RPR-220
碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌耐药性及耐药基因分析
㊃论 著㊃D O I :10.3969/j.i s s n .1672-9455.2023.18.009碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌耐药性及耐药基因分析*侯素君1,尹盟盟1,王均梅1,别海文1,梁永娟1,朱元祺21.山东省日照市中医医院检验科,山东日照276800;2.青岛大学附属医院检验科,山东青岛266003摘 要:目的 探讨医院碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(C R E )的临床耐药性及耐药表型和基因型,为医院C R E 菌株感染的临床治疗及医院感染暴发的预防和控制提供科学依据㊂方法 收集2020年7月至2023年1月日照市中医医院临床患者标本中分离的77株C R E 菌株,采用全自动微生物分析仪进行细菌鉴定和药敏试验,采用改良碳青霉烯酶灭活试验(m C I M )和乙二胺四乙酸(E D T A )改良碳青霉烯酶灭活试验(e C I M )联合检测碳青霉烯酶表型,采用聚合酶链反应(P C R )扩增耐药基因并进行测序分型㊂结果 77株C R E 菌株主要分离自痰液,其次是尿液㊁胸腔积液;科室来源主要是颅脑外科㊁重症医学科㊁脑卒中监护室㊂C R E 菌株中肺炎克雷伯菌33株,大肠埃希菌15株,阴沟肠杆菌12株,其他细菌17株㊂C R E 菌株对替加环素敏感性为97.4%,阿米卡星为44.2%,复方磺胺甲噁唑为39.0%,对其他抗菌药物的敏感性均低于20.0%㊂m C I M 筛选碳青霉烯酶菌株的灵敏度为95.9%,特异度为100.0%㊂P C R 扩增结果显示49株C R E 菌株携带N D M 基因,24株C R E 菌株携带K P C 基因,1株C R E 菌株携带I M P 基因,3株未检出碳青霉烯酶基因;基因测序比对确定耐药基因亚型分别为b l a K P C -2㊁b l a N D M -1㊁b l a I M P -4㊂结论 C R E 菌株以肺炎克雷伯菌㊁大肠埃希菌㊁阴沟肠杆菌为主,具有较强的耐药性,肺炎克雷伯菌碳青霉烯类耐药基因主要为b l a K P C -2㊁大肠埃希菌耐药基因主要为b l a N D M -1,阴沟肠杆菌耐药基因主要为b l a N D M -1,临床需加强C R E 菌株检测,根据药敏试验结果合理选用抗菌药物,防范其在医院内暴发流行㊂关键词:碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌; 细菌耐药性; 耐药基因中图法分类号:R 446.5文献标志码:A 文章编号:1672-9455(2023)18-2667-05A n a l y s i s o n d r u g r e s i s t a n c e a n d d r u g r e s i s t a n c e g e n e s o f c a r b a pe n e m -r e s i s t a n t E n t e r o b a c t e r i a c e a e b a c t e r i a*H O U S u j u n 1,Y I N M e n g m e n g 1,WA N G J u n m e i 1,B I E H a i w e n 1,L I A N G Y o n g j u a n 1,Z HU Y u a n qi 21.D e p a r t m e n t o f C l i n i c a l L a b o r a t o r y ,R i z h a o M u n i c i p a l H o s p i t a l o f Tr a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e ,R i z h a o ,S h a n d o n g 276800,C h i n a ;2.D e p a r t m e n t o f C l i n i c a l L a b o r a t o r y ,A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f Q i n g d a o U n i v e r s i t y ,Q i n g d a o ,S h a n d o n g 266003,C h i n a A b s t r a c t :O b je c t i v e T o e x p l o r e t h e c l i n i c a l d r u g r e s i s t a n c e ,d r u g r e s i s t a n c e p h e n o t y p e s a n d g e n o t y p e s of c a r b a p e n e m -r e s i s t a n t E n t e r o b a c t e r i a c e a e (C R E )b a c t e r i a i n t h e h o s p i t a l s o a s t o p r o v i d e a s c i e n t i f i c b a s i s f o r t h e c l i n i c a l t r e a t m e n t o f C R E b a c t e r i a l s t r a i n s i n f e c t i o n a n d t h e p r e v e n t i o n a n d c o n t r o l o f t h e C R E b a c t e r i a l s t r a i n s i n f e c t i o n o u t b r e a k s .M e t h o d s S e v e n t y -s e v e n C R E s t r a i n s i s o l a t e d f r o m t h e c l i n i c a l p a t i e n t s s a m pl e s i n R i z h a o M u n i c i p a l H o s p i t a l o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e f r o m J u l y 2020t o J a n u a r y 2023w e r e c o l l e c t e d ,t h e b a c t e r i a l i d e n t i f i c a t i o n a n d d r u g s u s c e p t i b i l i t y t e s t s w e r e c o n d u c t e d b y t h e f u l l a u t o m a t i c m i c r o b i o l o gi c a l a n a -l y z e r ,a n d t h e c a r b a p e n a s e p h e n o t y p e w a s d e t e c t e d b y t h e m o d i f i e d c a r b a p e n e n a s e i n a c t i v a t i o n m e t h o d (m C I M )a n d E D T A m o d i f i e d c a r b a p e n e n a s e i n a c t i v a t i o n m e t h o d (e C I M ).T h e d r u g -r e s i s t a n c e g e n e s w e r e a m -p l i f i e d b y p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n (P C R )a n d t h e s e q u e n c i n g w a s p e r f o r m e d .R e s u l t s S e v e n t y-s e v e n C R E s t r a i n s w e r e m a i n l y i s o l a t e d f r o m t h e s p u t u m s p e c i m e n ,f o l l o w e d b y t h e u r i n e a n d p l e u r a l e f f u s i o n .T h e d e -p a r t m e n t s w e r e m a i n l y t h e c r a n i o c e r e b r a l s u r g e r y,i n t e n s i v e c a r e m e d i c i n e a n d s t r o k e i n t e n s i v e c a r e u n i t .A -m o n g th e C R E s t r a i n s ,t h e r e w e r e 33s t r a i n s o f K l e b s i e l l a p n e u m o n i a e ,15s t r a i n s o f E s c h e r i c h i a c o l i ,12s t r a i n s o f E n t e r o b a c t e r c l o a c a e a n d 17s t r a i n s o f o t h e r b a c t e r i a .T h e s e n s i t i v i t y o f t h e C R E s t r a i n s t o t i g a c y c l i n e w a s 97.4%,w h i c h t o a m i k a c i n w a s 44.2%,w h i c h t o c o t r i m o x a z o l e w a s 39.0%,a n d w h i c h t o o t h e r a n t i b a c t e r i a l d r u g s w a s l o w e r t h a n 20.0%.T h e s e n s i t i v i t y a n d s p e c i f i c i t y o f m C T M f o r s c r e e n i n g c a r b a p e n a s e s t r a i n w e r e 95.9%a n d 100.0%,r e s p e c t i v e l y .T h e P C R a m pl i f i c a t i o n r e s u l t s s h o w e d t h a t 49s t r a i n s o f C R E b a c t e r i a c a r -r i e d t h e N D M g e n e ,24s t r a i n s o f C R E b a c t e r i a c a r r i e d K P C g e n e ,1s t r a i n o f C R E b a c t e r i u m c a r r i e d I M P g e n e,㊃7662㊃检验医学与临床2023年9月第20卷第18期 L a b M e d C l i n ,S e pt e m b e r 2023,V o l .20,N o .18*基金项目:青岛大学附属医院 临床医学+X 科研项目(2019-3399);山东省日照市中医医院2021年度院级科研立项项目(R Z Z Y 2021L C -09)㊂ 作者简介:侯素君,女,副主任技师,主要从事临床病原微生物耐药监测及耐药机制方面的研究㊂Copyright ©博看网. All Rights Reserved.a n d3s t r a i n s d i d n o t d e t e c t c a rb a p e n e n a s e g e n e.T h e g e n e s e q u e nc i n g c o m p a r i s o nde t e r m i n e d t h a t t h e s u b t y p e s of d r ug r e s i s t a n c e g e n e w e r e b l a K P C-2,b l a N D M-1a n d b l a I M P-4.C o n c l u s i o n Th e C R E s t r ai n s a r e m a i n l y K l e b s i e l l a p n e u m o n i a e,E s c h e r i c h i a c o l i a n d E n t e r o b a c t e r c l o a c a e w i t h s t r o n g d r u g r e s i s t a n c e.T h e c a r b a p e n e m r e s i s t a n t g e n e o f K l e b s i e l l a p n e u m o n i a e i s i s m a i n l y b l a K P C-2,w h i c h o f E s c h e r i c h i a c o l i i s m a i n l y b l a N D M-1,a n d w h i c h o f E n t e r o b a c t e r c l o a c a e i s m a i n l y b l a N D M-1.C l i n i c s h o u l d s t r e n g t h e n t h e C R E s t r a i n s m o n i t o r i n g.T h e a n t i b a c t e r i a l d r u g s s h o u l d b e r e a s o n a b l y s e l e c t e d a c c o r d i n g t o t h e d r u g s u s c e p t i b i l i t y t e s t r e s u l t s t o p r e v e n t i t s o u t b r e a k s a n d e p i d e m i c i n t h e h o s p i t a l.K e y w o r d s:c a r b a p e n e m-r e s i s t a n t E n t e r o b a c t e r i a c e a e;b a c t e r i a l r e s i s t a n c e;d r u g r e s i s t a n c e g e n e当前,细菌耐药已成为全球公共健康领域的重大挑战,其中尤以碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(C R E)引起的感染形势最为严峻,碳青霉烯类抗菌药物包括亚胺培南㊁美洛培南和厄他培南等,是治疗多重耐药革兰阴性杆菌所致感染最有效的抗菌药物之一㊂随着该类药物在临床的广泛应用,肠杆菌目细菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药率呈逐年快速上升趋势[1]㊂耐药细菌感染致住院时间延长㊁费用增加㊁病死率增高,在社区或医院中可引起散发,交叉传播,甚至导致暴发流行,对婴幼儿㊁老年人和免疫缺陷者的威胁巨大㊂因此,探讨医院C R E菌株的耐药表型和基因型,可以为医院C R E菌株感染的临床治疗和医院感染暴发的防控提供科学依据㊂1材料与方法1.1菌株来源收集2020年7月至2023年1月日照市中医医院临床患者标本中分离的77株C R E菌株,剔除同一患者同一部位重复分离的菌株㊂1.2质控菌株大肠埃希菌A T C C25922㊁肺炎克雷伯菌A T C C700603㊁大肠埃希菌A T C C700323㊁大肠埃希菌A T C C35218㊁肺炎克雷伯菌A T C C B A A1705㊁肺炎克雷伯菌A T C C B A A2146均由省临床检验中心提供㊂1.3仪器与试剂 V I T E K2C o m p a c t全自动细菌鉴定及药敏分析仪(法国生物梅里埃公司)㊁L a b n e t C1301-230E U型手掌形离心机(美国L a b n e t公司)㊁B i o-R a d M y C y c i e r型P C R扩增仪(美国B i o-R a d公司)㊁E p p e n d o r f5415R型台式高速离心机(德国E p-p e n d o r f公司)㊁北京六一D Y C P-31D N型琼脂糖凝胶电泳仪(北京六一生物科技有限公司)㊁B i o-R a d凝胶成像仪(美国B i o-R a d公司)㊁B i o-R a d电泳槽(美国B i o-R a d公司),2ˑA c c u r a t e T a q预混液(湖南艾科瑞生物工程有限公司),D L2000D N A M a r k e r(日本T a K a R a公司),琼脂糖(日本T a K a R a公司),4S G e l-r e d核酸染料(香港B B I L i f e S c i e n c e C o r p o r a t i o n), W i z a r d G e n o m i c D N A P u r i f i c a t i o n K i t(美国P r o-m e g a公司),胰蛋白胨大豆肉汤培养基(T S B,杭州滨和微生物试剂公司),E t e s t条(温州市康泰生物科技有限公司),头孢哌酮/舒巴坦㊁替加环素药敏纸片均为英国O x i d公司产品㊂1.4方法1.4.1菌株鉴定及药敏试验菌株分离与培养严格按照‘全国临床检验操作规程“(第4版)[2]进行,使用V