜【摘要】背景:虽然小肠黏膜下层的结构与皮肤非常类似,但它的孔径大小与孔径率不如皮肤那样有利于种子细胞的长入.目的:利用EDC对于猪小肠黏膜下层进行化学改性,观察其改性后形态学结构及细胞相容性.方法:将小肠黏膜下层支架材料放入含0.2%胃蛋白酶的3%乙酸水溶液中,使小肠黏膜下层的质量浓度分别为1%、2%、3%、4%,磁力搅拌与冷冻干燥后获得小肠黏膜下层海绵,分别应用50,100,150 mmol/L的EDC进行交联改性,通过孔径及吸水率结果选取最佳质量浓度的小肠黏膜下层与EDC交联浓度,进行细胞培养.将第2代骨髓基质干细胞与小肠黏膜下层海绵共培养,1,2,3周后进行扫描电镜观察.结果与结论:①当小肠黏膜下层海绵质量浓度为1%时,在100 mmol/L EDC交联下的空间结构弹性好,结构规整,无空洞现象,孔径为100-150 μm;②在100 mmol/L EDC交联下,质量浓度1%小肠黏膜下层海绵的吸水能力比2%高出0.35倍,质量浓度3%与4%小肠黏膜下层海绵的吸水能力相差不明显,质量浓度1%小肠黏膜下层海绵的结构更利于水分的流动与变化;③质量浓度1%的小肠黏膜下层海绵经100 mmol/L EDC交联后的结构、孔径及吸水率最好,可进行细胞实验.培养3周时,细胞变形相对完整且快,细胞形态在孔隙位置相对较大,外形接近长梭形,数目较多,在孔隙周围细胞形态较小,似圆盘形,数目相对较少,产生铺路石样改变,覆盖于大部分支架表面,并有大量颗粒样物质在周围出现,尤其在细胞集中位置更多见;④结果表明,EDC交联改性的小肠黏膜下层海绵具有良好细胞相容性.%BACKGROUND: Although the porcine small intestinal submucosa is very similar to the skin in the structure, its pore size and porosity are not beneficial to the growth of seed cells as the skin does. OBJECTIVE: To observe the morphological and cytocompatibility of porcinesmall intestinal submucosa after chemical modification using 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbod imide (EDC). METHODS: A porcine small intestinal submucosa sample was immersed in 3% acetic acid solution containing 0.2% pepsin to make 1%, 2%, 3%, 4% small intestine submucosa solutions. After magnetic stirring and freeze-drying, small intestinal submucosa sponge was obtained and modified by cross-linking with 50, 100, 150 mmol/L EDC. Based on the detection of pore size and water absorption, we selected the best concentrations of small intestinal submucosa and EDC, which were further used for cell culture. Passage 2 bone marrow mesenchymal stem cells were cocultured with the small intestinal submucosa sponge, and observed under scanning electron microscope at 1, 2, 3 weeks after co-culture. RESULTS AND CONCLUSION: When cross-linked with 100 mmol/L EDC, the small intestinal submucosa sponge at a mass concentration of 1% showed a reasonable structure and good elasticity with no appearance of voids, and the pore size ranged 100-150 μm. Moreover, the small intestinal submucosa sponge at a mass concentration of 1% showed a 0.35-fold increase in the compared with that at a mass concentration of 2%, and its structure was more conducive to water flows and changes. The small intestinal submucosa sponges at a mass concentration of 3% and 4% showed no difference in the water absorbing capacity. After cross-linked