I T E K2C o m p a c t全自动微生物分析仪进行菌株鉴定及药敏试验㊂药敏试验结果判断根据美国临床和实验室标准协会(C L S I)最新版标准判断,收集临床标本中分离的肠杆菌目细菌药敏试验报告中亚胺培南㊁美洛培南最小抑菌浓度(M I C)ȡ4μg/m L或厄他培南ȡ2μg/m L(已用E t e s t条复核)的菌株[3]㊂1.4.2碳青霉烯酶表型确证试验改良碳青霉烯酶灭活试验(m C I M)操作步骤:参照C L S I2020年版M100操作标准,用1μL接种环挑一满环菌落,加入2 m L T S B肉汤中乳化,振荡10~15s,每管放入1张含10μg美洛培南的无菌纸片,确认纸片浸没于菌悬液中,35ħ孵育4h,将美洛培南纸片贴于已涂布大肠埃希菌A T C C25922悬液的MH平板,35ħ孵育18~ 24h,量取抑菌圈直径㊂乙二胺四乙酸(E D T A)改良碳青霉烯酶灭活试验(e C I M)操作步骤:另取一支试管,加入2m L T S B肉汤,再加入20μL0.5m o l/L E D T A溶液混匀,E D T A浓度最终为5mm o l/L㊂其余步骤同m C I M㊂m C I M判断标准:美洛培南抑菌圈直径为6~15mm或直径16~18mm但抑菌圈内有散在菌落时,为碳青霉烯酶阳性;抑菌圈直径ȡ19 mm,为碳青霉烯酶阴性;抑菌圈直径为16~18mm 或直径为19mm但抑菌圈内有散在菌落,则无法判断是否存在碳青霉烯酶,为碳青霉烯酶不确定[4]㊂e C I M判断标准:e C I M与m C I M结果比较,美洛培南抑菌圈直径相差ȡ5mm为金属β-内酰胺酶阳性,美洛培南抑菌圈直径相差ɤ4mm为金属β-内酰胺酶阴性,待测菌株产丝氨酸蛋白酶㊂1.4.3基因检测煮沸裂解法提取D N A模板,采用P C R扩增碳青霉烯酶耐药基因,扩增条件为94ħ预变性5m i n;94ħ变性30s,52ħ退火40s,72ħ延伸50s,共35个循环;72ħ再延伸10m i n㊂扩增后产物取10μL通过1.5%琼脂凝胶电泳30m i n,最终在凝胶成像仪上观察结果㊂引物信息见表1,引物序列查阅文献[5]获得,由上海生工生物工程有限公司合成引物,并进行相应的测序分析,与目的基因㊁阳性对照条带位置的扩增产物送上海生工生物工程有限公司完成测序,基因序列在h t t p://b l a s t.n c b i.n l m.n i h.g o v/b l a s t.c g i进行比对,确定耐药基因亚型㊂1.5统计学处理采用全国细菌耐药监测网提供的W h o n e t5.6软件收集药敏试验结果,使用S P S S21.0统计软件进行分析,计数资料以例数或百分比表示,比较采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义㊂㊃8662㊃检验医学与临床2023年9月第20卷第18期 L a b M e d C l i n,S e p t e m b e r2023,V o l.20,N o.18Copyright©博看网. All Rights Reserved.表1 P C R 扩增碳青霉烯类耐药基因引物引物引物序列(5'-3')目的基因产物长度(b p )N D M -F G G T T T G G C G A T C T G G T T T T Cb l a N D M 621N D M -RC G G A A T G G C T C A T C A C G A T C I M P -FG G A A T A G A G T G G C T T A A Y T C T C b l a I M P 232I M P -RG G T T T A A Y A A A A C A A C C A C C K P C -F m C G T C T A G T T C T G C T G T C T T Gb l a K P C 798K P C -R m C T T G T C A T C C T T G T T A G G C G V I M -FG A T G G T G T T T G G T C G C A T A b l a V I M 390V I M -RC G A A T G C G C A G C A C C A G O X A -48-FG C G T G G T T A A G G A T G A A C A C b l a O X A -48438O X A -48-RC A T C A A G T T C A A C C C A A C C G2 结 果2.1 C R E 菌株的种类与临床分布 77株C R E 临床分离株中,肺炎克雷伯菌33株(42.9%)㊁大肠埃希菌15株(19.5%)㊁阴沟肠杆菌12株(15.6%)㊁弗劳地枸橼酸杆菌7株(9.1%)㊁雷氏普罗威登斯菌3株(3.9%)㊁产气肠杆菌3株(3.9%)㊁奇异变形杆菌2株(2.6%)㊁产酸克雷伯菌2株(2.6%)㊂77株C R E 菌株来源标本以痰液和尿液为主,其中分离自痰液33株(42.86%)㊁尿液30株(38.96%)㊁胸腔积液6株(7.79%)㊁穿刺液5株(6.49%)㊁脑脊液2株(2.60%)㊂77株C R E 菌株的科室分布:颅脑外科23株,重症医学科10株,脑卒中监护室9株,急诊科6株,泌尿外科6株,肺病科5株,肝胆胰脾科3株,胸外科3株,脑病科2株,心血管内科2株,骨六科2株,康复科2株,髋膝骨科1株,风湿肾病科1株,妇科1株,肿瘤科1株㊂2.2 C R E 菌株药敏试验结果 77株C R E 菌株中超广谱β-内酰胺酶(E S B L s )的检出率为100.0%,对替加环素敏感性最高(97.4%),其次为阿米卡星(44.2%)㊁复方磺胺甲噁唑(39.0%),对其余抗菌药物的敏感性均低于20.0%㊂大肠埃希菌对阿米卡星的敏感性为80.0%,肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌对阿米卡星的敏感性分别为48.5%和50.0%㊂见表2㊂表2 C R E 菌株对常用抗菌药物的药敏试验结果(%)抗菌药物总计(n =77)耐药敏感肺炎克雷伯菌(n =33)耐药敏感大肠埃希菌(n =15)耐药敏感阴沟肠杆菌(n =12)耐药敏感阿米卡星55.844.251.548.520.080.050.050.0头孢唑啉100.00.0100.00.0100.00.0100.00.0头孢吡肟89.610.487.912.180.020.091.78.3头孢替坦94.85.290.99.193.30.7100.00.0头孢呋辛100.00.0100.00.0100.00.0100.00.0妥布霉素83.116.969.730.386.713.391.78.3庆大霉素79.219.963.636.480.020.091.78.3亚胺培南100.00.0100.00.0100.00.0100.00.0氨曲南80.519.597.03.020.080.083.316.7美洛培南100.00.0100.00.0100.00.0100.00.0呋喃妥因98.81.293.96.154.446.6100.00.0头孢曲松100.00.0100.00.0100.00.0100.00.0头孢他啶100.00.0100.00.0100.00.0100.00.0环丙沙星98.71.3100.00.093.30.7100.00.0左氧氟沙星89.610.484.815.286.713.391.78.3复方磺胺甲噁唑61.039.036.463.680.020.050.050.0氨苄西林100.00.0100.00.0100.00.0100.00.0替加环素2.697.40.0100.00.0100.00.0100.0头孢哌酮/舒巴坦96.13.993.96.193.30.7100.00.0哌拉西林钠/他唑巴坦100.00.0100.00.0100.00.0100.00.0阿莫西林/克拉维酸100.00.0100.00.0100.00.0100.00.02.3 耐药基因扩增结果 77株C R E 菌株中74株产碳青霉烯酶,3株未检出㊂其中,33株肺炎克雷伯菌中20株携带K P C 基因,12株携带N D M 基因,1株未检出碳青霉烯酶,主要产K P C (60.6%);15株大肠埃希菌中12株携带N D M 基因,3株携带K P C 基因,主要产N D M (80.0%);12株阴沟肠杆菌携带N D M 基因(100.0%);7株耐弗劳地枸橼酸杆菌携带N D M 基因(100.0%);3株雷氏普罗威登斯菌中2株携带N D M 基因,1株未检出碳青霉烯酶;3株产气肠杆菌中1株携带N D M 基因,1株携带K P C 基因,1株未检出碳青霉烯酶;2株产酸克雷伯菌中1株携带N D M基因,1株携带I M P 基因;2株奇异变形杆菌携带N D M 基因㊂碳青霉烯酶基因型中N D M 占66.2%(49/74),K P C 占32.4%(24/74),I M P 占1.4%(1/74)㊂琼脂电泳图见图1~3㊂2.4 碳青霉烯酶表型试验结果 74株携带碳青霉烯酶基因的C R E 菌株,其中71株m C I M 试验阳性,3株m C I M 试验均阴性,m C I M 筛选碳青霉烯酶菌株的灵敏度为95.9%,特异度为100.0%㊂m C I M 阳性菌株中,肺炎克雷伯菌32株,大肠埃希菌15株,阴沟肠㊃9662㊃检验医学与临床2023年9月第20卷第18期 L a b M e d C l i n ,S e pt e m b e r 2023,V o l .20,N o .18Copyright ©博看网. All Rights Reserved.杆菌12株,弗劳地枸橼酸杆菌7株,奇异变形杆菌2株,产气肠杆菌1株,产酸克雷伯菌1株,雷氏普罗威登斯菌1株㊂m C I M 结合e C I M 试验初步判断产金属β-内酰胺酶51株(m C I M 阳性,e C I M 阳性),产丝氨酸蛋白酶20株(m C I M 阳性,e C I M 阴性)㊂ 注:M 为D L 2000D N A 标志物;1为b l a N D M 阳性对照;2为b l a N D M阴性对照;3~16为临床菌株b l a N D M阳性㊂图1 P C R 扩增菌株b l a N D M基因的电泳图注:M 为D L 2000D N A 标志物;1为b l a K P C 阳性对照;2为b l a K P C阴性对照;3~17为临床菌株b l a K P C阳性㊂图2 P C R 扩增菌株b l a K P C基因的电泳图注:M 为D L 2000D N A 标志物;1为b l a I M P 阴性对照;2为b l a I M P阳性对照;4为临床菌株b l a I M P 阳性;3㊁5~12为临床菌株b l a I M P阴性㊂图3 P C R 扩增菌株b l a I M P 基因的电泳图2.5 基因测序 耐药基因扩增结果将与目的基因㊁阳性对照条带位置的扩增产物送上海生工生物工程有限公司完成测序,基因序列在h t t p://b l a s t .n c b i .n l m.n i h .g o v /b l a s t .c gi 进行比对,确定耐药基因型为b l a K P C -2㊁b l a N D M -1㊁b l a I M P -4㊂3 讨 论C R E 是当前最受关注的耐药威胁之一,我国C R E 的流行情况也比较严重㊂中国C H I N E T 细菌耐药性监测数据表明,2005年碳青霉烯类抗菌药物对肠杆菌目细菌保持着较高的抗菌活性,耐药率低于2%;到2010年,耐药率明显上升,达到5%;肺炎克雷伯菌的耐药率已高达10%[6]㊂2018年肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药率全国平均为10.1%[7],2021年肺炎克雷伯菌耐药率上升到23.1%[8],肠杆菌目细菌对碳青霉烯类抗菌药物最常见的耐药机制为产碳青霉烯酶[9]㊂因此,快速㊁准确地检测本院耐药菌是否产碳青霉烯酶,了解C R E 菌株基因分型对于临床治疗和医院感染控制至关重要㊂本研究77株C R E 菌株中,肺炎克雷伯菌占42.9%,大肠埃希菌占19.5%,阴沟肠杆菌占15.6%,其他肠杆菌目细菌占22.0%,与陆书华等[10]㊁崔超琼等[11]的研究结果接近;主要碳青霉烯酶基因型中N D M 占66.2%(49/74),K P C 占32.4%(24/74),I M P 占1.4%(1/74)㊂C R E 菌株主要分离自痰液㊁尿液㊁胸腔积液,也可分离自脑脊液㊁血液㊁穿刺液等,说明耐药株引起的感染并不仅限于呼吸㊁泌尿系统,还可能引起颅内㊁血流㊁胸腔等多部位感染,其感染的广泛性应引起临床重视㊂C R E 菌株科室分布主要是颅脑外科㊁重症医学科㊁脑卒中监护室,这与重症监护室患者病因的复杂性㊁病情危重㊁免疫力低下㊁糖皮质激素和高效广谱抗菌药物长期应用,以及侵入性操作治疗较多有关㊂本研究药敏试验结果显示,77株C R E 菌株对青霉素类㊁头孢菌素类㊁头霉素类耐药率均为90%以上,与王珍珍等[12]研究结果一致,临床应慎重经验用药,对替加环素㊁阿米卡星㊁复方磺胺甲噁唑耐药率分别为2.6%㊁55.8%㊁61.0%[13],临床可选择这些药物治疗感染者㊂按照A m b l e r 分子分类方法可将碳青霉烯酶分为3类:(1)A 类丝氨酸碳青霉烯酶,以K P C 为主,该酶活性可被阿维巴坦抑制,产酶菌株通常仅对替加环素㊁多黏菌素或头孢他啶/阿维巴坦敏感;(2)B 类金属β-内酰胺酶,以N D M 型金属酶为主,该酶活性不能被阿维巴坦抑制,产酶菌株通常仅对替加环素㊁多黏菌素敏感,少数菌株对氨曲南敏感;(3)D 类丝氨酸碳青霉烯酶,以O X A -48为主,常见于儿童患者分离的肺炎克雷伯菌,该酶活性可被阿维巴坦抑制,产酶菌株通常仅对替加环素㊁多黏菌素或头孢他啶/阿维巴坦敏感㊂C R E 感染的治疗具有挑战性,应根据药敏试验结果㊁耐药表型或基因分型㊁感染的严重程度,选择有效的治疗方案㊂本研究利用C L S I 推荐的m C I M 和e C I M 试验联合检测碳青霉烯酶表型,m C I M 筛选碳青霉烯酶菌株的灵敏度为95.9%,特异度为100.0%[1],与之符合,结合e C I M 试验初步判断产金属β-内酰胺酶51株,产丝氨酸蛋白酶20株㊂m C I M 试验操作简单,成本低,不需要特殊试剂,灵敏度和特异度高,适合所有微生物室开展㊂m C I M 与e C I M 联合检测筛选碳青霉烯酶表型,对临床选择用药具有重要意义㊂P C R 扩增结果显示,77株C R E 菌株中74株产㊃0762㊃检验医学与临床2023年9月第20卷第18期 L a b M e d C l i n ,S e pt e m b e r 2023,V o l .20,N o .18Copyright ©博看网. All Rights Reserved.碳青霉烯酶,3株未检出,而E S B L s的检出率为100.0%,可能为高产头孢菌素酶(A m p C)或高产E S-B L s合并外膜孔蛋白缺失或变异以及细菌外排泵系统改变所致[14]㊂目前常见的碳青霉烯酶为K P C㊁V I M㊁N D M㊁I M P和O X A,国内以K P C㊁N D M和I M P为主[15]㊂本研究77株菌株主要流行的碳青霉烯酶基因型依次为N D M(66.2%)㊁K P C(32.4%)和I M P(1.4%),以N D M和K P C为主[16]㊂河南部分地区和海南省5家综合医院收集的C R E菌株中,主要的耐药基因型也是N D M[17-18],本研究耐药基因K P C 的检出率低于N D M,77株C R E菌株中,仅有1株耐碳青霉烯产酸克雷伯菌检出I M P基因㊂97.0% (32/33)的肺炎克雷伯菌㊁100.0%(15/15)的大肠埃希菌,100.0%(12/12)的阴沟肠杆菌携带碳青霉烯酶基因㊂碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌主要携带K P C-2基因[19],碳青霉烯类耐药大肠埃希菌和阴沟肠杆菌主要携带N D M-1基因,与陆书华等[10]报道一致㊂K P C和N D M耐药基因均可由质粒介导,通过菌株自身克隆以及不同菌种间水平转移,是C R E流行激增的主要原因㊂K P C-2和N D M-1可水解绝大多数β-内酰胺药物,包括碳青霉烯类,不同之处在于K P C-2为丝氨酸蛋白酶,水解氨曲南,能被新型酶抑制剂阿维巴坦所抑制,而N D M-1为金属酶,不水解氨曲南,不被阿维巴坦㊁韦博巴坦等抑制㊂总之,C R E呈现广泛耐药甚至全耐药的特征,使临床抗感染治疗面临无药可用的困境,导致感染患者病死率高㊂实验室应快速鉴别产碳青霉烯酶菌株,选择早期快速筛查的方法,加快开展联合药敏试验,有效降低C R E感染患者的病死率[20]㊂临床医生应掌握医院C R E临床分布特征及耐药基因㊁细菌耐药情况,根据药敏试验结果合理选用抗菌药物;院感防控部门需加强监督检查,共同遏制C R E菌株在不同患者和不同区域间流行播散,降低医院C R E感染发生率㊂参考文献[1]喻华,徐雪松,李敏,等.肠杆菌目细菌碳青霉烯酶的实验室检测和临床报告规范专家共识[J].中国感染与化疗杂志,2020,20(6):671-680.[2]尚红,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].4版.北京:人民卫生出版社,2015:560-851.[3]C e n t e r s f o r D i s c a s e C o n t r o l a n d P r e v e n t i o n(C D C).F a c i l i-t y g u i d a n c e f o r c o n t r o l o f c a r b a p e n e m-r e s i s t a n t E n t e r o b a c-t e r i a c e a e(C R E)[E B/O L].[2023-04-15].h t t p s://w w w.c d c.g o v/h a i/p d f s/c r e/c r e-g u i d a n c e-508.p d f.[4]C l i n i c a l a n d L a b o r a t o r y S t a n d a r d s I n s t i t u t e.P e r f o r m a n c es t a n d a r d s f o r a n t i m i c r p b i a l s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g:M100-S30[S].W a y n e,P A,U S A:C L S I,2020.[5]P O I R E L L,WA L S H T R,C U V I L L I E R V,e t a l.M u l t i-p l e x P C R f o r d e t e c t i o n o f a c q u i r e d c a r b a p e n e m a s e g e n e s [J].D i a g n M i c r o b i o l I n f e c t D i s,2011,70(1):119-123.[6]周宏伟,胡燕燕,张嵘.碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的检测方法[J].检验医学,2020,10(35):971-973. [7]国家卫生计生委合理用药专家委员会,全国细菌耐药监测网.2018年全国细菌耐药监测报告[J].中国合理用药探索,2020,17(1):1-10.[8]胡付品,郭燕,朱德妹,等.2021年C H I N E T中国细菌耐药监测[J].中国感染与化疗杂志,2022,22(5):521-530.[9]T Z O U V E L E K I S L,MA R K O G I A N N A K I S A,P S I C HO-G I O U M,e t a l.C a r b a p e n e m a s e s i n K l e b s i e l l a p n e u m o n i a e a n d o t h e r E n t e r o b a c t e r i a c e a e:a n e v o l v i n g c r i s i s o f g l o b a ld i me n s i o n s[J].C l i n M i c r o b i o l R e v,2012,25(4):682-707.[10]陆书华,李晓哲,刘凌云,等.山东某院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌临床感染特征及耐药基因分析[J].检验医学, 2020,35(8):757-762.[11]崔超琼,周义正,李承彬,等.耐碳青霉烯肠杆菌科细菌的耐药性和分子特征[J].检验医学与临床,2020,17(17): 2455-2459.[12]王珍珍,赵战勤,常永超,等.耐碳青霉烯革兰阴性杆菌耐药性及耐药基因b l a K P C的分子特征[J].中国感染控制杂志,2020,10(19):857-863.[13]杨玉琪,刘家云,徐修礼,等.某院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的临床分布特点及药物敏感性分析[J].检验医学与临床,2021,18(1):1-5.[14]刘家旭,汪志勇.耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药机制及流行高危因素的研究进展[J].贵州医药,2020,44(4): 543-546.[15]孙艳.耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药机制及实验室检测研究进展[J].国际检验医学杂志,2020,41(4):2011-2016.[16]王素梅,张键东,王宇凡,等.耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药基因分型[J].中华医院感染学杂志,2019,29(17): 2566-2570.[17]L I U C,Q I N S,X U H,e t a l.N e w d e l h i m e t a l l o-β-l a c t a-m a s e1(N D M-1),t h e d o m i n a n t c a r b a p e n e m a s e d e t e c t e di n c a r b a p e n e m-r e s i s t a n t e n t e r o b a c t e r c l o a c a e f r o m h e n a np r o v i n c e,C h i n a[J].P L o S O n e,2015,10(8):e0135044.[18]苏屿,李天娇,龙文芳,等.海南耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药基因分析[J].中国抗菌药物杂志,2018,43(9): 96-100.[19]冯渐焘,陈爱文,李笃军,等.携带b l a K P C-3基因肺炎克雷伯菌新生儿分离株的研究[J].中国实验诊断学,2020, 24(9):1453-1457.[20]丁丽,陈佰义,李敏,等.碳青霉烯类耐药革兰阴性菌联合药敏试验及报告专家共识[J].中国感染与化疗杂志2023,23(1):80-90.(收稿日期:2023-05-23修回日期:2023-07-26)㊃1762㊃检验医学与临床2023年9月第20卷第18期 L a b M e d C l i n,S e p t e m b e r2023,V o l.20,N o.18Copyright©博看网. 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自黏性软聚硅酮薄膜敷料预防乳腺癌术后急性放射性皮炎的研究
自黏性软聚硅酮薄膜敷料预防乳腺癌术后急性放射性皮炎的研究郑良建;张红艳;袁梦珍;荣丽雯;孙昌进【摘要】目的探讨自黏性软聚硅酮薄膜敷料(美菲)对乳腺癌患者急性放射性皮炎的防护效果.方法选取我院84例乳腺癌术后患者为研究对象,随机分为对照组42例、试验组42例,对照组行常规放疗皮肤护理,试验组在放疗前予美菲膜贴于照射野皮肤表面.分别使用RTOG及RISRAS评分表评估放疗期间及放疗后2周急性放射性皮炎的严重程度.结果 RTOG评分显示,试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级放射性皮炎发生率分别为78.6％、16.7％、4.7％,对照组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级放射性皮炎发生率分别为16.7％、59.5％、23.8％,差异有统计学意义(P<0.001);与对照组相比较,试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级放射性皮炎发生时间更长,当发生相同等级放射性皮炎时,试验组累积放疗剂量更大(P<0.05).RISRAS评分显示试验组较对照组显著降低,差异有统计学意义(P<0.001).对照组总治疗时间较试验组延长(P<0.005).结论乳腺癌术后患者在放疗前及全过程中使用美菲,可以显著降低急性放射性皮炎的发生.【期刊名称】《中国医药指南》【年(卷),期】2018(016)006【总页数】3页(P11-13)【关键词】乳腺癌;放射治疗;放射性皮炎;美菲【作者】郑良建;张红艳;袁梦珍;荣丽雯;孙昌进【作者单位】成都市第三人民医院肿瘤放疗科西南交通大学附属医院,四川成都610031;四川省人民医院城东病区,四川成都610101;成都市第三人民医院肿瘤放疗科西南交通大学附属医院,四川成都610031;成都市第三人民医院肿瘤放疗科西南交通大学附属医院,四川成都610031;成都市第三人民医院肿瘤放疗科西南交通大学附属医院,四川成都610031【正文语种】中文【中图分类】R737.9放疗在乳腺癌治疗中起着至关重要作用。
术后辅助放疗不仅能明显降低局部和区域复发率，还能提高总生存率。
化验单正常值参考范围
0.0—30。0m/24h
尿微量白蛋白24h
尿量
尿微量白蛋白
24h尿微量白蛋白
穿刺液生化五项
穿刺液氯
Cl
96—108mmol/L
穿刺液蛋白
TP
g/L
穿刺液葡萄糖
GLU
mmol/L
穿刺液乳酸脱氢酶
PLDH
U/L
腺苷脱氨酶
ADA
U/L
脑脊液生化三项脑脊液生化五项
脑脊液氯
Cl
120-132mmol/l
血清叶酸
Fol
〉=6。8nmol/L
化学发光
铁蛋白
Fer
23。9—336。8ng/ml
11—306.2ng/ml
维生素B12
VitB12
133—675pmol/L
肿瘤相关抗原1
癌胚抗原
CEA
0.00—3.4ng/ml
电化学发光
甲胎蛋白
AFP
0.00-7。00ng/ml
神经原特异性烯醇化酶
NSE
0。00—16。3ng/ml
未见异常
尿乳糜试验
尿乳糜试验
阴性
粪便常规
+潜血试验
粪便常规（便Rt)
外观
黄色，软便
镜检
未见异常
双法便潜血
(化学+金标）
OB
阴性
阴道分泌物检查
阴道分泌物检查
清洁度
Ⅰ—Ⅱ度
本周氏蛋白定性
本周氏蛋白定性
阴性
HCG早孕测定
HCG早孕测定
阴性
白细胞分类
中性粒细胞（分叶核）
N
0.50—0。70
中性粒细胞(杆状核）
RPR220详细资料
RPR-220Sensors1/3Reflective photosensor (photoreflector)RPR-220The RPR-220 is a reflective photosensor. The emitter is a GaAs infrared light emitting diode and the detector is a high-sensitivity , silicon planar phototransistor. A custom lamp was developed to enable the achievement of a smaller package than with conventional reflectors.!ApplicationCompact disc players, Copiers, Game machines, Office automation equipment!Features1) A plastic lens is used for high sensitivity .2) A built-in visible light filter minimizes the influence of stray light.3) Lightweight and compact.!External dimensions (Units : mm)!Absolute maximum ratings (T a=25°C)查询RPR220供应商本页已使用福昕阅读器进行编辑。
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Sensors2/3!Electrical and optical characteristics (T a=25°C)!Electrical and optical characteristic curvesAMBIENT TEMPERATURE : Ta (°C)10080604020P C P D 0020406080100Fig.1 Power dissipation / collector powerdissipation vs. ambient temperature P O W E R D I S S I P A T I O N / C O L L E C T O R P O W E R D I S S I P T I O N : P D / P C (m W )F O R W A R D C U R R E N T : I F (m A )FORWARD VOLTAGE : V F (V)0.81.0 1.2 1.4 1.6 1.82.00.11101001ATa=25°CFig.2 Forward currentvs. forward voltageF O R WA R D V O L T A G E : V F (V )AMBIENT TEMPERATURE : Ta (°C)Fig.3 Forward voltage vs. ambient temperatureFORWARD CURRENT : I F (mA)C O L L E C T O R C U R R E N T : I C (m A )Fig.4 Collector currentvs. forward currentC O L L E C T O R C U R R E N T : IC (m A )COLLECTOR − EMITTER : V CE (V)Fig.5 Output characteristicsD A R K C U R RE NT : I C E O (µA )AMBIENT TEMPERATURE : Ta (°C)Fig.6 Dark current vs. ambienttemperatureSensors3/31101002468101214DISTANCE : d (mm)R E L A T I V E C O L L E C T O R W R R E N T : I C (%)Fig.7 Relative output vs. distanceR E L A T I V E C O L L E C T O R C U R R E N T : I C (%)AMBIENT TEMPERATURE : Ta (°C)−40−60−202040608010020406080100120160140Fig.8 Relative output vs. ambienttemperatureFig.9 Forward current vs. ambient temperatureF O R W A R D C U R R E N T : I F (m A )20406080100208010060400AMBIENT TEMPERATURE : Ta (°C)!Circuit for testing transfer characteristicsAppendixAbout Export Control Order in JapanProducts described herein are the objects of controlled goods in Annex 1 (Item 16) of Export Trade ControlOrder in Japan.In case of export from Japan, please confirm if it applies to "objective" criteria or an "informed" (by MITI clause)on the basis of "catch all controls for Non-Proliferation of Weapons of Mass Destruction.Appendix1-Rev1.0。
梅毒螺旋体IgM抗体检测在梅毒诊断中的意义
292中国艾滋病性病202丨年3月第27卷第3期Chin J A丨DS STD Vol.27 No.3 Mar 2021 DOI: 10.13419/j .cnki.aids.2021.03.19•工作研究•梅毒螺旋体IgM抗体检测在梅毒诊断中的意义刘意，娄金丽，李宇，冯霞，魏虹娟(首都医科大学附属北京佑安医院临检中心，北京100069)摘要：目的探讨检测血清梅毒螺旋体丨SM抗体在梅毒诊断中的临床意义方法北京佑安医院性病门珍就 诊者中已确诊为不同临床分期梅毒患者207例，治疗前采用免疫印迹法(T P-l g M-W B)检测血清中的I g M抗体同时进 行快速血浆反应素环状卡片试验(R P R)。
患者规范治疗后，每3个月复查1次，1年后每半年复查1次，随访两年.首 次R P R检测阴性时，再次进行梅毒螺旋体I g M抗体检测t结果207例确诊梅毒患者未进行规范治疗前，丨g M抗体阳 性率和K P R阳性率分别为74.88%、72.95%。
各期梅毒患者中T P-I g M-W B及K P R阳性率分别为，一期梅毒86.79%、60.38%;二期梅毒74.1丨％、83.93%;三期梅毒25.00%、50.00%.;隐性梅毒65.79%、60.53%两种方法相比一期梅毒T P-I g M-W B敏感性比K P R高，差异有统计学意义（P<0.05)。
符合规范治疗经随访至两年血清学治愈159例样本中，I g M抗体检测出4例阳性，其中一期梅毒中1例、二期梅毒1例、隐性梅毒2例，经F T A-a h s-I g M验证后4例均为阳性结论梅毒螺旋体I g M抗体在梅毒早期诊断中灵敏度高于R P1;在梅毒患者临床血清治愈判断中，除了 R P K试验 外,建议加人梅毒螺旋体IgM抗体作为检测指标。