with 100 mmol/L EDC, the small intestinal submucosa sponge at a mass concentration of 1% showed the best structure, pore size and water absorption, which were used for cell culture. At 3 weeks after cell culture, cell deformation was relatively intactand fast; there were many cells in the pores that were relatively large and approximately spindle-shaped, while there were less cells around the pores that were relatively small and disk-shaped. A paving stone-like alteration was observed in cells that covered the most of the scaffold surface with a large number of particle-like substances, especially in the site of cell concentration. All these findings indicate that EDC-modified small intestinal submucosa sponge has good cytocompatibility.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2017(021)034【总页数】6页(P5487-5492)【关键词】生物材料;材料相容性;小肠黏膜下层;海绵;三维重建;细胞黏附;体外观察【作者】孙慧哲;田伟;曾亮;裘锦云;张茜【作者单位】沈阳医学院医学教育研究中心,辽宁省沈阳市 110034;沈阳医学院解剖教研室,辽宁省沈阳市 110034;沈阳医学院解剖教研室,辽宁省沈阳市 110034;沈阳医学院解剖教研室,辽宁省沈阳市 110034;沈阳医学院,辽宁省沈阳市 110034【正文语种】中文【中图分类】R3180 引言 Introduction组织工程研究的重要内容主要为细胞与材料的相互作用,细胞外基质的存在影响着种子细胞的功能,最近发现,无细胞的天然细胞外基质可通过物理或化学方法处理小肠黏膜下层来获取[1-4]。
脱细胞羊膜与小肠黏膜下层对大鼠皮肤缺损修复中血管形成的作用
H UO n l M A i— u , h — e g e l Ya —i , Je h a LIZ i n , ta p
De . fAn t my, e e rh U nv riy Zh n ja o 0 5 0 He e , ia p o ao H b iNo t iest , a gik u,7 0 0, b iCh n
c a SI i r os ( S) n G oup . nd hysoogia s lne a e n B a p il c l a i g uz i Gr oup C ( he o r l o t c nt o gr up)r pe tvey es c i l.A fe t t r WO w e ks,he s m pls w e eobt i d f s o o c le al ton,m m u hit h m ials ani e t a e r ane orhit l gia v ua i i no s oc e c t i ng ofK19 a EGF , nd V
a c l a m nin or f l—hikne s ki de e t i r t .M e h ds nd a el u1 r a o f u lt c s s n fcs n a s t o :TW O u lt c ne s ki d f c s,whi察脱细胞 羊膜( 摘 观 HAM ) 小 肠 黏 膜 下 层 ( I) 进 大 鼠皮 肤 缺 损 修 复 过 程 中血 管 形 成 的 作 与 SS 促
用 。方 法 : D大 鼠 2 S 4只 , 两 侧 背 部 各 做 1 直 径 为 18 m 圆形 全 层 皮 肤 缺 损 。创 面随 机 分 为 A 组 、 在 个 .c B组 和 c组 。A 组 HAM 覆 盖 , B组 SS覆 盖 , 组 纱 布 覆 盖 。 在 2周 时 处 死 动 物 取 材 , I c HE 染 色 观 察 皮 肤 缺 损 修 复 情 况 。 免疫 组 织 化 学 染 色 检 测 V GF R — C E , T P R检 测 VE NA 的表 达 。 结 果 : 组 、 GFmR A B组 愈 合 较 好 。c组 愈 合 较 差 。 免疫 组 织 化 学 染 色 显 示 , B组 VE A、 GF阳 性 细 胞 显 著 多 于 C 组 , 中 A 组 最 多 ; T P R 结 果 显 其 R -C 示 , B组 比 C组 表 达 更 多 的 VE F mR A、 G NA。 中 A 组 最 多 , 异 有 统 计 学 意 义 ( < O0 ) 结 论 : M 和 其 差 P .5 。 HA SS均 能 上调 皮 肤 创 面 组 织 中 VE NA 的 表 达 、 加 VE F的 分 泌 , 中 HAM 具 有 更 强 的 促 进 皮 肤 缺 I GFmR 增 G 其 损修复过程 中血管形成作用 。 【 关键 词】 小 肠 ; 黏 膜 ; 细 胞 羊 膜 ; 管 内皮 生 长 因 子 A; 肤 ; 疫 组 织 化 学 肠 脱 血 皮 免