关键词：梅毒螺旋体；免疫印迹；免疫球蛋A M;治愈中图分类号：K 759 文献标志码：A文章编号：1672-5662(2021 )03-0292-03Significance of IgM antibody detection of Treponema pallidum in diagnosis of syphilis LIU Y i, LOU Jinli, LI Y u, FENG Xia, WEI Hongjuan. (Beijing You' an Hospital, Capital Medical University, Beijing 100069, China) Corresponding author: LI Yu, Email: ********************Supported by the Basic Clinical Research Cooperation Project of Capital Medical University (16JL61)Abstract: Objective To investigate the clinical significance of IgM antibody detection of Treponema pallidum in patients with syphilis. Methods A total of 207 syphilis cases with different clinical stages were diagnosed in STD clinic of Beijing You'an Hospital. IgM antibody in serum was detected by western blot (TP-IGM-WB) and rapid plasma regain assay (RPR) was performed before treatment. The patients were followed up every three months in the first year and six months in the second year after the standard treatment. IgM antibody of Treponema pallidum was detected again when RPR test was negative for the first time. Results The positive rates of IgM antibody and RPR were 74.88% and 72.95% respectively in 207 confirmed syphilis patients before the standard treatment. The positive rates of TP-IgM-WB and RPR were 86.79% and 60.38% in primary syphilis, 74.11% and 83.93% in secondary syphilis, 25% and 50% in tertiary syphilis;65.79% and 60.53% in latent syphilis. The sensitivity of TP-IGM-WB for primary syphilis was higher than that for RPR inthe two methods (P < 0.05). Among the 159 cases with the standard treatment and serologically cured for two years after follow-up, 4 cases were positive for IgM antibody, including 1case of primary syphilis, 1case of secondary syphilis, and 2 cases of latent syphilis. All the 4 cases were positive after verification of FTA-abs-IgM. Conclusion The sensitivity of IgM antibody of Treponema pallidum in early diagnosis of syphilis is higher than that of RPR. In addition to RPR test, it is suggested to add IgM antibody of Treponema pallidum as the detection index in clinical serum cure judgment of syphilis patients.Keywords: Treponema pallidum; western blot; IgM; cure梅毒是我国重点防治的性传播疾病之一，在全 球已经有数百年的流行历史|]。
产新德里金属β-内酰胺酶大肠埃希菌耐碳青霉烯类药物相关机制研究和分子分型
㊀２０２１,３７(１)中国人兽共患病学报C h i n e s e J o u r n a l o f Z o o n o s e sD O I :１０．３９６９/j．i s s n ．１００２－２６９４．２０２０．００．１７９ 实验研究产新德里金属βＧ内酰胺酶大肠埃希菌耐碳青霉烯类药物相关机制研究和分子分型傅芬蕊１,２,张㊀娅１,３,潘玉红１,４,曹颖平１,４,郑培烝１,４福建省自然科学基金(N o ．２０１６J ０１４６６)通讯作者:郑培烝,E m a i l :z h e n g p e i z h e n g ＠a l i y u n ．c o m ;O R C I D :００００Ｇ０００２Ｇ６３４２Ｇ０７４５作者单位:１．福建医科大学附属协和医院,福州㊀３５０００１;２．宁德市医院,宁德㊀３５２０００;３．九江学院附属医院,九江㊀３３２０００;４．福建医科大学医学技术与工程学院,福州㊀３５０００４摘㊀要:目的㊀研究某三甲医院临床分离的产新德里金属βＧ内酰胺酶(N D M )大肠埃希菌的耐药机制和分子流行病学特征.方法㊀在某三甲医院收集的耐碳青霉烯类大肠埃希菌中利用聚合酶链反应(P C R )筛查是否携带N DM 基因,通过测序确定N DM 型别并进一步检测其它碳青霉烯酶相关基因和广谱βＧ内酰胺酶类耐药基因.通过载体构建和表达研究N D M Ｇ１㊁N D M Ｇ６及N D M Ｇ９对亚胺培南的水解能力.采用多位点序列分型(M L S T )对产N D M 大肠埃希菌进行分子分型.结果㊀共筛选出８株携带N D M 大肠埃希菌,其中２株为N D M Ｇ９型,６株为N D M Ｇ６型.４株大肠埃希菌同时携带N DM Ｇ６㊁T E M 和C T X ＧM Ｇ１基因,１株同时携带N DM Ｇ６㊁T E M 和C T X ＧM Ｇ９基因.携带N DM Ｇ１㊁N DM Ｇ６与N DM Ｇ９重组菌对亚胺培南均耐药,最小抑菌浓度(M I C )分别为３２μg /m L ㊁１２８μg /m L 和６４μg /m L .产N D M 大肠埃希菌M L S T 分型结果为S T ２２６㊁S T ６４８和S T １２８４型各１株,S T １０１型５株,此５株均来源于神经内科.结论㊀首次发现同时携带N DM Ｇ６㊁T E M 和C T X ＧM Ｇ１基因和携带N DM Ｇ６㊁T E M 和C T X ＧM Ｇ９基因的大肠埃希菌,N D M Ｇ６㊁N D M Ｇ９对亚胺培南的耐药性比N D M Ｇ１强,应引起重视.M L S T 分型结果提示某三甲医院可能存在耐碳青霉烯类大肠埃希菌的院内局部传播.关键词:大肠埃希菌;耐药;新德里金属βＧ内酰胺酶;多位点序列分型中图分类号:R ３７８．２㊀㊀㊀文献标识码:A ㊀㊀㊀文章编号:１００２－２６９４(２０２１)０１－００５３－０７C a r b a p e n e m Ｇr e s i s t a n c em e c h a n i s m s a n dm o l e c u l a r t y p i n g of E s c h e r i c h i a c o l i p r o d u c i ng N e wD e lh im e t a l βＧl a c t a m a s e F U F e n Ｇr u i １,２,Z H A N G Y a １,３,P A N Y u Ｇh o n g １,４,C A O Y i n g Ｇp i n g １,４,Z H E N GP e i Ｇz h e n g１,４(１．F u j i a n M e d i c a lU n i v e r s i t y U n i o n H o s p i t a l ,F u z h o u ３５０００１,C h i n a ;２．N i n g d eM u n i c i p a lH o s p i t a l ,N i n gd e ３５２０００,C h i n a ;３．J i u j i a n g U n i v e r s i t y A f f i l i a t e d H o s p i t a l ,J i u j i a n g ３３２０００,C h i n a ;４．S c h o o l o f M e d i c a lT e c h n o l o g y a n dE n g i n e e r i n g ,F u j i a n M e d i c a lU n i v e r s i t y ,F u z h o u ３５０００４,C h i n a )A b s t r a c t :T h e a i m o f t h i ss t u d y w a s t o i n v e s t i g a t e t h er e s i s t a n c e m e c h a n i s m sa n d m o l e c u l a re p i d e m i o l o gi c a l f e a t u r e so f E s c h e r i c h i ac o l i s t r a i n s p r o d u c i n g N e wD e l h im e t a l βＧl a c t a m a s e (N D M )c o l l e c t e d i n a t h i r d c l a s sAh o s p i t a l ．N DM g e n e sw e r e s c r e e n e dw i t hP C R i n c a r b a p e n e m Ｇr e s i s t a n t E s c h e r i c h i a c o l i s t r a i n s ．T y p e s o f N DM g e n e sw e r e i d e n t i f i e db y s e q u e n c i n g ．O t h e r c a r b a p e n e m Ｇr e s i s t a n c e r e l a t e d g e n e sa n de x t e n d e d Ｇs p e c t r u m ＧβＧl a c t a m a s e g e n e sw e r ed e t e c t e db y P C Rf o r N DM g e n e p o s i t i v e s t r a i n s ．A n e x p r e s s i o n s y s t e m w a s u s e d t o e v a l u a t e t h e i m i p e n e m Ｇh y d r o l y s i s a b i l i t y o fN D M Ｇ１,N D M Ｇ６a n dN D M Ｇ９．M o l e c u l a r t y p i n g o f E s c h e r i c h i a c o l i p r o d u c i n g N D M w a s p e r f o r m e dw i t h t h em u l t i l o c u s s e q u e n c e t y p i n g (M L S T )m e t h o d ．E i g h t s t r a i n s o f E s c h e r i c h i a c o l i p r o d u c i n g N D M w e r e i d e n t i f i e d ,a m o n g wh i c hs i xw e r eN D M Ｇ６s t r a i n s ,a n dt h er e m a i n d e rw e r eN D M Ｇ９s t r a i n s ．F o u r s t r a i n so f E s c h e r i c h i ac o l i w e r ef o u n dt os i m u l t a n e o u s l y c a r r y N DM Ｇ６,T E M a n d C T X ＧM Ｇ１g e n e s ,a n do n e s t r a i nw a s f o u n d t o s i m u l t a n e o u s l y c a r r y N DM Ｇ６,T E M a n d C T X ＧM Ｇ９g e n e s ．R e c o m b i n a n t E s c h e r i c h i a c o l i s t r a i n s e x p r e s s i n gN DM Ｇ１,N DM Ｇ６a n d N DM Ｇ９g e n e sw e r e r e s i s t a n t t o i m i pe n e m ,w i t h m i n i m u mi n h i b i t o r y c o n c e n t r a t i o n so f３２μg /m L ,１２８μg/m La n d６４μg /m L ,r e s p e c t i v e l y．M L S Tr e v e a l e d f o u r d i s t i n c t s e Ｇq u e n c e t y p e s (S T s ),a m o n g wh i c h f i v e s t r a i n s o f S T １０１w e r e c o l Ｇl e c t e d f r o mt h en e u r o l o g i c a l u n i t ,a n d t h e r e m a i n i n g t h r e e s t r a i n s w e r eS T ２２６,S T ６４８a n dS T １２８４,r e s p e c t i v e l y ．T h i s s t u d y r e po r t s t h e f i r s t i d e n t i f i c a t i o no f E s c h e r i c h i ac o l i s i m u l t a n e o u s l y c a r r y i n g N DM Ｇ６,T E M a n d C T X ＧM Ｇ１g e n e s ,o r N DM Ｇ６,T E M a n d ３５C T XＧMＧ９g e n e s．N o t a b l y,ND MＧ６w a s a s s o c i a t e dw i t h t h eh i g h e s t i m i p e n e mh y d r o l y s i s a b i l i t y,a n dw a s f o l l o w e db y N D MＧ９a n dN D MＧ１．T h eM L S Tr e s u l t s i n d i c a t e d t h a t an o s o c o m i a l i n f e c t i o no f c a r b a p e n e mＧr e s i s t a n tE s c h e r i c h i a c o l i o c c u r r e d l o c a l l y i na t h i r d c l a s sAh o s p i t a l．K e y w o r d s:E s c h e r i c h i a c o l i;r e s i s t a n c e;N e w D e l h im e t a l l oＧβＧl a c t a m a s e;m u l t i l o c u s s e q u e n c e t y p i n gS u p p o r t e db y t h eN a t u r a l S c i e n c eF o u n d a t i o no fF u j i a nP r o v i n c e(N o．２０１６J０１４６６)C o r r e s p o n d i n g a u t h o r:Z h e n g P e iＧz h e n g,E m a i l:z h e n g p e i z h e n g＠a l i y u n．c o m㊀㊀大肠埃希菌是引起人类各种感染如泌尿道㊁呼吸道㊁创面伤口的感染以及菌血症常见的病原体之一.近年来,由于抗菌药物使用不规范,大肠埃希菌对抗菌药物的耐药性明显增强,出现耐碳青霉烯类药物的大肠埃希菌.根据全国耐药性监测网２０１８年的数据,大肠埃希菌对碳青霉烯类药物全国平均耐药率为１．５％.碳青霉烯类药物是目前临床上控制革兰阴性菌感染最有效的抗生素之一,对大肠埃希菌具有强大抗菌活性,一旦出现耐药,将使得感染后的治疗变得十分困难.大肠埃希菌对碳青霉烯类药物最常见的耐药机制是产碳青霉烯酶[１].碳青霉烯酶是指所有能水解碳青霉烯类的βＧ内酰胺酶,依据A m b l e r分子分类将碳青霉烯酶分为A类碳青霉烯酶㊁B类金属βＧ内酰胺酶(M e t a l l oＧβＧl a c t a m a s e,M B L)和D类苯唑西林酶(O x a c i l l i n a s e,O X A).自２００９年在印度分离的大肠埃希菌中发现新德里金属βＧ内酰胺酶１(N e w D e l h im e t a l l oＧβＧl a c t a m a s eＧ１,N D MＧ１)以来,产N D M型酶的大肠埃希菌在世界范围内被广泛报道,而亚洲大陆被认为是主要的流行区域,特别是中国和印度[２],目前已发现２０多种型别的N D M.本文收集来自住院患者的耐碳青霉烯类药物大肠埃希菌８株,对其耐药机制和分子分型进行研究,结果报道如下.１㊀材料和方法１．１㊀菌株来源㊀从住院患者临床标本中分离的８株对亚胺培南耐药的大肠埃希菌.１．２㊀仪器与试剂㊀V I T E KＧ２c o m p a c t全自动微生物分析仪㊁革兰阴性细菌鉴定卡(G N)㊁药敏卡片(A S TＧG N１６)㊁亚胺培南E t e s t试纸条(法国生物梅里埃公司)㊁P C R扩增仪(美国A p p l i e dB i o s y s t e m s 公司)㊁凝胶成像分析系统(美国B I OＧR A D公司)㊁T a q D N A聚合酶(２．５U/μL)㊁d N T P(２．５mm o l/L)㊁D N A纯化回收试剂盒㊁质粒小提试剂盒及T O P１０感受态细胞(北京天根生化科技有限公司)㊁p C R２．