创伤性脑损伤大鼠肠黏膜损害及小肠运动功能障碍的关系研究
观察 创 伤 性 脑 损 伤 ( B ) 大 鼠肠 黏 膜 形 态 学 改 变 及 小 肠 动 力 变 化 , 讨 二 者 的关 系 。 方 法 T I后 探
采
用改 良 F ee eny自由落体 撞击伤法建立 T I B 模型 。6 4只雄性健康 Wia 大 鼠随机 分为假手 术对照组 和 T I , sr t B 组 两组 又根据实验终止时问各分 为 4个亚组 , 分别于伤后 3 6 1 、4h光镜下观察小肠 黏膜 的病理变化 及利用美 蓝染色法 、 、2 2 计算小肠推进 比。结果 TI B 组小肠推进 比均低于对 照组 ( 00 ) P< .5 。光镜下 T I 3h即可 见肠绒毛肿 胀 、 粗 、 B组 增 T I 早期即可 出现肠黏膜损伤 和肠动力 障碍 , B后 二者可能互 为因果 。
小肠黏膜下层与脱细胞羊膜促进大鼠损伤皮肤修复及血管形成的作用
2 3 2・
现 代 中西 医结 合 杂 志 M o d e r n J o u r n a l o f I n t e g r a t e d T r a d i t i o n a l C h i n e s e a n d We s t e r n Me d i c i n e 2 0 1 5 J a n , 2 4 ( 3 ) 来自[ 文献标识码 ] A
[ 文章编号 ] 1 0 0 8— 8 8 4 9 ( 2 0 1 5 ) 0 3— 0 2 3 2— 0 3
The f unc t i o n o f s ma l l i nt e s t i na l s ubm uc o s a an d a c e l l ul a r am ni ot i c i n pr om o t i o n r e pa r a t i o n a nd
V a s c u l a r i z a t i o n o f i n j u r e d s k i n i n r a t
W ANG Fe i , W EI Ho ng f a n g, HU Che n g d o ng,ZHANG Enl u,GAO Ai q i n,W ANG Rui , LI Do ng f e n g
( T h e C e n t r a l H o s p i t a l o f H a n d a n C i t y , H a n d a n 0 5 6 0 0 1 , H e b e i , C h i n a )
Ab s t r a c t :0b j e c t i v e I t i s t o a p p r o a c h t h e f u n c t i o n o f s ma l l i n t e s t i n a l s u b mu c o s a a n d a c e l l u l a r a mn i o t i c i n p r o mo t i o n r e p — a r a t i o n a n d v a s c u l a r i z a t i o n o f i n j u r e d s k i n i n r a t .Me t h o d s T wo f u l l — t h i c k n e s s s k i n d e f e c t s t h a t a b o u t 1 . 5 c m ×1 . 5 c m w e r e
肠内免疫营养对烫伤大鼠肠黏膜保护作用的实验研究
肠内免疫营养对烫伤大鼠肠黏膜保护作用的实验研究蔡晨;唐益忠;刘晟;王永杰【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2004(39)6【摘要】目的研究肠内免疫营养剂Stresson对烫伤大鼠肠道功能的保护作用.方法致64只SD大鼠总体表面积(TBSA)30% Ⅲ度烫伤,随机分为肠内免疫营养(EIN)组及肠内营养(EN)组,另取8只大鼠作为伤前对照(Control).EIN和EN组给予等热量肠内营养液.于伤前、伤后1、4、7、10 d,检测肠黏膜通透性、肠黏液层厚度、肠黏液分泌型免疫球蛋白A(s-IgA)、血浆内毒素及血浆二胺氧化酶(DAO)活性. 结果同EN组相比,EIN组大鼠肠黏液层厚度、肠黏液s-IgA浓度明显升高,而肠黏膜通透性、血浆中DAO活性和内毒素水平较EN组明显降低. 结论早期肠内免疫营养能有效地减轻烫伤后肠黏膜细胞损伤,促进肠黏液s-IgA的分泌,减少内毒素的易位.【总页数】4页(P443-446)【作者】蔡晨;唐益忠;刘晟;王永杰【作者单位】安徽医科大学第一附属医院烧伤科,合肥,230022;安徽医科大学第一附属医院烧伤科,合肥,230022;安徽医科大学第一附属医院烧伤科,合肥,230022;安徽医科大学第一附属医院烧伤科,合肥,230022【正文语种】中文【中图分类】R459.9;R644【相关文献】1.肠内免疫营养对烫伤大鼠肠黏膜损伤的保护作用 [J], 蔡晨;郭光华;徐庆连;唐益忠;刘晟2.卡巴胆碱对烫伤大鼠肠内补液时肠黏膜血流量、Na+-K+-ATP酶活性和水通道蛋白-1表达的影响 [J], 耿世佳;包呈梅;吴静;车晋伟;任明姬;胡森;盛志勇3.早期肠内免疫营养对烫伤大鼠炎症反应及肠黏膜屏障功能的影响 [J], 夏艳;王宏星;薛育政4.丙酮酸盐糖液对烫伤大鼠肠内补液时肠黏膜血流量及Na +-K +-ATP 酶活性和吸收效率的影响 [J], 刘维维;赵莹;李娟;喻文;白晓东;张慧萍;胡森;盛志勇5.早期肠内谷氨酰胺补给对烫伤大鼠肠黏膜细胞紧密连接的影响 [J], 邓志云;郭光华;杨毅因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
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中南大学硕士学位论文小肠粘膜下层对大鼠创伤皮肤的实验研究姓名:吴贤玲申请学位级别:硕士专业:组织胚胎学指导教师:伍赶球20040501摘要[目的]探讨小肠粘膜下层(SIS)对大鼠创伤皮肤的愈合作用及其可能机制。
[方法]60只健康成年SD大鼠,切除背部直径1.5厘米的圆形全层皮肤,随机分成小肠粘膜下层组(A组)、络合碘凡士林纱条组(B组)以及空白对照组(C组)。
本实验采用的猪小肠经刮、消毒、脱细胞等处理制备小肠粘膜下层片剂。
于创后4天(d4)、7天(d7)、14天(d14)、28天(d28)分阶段取材,宏观观察及做HE染色观察以上三组大鼠愈合过程,用免疫组织化学、原位杂交观察创面组织中转化生长因子p1(TGF—p1)及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况,并进行图像分析。
[结果]A组在愈合速度方面快于B组,C组最慢,A组皮肤附件生长良好,而其余二组皮肤附件生长于伤口边缘处。
A组创面皮肤组织中TGF-pl及TGF—plmRNA的表达在d4、d7、d14增强,与其余二组比较差异有显著性(p<O.05),A组创面皮肤组织中TGF.B】及TGF一131mRNA的表达在d28明显下降,有明显的时相性。
A组创面皮肤组织中PCNA的表达在d4、d7、d14增强,与其余二组比较差异有显著性(p<O.05)。
[结论]小肠粘膜下层能促进创伤皮肤的愈合。
其机制可能与调节创面TGF—pl及促表皮干细胞分裂增生有关。
小肠粘膜下层是一种良好的创伤药膜。
关键词:小肠粘膜下层,伤口愈合,TGF—p1,TGF.plmRNA,PCNAIIABSTRACT【Objectives】Thisstudyistoinvestigatetheeffectofthesmallintestinalsubmucosa(sis)onrepairingtheskininratsanditsmechanism.[Methods]SixtySDratswereresected1.5cmcirculardorsispinalfullskin.Twentyratswereboundupsmallintestinalsubmucosa(Agroup)Twentyratswereboundupiodinevaselinegauze(Bgroup).Twentyratswereblankcomparison(Cgroup).Pigsmallintestinalwasscraped、disinfected、gotridofcells,thenSISwasmaded.Wegotthematerialatthe4day(d4)、7day(d7)、14day(d14)、28day(d28)gradingly.ThewoundswereobservedgrosslyandundermicroscopewithHEsections.TheexpressionofcytokinesincludingTransforminggrowthfactor-pl(TGF一131)andProliferationcellnuclearantigen(PCNA)wereinvestigatedbytheimmuehistochemistry,TGF一131mRNAexpressionwasinvestigatedbytheDigoxenin—labeledOligonuclcotide-probesinsituHybrization.Theimageanalysissystemwasused.【Results]Inthespeedofthehealingwound,Agroupwasfastest,thentheBgroup,lastwasCgroup.IntheAgroup,theskinaccessoriesgrewwell,whileintheresttwogroups,theskinaccessoriesgrowinmargin.IntheAgroup,theexpressionofTGF—pl、TGF-p1mRNAincreasedhigherthantheresttwogroupsatthed4、d7、d14(p<O.05).theexpressionofTGF—p1、TGF—p1mRNAreducedsignificantlyatthed28,ithadtheobvioustemporal.IntheAgroup,theexpressionofPCNAincreasedhigherthantheresttwogroupsatthed4、d7、d14(p<0.05).[Conclusions】Thesmallintestinalsubmucosacanpromotethewoundhealing.ItmaymodulateTGF-31andinducethecelltoproliferate.Sothesmallintestinalsubmucosaisagoodmedicaton.[Keywords】smallintestinalsubmucosa,woundhealing,TGF-pl,TGF一131mRNA,PCNAIII原创性声明本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。
尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。
与我共同工作的同志对本硬究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。
要‘缓诱日期:丝年!月兰日作者签名关于学位论文使用授权说明本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全部或部分内容,可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文;学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。
日期:堕年j兰日硕士学位论文第一章前言第一章前言皮肤具有重要的物理、化学及生物学屏障功能,皮肤创伤所引起的局部或全身损害均与皮肤屏障的丧失有关,尽早修复缺损皮肤并最大可能恢复功能与外观已成为治疗重要目标。
目前最常用的暂时性皮肤覆盖物是异种皮,此类覆盖物粘附性强,具有良好的屏障保护功能、止血性能及减轻疼痛等效果,可广泛用于供皮区、浅度创面及深度创面。
但异种皮来源有限,存在传播细菌、真菌及病毒性疾病的危险。
Apligraft是同时包括表皮和真皮成分的商品化皮肤替代物,由含成纤维细胞的胶原凝胶表面种植表皮细胞培养而成,已用于慢性溃疡的治疗。
但其价格贵,且含异体表皮细胞可引起免疫排斥反应,尚不能广泛用于深度创面【11。
目前已有的组织工程皮肤在其应用方面尚有欠缺,同时活性皮肤替代物抵抗胶原酶消化能力弱,抗感染能力差【2】。
研究人员十分期待制备经济实用、易于储存、生物相容性好的创面覆盖物,不但可以作为暂时敷料用于供皮区,同时充当修复创伤的脚手架及诱导材料,促残存上皮再生,促表皮细胞分裂增殖,促细胞和血管及皮肤附件生长,以达到重建皮肤,改善创面外观与功能。
体内组织工程是直接将无任何活性细胞的生物材料植入宿主体内,调控宿主细胞的生物学作用,生成具有原组织活性和功能的组织,最后达到组织再生的要求。
体内组织工程的思路着眼于提供组织周边自身细胞长入的环境,调控长入细胞的分化行为,最终实现组织再生性修复。
目前体内组织工程生物材料大致分三类:自然衍生物,如胶原和藻酸盐等:天然细胞外基质:如膀胱粘膜下层和小肠粘膜下层等;合成聚合物,如聚乙醇酸、聚乳酸和聚乙醇酸聚乳酸复合物等12】。
这些材料在体内组织工程中则直接作为细胞长入的支架。
自然衍生物和合成聚合物仅仅能够作为支架,不具备聚集组织内细胞和调节细胞表型的功能,更不可能具有定位并传送宿主细胞、生物活性因子及调整构建基质三维结构的能力和指导新组织形成的能力。
小肠粘膜下层是天然细胞外基质材料,其组成成份和结构与结缔组织的细胞外基质相似,内含复杂排列的胶原、蛋白聚糖和糖蛋白等13】,这样的结构与细胞更具有亲和力,可以更有效地传递分子和细胞信息。
目前来说,小肠粘膜下层是体内组织工程的代表性材硕士学位论文第一章前言料,正受到广泛关注。
小肠粘膜下层作为天然细胞外基质材料,组织相容性好,材料的表面修饰性能好【4】,即其表面有利于细胞粘附,为细胞在其表面生长繁殖分泌基质提供良好环境,诱导性能好,能与各种促进细胞定向分化、分裂的生长因子复合,共同诱导新生组织的生成15J。
在国外,小肠粘膜下层作为一种组织工程生物材料,被应用于修复皮肤溃疡【6】、膀胱【7】、尿道下裂嘲及作为血管替代物19]等,均己取得较好疗效,但其诱导组织再生机制至今仍不甚清楚。
大量实验证明TGF.13l、表皮干细胞在皮肤组织修复中发挥了重要作用【10]-1n】,为了进一步了解小肠粘膜下层修复创伤皮肤的作用及可能机制,我们把小肠粘膜下层外敷于创伤皮肤,存活一定时间后,利用HE、免疫组织化学、原位杂交等方法观察其修复情况、创面组织生长因子TGF.Bl的蛋白质水平及基因水平变化、PCNA蛋白质水平变化,PCNA常被用作评价细胞增殖状态,故用PCNA来间接反映创面表皮干细胞增生分裂情况,为小肠粘膜下层在临床上治疗皮肤创伤提供重要的依据。
2硕士学位论文第二章材料与方法2.1实验动物第二章材料与方法健康成年SpragueDewley60只,体重200—220克,雌雄兼有,由湘雅医学院实验动物学部提供。
2.2主要试剂和设备小肠粘膜下层兔抗TGF.13l多克隆抗体兔抗TGF-BlmRNA试剂盒TGF.13lmRNA序列为:来源于经长沙市检疫合格的猪小肠。
北京中山武汉博士德5'-ACCTGCAAGACCATCGACATGGAGCTGGTGAAACG一3’5'-CGTGCAGAGCTGCGCTTGCAGAGATTAAAATCAAG一3’5'-CACAGCTCACGGCACCGGAGAGCCCTGGATACCAA一3’2×SSC(1000ml蒸馏水中加氯化钠17.69,柠檬酸三纳8.89)原位杂交PBS(1000ml蒸馏水中加氯化钠30g。
Na2HP04‘121-120309,NaH2P04・2H200.49)兔抗PCNA多克隆抗体武汉博士德SP试剂盒北京中山石蜡切片机PIKATOKYO恒低温切片机AO,USA恒温箱上海跃进医疗器械厂显微镜OlympusJapan医用微波炉南京医疗器械厂Nikon照相机UFX,JapanHPIAS一1000图文分析系统同济医科大学Y.射线湘雅医院32.3实验方法2.3.1小肠粘膜下层制备取经过检疫的健康的猪小肠用清水冲洗干净后,挑选管腔粗细均匀、管壁无破损及无淋巴结的部位。