１载体(２５n g/μL)(美国I n v i t r o g e n生命技术公司)㊁MＧH琼脂(英国O x o i d公司)㊁引物的合成及P C R产物测序(上海博尚生物技术有限公司).１．３㊀方㊀法１．３．１㊀菌株鉴定与药敏㊀使用V I T E KＧ２c o m p a c t 全自动微生物分析仪进行菌株鉴定和药敏.采用亚胺培南E t e s t试纸条对亚胺培南耐药性进行验证.药敏结果根据２０１９年C L S I的抗菌药物敏感性试验标准进行判断.以大肠埃希菌A T C C２５９２２为质控菌株.１．３．２㊀碳青霉烯酶基因检测及测序㊀煮沸法提取细菌D N A模板,采用P C R法扩增常见的A类碳青霉烯酶基因(K P C㊁G E S㊁S M E㊁I M I/NM C)㊁B类金属酶基因(N DMＧl i k e㊁I MPＧl i k e㊁V I MＧl i k e㊁S I MＧ１㊁G I MＧ１和S P M)㊁D类苯唑西林酶基因(O X AＧ２３Ｇl i k e㊁O X AＧ２４Ｇl i k e㊁O X AＧ５８Ｇl i k e和O X AＧ１４３Ｇl i k e)和广谱βＧ内酰胺酶类耐药基因(S HV㊁T E M㊁C T XＧMＧ１群㊁C T XＧMＧ２群㊁C T XＧMＧ８群㊁C T XＧMＧ９群和C T XＧMＧ２５群).P C R的扩增体系均为２５μL:上下游引物各０．５μL(１０μmm o l/L),１μL模版D N A,２．５μL１０ˑT a q B u f fＧe r,２μLd N T P,０．５μLT a q聚合酶(２．５U/μL),用灭菌水补足至２５μL.反应参数为:９４ħ预变性５m i n;９４ħ３０s,５５ħ３０s,７２ħ１m i n,循环３０次;７２ħ延伸１０m i n.扩增产物用１％琼脂糖凝胶进行电泳,凝胶成像分析系统进行结果观察.电泳阳性产物送测序公司纯化并双向测序,所得测序结果使用B L A S T与G e n B a n k中的序列进行比对. N DMＧl i k e基因阳性的标本再用N DMＧf u l l引物扩增N DM型基因全长,经测序确定具体的N DM基因型别.引物名称㊁引物序列及预计产物长度见表１.４５中国人兽共患病学报２０２１,３７(１)表１㊀扩增耐药基因相关引物信息T a b ．１㊀P r i m e r i n f o r m a t i o n f o r r e s i s t a n c e g e n e a m pl i f i c a t i o n 引物名称引物序列(５ᶄＧ３ᶄ)扩增产物长度/b p参考文献K P C 上游:C G G T G T G T A C G C G A T G G A T A ５７４本文下游:T C C G G T T T T G T C T C C G A C T G G E S 上游:C G G T T T C T A G C A T C G G G A C A ３２１本文下游:C G T T T G G T T T C C G A T C A G C C S M E 上游:A T A G C G A C A A T G G G G C A A C A ３００本文下游:C A G C A G G A A C A C T A G C A C G AI M I /NM C上游:A T C G G T G G T C C T G A G G G T A T ３０１本文下游:C G T A T G C T C C G C A A C T A C C AO X A Ｇ２３Ｇl i k e 上游:G A T C G G A T T G G A G A A C C A G A ５０１[３]下游:A T T T C T G A C C G C A T T T C C A T O X A Ｇ２４Ｇl i k e 上游:G G T T A G T T G G C C C C C T T A A A２４６[３]下游:A G T T G A G C G A A A A G G G G A T T O X A Ｇ５１Ｇl i k e 上游:T A A T G C T T T G A T C G G C C T T G ３５３[４]下游:T G G A T T G C A C T T C A T C T T G G O X A Ｇ５８Ｇl i k e 上游:A A G T A T T G G G G C T T G T G C T G ５９９[３]下游:C C C C T C T G C G C T C T A C A T A CO X A Ｇ１４３Ｇl i k e 上游:T G G C A C T T T C A G C A G T T C C T１４９[５]下游:T A A T C T T G A G G G G G C C A A C CI M P Ｇl i k e 上游:G A A T A G (A /G )(A /G )T G G C T T A A (C /T )T C T C １８８[６]下游:C C A A A C (C /T )A C T A (G /C )G T T A T C V I M Ｇl i k e 上游:G T T T G G T C G C A T A T C G C A A C ３８２[６]下游:A A T G C G C A G C A C C A G G A T A G S I M Ｇ１上游:G T A C A A G G G A T T C G G C A T C G ５６９[６]下游:T G G C C T G T T C C C A T G T G A GG I M Ｇ１上游:T C A A T T A G C T C T T G G G C T G A C ７２[６]下游:C G G A A C G A C C A T T T G A A T G G S P M 上游:C T A A A T C G A G A G C C C T G C T T G ７９８[６]下游:C C T T T T C C G C G A C C T T G A T C N DM Ｇl i k e 上游:T C C T C A A C T G G A T C A A G C A G G ２４９本文下游:A A A A T A C C T T G A G C G G G C C A N DM Ｇf u l l 上游:A T G G A A T T G C C C A A T A T T A T G C A C ８１３[７]下游:T C A G C G C A G C T T G T C G G CP r e ＧN DM Ｇf u l l 上游:C A C C T C A T G T T T G A A T T C G C C ９８４[８]下游:C T C T G T C A C A T C G A A A T C G C S H V 上游:A G G A T T G A C T G C C T T T T T G ３９３[９]下游:A T T T G C T G A T T T C G C T C GT E M 上游:A T G A G T A T T C A A C A T T T C C G８５８[１０]下游:C C A A T G C T T A A T C A G T G A G G C T X ＧM Ｇ１群上游:G G T T T A A A A A A T C A C T G C G T C８３３[１１]下游:T T G G T G A C G A T T T T A G C C G C５５１期傅芬蕊,等:产新德里金属βＧ内酰胺酶大肠埃希菌耐碳青霉烯类药物相关机制研究和分子分型表１(续)引物名称引物序列(５ᶄＧ３ᶄ)扩增产物长度/b p参考文献C T X ＧM Ｇ２群上游:A T G A T G A C T C A G A G C A T T C G ８６５[１２]下游:T G G G T T A C G A T T T T C G C C G C C T X ＧM Ｇ８群上游:A T G A T A G A G A C A T C G C G T T A A G ８６０[１３]下游:C G G T G A C G A T T T T C G C G G C A G C T X ＧM Ｇ９群上游:A T G G T G A C A A A G A G A G T G C A ８６３[１２]下游:C C C T T C G G C G A T G A T T C T C C T X ＧM Ｇ２５群上游:C A C A C G A A T T G A A T G T T C A G９２３[１４]下游:T C A C T C C A C A T G G T G A G T １．３．３㊀N D M Ｇ１㊁N D M Ｇ６与N D M Ｇ９酶水解亚胺培南能力的比较㊀实验分为８组,见表２.分别扩增含与不含启动子序列的N DM Ｇ１㊁N DM Ｇ６及N DM Ｇ９型基因全长(携带N DM Ｇ１型基因的菌株来源于本实验室保存的菌株),引物分别为P r e ＧN DM Ｇfu l l 与N DM Ｇf u l l ,引物序列见表１,反应体系及条件同上.按D N A 纯化回收试剂盒方法对上述基因全长进行纯化,根据p C R２．１载体试剂说明书进行转化.根据抗性筛选与蓝白筛选挑选转化成功的重组T O P １０感受态细胞,进行P C R 检测耐药基因,测序证实转化是否成功和N D M 型别是否正确,琼脂稀释法测亚胺培南M I C 值.表２㊀N D M Ｇ１㊁N D M Ｇ６及N D M Ｇ９水解亚胺培南能力试验分组情况T a b ．２㊀G r o u p e d e v a l u a t i o no f t h e i m i p e n e m Ｇh y d r o l ys i s a b i l i t y o fN D M Ｇ１,N D M Ｇ６a n dN D M Ｇ９菌株解释㊀T O P １０T O P １０感受态细胞T O P １０＋p C R２．１含空载体的重组菌T O P １０＋p C R２．１＋N DM Ｇ１含N DM Ｇ１全长基因的重组菌T O P １０＋p C R２．１＋N DM Ｇ６含N DM Ｇ６全长基因的重组菌T O P １０＋p C R２．１＋N DM Ｇ９含N DM Ｇ９全长基因的重组菌T O P １０＋p C R ２．１＋P r e ＧN DM Ｇ１含启动子和N DM Ｇ１全长基因的重组菌T O P １０＋p C R ２．１＋P r e ＧN DM Ｇ６含启动子和N DM Ｇ６全长基因的重组菌T O P １０＋p C R ２．１＋P r e ＧN DM Ｇ９含启动子和N DM Ｇ９全长基因的重组菌１．３．４㊀多位点序列分型(M L S T )㊀对携带有N DM 基因的８株大肠埃希菌进行分型,P C R 扩增７个管家基因,即a d k ㊁f u m C ㊁g y r B ㊁i c d ㊁m d h ㊁pu r A 和r e c A ,所用引物序列及预计产物长度参考网站(h t Ｇt ps ://e n t e r o b a s e ．r e a d t h e d o c s ．i o /e n /l a t e s t /m l s t /m l s t Ｇl e g a c yＧi n f o Ｇe c o l i ．h t m l ).P C R 的扩增体系及扩增参数同上.扩增的P C R 产物的测序结果提交到p u b M L S T 数据库进行在线序列比对获得序列型.２㊀结㊀果２．１㊀菌株鉴定与表型筛查结果㊀本次收集的８株大肠埃希菌,经鉴定均为对亚胺培南不敏感的大肠埃希菌.经亚胺培南E t e s t 试纸法验证所有菌株均对亚胺培南不敏感.见表３.２．２㊀碳青霉烯酶基因筛查与测序结果㊀８株对亚胺培南不敏感大肠埃希菌所测A 类和D 类碳青霉烯酶基因均为阴性,B 类碳青霉烯酶基因中除N DM Ｇl i k e 基因为阳性外,其余均为阴性;广谱βＧ内酰胺酶基因中７株T E M 基因阳性,４株C T X ＧM Ｇ１基因阳性,１株C T X ＧM Ｇ９基因阳性,具体见表３.扩增８株N DM 基因全长,电泳结果与预计条带大小(８１３b p )相近,如图１所示.将P C R 产物进行双向测序,序列经比对分析,６株为携带N DM Ｇ６基因,２株为携带N DM Ｇ９基因,见表３.２．３㊀N D M Ｇ１㊁N D M Ｇ６和N D M Ｇ９水解亚胺培南能力结果㊀以T O P １０感受态细胞和含有空载体的重组菌作为阴性对照,仅含有N DM Ｇ１Ｇfu l l 基因㊁N DM Ｇ６Ｇf u l l 基因和N DM Ｇ９Ｇf u l l 基因的重组菌,因不含启动子,N DM 型基因无法表达,故表现为对亚胺培南敏感,与阴性对照组结果相同,M I C 值均为０．２５μg /m L .而含有P r e ＧN DM Ｇ１Ｇfu l l 基因㊁６５中国人兽共患病学报２０２１,３７(１)表３㊀８株产新德里金属βＧ内酰胺酶大肠杆菌临床相关信息㊁耐药基因检测及分子分型结果T a b ．３㊀R e l a t e d c l i n i c a l i n f o r m a t i o n ,r e s i s t a n c e g e n e d e t e c t i o na n dm o l e c u l a r t y p i n g o f e i gh t s t r a i n s o f E s c h e r i c h i a c o l i p r o d u c i n g N e wD e l h im e t a l βＧl a c t a m a s e 科室年龄(岁)标本类型亚胺培南E t e s t 试纸法碳青霉烯酶基因广谱βＧ内酰胺酶基因M L S T分型结果康复科５３中段尿＞３２(R )N DM Ｇ６T E M S T １０１神经内科８６中段尿８(R )N DM Ｇ６T E M ,C T X ＧM Ｇ１S T １０１神经内科８１中段尿４(R )N DM Ｇ６T E M ,C T X ＧM Ｇ１S T １０１神经内科８４中段尿＞３２(R )N DM Ｇ６T E M ,C T X ＧM Ｇ１S T １０１神经内科６７中段尿＞３２(R )N DM Ｇ６T E M ,C T X ＧM Ｇ１S T １０１血液科６０分泌物３(I )N DM Ｇ６T E M ,C T X ＧM Ｇ９S T ６４８呼吸内科６４痰２(I)N DM Ｇ９－S T １２８４小儿外科１７分泌物１２(R )N DM Ｇ９T E MS T ２２６１Ｇ８分别为８株待检菌株;M 为D N A m a r k e r;阴性为阴性对照图１㊀N D M 基因扩增产物电泳图F i g ．１㊀E l e c t r o ph o r e s i s o fP C R p r o d u c t s o f t h e N D M g e n e P r e ＧN DM Ｇ６Ｇf u l l 基因及P r e ＧN DM Ｇ９Ｇf u l l 型基因的重组菌对亚胺培南均耐药,对亚胺培南的M I C 值分别为３２μg /m L ㊁１２８μg /m L 和６４μg/m L .２．４㊀M L S T 结果㊀对该８株耐药大肠埃希菌进行分子分型,S T １０１型有５株㊁S T ２２６㊁S T ６４８和S T １２８４型各１株.见表３.３㊀讨㊀论自２００９年首次发现产N D M Ｇ１酶的菌株以来,产N D M 型酶的菌株迅速向其他国家播散,在世界各地均有发现并报道.我国及世界上流行的分离菌中检出率较高的N D M 型酶基因主要为N DM Ｇ１和N DM Ｇ５[１５].本次实验在８株大肠埃希菌中均检测出N DM 基因,其中６株携带N DM Ｇ６基因,２株携带N DM Ｇ９基因.而N DM Ｇ６基因在２０１２年第一次从新西兰病人携带的大肠杆菌中鉴定出来以来[１６],国内外关于N DM Ｇ６基因报道均较少见.N DM Ｇ９基因是我国学者２０１４年在肺炎克雷伯菌中首次报道发现[１７],目前已在韩国㊁我国大陆及台湾地区等地均发现了携带N DM Ｇ９基因的大肠杆菌㊁肺炎克雷伯菌等细菌[１８].为了进一步分析菌株耐药基因的携带情况,还筛查８株耐药菌的广谱βＧ内酰胺酶基因,发现大肠埃希菌中存在多种耐药基因共存现象,几乎所有的耐药菌株均携带有T E M 基因,４株耐药菌同时携带有N DM Ｇ６㊁T E M 和C T X ＧM Ｇ１基因,１株同时携带N DM Ｇ６㊁T E M 和C T X ＧM Ｇ９基因,目前国内外均未见此类报道.本文结果显示N D M Ｇ１㊁N D M Ｇ６和N D M Ｇ９水解亚胺培南能力从强到弱依次为N D M Ｇ６㊁N D M Ｇ９和N D M Ｇ１,文献中未见同时比较以上３种型别N D M 水解亚胺培南能力的报道.对于N DM 型基因,目前已发现了２０多个型别,而它们之间大多只有几个碱基的不同.N DM Ｇ６基因㊁N DM Ｇ９基因与N DM Ｇ１基因的区别是分别在基因６９８位置(CңT )和４５４位置(GңA )上存在有一个碱基的改变,从而导致氨基酸分别由丙氨酸转变为缬氨酸㊁谷氨酸转变为赖氨酸.氨基酸的改变会影响N D M 蛋白的二级结构,可能改变N D M 蛋白的空间结构,从而改变N D M 与底物即碳青霉烯类药物的结合特性,表现出不同的水解能力.不同类型的N D M 水解碳青霉烯类药物的具体机制有待进一步研究.本次研究还采用M L S T 法对８株耐药大肠埃希菌进行分型,结果为:５株携带N DM Ｇ６基因大肠埃希菌为S T １０１型,１株携带N DM Ｇ６基因大肠埃７５１期傅芬蕊,等:产新德里金属βＧ内酰胺酶大肠埃希菌耐碳青霉烯类药物相关机制研究和分子分型希菌为S T６４８型,有２株携带N DMＧ９基因大肠埃希菌分别为S T２２６型和S T１２８４型.在２０１２年首次报道产N DMＧ６基因的大肠埃希菌,其分型结果也为S T１０１型,而在国外报道,产N DM型基因的大肠埃希菌中,也有发现其M L S T分型结果为S T１０１型[１９],提示大肠埃希菌S T１０１型与N D M型碳青霉烯酶基因关系密切.S T６４８型大肠埃希菌常在产超广谱βＧ内酰胺酶的大肠埃希菌中发现[２０],在英国㊁日本分别首次报道产N DMＧ５和N DMＧ７基因的大肠埃希菌,其分型结果均为S T６４８型[２１],国内学者也有在S T６４８型大肠埃希菌中发现N DMＧ５基因,但并未检测出携带有N DMＧ６基因,国际上也并未发现携带有N DMＧ６基因的S T６４８型.产N DM基因的S T１２８４型大肠埃希菌在国内外鲜有报道发现,第一次在S T１２８４型大肠埃希菌中检出N DMＧ５基因是在２０１５年,而后虽有再次检出N DMＧ５基因,但到目前为止未检出携带有包括N DMＧ９基因在内其它N DM型基因.国内外均未在S T２２６型大肠埃希菌中发现N DM型基因.本次分离的８株耐药大肠埃希菌有５株M L S T 分型结果一致,均为S T１０１型,且均检出N DMＧ６基因.其中４株来自神经内科患者,１株来自康复科患者.通过查阅临床相关资料发现,这位康复科患者是在神经内科治疗一段时间后转入康复科的,且与２号患者曾在同一个病房治疗.２号患者长期卧床治疗,在其住院期间,３号㊁４号和５号患者也在神经内科治疗,而且３号和４号患者前后入住同一张病床.以上患者多为免疫力低下㊁有留置导尿管史和长期卧床的老年人.综合以上因素提示这些病人极有可能是在医院内发生了交叉感染.对此,临床上应尽量缩短留置导尿管的时间㊁合理使用抗菌药物㊁规范医护人员的操作和加强对各种医疗器械的消毒措施,同时应重视并加强院感监控力度,避免耐药菌株的传播和医院内感染的发生.利益冲突:无引用本文格式:傅芬蕊,张娅,潘玉红,等．产新德里金属βＧ内酰胺酶大肠埃希菌耐碳青霉烯类药物相关机制研究和分子分型[J]．中国人兽共患病学报,２０２１,３７(１):５３Ｇ５９．D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１００２Ｇ２６９４．２０２０．００．１７９参考文献:[１]T a nK,N g u y e n J,N g u y e nK,e t a l．P r e v a l e n c e o f t h e c a r b a p e nＧe mＧh e t e r o r e s i s t a n t p h e n o t y p e a m o n g E S B LＧp r o d u c i n g E s c h eＧr i c h i a c o l i a n dK l e b s i e l l a p n e u m o n i a e c l i n i c a l i s o l a t e s[J]．JA n t iＧm i c r o bC h e m o t h e r,２０２０,７５(６):１５０６Ｇ１５１２．D O I:１０．１０９３/j a c/ d k a a０４８[２]L i J,Y uT,T a oX Y,e t a l．E m e r g e n c e o f a nN D MＧ５Ｇp r o d u c i n g E s c h e r i c h i a c o l i s e q u e n c e t y p e４１０c l o n e i n i n f a n t s i n a c h i l d r e n s h o s p i t a l i n C h i n a[J]．I n f e c t D r u g R e s i s t,２０２０,１３:７０３Ｇ７１０．D O I:１０．２１４７/I D R．S２４４８７４[３]W o o d f o r dN,E l l i n g t o n M J,C o e l h oJ M,e t a l．M u l t i p l e xP C R f o r g e n e se n c o d i n gp r e v a l e n tO X Ac a r b a p e n e m a s e s i n A c i n e t oＧb a c t e r s p p[J]．I n t JA n t i m i c r o bA g e n t s,２００６,２７(４):３５１Ｇ３５３．D O I:１０．１０１６/j．i j a n t i m i c a g．２００６．０１．００４[４]B r o w nS,Y o u n g H K,A m y e s S G．C h a r a c t e r i s a t i o n o fO X AＧ５１, an o v e lc l a s s D c a r b a p e n e m a s ef o u n di n g e n e t i c a l l y u n r e l a t e d c l i n i c a l s t r a i n so f A c i n e t o b a c t e rb a u m a n n i i f r o m A r g e n t i n a[J]．C l i n M i c r o b i o l I n f e c t,２００５,１１(１):１５Ｇ２３．D O I:１０．１１１１/j．１４６９Ｇ０６９１．２００４．０１０１６．x[５]H i g g i n sP G,L e h m a n n M,S e i f e r t H．I n c l u s i o no f O X AＧ１４３p r i m e r si na m u l t i p l e x p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n(P C R)f o r g e n e s e n c o d i n gp r e v a l e n tO X Ac a r b a p e n e m a s e s i n A c i n e t o b a c t e r s p p[J]．I n tJA n t i m i c r o b A g e n t s,２０１０,３５(３):３０５．D O I:１０．１０１６/j．i j a n t i m i c a g．２００９．１０．０１４[６]M e n d e sR E,K i y o t aK A,M o n t e i r o J,e t a l．R a p i dd e t e c t i o n a n d i d e n t i f i c a t i o no fm e t a l l oＧb e t aＧl a c t a m a s eＧe n c o d i n g g e n e s b y m u l t iＧp l e x r e a lＧt i m eP C Ra s s a y a n dm e l t c u r v e a n a l y s i s[J]．JC l i n M iＧc r o b i o l,２００７,４５(２):５４４Ｇ５４７．D O I:１０．１１２８/J C M．０１７２８Ｇ０６[７]H o r n s e y M,P h e eL,W a r e h a m D W．An o v e l v a r i a n t,N D MＧ５, o ft h e N e w D e l h im e t a l l oＧβＧl a c t a m a s ei na m u l t i d r u gＧr e s i s t a n t E s c h e r i c h i a c o l i S T６４８i s o l a t e r e c o v e r e d f r o ma p a t i e n t i n t h eUＧn i t e dK i n g d o m[J]．A n t i m i c r o b A g e n t s C h e m o t h e r,２０１１,５５(１２):５９５２Ｇ５９５４．D O I:１０．１１２８/A A C．０５１０８Ｇ１１[８]K a a s eM,N o r d m a n nP,W i c h e l h a u sT A,e t a l．N D MＧ２c a r b a pＧe n e m a s e i n A c i n e t o b a c t e r b a u m a n n i i f r o m E g y p t[J]．JA n t i m iＧc r o bC h e m o t h e r,２０１１,６６(６):１２６０Ｇ１２６２．D O I:１０．１０９３/j a c/d k r１３５[９]B h a t t a c h a r j e eA,S e n M R,P r a k a s hP,e t a l．R o l e o f b e t aＧl a c t aＧm a s e i n h i b i t o r s i ne n t e r o b a c t e r i a l i s o l a t e s p r o d u c i n g e x t e n d e dＧs p e c t r u mb e t aＧl a c t a m a s e s[J]．JA n t i m i c r o bC h e m o t h e r,２００８,６１(２):３０９Ｇ３１４．D O I:１０．１０９３/j a c/d k m４９４[１０]T o n k iM,M o h a rB,Šišk oＧK r a l j e v iK,e t a l．H i g h p r e v a l e n c e a n d m o l e c u l a rc h a r a c t e r i z a t i o n o fe x t e n d e dＧs p e c t r u mβＧl a c t aＧm a s eＧp r o d u c i n g P r o t e u s m i r a b i l i s s t r a i n s i ns o u t h e r nC r o a t i a [J]．J M e d M i c r o b i o l,２０１０,５９(P t１０):１１８５Ｇ１１９０．D O I:１０．１０９９/j mm．０．０１６９６４Ｇ０[１１]P a r kY J,L e eS,K i m Y R,e t a l．O c c u r r e n c e o f e x t e n d e dＧs p e cＧt r u m(b e t a)Ｇl a c t a m a s e sa n d p l a s m i dＧm e d i a t e d A m p C(b e t a)Ｇl a c t a m a s e s a m o n g K o r e a ni s o l a t e so f P r o t e u s m i r a b i l i s[J]．JA n t i m i c r o bC h e m o t h e r,２００６,５７(１):１５６Ｇ１５８．D O I:１０．１０９３/ j a c/d k i４０８[１２]G a r r e cH,D r i e u xＧR o u z e t L,G o l m a r d J L,e t a l．C o m p a r i s o n o f n i n e p h e n o t y p i c m e t h o d sf o rd e t e c t i o n o fe x t e n d e dＧs p e c t r u mb e t aＧl ac t a m a s e p r od u c t i o nb y E n te r o b a c t e r i a c e a e[J]．JC l i nM iＧc r o b i o l,２０１１,４９(３):１０４８Ｇ１０５７．D O I:１０．１１２８/J C M．０２１３０Ｇ１０[１３]N a v o nＧV e n e z i a S,C h m e l n i t s k y I,L e a v i t tA,e t a l．D i s s e m i n aＧt i o no f t h e C T XＧMＧ２５f a m i l y b e t aＧl a c t a m a s e s a m o n g K l e b s i e l l a８５中国人兽共患病学报２０２１,３７(１)p n e u m o n i a e,E s c h e r i c h i a c o l i a n d E n t e r o b a c t e rc l o a c a e a n d iＧd e n t i f i c a t i o no f t h en o v e l e n z y m eC T XＧMＧ４１i n P r o t e u sm i r aＧb i l i s i n I s r a e l[J]．JA n t i m i c r o bC h e m o t h e r,２００８,６２(２):２８９Ｇ２９５．D O I:１０．１０９３/j a c/d k n１８２[１４]G o r e nM G,N a v o nＧV e n e z i a S,C h m e l n i t s k y I,e t a l．C a r b a p e nＧe mＧr e s i s t a n tK P CＧ２Ｇp r o d u c i n g E s c h e r i c h i ac o l i i na T e lA v i vM e d i c a lC e n t e r,２００５t o２００８[J]．A n t i m i c r o b A g e n t s C h eＧm o t h e r,２０１０,５４(６):２６８７Ｇ２６９１．D O I:１０．１１２８/A A C．０１３５９Ｇ０９[１５]Z o u H,J i aX,L i u H,e t a l．E m e r g e n c eo fN D MＧ５Ｇp r o d u c i n g E s c h e r i c h i ac o l i i nat e a c h i n g h o s p i t a l i nC h o n g q i n g,C h i n a: I n c FＧt y p e p l a s m i d s m a y c o n t r i b u t e t o t h e p r e v a l e n c e o f b l a N D MＧ５[J]．F r o n tM i c r o b i o l,２０２０,１１:３３４．D O I:１０．３３８９/ f m i c b．２０２０．００３３４[１６]W i l l i a m s o nD A,S i d j a b a tH E,F r e e m a nJ T,e ta l．I d e n t i f i c aＧt i o na n dm o l e c u l a r c h a r a c t e r i s a t i o no fN e wD e l h im e t a l l oＧβＧl a cＧt a m a s eＧ１(N D MＧ１)Ｇa n d N D MＧ６Ｇp r o d u c i n g E n t e r o b a c t e r i a c e a e f r o m N e w Z e a l a n d h o s p i t a l s[J]．I n tJ A n t i m i c r o b A g e n t s,２０１２,３９(６):５２９Ｇ５３３．D O I:１０．１０１６/j．i j a n t i m i c a g．２０１２．０２．０１７[１７]W a n g X,L iH,Z h a oC,e t a l．N o v e lN D MＧ９m e t a l l oＧβＧl a c t aＧm a s e i d e n t i f i e d f r o maS T１０７K l e b s i e l l a p n e u m o n i a e s t r a i n iＧs o l a t e d i nC h i n a[J]．I n t JA n t i m i c r o bA g e n t s,２０１４,４４:９０Ｇ９１．D O I:１０．１０１６/j．i j a n t i m i c a g．２０１４．０４．０１０[１８]L i nY C,K u r o d a M,S u z u k i S,e t a l．E m e r g e n c eo f a n E s c h eＧr i c h i a c o l i s t r a i n c oＧh a r b o u r i n g m c rＧ１a n db l a N D MＧ９f r o ma uＧr i n a r y t r a c t i n f e c t i o n i nT a i w a n[J]．JG l o bA n t i m i c r o bR e s i s t,２０１９,１６:２８６Ｇ２９０．D O I:１０．１０１６/j．j g a r．２０１８．１０．００３[１９]Q a m a rMU,W a l s hT R,T o l e m a nMA,e t a l．D i s s e m i n a t i o n o f g e n e t i c a l l y d i v e r s e N D MＧ１,Ｇ５,Ｇ７p r o d u c i n gＧG r a mＧn e g a t i v e p a t h o g e n s i s o l a t e d f r o m p e d i a t r i c p a t i e n t s i nP a k i s t a n[J]．F uＧt u r eM i c r o b i o l,２０１９,１４(１):６９１Ｇ７０４．D O I:１０．２２１７/f m bＧ２０１９Ｇ００１２[２０]P e i r a n oG,P i t o u t J D D．E x t e n d e dＧS p e c t r u mβＧL a c t a m a s eＧP r oＧd u c i n g E n t e r o b a c t e r i a c e a e:u p d a t eo n m o l e c u l a re p i d e m i o l o g y a n dt r e a t m e n to p t i o n s[J]．D r u g s,２０１９,７９(１４):１５２９Ｇ１５４１．D O I:１０．１００７/s４０２６５Ｇ０１９Ｇ０１１８０Ｇ３[２１]M i z u n oY,Y a m a g u c h iT,M a t s u m o t oT．Af i r s t c a s eo fN e wD e l h im e t a l l oＧβＧl a c t a m a s eＧ７i na nE s c h e r i c h i ac o l i S T６４８i s oＧl a t e i nJ a p a n[J]．J I n f e c tC h e m o t h e r,２０１４,２０(１２):８１４Ｇ８１６．D O I:１０．１０１６/j．j i a c．２０１４．０８．００９收稿日期:２０２０Ｇ０５Ｇ２２㊀编辑:张智芳(上接第５２页)[２９]S c h e y K L,W a n g Z,W e n k e J L,e t a l．A q u a p o r i n s i n t h e e y e: e x p r e s s i o n,f u n c t i o n,a n dr o l e s i no c u l a rd i s e a s e[J]．B i o c h i mB i o p h y sA c t a,２０１４,１８４０(５):１５１３Ｇ１５２３．D O I:１０．１０１６/j．b b a g e n．２０１３．１０．０３７[３０]H i b u s eT,M a e d aN,N a g a s a w aA,e t a l．A q u a p o r i n s a n d g l y cＧe r o lm e t a b o l i s m[J]．B i o c h i m B i o p h y sA c t a,２００６,１７５８(８):１００４Ｇ１０１１．D O I:１０．１０１６/j．b b a m e m．２００６．０１．００８[３１]A l v a r a d oM E,R u b i a n oC,Sán c h e zW,e t a l．C a l c i u mＧb i n d i n g p r o t e i n s t h a t a r e t y p e Bᵡr e g u l a t o r y s u b u n i t s o f p h o s p h a t a s e２A i n G i a r d i ai n t e s t i n a l i s[J]．P a r a s i t o lR e s,２０１８,１１７(１０):３２０５Ｇ３２１４．D O I:１０．１００７/s００４３６Ｇ０１８Ｇ６０１９Ｇz[３２]P r a s a dR,A t u l,S o n iA,e t a l．E x p r e s s i o n,c h a r a c t e r i z a t i o n, a n dc e l l u l a r l o c a l i z a t i o n o f k n o w p a i n s,p a p a i nＧl i k e c y s t e i n e p r oＧt e a s e s o f t h e P l a s m o d i u mk n o w l e s i m a l a r i a p a r a s i t e[J]．P L o S O n e,２０１２,７(１２):e５１６１９．D O I:１０．１３７１/j o u r n a l．p o n e．００５１６１９[３３]张佳凤,郝文波,肖斌,等．抗弓形虫水通道蛋白多肽抗体的制备及鉴定[J]．中国人兽共患病学报,２０１５,３１(１０):９０３Ｇ９０７．D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１００２Ｇ２６９４．２０１５．１０．００２[３４]钟亮尹,刘思敏,曾智华,等．弓形虫C D P K５基因多克隆抗血清的制备及功能鉴定[J]．重庆医学,２０１６,４５(１６):２１８２Ｇ２１８５．D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１６７１Ｇ８３４８．２０１６．１６．００８[３５]冯宪敏,张宏梅,李瑶,等．蓝氏贾第鞭毛虫P P D K多肽抗体制备与定位研究[J]．中国病原生物学杂志,２０１５,１０(２):１４４Ｇ１４７．D O I:１０．１３３５０/j．c j p b．１５０２１０[３６]肖斌,陈瑜,李林海,等．兔抗弓形虫C o r A家族M g２＋转运蛋白多肽抗体的制备及鉴定[J]．生物技术通讯,２０１６,２７(６):７７８Ｇ７８２．D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１００９Ｇ０００２．２０１６．０６．００６[３７]C a o i l i S E．B e n c h m a r k i n g BＧc e l l e p i t o p e p r e d i c t i o nw i t h q u a n t iＧt a t i v ed o s eＧr e s p o n s ed a t ao na n t i p e p t i d ea n t i b o d i e s:t o w a r d s n o v e l p h a r m a c e u t i c a l p r o d u c td e v e l o p m e n t[J]．B i o m e d R e s I n t,２０１４,２０１４:８６７９０５．D O I:１０．１１５５/２０１４/８６７９０５[３８]W a n g F,Y eB．B i o i n f o r m a t i c sa n a l y s i sa n dc o n s t r u c t i o no f p h y l o g e n e t i c t r e e o fA q u a p o r i n s f r o m E c h i n o c o c c u s g r a n u l o s u s [J]．P a r a s i t o lR e s,２０１６,１１５(９):３４９９Ｇ３５１１．D O I:１０．１００７/ s００４３６Ｇ０１６Ｇ５１１４Ｇ２收稿日期:２０２０Ｇ０４Ｇ２４㊀编辑:张智芳９５１期傅芬蕊,等:产新德里金属βＧ内酰胺酶大肠埃希菌耐碳青霉烯类药物相关机制研究和分子分型。
基于51单片机控制的循迹小车
毕业设计（论文）课题名称：基于单片机控制的循迹小车指导教师：系别：专业：班级：姓名：摘要本文论述了基于单片机的智能循迹小车的控制过程。
智能循迹是基于自动引导机器人系统，用以实现小车自动识别路线，以及选择正确的路线。
智能循迹小车是一个运用传感器、单片机、电机驱动及自动控制等技术来实现按照预先设定的模式下，不受人为管理时能够自动实现循迹导航的高新科技。
该技术已经应用于无人驾驶机动车，无人工厂，仓库，服务机器人等多种领域。
本设计采用89C52单片机作为小车的控制核心；采用RPR220红外反射式开关传感器作为小车的循迹模块来识别白色路面中央的黑色引导线，采集信号并将信号转换为能被单片机识别的数字信号；采用驱动芯片L298N构成双H桥控制直流电机，其中软件系统采用C程序，本设计的电路结构简单，容易实现，可靠性高目录摘要 (1)目录 (1)第1章绪论 (2)1.1课题背景 (2)1.2课题研究的目的和意义 (3)1.3 本设计的意义 (4)第二章方案论证 (4)2.1 控制器方案论证 (4)2.2 供电单元方案论证 (5)2.3 智能循迹小车电源模块的选择 (5)2.4智能循迹小车电机驱动电路的选择 (5)2.5 检测循迹模块 (5)2.5 显示模块论证 (6)第三章智能循迹小车硬件部分 (6)3.1 系统总体方案 (6)3.2 单片机最小系统 (7)3.3 电源模块 (8)3.4 电机驱动模块 (9)3.5 循迹单元电路 (10)3.6测速模块电路 (13)3.7 显示模块电路 (13)第四章循迹小车项目软件流程图 (14)4.1 总体软件流程图 (14)4.2小车循迹流程图 (15)4.3中断程序流程图 (16)第五章总结 (17)第六章致谢 (18)第七章参考文献 (18)附图设计总体图 (19)封底.................................................................................................................... 错误！未定义书签。
WS272007梅毒诊断标准
WS273-2007梅毒诊断标准梅毒诊断标准1范畴本标准规定了梅毒的诊断依据、诊断原则、诊断标准和鉴不诊断。
2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
2.1梅毒Syphilis梅毒是惨白螺旋体（又名梅毒螺旋体）感染人体所引起的一种系统性、慢性经典的性传播疾病，可累及人体多系统多脏器的损害，产生多种多样的临床表现，导致组织破坏、功能失常，甚至危及生命。
2.2前带现象Prozone phenomenon非梅毒螺旋体抗原试验（如RPR试验）中，有时由于血清抗体水平过高，抗原抗体比例不合适，而显现弱阳性、不典型或阴性的结果，但临床上又有典型的二期梅毒体征，将此血清稀释后再做血清学试验，显现了阳性的结果，称quot;前带现象二3缩略语下列缩略语适用于本标准。
VDRL Venereal Disease Research Laboratory 性病研究实验室（玻片试验）USR Unheated serum reagin血清不需加热的反应素（玻片试验）TRUST Toluidine red unheated serum test 甲苯胺红血清不需加热试验RPR Rapid plasma reagin快速血浆反应素（环状卡片试验）FTA-ABS Fluorescent treponemal antibody-absorption 荧光螺旋体抗体吸取（试验）TPHA Treponema pallidum hemagglutination assay梅毒螺旋体血凝试验TPPA Treponema pallidum particle agglutination assay 梅毒螺旋体颗粒凝集试验4诊断依据4.1一期梅毒4.1.1流行病学史：有多性伴，不安全性行为，或性伴感染史。
4.1.2临床表现：4.1.2.1硬下疳：埋伏期一样为2〜4周。
一样为单发，但也可多发；直径约1cm〜2cm,圆形或椭圆形浅在性溃疡，界限清晰、边缘略隆起，疮面清洁；触诊基底坚实、浸润明显，呈软骨样的硬度；无明显疼痛或触痛。
2018-rpr实验步骤-word范文模板 (8页)
本文部分内容来自网络整理，本司不为其真实性负责，如有异议或侵权请及时联系，本司将立即删除！== 本文为word格式，下载后可方便编辑和修改！ ==rpr实验步骤篇一：梅毒快速检测试验记录(科华)梅毒快速检测试验记录实验步骤：1、取出RPR试剂，平衡到室温；2、分别吸取50微升梅毒阳性对照和阴性对照均匀铺加在纸卡的两个圆圈中；3、另吸取50微升待检血清均匀铺加在纸卡的另一个圆圈中；4、用盒中专用针头，滴管吸取RPR试剂，分别垂直滴加1滴于上述血清中；5、用RPR旋转仪水平转动纸卡8分钟，100转/分钟，然后3分钟内在光线充足处判断结果；6、定性试验呈弱阳性或阳性者，必须做定量试验才能了解患者血清中的抗体滴度，具体方法如下：将待检血清用生理盐水作倍比稀释（原血清、1：2、1：4、1：8、1：16、1：32），然后对每个稀释度的血清按定性试验方法再进行测定并判断结果结果判断：1、阴性反应（—）：可见均匀的抗原颗粒而无凝集物；2、弱阳性反应（+~++）：可见较小的黑色凝集物；3、阳性反应（+++~++++）：可见中等或较大的黑色凝块，溶液清亮。
结果分析：检测者：复核者：篇二：梅毒筛查试验梅毒试验简介一、梅毒筛查（TRUST）实验原理：采用VDRL抗原重悬于含有特制的甲苯胺红溶液中制成。
供在白色卡片上进行试验，以检测血清或血浆中反应素用。
可作为梅毒病人的诊断和疗效之参考。
二、快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）所用抗原为标准的牛心肌脂抗原，该方法操作简便、迅速，适用于大量标本检测，目前许多血站用RPR试验对献血者进行梅毒普查。
RPR试验和df方法对一期梅毒的诊断相互配合，可早期诊断梅毒。
缺点是当抗体含量过高时，易出现假阴性反应，即前带现象（prozone phenomenon），会有漏检；还易出现生物学假阳性反应。
对潜伏期梅毒、神经梅毒不敏感。
RPR是“快速血浆反应素试验”的英文缩写，是一种非螺旋体抗原血清试验。
肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类抗菌药的研究进展
肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类抗菌药的研究进展唐小红;朱卫民【摘要】肺炎克雷伯菌是一种常见的机会性致病菌,为医院内感染的重要病原菌之一.近年来,肺炎克雷伯菌的感染率及耐药率呈上升趋势,碳青霉烯类抗菌药是治疗该菌最有效的抗菌药物,但随着使用的增加,其耐药性也不断增加.本文就肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制:产生碳青霉烯酶、青霉素结合蛋白对碳青霉烯类亲和力的下降、高产AmpC酶或ESBLs合并外膜蛋白缺失、生物被膜、主动外排系统等方面的研究进展作一综述.【期刊名称】《国外医药（抗生素分册）》【年(卷),期】2014(035)003【总页数】5页(P115-118,122)【关键词】肺炎克雷伯菌;碳青霉烯酶;碳青霉烯类抗生素;细菌;耐药性【作者】唐小红;朱卫民【作者单位】重庆医科大学附属第一医院感染科, 重庆400016;重庆医科大学附属第一医院感染科, 重庆400016【正文语种】中文【中图分类】R378肺炎克雷伯菌（Kpn）属于克雷伯菌属的7个亚种之一—肺炎克雷伯菌肺炎亚种，革兰阴性菌，是重要的条件致病菌。
常导致肺炎、支气管炎、泌尿道和创伤感染等医院感染。
近十年来，因青霉素与头孢类抗菌药的大量及广泛使用，尤其是第3代头孢抗菌药的使用，肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类抗生素为主的各种抗菌药的耐药性不断增强，该耐药菌的出现加剧了各种难治性感染，使治疗十分棘手 [1-3]。
碳青霉烯类抗生素因其广谱的抗菌活性，对超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、头孢菌素酶(AmpC)稳定，持续的抗菌后效应[4]等特点，已成为临床治疗革兰阴性菌引起严重感染的一线药物[5]，更成为治疗肠杆菌科细菌引起严重感染的首选药物。
但随着应用的增加，对其耐药的报道也逐渐增多。
探究其耐药机制有:产生碳青霉烯酶，青霉素结合蛋白对碳青霉烯类亲和力的下降，高产AmpC酶或ESBLs合并外膜蛋白缺失，生物被膜，主动外排系统。
本文就近年来肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类抗菌药的主要作用机制作一介绍，分述如下。
RPR220(中文)
反射型光电探测器RPR220
RPR－220是一种一体化反射型光电探测器。
其发射器是一个砷化镓红外发光二极管，而接收器是一个高灵敏度，硅平面光电三极管。
主要应用在游戏机，复印机和办公自动化等设备中。
特点：
1。
塑料透镜以提高灵敏度；
2。
内置的可见光过滤器以减小离散光的影响；
3。
体积小结构紧凑。
它采用DIP4封装。
发射器和接收器都有两根引出脚，其中长脚为正极，短脚为负极。
器封装如图1示。
Ò³ 1
（4）集电极功耗：80mW；
3工作环境温度：－2５℃～８５℃；
４贮藏温度：－３０℃～８５℃；
二.
测试电路
接单片机IO输出
驱动后级电路
上图是实际测试电路
Ò³ 2
电路参数
电源：5v，图中所示二极管中流过的电流大约为8～10mA。
RPR220反射式光电传感器的性能测试与分析
【摘要】通过给定的测量电路，检测反射式红外光电传感器在多种颜色表面的反射特性。
近红外反射式光电传感器在白色、红色、绿色、蓝色、橙色、玖红、金黄、浅蓝、木板等表面反射特性相类似，没有区分度；青绿、咖啡色表面反射特性与白色表面相比较，略有差异，区分度不明显；黑色表面与上述各种颜色表面差异最大，区分度明显。
提高发射管工作电流，可以增加传感器的有效探测范围。
加装红外滤光片，能降低环境光对检测结果的影响。
【关键词】红外线；反射式；光电传感器序言在机器人竞赛和电子设计竞赛中经常会用到反射式红外光电传感器[1]。
反射式红外光电传感器是利用检测反射光强度进行工作的，反射光的强弱与发射管工作电流、反射距离、反射面材料及传播介质特性等因素相关。
在一般工作环境中，传感器检测结果受环境照度强弱变化的影响。
rpr220是日本罗姆（rohm）株式会社生产的一款常用反射式红外光电传感器[2]，中心波长800nm，属于近红外传感器。
本文通过给定的测试电路，测出rpr220传感器在不同颜色表面及木材表面的反射特性。
1、实验方法测试电路中，vcc取+5v，rx取20kω[3]，改变红外发光管工作电流、传感器与反射面之间的距离、反射面材料与颜色及环境光的照度强弱等因素，记录输出电压变化，以判别传感器的工作状态。
实验均在晴天室内操作，室温26℃。
测试红外发光管不同工作电流对传感器性能影响时，室内环境光照度为400lx，照度误差10%。
测试各种反射面对传感器性能影响时，发射管取额定工作电流10ma。
检测环境光、红外滤光片对传感器性能影响时，发射管电流10ma，传感器距离白色反射面高度15cm。
测量仪表为victor1010a、vc890d。
2、实验结果分析图1是白色反射面的特性曲线，发射管电流5ma时，处于欠电流工作状态，曲线最低点，检测距离3mm，输出电压1.4v；发射管电流10ma曲线，检测距离3mm～10mm，输出电压≤0.3v；发射管电流15ma曲线，检测距离3mm～14mm，输出电压≤0.3v。
金标法检测梅毒螺旋体特异性抗体的适用性分析
+!王!怡!姚 ! 峰’ 非 特 异 性 梅 毒 血 清 学 试 验’ 见,白 继 文 主 编I 检验医学诊断技术’ 北 京,人 民 卫 生 出 版 社!第 ( 版!&""%!)&& !)&,
!!摘要"目的!探讨 5V1金标法在梅毒患者检测与献 血 者 筛 查 中 的 适 用 性! 方 法 !&/!(+ 份 无 偿 献 血 者 标 本 经 OVO"5V1ad[ZL 法初"复检#阳性标本以 5VVL 确认#同 时 用 5OJZ5"5V1金 标 法 检 测! 金 标 法 检 测 了 &, 例 临 床 梅毒#(%例自身免疫性疾病标本!结果!OVO"5V1ad[ZL 共 检 出 阳 性 %(, 份#两 法 共 阳 性 !) 份#OVO 单 阳 + 份# 5V1ad[ZL 单阳!+ 份$%(, 份 阳 性 中 5VVL 确 认 阳 性 %%( 份#5V1ad[ZL 假 阳 性 %/ 份 %%,I2*&#金 标 法 , 份 %+I +*&#OVO+份%(I,*OJZ5%份%"I/*&$OVO 漏检+!份%+"I)*OJZ5 漏 检 (, 份 %("I2*&!&, 例 梅 毒 标本金标法均为阳性#(%例自身免疫性疾病标本金标法为阴性! 结 论 金 标 法 其 灵 敏 度"特 异 性 与 5VVL 相 比 无 显著差异%7 #"I",&#比 OVO"5OJZ5 好%7 ("I",&! !!关键词"梅毒 特异性#抗体 非特异性#抗体 金标法’免疫层析技术 ! ! 中 图 分 类 号 ""++!’!%!"),2’%! ! ! 文 献 标 识 码 "#! ! ! 文 章 编 号 "%""+1,+23#&""+$"(1"%,/1"&
RPR220原理及其应用
RPR220原理及其应用RPR220由两个光敏电阻构成，分别被连接到一个光透过滤器中。
当光线照射到滤波器上时，透明的光会穿过滤波器，并照射到光敏电阻上。
光敏电阻会根据光线的强度改变其电阻值，进而产生一个与光强度成正比的电压信号。
另一方面，被滤波器吸收的光也会通过散热来改变光敏电阻的温度，从而影响其电阻值。
因此，RPR220测量的不仅仅是光线的强度，也包括其温度的变化。
1.光敏电阻：RPR220可以被用作光敏电阻，用于测量光线的强度。
通过测量光敏电阻的电阻值变化，可以估计光线的强度，从而实现自动调亮或者调暗等功能。
在照明领域，RPR220可以用于智能照明系统中的亮度自适应控制。
2.光敏传感器：RPR220可以被用作光敏传感器，用于检测光线的存在与否。
在工业中，RPR220可以用于检测机器或者设备的运行状态，当运行状态发生故障时，光线不再照射到RPR220上，从而触发报警或者其他相应的控制措施。
3.温度测量：RPR220的原理中考虑了光敏电阻的温度敏感性，因此，它也可以被用于测量温度。
通过测量光敏电阻的电阻值变化，可以计算出环境的温度值。
这在一些温度变化较小的场景中，提供了一种简单且低成本的温度测量方法。
4.安防系统：由于RPR220能够检测光线的存在和强度，因此它也可以被用于安防系统中。
当光线被遮挡或者光线的强度突然改变时，RPR220会产生相应的触发信号，从而触发安防系统中的报警或者录像功能。
在以上的应用中，RPR220具有响应速度快、精确度高、结构简单、使用方便等特点。
然而，它也存在着一些限制，例如对光线的灵敏度受到环境因素的影响，故障率较高等。
因此，在具体的应用中，需要根据实际需求来选择合适的光敏元件，并采取适当的补偿措施，以提高其性能和稳定性。
YXCDC.OG-YQ-AB-22-梅毒旋转仪操作规程
六、点检规程
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为保证振荡器的正常运转，每次使用时均应填写仪器使用记录。出现故障时应及时填写设备维修记录。
七、注意事项
不要用力向下压振荡台，否则将造成机械故障。
完毕后应注意关闭开关，断开电源，否则将可能造成仪器的损坏。
注意经常进行清洁，防止污染。
八、引用文件和技术依据
梅毒旋转振荡器使用说明书
九、质量记录
仪ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ使用记录
设备维护和维修记录
元江县人民医院检验科
作 业 指 导 书
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文件名称：XK96-8型梅毒旋转仪操作规程
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受控号：
拟制部门：元江县人民医院检验科
拟制人：常学芬
审核人：王羽熙
批准人：李琳
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发布日期：2015年08月26日
实施日期：2015年09月01日
元江县人民医院检验科作业指导书
文件编号：YJXYYJYKHIV01
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文件名称：XK96-8型梅毒旋转仪操作规程
振荡频率：可调节
额定频率：50Hz
室内温度：5~40℃
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室内湿度：低于95%
五、操作方法
接通电源。
将血清反应板置于振荡台面上。
使用“RPR”档或“TRUST”档使用固定的旋转频率及旋转幅度。
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根据试剂盒要求设置旋转时间。
开启开关，开始旋转。
旋转结束后仪器自动停止旋转，将反应板取下及时判读结果，断开电源。
第3版第0次修订
一、目的
振荡器主要由医疗卫生单位用于开展梅毒血清学试验，为确保实验结果的准确，应正确使用该设备。
二、适用范围
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适用于性病艾滋病科梅毒旋转仪的使用。
梅里埃-API-鉴定范围
API 20 E 肠道菌鉴定系统（Ref. 20 100）API 20 E®革兰氏阴性杆菌的鉴定（18-24小时内完成）•几乎覆盖临床环境中可发现的所有细菌。
•评估其他鉴定系统的参照技术(600篇出版物)。
•快速和易于使用：单一菌落，按试条上的标识填充，填充好的试条放入盒内，明晰的颜色，软件辅助结果解释。
•保存期长。
Ref. 20 100 – 25 鉴定条Ref. 20 160 – 100 鉴定条布丘菌属：乡间布丘菌 Buttiauxella agrestis布戴约维采菌属：水生布戴维约采菌 Budvicia aquatica 布鲁菌属：布鲁菌属某些种 Brucella spp西地西菌属：戴氏西地西菌 Cedecea davisae拉氏西地西菌 Cedecea lapagei奈氏西地西菌 Cedecea neteri柠檬酸杆菌属：无丙二酸柠檬酸杆菌 Citrobacter amalonaticus（+/-无丙二酸柠檬酸杆菌） (+/-Citrobacter amalonaticus)布氏柠檬酸杆菌 Citrobacter braakii （+/-弗氏柠檬酸杆菌） (+/-Citrobacter freundii)法氏柠檬酸杆菌 Citrobacter farmeri （+/-无丙二酸柠檬酸杆菌） (+/-Citrobacter amalonaticus)弗氏柠檬酸杆菌 Citrobacter freundii （+/-弗氏柠檬酸杆菌） (+/-Citrobacter freundii)柯氏柠檬酸杆菌 Citrobacter koseri （=差异柠檬酸杆菌） (=Citrobacter diversus)杨氏柠檬酸杆菌 Citrobacter youngae （+/-弗氏柠檬酸杆菌） (+/-Citrobacter freundii)克氏/无丙二酸柠檬酸杆菌 Citrobacter koseri/amalonaticus爱德华菌属：迟钝爱德华菌 Edwardsiella tarda保科爱德华菌 Edwardsiella hoshinae 艾肯菌属：啮蚀艾肯菌 Eikenella corrodens肠杆菌属：阴沟肠杆菌 Enterobacter cloacae产气肠杆菌 Enterobacter aerogenes河生肠杆菌 Enterobacter amnigenus中间肠杆菌 Enterobacter intermedius 日沟维肠杆菌 Enterobacter gergoviae 阪崎肠杆菌 Enterobacter sakazakii生癌肠杆菌 Enterobacter cancerogenus （=泰勒肠杆菌） (=Enterobacter taylorae)阿氏肠杆菌 Enterobacter asburiae伯克霍尔德菌属：洋葱伯克霍尔德菌 Burkholderia cepacie（=洋葱假单胞菌） (=Pseudomonas cepacie)欧文菌属：欧文菌属某些种 Erwinia spp埃希菌属：大肠埃希菌 Escherichia coli弗格森埃希菌 Escherichia fergusonii 赫氏埃希菌 Escherichia hermannii伤口埃希菌 Escherichia vulneris假单胞菌属：铜绿假单胞菌 Pseudomonsa aeruginosa荧光假单胞菌 Pseudomonsa fluorescens 恶臭假单胞菌 Pseudomonsa putida类鼻疽假单胞菌 Pseudomonsa pseudomallei假单胞菌属某些种 Pseudomonsa spp寡养单胞菌属：嗜麦寡养食单胞菌 Stenotrophomonas maltophilia（=嗜麦芽黄单胞菌） (= Xanthomonas maltophilia)气单胞菌属：嗜水气单胞菌 Aeromonas hydrophila豚鼠气单胞菌 Aeromonas caviae杀鲑杀鲑气单胞菌 Aeromona ssalmonicidas salmonicidas（=杀鲑气单胞菌） (=Aeromonas salmonicidas)温和气单胞菌 Aeromonas sobria产碱菌属：产碱菌属某些种 Alcaligenes spp克雷伯菌属：植生肺炎克雷伯菌 Klebsiella planticola土生拉乌尔菌 Raoultella terrigena解鸟氨酸拉乌尔菌 Raoultella ornithinolytica产酸克雷伯菌 Klebsiella oxytoca肺炎肺炎克雷伯菌 Klebsiella pneumoniae pneumoniae臭鼻肺炎克雷伯菌 Klebsiella pneumoniae ozaenae鼻硬结肺炎克雷伯菌 Klebsiella pneumonia rhinoscleromatis克吕沃尔菌属：克吕沃尔菌属某些种 Kluyvera spp抗坏血酸克吕沃尔菌 Kluyvera ascorbata栖冷克吕沃尔菌 Kluyvera cryocrescens 科泽菌属：特氏科泽菌 Koserella trabulsii勒克菌属：非脱羧勒克菌 Leclercia adecarboxylata米勒菌属：威斯康星米勒菌 Moellerella wisconsensis摩根菌属：摩氏摩根菌 Morganella morganii变形杆菌属：奇异变形杆菌 Proteus mirabilis彭氏变形杆菌 Proteus penneri普通变形杆菌群 Proteus vulgaris group普罗威登斯菌属：产碱普罗威登斯菌 Providencia alcalifaciens雷氏普罗威登斯菌 Providenciarettgeri斯氏普罗威登斯菌 Providenciastuartii拉氏普罗威登斯菌 Providencia rustigianii腐败希瓦菌群 Shewanella putrefaciens group爱文菌属：美洲爱文菌 Ewingella americana哈夫尼菌属：蜂房哈夫尼菌 Hafnia alvei沙雷菌属：无花果沙雷菌 Serratia ficaria居泉沙雷菌 Serratia fonticola液化沙雷菌 Serratia liquefaciens粘质沙雷菌 Serratia marcescens气味沙雷菌1型 Serratia odorifera 1 气味沙雷菌2型 Serratia odorifera 2 普城沙雷菌 Serratia plymuthica深红沙雷菌 Serratia rubidaea志贺菌属：鲍氏志贺菌 Shigella bogdii痢疾志贺菌 Shigella dysenteriae弗氏志贺菌 Shigella flexneri索氏志贺菌 Shigella sonnei塔特姆菌属：痰塔特姆菌 Tatumella ptyseos志贺菌属某些种 Shigella spp耶尔森菌属：小肠结肠炎耶尔森菌 Yersinia enterocolitica弗氏耶尔森菌 Yersinia fredericksenii 中间耶尔森菌 Yersinia intermedia克氏耶尔森菌 Yersinia kristensenii 鼠疫耶尔森菌 Yersinia pestis假结核耶尔森菌 Yersinia pseudotuberculosis鲁氏耶尔森菌 Yersinia ruckeri莫拉菌属：莫拉菌属某些种 Moraxella spp巴斯德菌属：产气巴斯德菌 Pasteurella aerogenes 溶血曼海姆菌 Mannheimia haemolytica 多杀巴斯德菌 Pasteurella multocida 侵肺巴斯德菌 Pasteurella pneumotropica巴斯德菌属某些种 Pasteurella spp沙门菌属：猪霍乱沙门菌亚利桑那亚种 Salmonella choleraesuis ssp arizonae猪霍乱沙门菌猪霍乱亚种 Salmonella choleraesuis ssp choleraesuis沙门菌甲型副伤寒血清型 Salmonella ser.Paratyphi A乙型副伤寒沙门菌 Salmonella paratyphi B沙门菌属某些种 Salmonella spp伤寒沙门菌 Salmonella typhi肠炎沙门菌 Salmonella enteritidis沙门菌鸡血清型 Salmonellaser.Gallinarum沙门菌鸡白痢血清型 Salmonellaser.Pullorum鼠伤寒沙门菌 Salmonella typhimurium 不动杆菌属：鲍曼不动杆菌 Acinetobacter baumannii 醋酸钙不动杆菌 Acinetobacter calcoaceticus不动杆菌属某些种 Acinetobacter spp 鞘氨醇单胞菌属：少动鞘氨醇单胞菌 Sphlingomonas paucimobilis发光杆菌属：美人鱼发光杆菌 Photobacterium damselae（=美人鱼利斯顿菌） (= Listonella damsela) 邻单胞菌属：类志贺邻单胞菌 Plesiomonas shigelloides拉恩菌属：水生拉恩菌 Rahnella aquatilis弧菌属：解藻朊酸弧菌 Vibrio alginolyticus霍乱弧菌 Vibrio cholerae河流弧菌 Vibrio fluvialis霍利斯格里蒙菌 Grimontia hollisae最小弧菌 Vibrio mimicus副溶血弧菌 Vibrio parahaemolyticus 创伤弧菌 Vibrio vulnificus无色杆菌属：无色杆菌属某些种 Achromobacter spp 博德特菌属：博德特菌属某些种 Bordetella spp色杆菌属：紫色色杆菌 Chromobacterium violaceum 金色单胞菌属：浅黄假单胞菌 Pseudomonas luteola金黄杆菌属：产吲哚金黄杆菌 Chryseobacterium indologenes（=产吲哚黄杆菌） (= Flavobacterium indologenes)脑膜脓毒性金黄杆菌 Chryseobacterium meningosepticum（=脑膜脓毒性黄杆菌）(=Flavobacterium meningosepticum)黄色单胞菌属：栖稻黄色单胞菌 Flavimonas oryzihabitans希瓦菌属：腐败希瓦菌 Shewanella putrefaciens 鞘氨醇杆菌属：多食鞘氨醇杆菌 Sphingobacterium multivorum威克斯菌属：有毒威克斯菌 Weeksella virosa动物溃疡威克斯菌 Weeksella zoohelcum 栖稻假单胞菌 Pseudomonas oryzihabitansAPI 20 NE 非肠道菌鉴定系统（Ref. 20 050）API 20 NE非肠杆菌科革兰氏阴性杆菌的鉴定（24-48小时内完成）•选择此系统是针对那些造成院内机会感染日益增高的细菌 (由于这些细菌对抗生素耐药性越来越强，所以准确鉴定很必要)。
不明原因肺炎监测方案介绍
监测目的
加强对不明原因肺炎病例监测、排查和疫情处置 的规范管理； 此方案不仅指导监测，也指导排查与疫情处置。
及时发现SARS、人禽流感病例、MERS、人感染H7N9 禽流感；
早期发现病例 及时发现其它以肺炎为主要临床表现的聚集性呼
吸道传染病。
监测单位及监测时限
监测、排查、管理单位
各级卫生行政部门 各级疾控机构 各级各类医疗机构
采样送检
地市级专家组会诊
会诊后不能排除 SARS、人禽流感
省级专家组会诊
SARS或人禽流感疑似/临床诊断/实验室确诊病 例（各省首例、散发、感染来源不明SARS、年
度首例人禽流感由卫生部诊断）
排除SARS和 人禽流感
原报告单位网上订正为诊断疾 病或“其他不明原因疾病” （病例发病1个月以内需订正）。 将其调查资料报同级卫生行政 部门。根据需要，由上级专家 组进行审核，最终审核权限在 省级专家组。
ILI
监测方案介 绍
《全国不明原因肺炎病例监测、 排查和管理方案》2007年7月发布。
2004年7月下发的《全国不明原因肺炎 病例监测实施方案》同时废止。
总体思路
鼓励报告 医院专家组会诊后即可网络直报。
分级分类处理 不明原因肺炎病例监测：关键在于报告。不明原因 肺炎病例不等同于疑似SARS或人禽流感病例。重 点关注聚集性不明原因肺炎病例。 将不明原因肺炎监测方案和现行的人禽流感和 SARS相关预案和文件内容有机整合，以利于基层 实施。
聚集性不明原因肺炎病例密切接触者医学观察表
县级疾控机构负责填写、汇总，并及时逐级报告至自治 区级疾控机构
附件（临床医生需熟悉并易获得）
不明原因肺炎病例诊断、报告、处理流程 社区获得性肺炎诊断和治疗指南 不明原因肺炎病例调查表 不明原因肺炎病例会诊记录单